專利名稱：：脫氧膽酸的純化方法
技術領域：
：本發(fā)明針對脫氧膽酸和其鹽的合成以及適用于脫氧膽酸合成的中間體。在一個實施例中，本發(fā)明提供以氫化可的松(Hydrocortisone)為起始材料制備脫氧膽酸或其鹽的合成方法。本發(fā)明還針對例如12-酮基或12-a-羥基類固醇等中間體以及用于其制備的新穎方法。本發(fā)明更進一步提供純化的脫氧膽酸組合物和純化方法，其中脫氧膽酸的純度為至少96%。
背景技術：
：快速去除體脂是一個久遠的理想，且已主張許多物質來實現(xiàn)這類效果，但鮮有成效。“美塑療法(mesotherapy)”或使用用于去除脂肪的可注射劑雖然已自20世紀50年代就宣稱用于順勢療法和美容，但仍因安全性和功效問題而不能為開業(yè)醫(yī)師廣泛接受。美塑療法最初作為利用含有用于治療局部醫(yī)學和美容病癥的化合物混合物的皮膚注射液的方法在歐洲構想出來。雖然美塑療法傳統(tǒng)上用于疼痛減輕，但其美容應用、尤其脂肪和脂肪團(cellulite)去除，近來在美國已受到關注。一種所述報導的在巴西流行且使用磷脂酰膽堿注射液的用于局部脂肪減少的治療已被誤認為與美塑療法同義。盡管其吸引之處為聲稱的“溶脂”注射液，但幾乎沒有這些美容治療的安全性和功效的資料。參看羅坦達A.M.(Rotunda,A.M.)和M.克洛德尼(M.Kolodney),皮膚外科學(DermatologicSurgery)32，465-480(2006)(“美塑療法和磷脂酰膽堿注射液歷史闡明和綜述(MesotherapyandPhosphatidylcholineInjectionsHistoricalClarificationandReview)”)。近來公開的文獻報導，膽酸、脫氧膽酸和其鹽在注入活體內脂肪沉積處時具有脂肪去除性質。參看WO2005/117900和WO2005/112942以及US2005/0261258、US2005/0267080、US2006/127468和US20060154906,全部以全文引用的方式并入本文中)。注入脂肪組織的脫氧膽酸鹽經由細胞溶解機理降解脂肪細胞。因為注入脂肪的脫氧膽酸鹽因暴露于蛋白質而快速失活，接著快速返回到腸內容物，所以其作用受空間限制。作為賦予臨床安全性的此減弱作用的結果，脂肪去除療法通常需要4-6療程。此無需外科手術的局部脂肪去除不僅有利于與病理學局部脂肪沉積(例如HIV治療中的醫(yī)學介入易發(fā)的血脂異常)相關的治療性處理，而且有利于美容脂肪去除且無外科手術(例如吸脂術)所固有的伴隨風險。參看羅坦達(Rotunda)等人，皮膚外科學(Dermatol.Surgery)30:1001-1008(2004)(“脫氧膽酸鈉的清潔作用是用于局部脂肪溶解的可注射磷脂酸膽喊調配物的主要特征(Detergenteffectsofsodiumdeoxycholateareamajorfeatureofaninjectablephosphatidylcholineformulationusedforlocalizedfatdissolution)”)和羅坦達(Rotunda)等人，美國皮膚學會雜志(J.Am.Acad.Dermatol.)(2005:973-978)(“用皮下脫氧膽酸鹽注射液治療的脂肪瘤(Lipomastreatedwithsubcutaneousdeoxycholateinjections)”)，兩者以全文引用的方式并入本文中。另外，許多重要的類固醇在類固醇的C-環(huán)上具有12-a-羥基取代基。這些化合物包括例如膽汁酸，例如脫氧膽酸、膽酸、石膽酸等。迄今為止，在成本效率基礎上，這些化合物通常從牛和羊來源回收，牛和羊來源提供現(xiàn)成的膽汁酸來源。然而，最近發(fā)現(xiàn)例如朊病毒等病原體會污染這些來源，由植物來源或合成起始材料合成膽汁酸的替代方法已日益變得重要。舉例來說，來自新西蘭的動物的脫氧膽酸是在美國管理制度下供人類使用的膽汁酸來源，只要動物持續(xù)保持分離，不然不含可觀察到的病原體。這些嚴格的條件對適合的哺乳動物源膽汁酸的量施加了限制，且不排除膽汁酸將不含這些病原體的可能性。仍需要由開頭可知不含動物起源部分(或能夠作用于動物(尤其哺乳動物)且供人類使用時，對人類具有有害影響的病原性部分)和其它例如動物或微生物代謝物、毒素(包括細菌毒素，例如致熱原)等有害試劑的適量例如脫氧膽酸等有效膽汁酸，其在人類中用作藥劑。另外，需要制備不含其它未計劃的膽汁酸的膽汁酸組合物。就此而論，已知哺乳動物源脫氧膽酸受膽酸污染。反過來，進一步已知膽酸是膽囊結石形成中的必需組分。因此，正需要提供制備脫氧膽酸的方法，所述方法不導致受其它膽汁酸污染。迄今為止，GB2452358揭示以9a-羥基雄_4_烯_3，17-二酮為起始物合成脫氧膽酸。在所述合成中，中間體3a-羥基-5P-雄-9(11)-烯-17-酮經揭示為自9a-羥基雄-4-烯-3，17-二酮衍生而來。雖然9a-羥基雄-4-烯_3，17-二酮如所述專利中所揭示有效地轉化為脫氧膽酸，但由氫化可的松合成脫氧膽酸將特別有用，這是因為氫化可的松可廣泛獲得。可的松和氫化可的松分別具有11-酮基或11-0-羥基而不是脫氧膽酸的12-a-羥基。類固醇主鏈上的11-酮基或11-0-羥基轉化成相應12-a-羥基或12-酮基并非平凡的，因為不僅必須進行轉化，而且必須選擇性進行轉化。國際專利申請公開案第W02008/157635號報導多個反應流程，其中在一個情況下，3-^-乙酰氧基-11-a-酮基類固醇經由在所述類固醇中形成A-9，11-烯官能團，接著用三氧化鉻在12-位進行烯丙基氧化而轉化為3-0-乙酰氧基-12-a-羥基類固醇。使用三氧化鉻提供適度產率的A-9，11-烯-12-氧代官能團，且此反應產生的副產物妨礙所要產物的純化。此外，三氧化鉻具有高毒性、腐蝕性并且致癌。其是六價鉻，一種環(huán)境危害的主要實例。在氧化過程中應限制使用三氧化鉻。toon]鑒于以上描述，需要提供使用環(huán)境上相容和毒性較低的氧化劑使Il-P-羥基/11-酮基類固醇轉化成相應A-9，11-烯、12-a-羥基/12-酮基類固醇的高效合成方法。醫(yī)藥級化學品需要一貫可重現(xiàn)的純度。在一些實施例中，純化方法應提供至少95%純度或至少99%純度。然而，純化到至少99%在技術上具挑戰(zhàn)性。舉例來說，純化方法中所用的溶劑可俘獲產物，由此降低其純度，且其它污染物可由任何純化方法帶出。這一問題尤其與脫氧膽酸和其鹽相關，因為這一產品已揭示用于去除不想要脂肪沉積的美容用途。參看例如美國專利第7，622，130號，其以全文引用的方式并入本文中。困為美容手術完全任意選擇，所以管理機構通常要求較高安全標準。
發(fā)明內容本發(fā)明提供適用于制備膽汁酸或其鹽的方法和組合物以及純化如此制備的膽汁酸的方法。在一個實施例中，提供消除或限制在A-9，11-烯類固醇的12-位進行烯丙基氧化期間所采用的鉻(VI)氧化劑量的氧化方法。氧化反應采用提供化合物1、2和3的環(huán)境上相容的共氧化劑混合物權利要求1.一種方法，其使化合物2和化合物3和任選的化合物I的混合物2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中所述混合物包含2、3和I。3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中R1和R2連同其所連接的碳原子一起形成4.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中R1是膽汁酸的17-側鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組膽酸、脫氧膽酸、牛磺膽酸和甘氨膽酸。5.根據(jù)權利要求I或4所述的方法，其中所述側鏈的羧基官能團經C1-C6烷基酯化。6.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中R2是氫，且R1選自由以下組成的群組7.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中所述氫化條件包含使所述化合物的混合物與包含鉬、鈀、銠和/或釕的鉬族金屬催化劑接觸。8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其中所述催化劑是Pd/C或Pt02。9.根據(jù)權利要求I所述的方法，其中所述氧化條件包含使用含氯鉻酸吡啶鎗(PCC)的EtOAc010.根據(jù)權利要求I所述的方法，其進一步包含使化合物39還原，得到化合物4011.一種制備12-酮基化合物3的方法，12.—種使Il-P-羥基類固醇轉化成相應12-酮基類固醇的方法，其中所述方法包含a)選擇適當保護的Il-P-羥基類固醇；b)使所述Il-P-羥基類固醇脫水，在所述類固醇中提供A-9，ll_烯官能團；c)通過在存在共氧化劑的情況下使上述b)的類固醇產物與烷基過氧化氫反應在所述.12-位實現(xiàn)烯丙基氧化；和d)使所述A-9，ll_烯官能團氫化，得到9-a-氫-11-二氫-12-酮基類固醇；和e)任選地用有效量的還原劑使上述d)中產生的所述9-a-氫-11-二氫-12-酮基類固醇的12-酮基官能團還原，得到9-a-氫-11-二氫-I-a-羥基類固醇。13.根據(jù)權利要求12所述的方法，其中所述11-0-羥基類固醇是通過用至少化學計量量的還原劑使相應11-酮基類固醇還原，得到所述Il-P-羥基類固醇來制備。14.根據(jù)權利要求12所述的方法，其中所述Il-P-羥基類固醇是氫化可的松(hydrocortisone)或氫化可的松衍生物。15.根據(jù)權利要求11和12中任一權利要求所述的方法，其中所述烯丙基氧化是利用I當量以上的叔丁基過氧化氫且在存在CuI的情況下實現(xiàn)。16.根據(jù)權利要求11和12中任一權利要求所述的方法，其中所述共氧化劑選自由以下組成的群組次氯酸鈉水溶液、鈀/碳、Pd(OCOCF3)2、Pd(OAc)2和CuI。17.一種式I化合物，18.根據(jù)權利要求17所述的化合物，其中式2化合物選自由以下組成的群組化合物.42、43、44、45和4619.一種式5化合物，20.根據(jù)權利要求19所述的化合物，其中所述式5化合物選自由以下組成的群組化合物48、49、50、51和5221.—種式6化合物，22.根據(jù)權利要求21所述的化合物，其中所述式6化合物選自由以下組成的群組化合物48a、49a、50a、51a和52a23.根據(jù)權利要求17、19或21中任一權利要求所述的化合物，其中R1選自由以下組成的群組24.根據(jù)權利要求17、19或21中任一權利要求所述的化合物，其中R1和R2連同其所連接的碳原子一起形成酮基。25.根據(jù)權利要求17、19或21中任一權利要求所述的化合物，其中R1和R2連同其所連接的碳原子一起形成26.—種制備化合物12的方法，27.根據(jù)權利要求26所述的方法，其中所述脫水條件包含亞硫酰氯和吡啶。28.根據(jù)權利要求26所述的方法，其中化合物13是利用包含選擇性保護化合物17的3-羥基的方法來制備29.根據(jù)權利要求28所述的方法，其中化合物17是利用包含在氧化條件下使化合物30.根據(jù)權利要求29所述的方法，其中所述鄰位醇氧化劑是NaI04。31.根據(jù)權利要求30所述的方法，其中化合物16是利用包含在羰基還原成醇基的條件下使化合物1532.根據(jù)權利要求31所述的方法，其中所述還原劑包含NaBH4。33.根據(jù)權利要求32所述的方法，其中化合物15是利用包含在氫化條件下使氫化可的松34.根據(jù)權利要求33所述的方法，其中所述氫化條件包含Pd/C作為催化劑和DMF作為溶劑。35.一種制備式14化合物的方法，36.一種制備式18化合物方法,所述方法包含37.一種制備脫氧膽酸或其鹽的方法，所述方法包含a)在氫化條件下使氫化可的松38.一種制備化合物24的方法，39.根據(jù)權利要求38所述的方法，其中步驟a)包含丙酮作為溶劑；步驟b)包含二氯甲烷作為溶劑；步驟c)在惰性氛圍下包含無水四氫呋喃作為溶劑；步驟d)的威蒂希反應條件在惰性氛圍下于作為溶劑的無水四氫呋喃中包含叔丁醇鉀；步驟e)包含三乙胺和4-二甲基氨基吡啶；步驟f)的二氯化C1-C2烷基鋁在0-5°C的惰性氛圍下于作為溶劑的無水二氯甲烷中包含二氯化乙基鋁；步驟g)的所述氫化催化劑于作為溶劑的乙酸乙酯中包含無水鈀/碳；且步驟h)的所述C4-C6叔烷基過氧化氫在低于5°C的溫度下于作為溶劑的水中包含叔丁基過氧化氫。40.一種制備脫氧膽酸或其鹽的方法，所述方法包含a)在包含氫氣和Pd/碳的氫化條件下使化合物2441.一種制備化合物31的方法，42.一種制備化合物26的方法，43.一種制備純度大于96%的脫氧膽酸(DCA)或其鹽的方法，所述方法包含(a)使純度為約95%或小于95%的DCA與包含二氯甲烷的溶劑在一定條件下接觸，形成DCA溶液；(b)使所述DCA從得自步驟(a)的所述DCA溶液中結晶，得到含有結晶DCA的溶液；和(c)回收純度大于96%的所述結晶DCA。44.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中所述溶劑進一步包含甲醇。45.根據(jù)權利要求44所述的方法，其中二氯甲烷比甲醇的比率在約100I到約3I范圍內。46.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中溶劑比DCA的比率為約40I到約10I。47.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中所述接觸是在回流條件下。48.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中所述DCA是通過在步驟(c)中去除足量二氯甲烷來結晶。49.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中所述DCA是通過去除一部分所述溶劑和降低所述溶液的溫度來結晶。50.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中所述結晶DCA是通過過濾來回收。51.根據(jù)權利要求43所述的方法，其進一步包含使DCA轉化成醫(yī)藥學上可接受的鹽。52.根據(jù)權利要求43所述的方法，其中所述純度為至少99%。53.一種制備純度大于96%的脫氧膽酸(DCA)的方法，所述方法包含(a)使純度為約95%或小于95%的DCA與包含二氯甲烷和甲醇的溶劑在一定條件下接觸，形成DCA溶液；(b)使所述DCA從得自步驟(I)的所述DCA溶液中結晶，得到含有結晶DCA的溶液；(c)回收所述結晶DCA并去除足量所述二氯甲烷以使得所述回收的結晶DCA的純度大于96。54.根據(jù)權利要求53所述的方法，其中二氯甲烷比甲醇的比率在約100I到約3I范圍內。55.根據(jù)權利要求53所述的方法，其中溶劑比DCA的比率為約40I到約10I。56.根據(jù)權利要求53所述的方法，其中所述接觸是在回流條件下。57.根據(jù)權利要求53所述的方法，其中所述DCA是通過去除一部分所述溶劑和降低所述溶液溫度來結晶。58.根據(jù)權利要求53所述的方法，其中所述結晶DCA是通過過濾來回收。59.根據(jù)權利要求53所述的方法，其進一步包含使DCA轉化成醫(yī)藥學上可接受的鹽。60.根據(jù)權利要求53所述的方法，其中所述純度為至少99%。61.一種完全合成的脫氧膽酸(DCA)或其醫(yī)藥學上可接受的鹽，其中所述合成的DCA或其醫(yī)藥學上可接受的鹽的純度為至少99%。62.一種組合物，其包含純度為至少99%的DCA或其醫(yī)藥學上可接受的鹽和醫(yī)藥學上可接受的賦形劑。63.一種用于非外科手術去除局部脂肪的組合物，所述組合物基本上由純度為至少99%的DCA或其醫(yī)藥學上可接受的鹽組成，其中所述DCA基本上是所述組合物的唯一脂肪去除組分。64.一種組合物，其包含DCA和溶劑，所述溶劑包含含甲醇或不含甲醇的二氯甲烷，其中DCA比溶劑的濃度為40I到約10:I。全文摘要本發(fā)明提供制備脫氧膽酸和其中間體的合成方法、高純度合成脫氧膽酸、組合物和使用方法。還提供由Δ-9，11-烯、11-酮基或11-羥基-β-類固醇合成12-酮基或12-α-羥基類固醇的方法。本發(fā)明還涉及在所述合成期間制備的新穎化合物。本發(fā)明還涉及從氫化可的松(Hydrocortisone)開始合成脫氧膽酸。文檔編號C07J13/00GK102812035SQ201080056763公開日2012年12月5日申請日期2010年12月17日優(yōu)先權日2009年12月18日發(fā)明者羅伯特·M·莫里亞蒂,約翰·格雷戈里·里德,羅伊·A·小斯瓦爾林根申請人:凱瑟拉生物制藥有限公司