專利名稱：一種吲哚生物堿-它波寧鹽的大工業(yè)生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種吲哚生物堿一它波寧的工業(yè)化生產(chǎn)工藝。它波寧是合成系列抗腦缺血和老年癡呆藥物長春胺、長春西汀和長春布寧的關(guān)鍵原料，本身也有一定的降壓藥理活性。本方法應(yīng)用堿液浸泡和先進的超聲組織細胞破碎提取、特定PH值萃取分離和特殊溶劑中制備它波寧鹽純品，該工藝與之前國內(nèi)外報道比較，大大提高了它波寧的純度和回收率。
背景技術(shù)：
它波寧(Tabersonine)是一種吲哚生物堿，本身有小的降壓活性，為合成一線抗腦缺血和老年癡呆藥物長春胺、長春西汀和長春布寧的關(guān)鍵原料，是非常重要的藥物合成中間體。該化合物天然來源于非洲產(chǎn)小灌木Voacanga africana果籽、還有夾竹桃科植物長春花和柳葉水甘草，所以又名柳葉水甘草堿。其中，以Voacanga africana種子中它波寧含量最高，達到2. 0% -2. 5%以上。Voacanga africana的其他部分如樹皮和根皮除含有它波寧夕卜，還含有大量其他生物喊如Voacangine, Vocamine, Vobtusine, Amataine, Akuammidine, Coronaridine和Vobtusine，它們均有良好的生理活性。
由于它波寧是Voacanga africana種子中主要的生物堿(占生物總堿含量的95% 以上，HPLC檢測)，且含量高，所以目前天然它波寧的生產(chǎn)主要是從Voacanga africana種子提取分離得到。關(guān)于從Voacanga africana果籽提取、分離和純化它波寧的方法相關(guān)報道不多。專利US 3758478報道方法為以石油醚為提取溶劑，索氏加熱提取或者冷浸滲漉法，提取液以不同稀酸液分步洗滌和反復(fù)萃取多次，但其提取得率只有它波寧生物含量的 75%。專利US 3892755還報道了以5%酸性乙醇提取，濃縮后，加水分散，再反復(fù)萃取分離， 其提取得率也不高于75%。專利CN 101250188A采用正己烷或者石油醚加熱提取，然后酸化，上大孔樹脂柱，以60% -90%的甲醇溶液洗脫。洗脫液再堿化、萃取，濃縮結(jié)晶和重結(jié)晶得到產(chǎn)物，以Voacanga africana果籽計提取回收率為1. 6%，按它波寧生物含量2. 5%計算，該方法它波寧生物量提取回收率只有64 %。
可見，目前從Voacanga africana果籽提取分離純化它波寧的方法主要存在以下一些缺點
(1)無論是溶劑熱提法還是冷漉法，都難以將Voacanga africana果籽中它波寧完全提取出來，提取回收率偏低，造成每公斤生產(chǎn)成本高。
(2)使用了大量的毒性有機溶劑如氯仿、苯和二氯乙烷等，不利于生產(chǎn)人員的健康，同時也不環(huán)保。
(3)工藝程序多，反復(fù)的萃取和酸化會破壞它波寧結(jié)構(gòu)以及損失它波寧得率，同時對設(shè)備要求也高。
(4)大孔樹脂法，需要濃縮甲醇水體系，能耗高，而且還需要其他萃取調(diào)酸步驟，不利于大工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明針對以上工藝的不足之處進一步研究，對其工藝進行提高，其目的旨在建立從Voacanga africana果籽中高效提取、分離、純化得到它波寧之工業(yè)化大生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明與上述方法之不同特征之處在于(1)應(yīng)用高效的超聲細胞破碎技術(shù)與溶劑提取法相結(jié)合，利于它波寧從Voacanga africana果籽組織中游離出來，大大提高提取回收率；( 處理溶劑采用采用堿性水溶液和工業(yè)甲醇，屬于安全和低成本溶劑；C3)本工藝無需柱層析和反復(fù)萃取，同時由于游離它波寧為油狀物，通過先成鹽，再經(jīng)過簡單的結(jié)晶重結(jié)晶可得到含量高、質(zhì)量好、符合藥用中間體要求的原料。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決以往技術(shù)中它波寧生物堿提取回收率低、污染大、能耗高、成本高等缺點，旨在建立高效、低成本、簡潔和高回收率的以Voacanga africana果籽為原料生產(chǎn)它波寧生物堿的工業(yè)化工藝路線。
本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)(工藝流程見附圖2)
以Voacanga africana果籽為原料，經(jīng)過粉碎、過篩、稀堿液浸泡、超聲破碎細胞組織、甲醇提取、濃縮、調(diào)PH值萃取和結(jié)晶重結(jié)晶等，得到純度高、質(zhì)量好的它波寧鹽。具體步驟如下
1、將含水量低于2% (否則先曬干)的Voacanga africana果籽粉碎，過60目篩得到Voacanga africana果籽粉末。以pH值9左右堿性溶液浸泡，再超聲破碎細胞組織， 過濾壓干得Voacanga africana果籽粉。堿性慮液可回收循環(huán)利用。
2、將上步得到Voacanga africana果籽粉以6倍量工業(yè)甲醇60加熱提取2遍，以 HPLC檢測，它波寧生物堿提取率98%以上(否則甲醇再提取一次，濾液套用)。過濾，濃縮， 得Voacanga africana果籽粉甲醇提取流浸膏，甲醇回收循環(huán)利用。
3、將上步得到Voacanga africana果籽粉甲醇提取流浸膏分散于3倍水中，加稀酸調(diào)PH值至約3. 0，再以1/2體積乙酸乙酯萃取1次，除去脂溶性雜質(zhì)。有機相回收乙酸乙酯循環(huán)利用，水相先以活性炭脫色。
4、將上步活性炭脫色之水相以堿液調(diào)至pH值8，有沉淀析出，再加乙醚萃取二次， 合并有機相，加無水硫酸鈉干燥過夜，濃縮至干得油狀它波寧粗品。
5、將上步粗品以無水甲醇溶解，以強酸調(diào)pH值至約3. 0，再減壓抽出部分甲醇，冷卻析出它波寧粗晶。再以甲醇重結(jié)晶得精品。
本發(fā)明提供了從Voacanga africana果籽高效提取、分離、純化它波寧生物堿的工業(yè)化工藝路線，該工藝路線與文獻報道的方法相比，有更好的提取回收率、更環(huán)保低碳以及更適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。


圖1為它波寧結(jié)構(gòu)式圖2為本發(fā)明它波寧鹽制備工藝流程圖
具體實施例方式
在下面的實施例中進一步說明了本發(fā)明，這并不限制本發(fā)明的范圍。
實施例1它波寧生物堿的制備方法1
取水分含量小于2%的Voacanga africana果籽，粉碎過60目篩。稱取Voacanga africana果籽粉1kg，pH值9的氫氧化鈉溶液3L浸泡，超聲破碎細胞組織lh。過濾，壓干得Voacanga africana果籽粉，堿液回收循環(huán)利用。將壓干之Voacanga africana果籽粉至于多功能提取罐，以6L工業(yè)甲醇提取兩次，每次4h (HPLC檢測它波寧生物堿提取回收率，大于98%即可，否則再以6L甲醇提取濁，過濾甲醇套用)，過濾濃縮，得Voacanga africana 果籽甲醇提取流浸膏，甲醇回收循環(huán)利用。將上述流浸膏分散于3L水中，以稀硫酸調(diào)pH值至3.0，再以1.5L乙醚萃取1次，除去脂溶性物質(zhì)。有機相乙酸乙酯回收循環(huán)利用，水相先以活性炭脫色，再以濃氨水溶液調(diào)PH值至8. 0，再以2L乙醚萃取兩次。合并有機相，以50g 無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，減壓濃縮得油狀它波寧生物堿粗品24. Og。
實施例2它波寧生物堿的制備方法2
取水分含量小于2%的Voacanga africana果籽，粉碎過60目篩。稱取Voacanga africana果籽粉1kg，pH值9的氨水溶液3L浸泡，超聲破碎細胞組織lh。過濾，壓干得 Voacanga africana果籽粉，堿液回收循環(huán)利用。將壓干之Voacanga africana果籽粉至于多功能提取罐，以6L工業(yè)甲醇提取兩次，每次4h (HPLC檢測它波寧生物堿提取回收率，大于 98%即可，否則再以6L甲醇提取2h，過濾甲醇套用)，過濾濃縮，得Voacanga africana果籽甲醇提取流浸膏，甲醇回收循環(huán)利用。將上述流浸膏分散于3L水中，以稀鹽酸調(diào)pH值至 3.0，再以1.5L乙酸乙酯萃取1次，除去脂溶性物質(zhì)。有機相乙酸乙酯回收循環(huán)利用，水相先以活性炭脫色，再以0. 氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8. 0，再以2L乙酸乙酯萃取兩次。合并有機相，以50g無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，減壓濃縮得油狀它波寧生物堿粗品24. 5g。
實施例3它波寧鹽酸鹽制備方法1
將油狀它波寧生物堿粗品24. Og以500mL無水甲醇加熱溶解，再以濃鹽酸調(diào)至pH 值至3.0，再減壓抽出約200mL甲醇，冷卻析出它波寧粗晶。再以甲醇重結(jié)晶得它波寧鹽酸鹽精品23.0g。HPLC檢測含量大于99. 5%。
實施例4它波寧鹽酸鹽制備方法2
將油狀它波寧生物堿粗品24. Og以500mL丙酮加熱溶解，再以硫酸調(diào)至pH值至 3.0，再減壓抽出約150mL丙酮，冷卻析出它波寧粗晶。再以乙醇重結(jié)晶得它波寧硫酸鹽精品23. 5g。HPLC檢測含量大于99. 0%o
權(quán)利要求
1.一種制備它波寧生物堿鹽的方法，其特征為以Voacanga africana果籽為原料，應(yīng)用了先進高效的提取、分離和純化成鹽技術(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利1要求所述方法，Voacangaafricana果籽干燥、粉碎過60目篩，以pH 9 左右堿溶液(氨水、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣或者碳酸鈉、碳酸鉀)浸泡，以超聲破碎提取，再過濾、壓干得到Voacangaafricana果籽粉。
3.根據(jù)權(quán)利1和2要求所述方法，其特征在于以工業(yè)甲醇或者工業(yè)乙醇溶劑提取 Voacanga africana果籽粉，過濾，減壓濃縮成流浸膏。
4.根據(jù)權(quán)利3要求所述方法，其特征在于先將流浸膏充分分散于水中，再以稀酸調(diào)pH 值至3. 0，以1/2體積乙酸乙酯(乙醚)萃取除去脂溶性物質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利4要求所述方法，其特征在于將萃取得到水相以稀堿液(氨水、氫氧化鈉、 氫氧化鉀、氫氧化鈣和碳酸鈉或者碳酸鉀)調(diào)PH值至8. 0，分出有機相，以無水硫酸鈉干燥過夜，再減壓濃縮得到油狀它波寧粗品。
6.根據(jù)權(quán)利5要求所述方法，其特征在于將5得到油狀它波寧粗品溶于無水甲醇(或者無水乙醇)，再以強酸(硫酸、鹽酸、氫溴酸等)調(diào)PH值至3.0，減壓濃縮出部分溶劑，冷卻析晶。抽慮得到它波寧鹽粗品，再以甲醇(或者乙醇)重結(jié)晶，得純度大于99.0%的精品。
全文摘要
本發(fā)明為一種活性吲哚生物堿—它波寧鹽的工業(yè)化生產(chǎn)工藝，它波寧是合成系列抗腦缺血和老年癡呆藥物長春胺、長春西汀和長春布寧的重要原料。本提方法應(yīng)用堿液浸泡和超聲組織細胞破碎提取、特定pH值萃取分離和特殊溶劑中純化制備它波寧鹽。該工藝得到純度大于99.0％它波寧的回收率大于92％，非常適用于大工業(yè)化生產(chǎn)它波寧鹽。
文檔編號C07D471/20GK102532136SQ20101060211
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月17日
發(fā)明者張梅, 彭學(xué)東, 王正濂, 龔福春 申請人:江蘇斯威森生物醫(yī)藥工程研究中心有限公司