專利名稱：：含10-羥基喜樹堿的水溶性衍生物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一系列含羥基喜樹堿氨基酸酯鹽的水溶性衍生物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：1966年美國的Wall等首次從中國特有的植物喜樹.(Camptothecaacuminata)中分離得到了喜樹堿(Camptothecin，CPT)(JAmChemSoc.196688:3883-38卯)，因其獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和顯著的抗腫瘤活性引起全世界相關(guān)人員的重視，但是喜樹堿毒副作用大，限制了其臨床應(yīng)用。隨后又從喜樹中分離出了10-羥基喜樹堿(HCPT)，經(jīng)臨床試用表明其具有抗癌譜廣，療效顯著，毒副作用小的特點，特別是對原發(fā)性肝性肝癌、胃腸癌、膀胱癌、頭部頸部皮癌、白血病、宮頸癌等惡性腫瘤有顯著療效。但由于HCPT的水溶性極差，只能通過下列反應(yīng)制成水溶性針劑用于臨床<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>IIa的藥效必須基團--內(nèi)脂環(huán)經(jīng)水解成為相應(yīng)的羧酸形式IIb后，盡管可溶于水，但95%以上的HCPT失去了抗癌活性[CancerChemother.Rep.1970，54，461-470;CancerChemother.Rep.1972，56(Part1)，95-101;CancerChemother.Rep.1972，56，515-5211。其主要原因是IIb會與血槳中的白蛋白(HAS)結(jié)合，難于發(fā)揮藥效，而與白蛋白結(jié)合的羧酸形式的IIb在體內(nèi)會慢慢釋放出來，產(chǎn)生滯后毒性。臨床上為了達到相應(yīng)的療效，只能增大用量，這樣也導(dǎo)致了HCPT的毒副作用增大。為了提高HCPT的生物利用率，許多藥物化學(xué)家對該藥物進行了結(jié)構(gòu)修飾。1994年，美國FDA批準水溶性伊立替康(Irinotecan，CPT-11)上市，用于治療結(jié)腸癌，但其合成的工藝復(fù)雜，生產(chǎn)成本高。1996年用于卵巢癌病人的二線治療藥物水溶性拓撲替康(Topotecan)又獲準上市，美國FDA又于1999年批準其作為小細胞肺癌(SCLC)的二線治療藥物，但因其抗癌譜窄，毒副作用大，主要是骨髓抑制，限制了它的使用。因此，對HCPT進行局部修飾，在保留內(nèi)酯環(huán)的同時，改善其水溶性具有重要意義。Yu-LingLeu(J.Med.Chem.2008，51，1740-1746)報道了在HPCT芳羥基上引入葡萄糖苷以獲得其水溶性前藥。該前藥制備工藝復(fù)雜，水溶性增加不大。WO2005062985提供了羥基喜樹堿及其衍生物的IO，20(S)雙?；闹舅狨ァ⒎妓狨?、芳或芳雜環(huán)羧酸酯，而中國的呂偉等又合成了IO，20(S)單?；螂p?；奶妓嶂?CN1673225)和羧酸酯(CN1673226)。它們在血槳中被水解釋放出的活性成分是羥基喜樹堿，但是這些化合物并沒有很好的解決HCPT水溶性的問題。為了解決HCPT水溶性問題，我們設(shè)計了通式(I)化合物，該類化合物不僅具有良好的水溶性，而且在進入體內(nèi)后能釋放出母體藥物HCPT，產(chǎn)生藥效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供在我國廣泛使用的羥基喜樹堿及其衍生物的10-氨基酸酯的鹽類作為前藥，同時提供其相應(yīng)的制備方法。這類藥物具有良好的水溶性，在進入體內(nèi)后可分解釋放出10-羥基喜樹堿及其衍生物，產(chǎn)生抗癌作用。本發(fā)明涉及的通式為其中，A為飽和的碳氫化合物，具有如下結(jié)構(gòu)R1-(CH2)n-C-(CH2)m_R2其中，m=0，1，2，3;n=0，1，2，3;m與n可以相同，也可不同；R1=H，Me，Et;R2=H，Me，Et;1^與112可以相同，也可不同；D表示含有氮原子的有機基團，D=NR3R4:其中R3，114表示11、CL6直鏈或含支鏈垸基，R3，W可以是相同的或者是不同的；,CH2D=N;n=l,2,3,4,f(CH2)nr5，r6，r7,rS表示H、Ci.3直鏈或含支鏈烷基,如CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、i-Pr,R5，R6,R7,R&J以相同，也可以不相同；E=CH2、0、S、NR9;R9=H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、i-Pr、Ph、CH2Ph。HB是指可作為藥用的無機酸如鹽酸、磷酸、硫酸或碳酸；或可作為藥用的有機酸如L酸、乳酸、甲磺酸、丁二酸、枸櫞酸、富馬酸、馬來酸或蘋果酸。上述通式(I)化合物的制備方法包括A.羥基喜樹堿在吡啶中與含叔胺的酰氯鹽酸鹽反應(yīng)，亦可在有機溶劑中添力BDMAPK叔胺，在-2050°。攪拌1-50小時，形成如通式(I)的化合物。酯化所用的有機溶劑為含鹵素的有機溶劑二氯甲烷、氯仿或氯苯；或不含鹵素的有機溶劑苯、甲苯、己烷或環(huán)己烷；或含其他雜原子的有機溶劑吡啶、乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚；以及上述溶劑的混合溶劑。有機溶劑用量以溶解參與反應(yīng)的10-羥基喜樹堿為準。B.羥基喜樹堿在有機溶劑中與氨基被芐基或CBZ或BOC保護的氨基酸在DCC,或DCC/DMAP，或其他相應(yīng)活性物質(zhì)的作用下，在反應(yīng)溫度-205(TC下反應(yīng)形成酯，再在有機溶劑中脫去保護基團并與相應(yīng)的酸成鹽，形成如通式(I)的化合物。DCC/DMAP(P-CBZ或BOC)酯化所用的有機溶劑為含鹵素的有機溶劑二氯甲烷、氯仿或氯苯；或不含鹵素的有機溶劑苯、甲苯、己烷或環(huán)己垸；或含其他雜原子的有機溶劑吡啶、乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚；以及上述溶劑的混合溶劑。有機溶劑用量以溶解參與反應(yīng)的10-羥基喜樹堿為準。脫保護所用的有機溶劑為醇類(如甲醇或乙醇)，醚類(如THF、乙醚)，乙酸，丙酮。成鹽的有機溶劑與酯化反應(yīng)相同但不包括吡啶等堿性溶劑。C.通過10-羥基喜樹堿(IIa)在有機溶劑中與含二取代氨基的氨基酸在DCC，或DCC/DMAP，或其他相應(yīng)的活性物質(zhì)的作用下形成酯，反應(yīng)時間1小時以上，反應(yīng)溫度-2050。C。所用的有機溶劑為含鹵素的有機溶劑二氯甲垸、氯仿或氯苯；或不含鹵素的有機溶劑苯、甲苯、己烷或環(huán)己垸；或含其他雜原子的有機溶劑吡啶、乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚。本發(fā)明所述的含10-羥基喜樹堿的衍生物(I)可用于制備對人及動物產(chǎn)生抗癌活性的藥物。本發(fā)明在不改變10-羥基喜樹堿固有藥理活性的前提下，通過化學(xué)反應(yīng)(結(jié)構(gòu)修飾)形成含氨基酸的衍生物，并與相應(yīng)的酸成鹽制成前藥，從而達到改善其水溶性，減少毒副作用的目的。具體實施例方式下面的實施實例可使本專業(yè)技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例l羥基喜樹堿IO-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽的制備在干燥的氮氣流下，于25ml干燥的三頸瓶中加入80mgl0-羥基喜樹堿，4ml無水吡啶，在室溫下攪拌至完全溶解。將300mg(Y-N，N-二乙氨基)丁酰氯鹽酸鹽溶于5ml干燥的二氯甲垸中，緩慢滴加，室溫下反應(yīng)2-3小時。反應(yīng)畢，在反應(yīng)液中加水數(shù)滴，攪拌5分鐘，加入15ml乙醚，析出固體，過濾，用乙醚沖洗固體。將固體溶于甲醇，滴加乙醚至渾濁時止，靜止析晶，抽濾，用乙醚沖洗；按上述方法重結(jié)晶后，減壓干燥，得到淡黃色固體60mg，m.p221-223。C，收率54%。IR(KBr，cm1):3559，3435，2942，2646，1774,1743，1653，1602，1587，1462，1437，1346，1234，1194，1161，1141，1107，1068。13C-NMR(500Hz)，5:7.745(C-18),8.369(C-28)，18.267(C-25)，30.311(C-19)，30.535(C-24)，46.098(C-27)，49.175(C-5)，511)，128.203(C-8)，130.289(C-12)，130.376(C-6)，131.133(C-7)，145.225(C-13)，145.837(C-3)，148.827(C-10)，149.948(C-15)，152.485(C-2)，156.709(C-22)，171.055(C-23)，172.376(C-21)。2827ESI-MS:506(M+-HC1)n12實施例2羥基喜樹堿IO-(y-氨基)丁酸酯醋酸鹽的制備將cBz保護的280mgy-氨基丁酸和25011^0(:(:溶于101111<:112(:12中，加入40mgDMAP，室溫下攪拌10min，再加入0.5ml吡啶和150mgHCPT。反應(yīng)10小時以上，過濾，濾液用pH3的酸水洗至水層為酸性。再用飽和NaHC03洗至水層為堿性，最后用飽和食鹽水洗至中性。將有機層用無水Na2S04干燥，蒸干有機溶劑。用THF溶解，加入0.5ml乙酸，少許10%鈀-碳，通入氫氣氫解，反應(yīng)l小時左右，過濾，加入乙醚結(jié)晶，得到淡黃色固體100mg，收率46%。IR(KBr,cm1):3428，2927,1745，1657，1623，1591，1504，1235，1193，1162，1109，1047。ESI-MS:450(M+-AcOH)實施例3.HCPT-y—氨基丁酸酯鹽酸鹽的制備將230mgBoc保護的y—氨基丁酸禾卩250mgDCC溶于10mlCH2Cl2中，加入40mgDMAP，攪拌10min。加入0.5ml吡啶和150mgHCPT，反應(yīng)10小時以上，反應(yīng)完成后用pH3的酸水洗滌，洗至水層為酸性，再用飽和NaHC03洗滌至水層為堿性，最后用飽和食鹽水洗滌至水層為中性，有機層用無水NaS04干燥。揮掉有機溶劑得到200mg淡黃色固體，收率85%。將該固體溶于乙酸乙酯與二氯甲烷的混合液，冰浴冷卻下滴加HC1飽和的乙酸乙酯溶液，反應(yīng)完成后，過濾，將濾餅溶于水，加入丙酮，析晶，過濾得到HCPT-Y—氨基丁酸酯鹽酸鹽20mg。收率11%。ESI-MS:450(M+-AcOtt)實施例4羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二甲氨基)丁酸酯鹽酸鹽的制備(酰氯法)在干燥的氮氣流下，于25ml干燥的三頸瓶中加入100mgl0-羥基喜樹堿，4.5ml無水吡啶，在室溫下攪拌至完全溶解。將300mg(Y-N，N-二甲氨基)丁酰氯鹽酸鹽溶于5ml干燥的二氯甲烷中，緩慢滴加，室溫下反應(yīng)2-3小時，過濾，固體減壓干燥，得到130mg粗品。將粗品的細粉末均勻分散在甲醇中，攪拌2-Smin，過濾，減壓干燥，得到淡黃色固體90mg，收率64%，m.p247-250。C。IR(KBr,cm"):3582，3435，3035，2964，2676，1757，1663,1634，1606，1554，1503，1467，1230，ll卯，1158，1143，1130。"C-NMR(500Hz),S:6.670(C-l)，18.615(C隱2),29.758(C-3),30.283(C-4),42.237(C-S)，48.919(C-6)，55.998(C-7)，64.985(C-8)，72.764(C-9)，97.881(010)，U7.5卯(C-ll)，118.216(C-12),125.172(C-13)，126.737(C-14),127.615(C-15),128.001(C-16)，130.790(C-17),143.074(C-18),143.404(C-19)，144.977(C-20),149.235(C-21)，149.986(C-22),156.187(C-23),171.537(C-24)，173.531(C-25)。ESI-MS:478(M+-HC1)實施例5羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二甲氨基)丁酸酯鹽酸鹽的制備(羧酸法)在干燥的三頸瓶中加入90mgY-N，N-二甲氨基丁酸鹽酸鹽，180mgDCC和60mgDMAP，在10ml二氯甲烷和lml吡啶的混合溶劑中攪拌15min，再加入100mgHCPT，在室溫下反應(yīng)2-3天，柱層析純化，得到50mg淡黃色固體，m.p:247-250°C，收率35%。ESI-MS:478(M)實施例6羥基喜樹堿IO-(Y-嗎啉)丁酸酯鹽酸鹽的制備在干燥的氮氣流下，于25ml干燥的三頸瓶中加入80mgl0-羥基喜樹堿，4ml無水吡啶，在室溫下攪拌至完全溶解。將350mgY-嗎啉丁酰氯鹽酸鹽溶于10ml干燥的二氯甲烷中，緩慢滴加，室溫下反應(yīng)2-3小時。反應(yīng)完全后，在反應(yīng)液中加水數(shù)滴，攪拌5分鐘，加入15ml乙醚，析出固體，過濾，用乙醚沖洗固體。將固體溶于甲醇，滴加乙醚至渾濁時止，攪拌析晶，抽濾，用乙醚沖洗，減壓干燥，得到淡黃色固體25mg，收率20%。IR(KBr，cm—":3425，2929，2614，1747，1658，1602，1503，1463，1366，1233，1193，1158。1046。ESI掘520(M-HC1)。實施例7羥基喜樹堿10-(哌嗪-l)甲酸酯鹽酸鹽的制備在干燥的氮氣流下，于25ml干燥的三頸瓶中加入80mgl0-羥基喜樹堿，4ml無水吡啶，在室溫下攪拌至完全溶解；將溶于THF5ml中的70mgN'-cbz-哌嗪甲酰氯緩緩加入其中，于室溫以上反應(yīng)0.5小時以后，揮去THF;加入二氯甲烷10ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH5-6，飽和食鹽水(10mlx3)洗滌，無水硫酸鈉干燥溶劑，過濾，揮去二氯甲垸，得固體。將所得固體溶于10ml甲醇中，加入10。/。的Pd-C20mg，通氫反應(yīng)l小時以上，過濾，減壓揮去甲醇，殘液中加入乙醚20ml，通入HC1至沉淀完全，過濾，得羥基喜樹堿IO-(l-哌嗪)甲酸酯鹽酸鹽95mg，收率85%.實施例8羥基喜樹堿10-(4-甲基-l-哌嗪)甲酸酯鹽酸鹽的制備在干燥的氮氣流下，于25ml干燥的三頸瓶中加入100mgl0-羥基喜樹堿，4ml無水吡啶和THF5ml，在室溫下攪拌至完全溶解；將90mgN、-甲基-哌嗪甲酰氯分三次加入其中，于室溫以上反應(yīng)0.5小時以后，揮去THF;加入二氯甲垸lOml,用含碳酸氫鈉，pH約為8的飽和食鹽水(10mlx3)洗絳，無水硫酸鈉干燥溶劑，過濾，通入HC1至沉淀完全，過濾，得羥基喜樹堿IO-(4-甲基哌嗪-l)甲酸酯鹽酸鹽108mg，收率85%.實施例羥基喜樹堿IO-(，N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽水溶液穩(wěn)定性實驗1羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽水溶液的穩(wěn)定性實驗羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在水中具有良好的溶解性，但穩(wěn)定性欠佳，易分解釋放出原藥(HCPT)。實驗方法如下取少量的羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽溶解在純水中，分別于溶解后的2min，27min，49min，127min，157min和186min取樣，HPLC監(jiān)測其在各時間點的百分含量羥基喜樹堿IO-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在水中穩(wěn)定性實驗<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在生理鹽水中的穩(wěn)定性取少量的羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽溶解在純水中，分別于溶解后的lmin，24min，49min，127min，157min和178min取樣，HPLC監(jiān)測其在各時間點的百分含量羥基喜樹義威IO-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在生理鹽水中穩(wěn)定性實驗<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實驗表明,無論是在純水中還是在生理鹽水中，通過HPLC的監(jiān)測，我們發(fā)現(xiàn)羥基喜樹堿10-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽的百分含量都隨著時間的增加而減少，且在剛?cè)芙夂蟮哪嵌螘r間下降的速率是最快的，然后變得比較平穩(wěn)。在生理鹽水的條件下，變化幅度要大一些。3測試羥基喜樹堿10-(，N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在各種水溶液中的穩(wěn)定性取少量的羥基喜樹堿10-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽分別溶解在pH3.34水溶液、50%PEG400水溶液、50%丙二醇水溶液和50%甘油水溶液中，分別于溶解后的lmin，75min,150min和225min進樣，HPLC監(jiān)測其在各時間點的百分含量羥基喜樹堿IO-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在備種溶液中穩(wěn)定性實驗前藥百分含量溶液類型^^^"^^時間17515022550%PEG40096.123%88.417%78.637%72.015%pH3.34水溶液97.499%94.907%92.369%93.563%50%甘油95.119%94.661%93.380%93.319%50%丙二醇97.159%卯.304%83.871%80.896%4測試羥基喜樹堿10-(，N，N-二乙氮基)丁酸酯鹽酸鹽在不同pH值的甘油水溶液中的穩(wěn)定性先配好pH值分別為3.30、4.45和5.56的三種酸水，并按照體積分數(shù)分別加入10%和20X的甘油配成不同pH值的甘油水溶液。取少量羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽溶解在各溶液種，分別于溶解后的Oh，1.5h,311和4.51進樣，HPLC監(jiān)測其在各時間點的百分含量羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在各種溶液中穩(wěn)定性實驗前藥百分^^時間01.534.5溶液類型pH3-410%甘油水溶液97.659%96.962%96.191%95.178%pH3-420%甘油水溶液96.491%97.123%96.649%95.841%pH4-510%甘油水溶液98.053%96.562%95.310%93.970%pH4-520%甘油水溶液97.500%97.350%96.445%95.530%pH5-610%甘油水溶液98.213%97.197%96.074%94.854%pH5-620%甘油水溶液98.418%97.521%96.578%95.647%由實驗數(shù)據(jù)分析，降低pH值和采用較高比例的甘油水溶液，都能達到提高羥基喜樹堿10-(y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽溶液的穩(wěn)定性的目的。實施例羥基喜樹堿IO-(y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在體外兔血漿中的解離實驗取活兔一只(新西蘭大白兔，雌性，2.2Kg)，于耳沿靜脈注射2.21111的3%的戊巴比妥，從頸動脈插管取血，加入抗凝劑肝素，于5。C下3000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液，-20°。保存?zhèn)溆?。l.開環(huán)的羥基喜樹堿鈉鹽(O-HCPT)的體外酶解實驗羥基喜樹堿用pH7-8的氫氧化鈉水溶液配成約0.5mg/ml的溶液(O-HCPT,在氫氧化鈉的作用下講羥基喜樹堿的E環(huán)內(nèi)酯環(huán)開環(huán)得到的羧酸鹽)，取O.lml該溶液，加入0.9ml的兔血漿，混勻，置于37""C的恒溫水浴中，分別于5min，l'5min，30min，60min,120min各取0.21111，再加入冷卻到-20"C的乙腈0.4ml，振搖，10000轉(zhuǎn)/分離心10min，取上層清液，HPLC檢測。開環(huán)的羥基喜樹堿(O-HCPT)體外酶解實驗的HPLC數(shù)據(jù)時間5min15min30min保留時間(min)AREA%2.0894.77584.80%15.19%2.0834.77885.82%14.17%2.0894.78190.46%9.53%1時間60min120min保留時間(min)AREA%2.0854.76791.96%8.03%2.0794.76595.81%4.18%*保留時間2.06左右系開環(huán)HCPT;保留時間4.7左右系閉環(huán)HCPT.2.閉環(huán)羥基喜樹堿的體外酶解實驗將羥基喜樹堿用DMSO配成lmg/ml的溶液，取O.lml該溶液，加入0.9ml的兔血漿，充分混勻，置于37。C的恒溫水浴中，分別于5min，15min,30min，60min，120min各取0.2ml該溶液，再加入冷卻到-20。C的乙腈0.4ml沉淀蛋白質(zhì)，振搖，于10000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，.取上層清液，HPLC檢測。HCPT體外酶解實驗的HPLC數(shù)據(jù)時間5min15min30min保留時間(min"2.0664.7282.0654.7232.0744.735AREA%56.04%43.95%57.61%42.39%78.13%20.卯％時間60min120min保留時間(min)2.0674.7032.0554.676AREA%88.68%11.31%91.59%8.40%M呆留時間2.06左右系開環(huán)HCPT;保留時間4.7左右系閉環(huán)HCPT.3.羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽(前藥)的體外酶解實驗將羥基喜樹堿10-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽用H20配成lmg/ml'的溶液，取O.lml該溶液，加入0.9ml的兔血衆(zhòng)，充分混勻，置于37'C的恒溫水浴中，分別于5min，15min，30min，60min，120min各取0.2ml該溶液，再加入冷卻到-20。C的乙腈0.4ml沉淀蛋白質(zhì)，振搖，于10000轉(zhuǎn)/分離心10min，取上層清液，.HPLC檢測。羥基喜樹堿IO-(Y-N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽體外酶解實驗的HPLC數(shù)據(jù)(DMSO)時間5min15min30min保留時間(min"AREA%2.0574.69042.57%57.42%2.0604.69961.48%38.51%2.0634.73384.08%15.91%時間60min120min保留時間(min)AREA%2細4.70189.65%10.34%2.0624.73993.48%6.52%M呆留時間2.06左右系開環(huán)HCPT;保留時間4.7左右系閉環(huán)HCPT.實驗中未檢測到前藥在兔血漿中，難以檢測到羥基喜樹堿IO-(7-N，N-二乙氨基)丁酸酯，只能檢領(lǐng)!l到HCPT和O-HCPT，顯然羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯在兔血漿中按下式分解<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>LD5010mg/kg(iv,Rat)LD50840mg/kg(iv,mouse)(LDso數(shù)據(jù)來自ChemIDplusLite)配體Y-N,N-二乙氨基丁酸的毒性遠遠小于HCPT.實施例羥基喜樹堿IO-"-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽藥效學(xué)實驗1.小鼠結(jié)腸癌Colon26生長抑制作用以小鼠結(jié)腸癌Colon26為模型，對羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽和HCPT的抗腫瘤作用進行初步研究。實驗樣品羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽，HCPT實驗動物Fl小鼠40只，雄性，18-20g。由上海斯萊克動物有限公司提供。瘤株Colon26實體瘤小鼠l只。由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室傳代維持。實驗方法取生長良好的Colon26實體瘤小鼠l只，無菌條件下剖取瘤塊，用生理鹽水碾磨均勻，按0，2ml/只給小鼠腋皮下接種。次日將小鼠隨機分為6組，設(shè)置羥基喜樹堿10-(N,N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽6mg/kg(隔天i.p.)、3mg/kg(每天i.p.)、3mg/kg(每天.i.v.)、HCPT17mg/kg(給2天停1天)和陰性對照共5組進行實驗。結(jié)果按照以下公式判定對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重腫瘤抑制率％=-X100%對照組平均瘤重實驗結(jié)果羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽、HCPT對小鼠結(jié)腸癌Colon26的生長抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>羥基喜樹堿10-(Y-N，N-二乙氮基)丁酸酯鹽酸鹽的劑量為O.Ollmmol，HCPT的劑量為0.046mmol。本次實驗說明羥基喜樹堿IO-(Y-N，N-二乙氨基)丁酸酯鹽酸鹽在劑量較小的情況下具有明顯的抗腫瘤活性.權(quán)利要求1.一系列含10-羥基喜樹堿的衍生物，其特征在于該衍生物具有下列通式(I)其中，A為飽和的碳氫化合物，具有如下結(jié)構(gòu)其中，m＝0，1，2，3；n＝0，1，2，3；m與n相同或不同；R1＝H，Me，Et；R2＝H，Me，Et；R1與R2相同或不同；D表示含有氮原子的有機基團，D＝NR3R4其中R3，R4表示H、C1-6直鏈或含支鏈烷基，R3與R4相同或者不同；id="icf0003"file="A2009101762710002C3.tif"wi="29"he="15"top="127"left="29"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>n＝1，2，3，4，5HB是指可作為藥用的無機酸如鹽酸、磷酸、硫酸或碳酸；或可作為藥用的有機酸如乙酸、乳酸、甲磺酸、丁二酸、枸櫞酸、富馬酸、馬來酸或蘋果酸。2.權(quán)利要求l所述的含10-羥基喜樹堿的衍生物合成方法，其特征在于該方法是通過10-羥基喜樹堿在有機溶劑中與含叔胺的酰氯鹽酸鹽按摩爾比1:1-8，在與比含叔胺的酰氯鹽酸鹽多一倍摩爾的吡啶或DMAP或叔胺的作用下，在反應(yīng)溫度-2050'C下，反應(yīng)形成含叔胺的酯；所用的有機溶劑為含鹵素的有機溶劑二氯甲烷、氯仿或氯苯；或不含鹵素的有機溶劑苯、甲苯、己烷或環(huán)己垸；或含其他雜原子的有機溶劑吡啶、乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚，有機溶劑用量以溶解參與反應(yīng)的10-羥基喜樹堿為準。3.權(quán)利要求1所述含10-羥基喜樹堿的衍生物合成方法，其特征在于該方法是通過10-羥基喜樹堿在有機溶劑中與摩爾比1:1-3的氨基被節(jié)基或節(jié)氧羰賽CBZ或叔丁氧羰基BOC保護的氨基酸在等摩爾的DCC，或DCC/DMAP，或其他類似于DCC樣作用的活性物質(zhì)的作用下，在反應(yīng)溫度-2050'C下反應(yīng)形成酯，再在有機溶劑中脫去保護基團并與相應(yīng)的酸成鹽；酯化所用的有機溶劑為含鹵素的有機溶劑二氯甲垸、氯仿或氯苯；或不含鹵素的有機溶劑苯、甲苯、己垸或環(huán)己烷；或含其他雜原子的有機溶劑吡啶、乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚，以及上述溶劑的混合溶劑；有機溶劑用量以溶解參與反應(yīng)的10-羥基喜樹堿為準。脫保護所用的有機溶劑為甲醇、乙醇、THF、乙醚、以及乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸或丙酮；成鹽的有機溶劑與酯化反應(yīng)相同但不包括吡啶等堿性溶劑。4.權(quán)利要求1所述含10-羥基喜樹堿的衍生物合成方法，其特征在于該方法是通過10-羥基喜樹堿在有機溶劑中與摩爾比1:1-3的含叔胺的氨基酸在等摩爾的DCC，或DCC/DMAP，或其他類似于DCC樣作用的活性物質(zhì)的作用下，在反應(yīng)溫度-2050'C下，形成含叔胺的酯；所用的有機溶劑為含鹵素的有機溶劑二氯甲烷、氯仿或氯苯；或不含鹵素的有機溶劑苯、甲苯、己烷或環(huán)己烷；或含其他雜原子的有機溶劑吡啶、乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚，以及上述溶劑的混合溶劑；有機溶劑用量以溶解參與反應(yīng)的10-羥基喜樹堿為準。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述含10-羥基喜樹堿的衍生物，其特征在于，所述的化合物(I)在動物及人體內(nèi)可水解釋放出抗癌活性藥物羥基喜樹堿。全文摘要本發(fā)明公開了一系列分子內(nèi)含有10-羥基喜樹堿及其衍生物的氨基酸酯，并與酸成鹽的水溶性衍生物及其制備方法。該類水溶性衍生物具有通式(I)，其中A為飽和的碳氫化合物；D表示含有氮原子的有機基團；HB表示能與有機基團成鹽的酸。該類化合物具有良好的水溶性，在人或動物體內(nèi)芳酯鍵易水解，可釋放出10-羥基喜樹堿及其衍生物，從而發(fā)揮抗癌作用。文檔編號C07D491/22GK101654456SQ20091017627公開日2010年2月24日申請日期2009年9月8日優(yōu)先權(quán)日2008年9月10日發(fā)明者全繼平,徐少杰,李勤耕,濤王,睿田,緒羅,佩袁,彬郭申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)藥研究所