專利名稱：人il-23抗原結(jié)合蛋白的制作方法
人IL-23抗原結(jié)合蛋白相關(guān)申請的交叉引用
本申請依據(jù)35 U.S. C. 119(e)，要求保護(hù)于2009年10月26日提交的美國專利申請?zhí)?1/254,982和于2010年9月9日提交的美國專利申請?zhí)?1/381，287的權(quán)益，所述申請通過引用并入本文中。背景
白介素23 (IL-23)這種異二聚體細(xì)胞因子是促炎細(xì)胞因子的有效誘導(dǎo)物。IL-23與異二聚體細(xì)胞因子白介素12 (IL-12)有關(guān)，二者都共有共同的p40亞基。在IL-23中，獨特的pl9亞基與p40亞基共價結(jié)合。在IL-12中，獨特的亞基為p35 (Oppmann等，Immunity,2000，13: 713-715)。IL-23異二聚體蛋白為分泌性的。象IL-12—樣，IL-23由抗原呈遞 細(xì)胞(例如樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)因響應(yīng)激活刺激例如CD40連接、Toll樣受體激動劑和病原體而表達(dá)。IL-23結(jié)合異二聚體受體，所述受體包含IL-12RP I亞基(其與IL-12受體共有)和獨特的受體亞基IL-23R。IL-12受體由IL-12RP I和IL-12R3 2組成。IL-23結(jié)合其異二聚體受體，并通過JAK2和Tyk2傳導(dǎo)信號以激活STATl、3、4和5 (Parham等，J.Immunol. 2002, 168:5699-708)。所述受體亞基主要在激活的或記憶T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞上共表達(dá)，在樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和滑膜成纖維細(xì)胞上亦以較低水平表達(dá)。IL-23和IL-12對不同的T細(xì)胞亞群起作用，在體內(nèi)起基本上不同的作用。IL-23對激活的和記憶T細(xì)胞起作用，并促進(jìn)T細(xì)胞亞群Thl7的存活和擴增。Thl7細(xì)胞產(chǎn)生包括IL-6、IL-17、TNFa、IL_22和GM-CSF在內(nèi)的促炎細(xì)胞因子。IL-23亦對自然殺傷細(xì)胞、樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞起作用，以誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子表達(dá)。不象IL-23，IL-12誘導(dǎo)幼稚⑶4+ T細(xì)胞分化為成熟的產(chǎn)IFNy效應(yīng)細(xì)胞Thl，并通過刺激IFN y生產(chǎn)誘導(dǎo)NK和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的功能。先前認(rèn)為在很多自身免疫性疾病中由IL-12驅(qū)動的Thl細(xì)胞為病原性T細(xì)胞亞群，然而，最近在炎性腸病、銀屑病、炎性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化癥模型中的動物研究(其中評估了 IL-12與IL-23相比的單獨貢獻(xiàn))，堅定地確定在自身免疫/炎性疾病中是 IL-23 而不是 IL-12 為關(guān)鍵驅(qū)動者(Ahern 等，Immun. Rev. 2008 226:147-159 ；Cua等，Nature 2003 421:744-748 ;Yago 等，Arthritis Res and Ther. 2007 9(5): R96)。認(rèn)為IL-12在針對很多細(xì)胞內(nèi)病原體和病毒的保護(hù)性先天免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答發(fā)展中及在腫瘤免疫監(jiān)視中起關(guān)鍵作用。參見Kastelein等，Annual Review of Immunology,2007, 25: 221-42 ；Liu,等，Rheumatology, 2007, 46(8): 1266-73 ;Bowman 等，CurrentOpinion Infectious Diseases, 2006 19:245-52 ;Fieschi 和 Casanova, Eur. J.Immunol. 2003 33:1461-4 ;Meeran 等，Mol. Cancer Ther. 2006 5: 825-32 ；Langowski等，Nature 2006 442: 461-5。因此，與IL-12及IL-23雙重抑制相比，IL-23特異性抑制(寬免IL-12或共享的p40亞基)應(yīng)該具有潛在更優(yōu)越的安全特性。因此，抑制人IL-23而寬免IL-12的IL-23特異性拮抗劑(例如至少結(jié)合IL-23的獨特的P19亞基或結(jié)合IL-23的pl9和p40亞基二者的抗體)的使用，應(yīng)該提供等于或大于IL-12拮抗劑或p40拮抗劑的效力而無與抑制IL-12關(guān)聯(lián)的可能風(fēng)險。業(yè)已闡述了選擇用于抑制重組IL-23的鼠、人源化和噬菌體展示抗體；參見例如美國專利7，491，391、WIPO公開號 W01999/05280、TO2007/0244846、TO2007/027714、TO 2007/076524,W02007/147019,W02008/103473.W0 2008/103432, W02009/043933 和 W02009/082624。然而，需要能夠抑制天然人IL-23的完全人治療劑。所述治療劑對靶標(biāo)高度特異性，尤其是在體內(nèi)。完全抑制體內(nèi)靶標(biāo)可導(dǎo)致產(chǎn)生較低劑量的制劑、更低頻率和/或更有效給藥，進(jìn)而導(dǎo)致降低成本并提高效力。本發(fā)明提供這樣的IL-23拮抗劑。簡述
提供結(jié)合IL-23尤其是天然人IL-23的抗原結(jié)合蛋白。人IL-23抗原結(jié)合蛋白可降低、抑制、干擾和/或調(diào)節(jié)至少一種與IL-23相關(guān)的生物反應(yīng)，如此，用于改善IL-23相關(guān)疾病或病癥的影響。可例如將IL-23抗原結(jié)合蛋白用于降低、抑制、干擾和/或調(diào)節(jié)IL-23信號傳導(dǎo)、IL-23對Thl7細(xì)胞的激活、IL-23對NK細(xì)胞的激活或誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生。亦提供包括細(xì)胞系在內(nèi)的表達(dá)系統(tǒng)用于生產(chǎn)IL-23抗原結(jié)合蛋白，并提供診斷和治療與人IL-23相關(guān)疾病的方法。 提供的結(jié)合IL-23的一些抗原結(jié)合蛋白包含至少一個重鏈可變區(qū)并包含至少一個輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3 :與表3中所示的CDRHl相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的CDRHl ;與表3中所示的CDRH2相差不超過3個、2個或I個氨基酸取代、插入和/或缺失的⑶RH2 ;與表3中所示的⑶RH3相差不超過3個、2個或I個氨基酸取代、插入和/或缺失的⑶RH3 ;所述至少一個輕鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3 :與表3中所示的⑶RLl相差不超過3個、2個或I個氨基酸取代、插入和/或缺失的⑶RLl ;與表3中所示的⑶RL2相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL2 ;與表3中所示的⑶RL3相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL3。在一個實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自SEQ ID NO: 91、94、97、100和103 的 CDRHl ;選自 SEQ ID NO: 92、95、98、101、104、107 和 110 的 CDRH2 ;選自 SEQ ID NO:93、96、99、102 和 105 的 CDRH3 ;選自 SEQ ID NO: 62、65、68、71 和 74 的 CDRLl ;選自 SEQ IDNO: 63、66、69、72、75 和 78 的 CDRL2 ;和選自 SEQ ID NO: 64、67、70 和 73 的 CDRL3。在另一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自SEQ ID NO: 91、106、109、112和115的 CDRHl ;選自 SEQ ID NO: 113、116、118、120、121 和 122 的 CDRH2 ;選自 SEQ ID NO: 108、
111、114、117 和 119 的 CDRH3 ;選自 SEQ ID NO: 77、80、83、85、86、87、88、89 和 90 的 CDRLl ;為 SEQ ID NO: 81 的 CDRL2 ;和選自 SEQ ID NO: 76、79、82 和 84 的 CDRL3。在另一實施方案中，提供包含至少一個重鏈可變區(qū)和至少一個輕鏈可變區(qū)的分離的抗原結(jié)合蛋白。在又一實施方案中，提供如上所述的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含至少兩個重鏈可變區(qū)和至少兩個輕鏈可變區(qū)。在又一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與標(biāo)記基團(tuán)偶聯(lián)。亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其選自a)具有CDRHl為SEQ ID NO:129、CDRH2 為 SEQ ID NO: 132、CDRH3 為 SEQ ID NO: 136 和 CDRLl 為 SEQ ID NO: 123、CDRL2 為 SEQ ID NO: 81 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 76 的抗原結(jié)合蛋白；b)具有 CDRHl 為 SEQID NO: 131、CDRH2 為 SEQ ID NO: 134、CDRH3 為 SEQ ID NO: 137 和 CDRLl 為 SEQ ID NO:124、CDRL2 為 SEQ ID NO: 126 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 128 的抗原結(jié)合蛋白；c) a)具有CDRHl 為 SEQ ID NO: 130、CDRH2 為 SEQ ID NO: 133、CDRH3 為 SEQ ID NO: 99 和 CDRLl 為SEQ ID NO: 68、CDRL2 為 SEQ ID NO: 69 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 67 的抗原結(jié)合蛋白；和
d)具有 CDRHl 為 SEQ ID NO: 91、CDRH2 為 SEQ ID NO: 135、CDRH3 為 SEQ ID NO: 138 和CDRLl 為 SEQ ID NO: 125、CDRL2 為 SEQ ID NO: 127 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 64 的抗原結(jié)
合蛋白。亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自以下的至少一個重鏈可變區(qū)和至少一個輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 31的31-35、50-65和99-113位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: I的23-36、52-58和91-101位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 34的31_35、50_65和99-110位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)、包含SEQID NO: 36的31-35、50-66和99-110位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 4的
23-36,52-62和97-105位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQID NO: 38的31-35,50-66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 7的23_34、50_61和94-106 位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 40的31-35、50-66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 9的24-34、50-56和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 42的31-35、50-66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 11的23-34、50-61和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO:44的31-35、50-65和98-107位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 13的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 46或SEQ ID NO: 153的31-37、52-67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID N015的24_34、50_56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 48的31_37、52_67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 17的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 50的31-37、52-67和101-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 19的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ IDNO: 52的31-35、50-65和98-107位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 21的
24-34,50-56和98-107位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQID NO: 54的31-37,52-67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 23的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 56的31_37、52_67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 25的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；以及包含SEQ ID NO: 58的31-37、52-57和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 27的24-34、500-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)。本文提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過13、12、11、10、9、8、7、6、
5、4、3、2或I個氨基酸取代、添加和/或缺失；和其中輕鏈可變區(qū)序列與表I中所示的輕鏈可變區(qū)序列相差不超過13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或I個氨基酸取代、添加和/或缺失。亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其選自a) SEQ ID NO: 140重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 30輕鏈可變區(qū)；b) SEQ ID NO: 141重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 61輕鏈可變區(qū)；c) SEQ ID NO: 142重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 4輕鏈可變區(qū)；和d) SEQ ID NO:143重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 139輕鏈可變區(qū)。亦提供包含重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述重鏈可變區(qū)由與 SEQ ID NO: 31、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56 和 58 具有至少 90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列組成；所述輕鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO: 1、4、7、
9、11、13、15、17、19、21、23、25和27具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。在另一實施方案中，分離的抗原結(jié)合蛋白包含選自SEQ ID NO: 44、46、48、50、52、54、56、58和153的重鏈可變區(qū)，及選自SEQ ID NO: 13、15、17、19、21、23、25和27的輕鏈可變區(qū)。在又一實施方案中，分離的抗原結(jié)合蛋白包含選自SEQ ID NO: 31、34、36、38、40的和42的重鏈可變區(qū)和選自SEQ ID NO: 1、4、7、9和11的輕鏈可變區(qū)。亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自以下的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)a) SEQ ID NO: 31重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: I輕鏈可變區(qū)；b) SEQ ID NO: 34或36重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 4輕鏈可變區(qū)；c) SEQ ID NO: 38重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO:7輕鏈可變區(qū)；d) SEQ ID NO: 40重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 9輕鏈可變區(qū)；e) SEQ ID NO:42重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 11輕鏈可變區(qū)；f) SEQ ID NO: 44重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO:13輕鏈可變區(qū)；g) SEQ ID NO: 46或SEQ ID NO: 153重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 15輕鏈可變區(qū)；h) SEQ ID NO: 48重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 17輕鏈可變區(qū)；i) SEQ ID NO: 50重 鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 19輕鏈可變區(qū)；j) SEQ ID NO: 52重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 21輕鏈可變區(qū)；k) SEQ ID NO: 54重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 23輕鏈可變區(qū)；I) SEQ ID NO:56重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 25輕鏈可變區(qū)；和m) SEQ ID NO: 58重鏈可變區(qū)和SEQ IDNO: 27輕鏈可變區(qū)。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁 (covered patch)包含 SEQ ID NO: 15 的 30、31、32、49、50、52、53、56、92和94位的殘基接觸，其中殘基接觸具有大于或等于10 A2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。在一個實施方案中，殘基接觸包含SEQ ID NO: 46的31-35、54、58-60、66和101-105位的殘基。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含SEQ ID NO: I的31-34、51、52、55、68、93和98位的殘基接觸，其中殘基接觸具有大于或等于10 A2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。在一個實施方案中，殘基接觸包含 SEQ ID NO: 31 的 1、26、28、31、32、52、53、59、76、101、102 和 104-108 位殘基。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 46的32-35、54、58-60、66和101-105位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 46的31-35、54、56、58-60、66 和 101-105 位殘基 5 A 或更近。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 15的30-32、49、52、53、91_94和96位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 15的30-32、49、50、52、53、56、91-94 和 96 位殘基 5 A 或更近。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 31的26-28、31、53、59、102和104-108位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 31的1、26-28、30-32、52、53、59、100和 102-108 位殘基 5 A 或更近。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: I的31_34、51、52、55、68和93位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: I的 29、31-34、51、52、55、68、93 和 100 位殘基 5 A 或更近。亦提供如上所述的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白為抗體。在一個實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗體為單克隆抗體、重組抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗體片段。在另一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗體片段為Fab片段、Fab’片段、F (ab’)2片段、Fv片段、雙抗體(diabody)或單鏈抗體分子。在又一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白為人抗體。在再一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白為單克隆抗體。在另一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白屬于IgGl型、IgG2型、IgG3型或IgG4型。在又一實施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白屬于IgGl型或IgG2型。 亦提供編碼如上所述抗原結(jié)合蛋白的分離的核酸分子。在一個實施方案中，提供分離的核酸分子，其中至少一個重鏈可變區(qū)由選自以下的分離的核酸分子編碼SEQ IDNO: 32、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59 和 152，至少一個輕鏈可變區(qū)由選自以下的分離的核酸分子編碼SEQ ID NO: 2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26 和 28。在另一實施方案中，提供其中核酸分子與調(diào)控序列可操作地連接的核酸分子。在另一實施方案中，提供包含如上所述核酸分子的載體。在又一實施方案中，提供包含如上所述核酸分子的宿主細(xì)胞。在另一實施方案中，提供包含如上所述載體的宿主細(xì)胞。在又一實施方案中，提供足以用作雜交探針、PCR引物或測序引物的分離的多核苷酸，其為如上所述核酸分子的片段或其互補序列。亦提供制備如上所述抗原結(jié)合蛋白的方法，所述方法包括從分泌所述抗原結(jié)合蛋白的宿主細(xì)胞制備所述抗原結(jié)合蛋白的步驟。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 145中所述的人IL-23pl9亞基的46-58位殘基內(nèi)的殘基接觸、112-120位殘基內(nèi)的殘基接觸和155-163位殘基內(nèi)的殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于IOA2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。在一個實施方案中，提供其中當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 145中所述的人IL-23pl9亞基的46-58位殘基內(nèi)的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個殘基接觸，112-120位殘基內(nèi)的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個殘基接觸，和155-163位殘基內(nèi)的I、
2、3、4、5、6、7、8或9個殘基接觸。在另一實施方案中，提供其中當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL_23p40亞基的121-125位殘基內(nèi)的殘基接觸。在相關(guān)實施方案中，其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL-23p40亞基的121-125位殘基內(nèi)的1、2、3、4或5個殘基接觸。在另一實施方案中，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含 SEQ ID NO: 145 的 46、47、49、50、53、112-116、118、120、155、156、159、160 和 163位的殘基接觸。在另一實施方案中，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含 SEQ ID NO: 145 的 46、47、49、50、53、112-118、120、155、156、159、160 和 163 位的殘基接觸。在另一實施方案中，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含 SEQ ID NO: 145 的 46、47、49、50、53-55、57、58、112-116、118-120、155、156、159、160、162和163位殘基。在相關(guān)實施方案，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL-23p40亞基的122位的殘基接觸。在另一相關(guān)實施方案中，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL_23p40亞基122和124位的殘基接觸。在又一相關(guān)實施方案中，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL_23p40亞基的121-123和125位的殘基接觸。在再一相關(guān)實施方案中，提供其中在抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL-23p40亞基的121-123、125和283位殘基接觸。亦提供結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離如SEQ ID NO: 145中所述的人IL_23pl9亞基的46-58位殘基內(nèi)的殘基、112-123位殘基內(nèi)的殘基和155-163位殘基內(nèi)的殘基5A或更近，其如通過 X射線晶體學(xué)所測定。在一個實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離如SEQ ID NO: 145中所述的人IL-23pl9亞基的以下殘基5A或更近46-58位殘基內(nèi)的 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13個殘基；112-123 位殘基內(nèi)的 1、2、3、4、5、6、7、8、9 或10個殘基；和155-163位殘基內(nèi)的1、2、3、4、5、6、7、8或9個殘基。在另一實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 145的46-50、113-116、120、156、159、160和163位殘基5A或更近。在另一實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 145的46-50、112-120、156、159、160和163位殘基5A或更近。在相關(guān)實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ IDNO: 145的46-50、53、112-120、156、159、160和163位殘基5A或更近。在另一實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 145的46_50、53_55、58、113-116、120、121、156、159、160、162和163位殘基5A或更近。在相關(guān)實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 145的46_51、53_55、57、
58、112-116、118-121、123、155、156、159、160、162 和 163 位殘基 5A 或更近。在再一實施方案中，當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，抗原結(jié)合蛋白離如SEQ ID NO: 147中所述的人IL-23p40亞基的121-125位殘基內(nèi)的殘基5A或更近，其如X射線晶體學(xué)所測定。在相關(guān)實施方案中，當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 147的122和124位殘基5 A或更近。在另一實施方案中，當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 147的121-123和125位殘基5A或更近。亦提供如上所述的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白具有選自以下的至少一種特性a)降低人IL-23活性；b)降低促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生；c)以KD彡5X10-8 M與人IL-23結(jié)合；d)具有彡5X10-6 1/s的Ktjff速率；和d)具有彡400 pM的IC50。提供包含至少一種如上所述的抗原結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。在一個實施方案中，提供的藥物組合物進(jìn)一步包含標(biāo)記基團(tuán)或效應(yīng)基團(tuán)。在又一實施方案中，提供這樣的藥物組合物，其中標(biāo)記基團(tuán)選自同位素標(biāo)記、磁性標(biāo)記、氧化還原活性部分、光學(xué)染料、生物素化基團(tuán)和被第二報道分子識別的預(yù)定多肽表位。在又一實施方案中，提供這樣的藥物組合物，其中效應(yīng)基團(tuán)選自放射性同位素、放射性核素、毒素、治療基團(tuán)和化療基團(tuán)。亦提供用于治療或預(yù)防患者中的與IL-23有關(guān)的病況的方法，所述方法包括給予有需要的患者有效量的如上所述的至少一種分離的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，提供這樣的方法，其中病況選自炎性病癥、風(fēng)濕病、自身免疫性疾病、腫瘤病癥和胃腸道病癥。在又一實施方案中，提供這樣的方法，其中病況選自多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、銀屑病、炎性腸病、克羅恩病(Crohn’s disease)、潰瘍性結(jié)腸炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病關(guān)節(jié)炎、自身免疫性心肌炎；1型糖尿病和強直性脊柱炎。在再一實施方案中，提供其中分離的抗原結(jié)合蛋白質(zhì)單獨或作為聯(lián)合療法給予的方法。亦提供降低患者的IL-23活性的方法，所述方法包括給予有效量的至少一種如上所述的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，提供降低IL-23活性的方法，其中所述IL-23活性誘導(dǎo)產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子。附圖
簡述
圖IA :用重組人IL-23進(jìn)行的STAT-螢光素酶報道分子測定的結(jié)果。所有抗體完全抑制重組人IL-23。圖IB :用天然人IL-23進(jìn)行的STAT-螢光素酶報道分子測定的結(jié)果。僅一半完全抑制重組人IL-23的抗體能夠完全抑制天然人IL-23。詳述
本發(fā)明提供與IL-23抗原結(jié)合蛋白有關(guān)的組合物、試劑盒和方法，所述IL-23抗原結(jié)合蛋白包括拮抗IL-23的分子，例如抗IL-23抗體、抗體片段和抗體衍生物，例如拮抗性抗IL-23抗體、抗體片段或抗體衍生物。亦提供包含編碼結(jié)合IL-23的多肽的全部或部分的核酸序列的多核苷酸及其衍生物和片段，例如，編碼抗IL-23抗體、抗體片段或抗體衍生物的全部或部分的多核苷酸；包含所述核酸的質(zhì)粒和載體；和包含所述多核苷酸和/或載體和質(zhì)粒的細(xì)胞或細(xì)胞系。提供的方法包括例如制備、鑒別或分離IL-23抗原結(jié)合蛋白(例如抗IL-23抗體)的方法，測定分子是否與IL-23結(jié)合的方法，測定分子是否拮抗IL-23的方法，制備包含IL-23抗原結(jié)合蛋白的組合物例如藥物組合物的方法，和用于將IL-23抗原結(jié)合蛋白給予受試者的方法，例如用于治療由IL-23介導(dǎo)的病況及用于在體內(nèi)或體外拮抗IL-23的生物活性的方法。除非本文另外定義，否則與本發(fā)明有關(guān)使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語，應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。另外，除非上下文另外需要，否則單數(shù)術(shù)語應(yīng)包括復(fù)數(shù)，復(fù)數(shù)術(shù)語應(yīng)包括單數(shù)。與細(xì)胞及組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)及蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)和本文所述雜交關(guān)聯(lián)使用的術(shù)語及這些的技術(shù)，通常眾所周知并在本領(lǐng)域常用。除非另外指出，否則本發(fā)明方法和技術(shù)通常按照本領(lǐng)域熟知及在本說明書各處所引用和討論的各種通用和更具體參考文獻(xiàn)所述的常規(guī)方法來實施。參見例如Sambrook等，MolecularCloning: A Laboratory Manual,第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, N. Y. (2001);和Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates (1992) jPHarlow和Lane 的Antibodies: A LaboratoryManual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)。按照廠商說明書、如本領(lǐng)域通常所實現(xiàn)或如本文所述來實施酶促反應(yīng)及純化技術(shù)。與本文所述的分析化學(xué)、合成有機化學(xué)及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)關(guān)聯(lián)使用的術(shù)語及這些的實驗室程序和技術(shù)眾所周知，并在本領(lǐng)域常用。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、制劑和遞送及治療患者。為闡述及揭示例如可連同本文所述信息使用的在所述出版物中闡述的方法學(xué)目的，所有專利及其它標(biāo)明的出版物通過引用以其整體明確并入本文。本領(lǐng)域已知人IL-23 pl9 亞基(SEQ ID NO: 144 和 145)、共有 p40 亞基(SEQ IDNO: 146 和 147)、人 IL-23 受體異二聚體亞基 IL-12RP I (SEQ ID NO: 150 和 151)和IL-23R (SEQ ID NO: 148和149)的多核苷酸和蛋白質(zhì)序列，參見例如GenBank登記號AB030000、M65272、NM_005535、NM_144701，來自其它哺乳動物物種的那些亦是如此。業(yè)已闡述或可自商業(yè)來源獲得重組IL-23和包括單鏈和Fe蛋白在內(nèi)的IL-23受體蛋白以及表達(dá)IL-23 受體的細(xì)胞。(參見例如,Oppmann 等，Immunity, 2000, 13: 713-715 ;R&D Systems,Minneapolis. Minnesota ；United States Biological, Swampscott, Massachusetts ；WIPO公開號WO 2007/076524)?？勺匀思?xì)胞例如樹突細(xì)胞用包括本文所述的方法在內(nèi)的本 領(lǐng)域已知方法獲得天然人IL-23。IL-23為由與共有的p40亞基共價結(jié)合的獨特的pl9亞基組成的異二聚體細(xì)胞因子。pl9亞基包含四個a -螺旋“A”、“B”、“C”和“D”，其呈由A和B螺旋之間、B和C螺旋之間和C和D螺旋之間的三個內(nèi)部螺旋環(huán)連接的上-上-下-下基序，參見Oppmann等，Immunity, 2000，13: 713-715 和 Beyer 等，J Mol Biol, 2008. 382(4) : 942-55。認(rèn)為4個螺旋束細(xì)胞因子的A和D螺旋參與受體結(jié)合。p40亞基包含3個P -折疊夾層結(jié)構(gòu)域D1、D2 和 D3 (Lupardus和 Garcia, J. MOL. Biol. , 2008,382:931-941) 術(shù)語“多核苷酸”包括單鏈和雙鏈核酸兩種，并包括基因組DNA、RNA、mRNA、cDNA或合成來源或其某種組合，所述組合與通常在自然界發(fā)現(xiàn)的序列無關(guān)聯(lián)。包含特定序列的分離的多核苷酸除特定序列外，還可包括多達(dá)10個或甚至多達(dá)20個其它蛋白質(zhì)或其部分的編碼序列，或可包括控制所述核酸序列的編碼區(qū)的表達(dá)的可操作地連接的調(diào)控序列，和/或可包括載體序列。構(gòu)成多核苷酸的核苷酸可為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或核苷酸任一種類型的經(jīng)修飾的形式。修飾包括堿基修飾，例如溴尿苷和肌苷衍生物；核糖修飾，例如2’，3’ -雙脫氧核糖；和核苷酸間鍵修飾，例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代憐酸酯(phosphorodiselenoate)、苯胺基硫代憐酸酯(phosphoroaniIothioate)、苯胺基憐酸酯(phoshoraniIadate)和氨基憐酸酯。術(shù)語“寡核苷酸”意指包含100個或更少核苷酸的多核苷酸。在一些實施方案中，寡核苷酸為10-60個堿基長。在其它實施方案中，寡核苷酸為12、13、14、15、16、17、18、19或20-40個核苷酸長。寡核苷酸可為單鏈或雙鏈的，例如用于構(gòu)建突變體基因。寡核苷酸可為有義或反義寡核苷酸。寡核苷酸可包括用于檢測測定的可檢測標(biāo)記，例如放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、半抗原或抗原標(biāo)記。寡核苷酸可例如作為PCR引物、克隆引物或雜交探針使用。術(shù)語“多肽”或“蛋白質(zhì)”意指具有天然蛋白質(zhì)的氨基酸序列的大分子，也就是說，由天然存在及非重組的細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)；或其由遺傳工程改造或重組的細(xì)胞產(chǎn)生并包含具有天然蛋白質(zhì)的氨基酸序列的分子；或已自天然序列缺失一個或多個氨基酸殘基、將一個或多個氨基酸殘基插入到天然序列和/或取代天然序列的一個或多個氨基酸殘基的分子。該術(shù)語亦包括氨基酸聚合物，其中一個或多個氨基酸為相應(yīng)的天然存在的氨基酸的化學(xué)類似物和聚合物。術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”包括IL-23抗原結(jié)合蛋白(例如抗體)，和已自所述抗原結(jié)合蛋白序列缺失一個或多個氨基酸殘基、將一個或多個氨基酸殘基添加到所述抗原結(jié)合蛋白序列和/或取代所述抗原結(jié)合蛋白序列的一個或多個氨基酸殘基的序列。術(shù)語“多肽片段”是指與全長天然蛋白質(zhì)比較，具有氨基末端缺失、羧基末端缺失和/或內(nèi)部缺失的多肽。所述片段與天然蛋白質(zhì)比較亦可含有經(jīng)修飾的氨基酸。在某些實施方案中，片段為約5-500個氨基酸長。例如，片段可為至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19、20、50、70、100、110、150、200、250、300、350、400 或 450 個氨基酸長。有用的多肽片段包括抗體的免疫學(xué)功能片段，包括結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在IL-23抗原結(jié)合蛋白例如抗體情況下，有用的片段包括但不限于一個或多個CDR區(qū)、重鏈或輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域、抗體鏈的部分、包括不到3個⑶R的可變區(qū)的部分、等等?！鞍被帷卑ㄆ湓诒绢I(lǐng)域的通常含義。20種天然存在的氨基酸及其縮寫遵照常規(guī)用法。參見 Immunology-A Synthesis,第 2 版，(E. S. Golut^PD. R. Gren 編輯)，Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991)。20 種常規(guī)氨基酸、非天然氨基酸例如 [a]-、[a ]-二取代的氨基酸、N-烷基氨基酸和其它非常規(guī)氨基酸的立體異構(gòu)體(例如D-氨基酸)亦可為合適的多肽組分。非常規(guī)氨基酸的實例包括4_羥基脯氨酸、[Y]-羧基谷氨酸、[e 1-N, N，N-三甲基賴氨酸、[e ]-N_乙?；嚢彼帷?_磷酸絲氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、
-N_甲基精氨酸和其它相似的氨基酸和亞氨基酸(例如4-羥基脯氨酸)。在本文所用的多肽標(biāo)記法中，左手方向為氨基末端方向，右手方向為羧基末端方向，與標(biāo)準(zhǔn)用法和常規(guī)一致。術(shù)語“分離的蛋白質(zhì)”是指自蛋白質(zhì)或多肽或會干擾其治療、診斷、預(yù)防、研究或其它用途的其它污染物純化的蛋白質(zhì)(例如抗原結(jié)合蛋白，其實例可為抗體)。本文所用“基本上純的”意指所述分子種類為所存在的主要種類，也就是說，在摩爾基礎(chǔ)上其比同一混合物中的任何其它單獨種類更豐富。在某些實施方案中，基本上純的分子為其中目標(biāo)種類占所有存在的大分子種類的至少50% (基于摩爾)的組合物。在其它實施方案中，基本上純的組合物包含所述組合物中存在的所有大分子種類的至少80%、85%、90%、95%或99%。在某些實施方案中，基本上同質(zhì)的物質(zhì)被純化到通過常規(guī)檢測方法不能在所述組合物中檢測到污染種類的程度，因此所述組合物由單一可檢測的大分子種類組成。多肽(例如抗原結(jié)合蛋白，例如抗體)“變體”包含如下氨基酸序列其中相對于另一多肽序列，將一個或多個氨基酸殘基插入到所述氨基酸序列、自所述氨基酸序列缺失一個或多個氨基酸殘基和/或取代所述氨基酸序列中的一個或多個氨基酸殘基。變體包括融合蛋白。多肽“衍生物”為以不同于插入、缺失或取代變體的某種方式經(jīng)化學(xué)修飾例如經(jīng)由與另一化學(xué)部分的綴合的多肽。本說明書通篇與生物學(xué)物質(zhì)例如多肽、核酸、宿主細(xì)胞等關(guān)聯(lián)使用的術(shù)語“天然存在的”或“天然的”，是指在自然界發(fā)現(xiàn)的物質(zhì)，例如天然人IL-23。在某些方面，提供結(jié)合天然IL-23的重組的抗原結(jié)合蛋白。在這種情況下，“重組蛋白質(zhì)”為用重組技術(shù)即通過本文所述重組核酸的表達(dá)制備的蛋白質(zhì)。用于生產(chǎn)重組蛋白質(zhì)的方法和技術(shù)在本領(lǐng)域眾所周知。術(shù)語“抗體”是指任何同種型的完整免疫球蛋白，或其可與完整抗體競爭與靶標(biāo)抗原特異性結(jié)合的片段，包括例如嵌合抗體、人源化抗體、完全人抗體和雙特異性抗體。因此，抗體為抗原結(jié)合蛋白種類。除非另外指出，否則術(shù)語“抗體”除包括包含兩條全長重鏈和兩條全長輕鏈的抗體外，還包括其衍生物、變體、片段和突變蛋白，其實例在下面闡述。完整抗體通常包含至少兩條全長重鏈和兩條全長輕鏈，但在某些情況下可包含更少的鏈，例如駱l(camelid)中天然存在的抗體，其可僅包含重鏈?？贵w可僅自單一來源獲得，或可為“嵌合的”，即抗體的不同的部分可自兩個不同的抗體獲得，其在下面進(jìn)一步闡述?？稍陔s交瘤中通過重組DNA技術(shù)或通過酶促或化學(xué)裂解完整抗體來產(chǎn)生抗原結(jié)合蛋白、抗體或結(jié)合片段。本文所用術(shù)語抗體或免疫球蛋白鏈(重鏈或輕鏈)的“功能片段”(或簡而言之“片段”)，為包含缺乏全長鏈中存在的至少一些氨基酸但能夠特異性與抗原結(jié)合的抗體部分(不管該部分是如何獲得或合成的)的抗原結(jié)合蛋白。所述片段具生物學(xué)活性，因為它們與靶標(biāo)抗原特異性結(jié)合，并可與其它抗原結(jié)合蛋白(包括完整抗體)競爭與給定表位的特異性結(jié)合。在一個方面，所述片段保留全長輕鏈或重鏈中存在的至少一個CDR，在一些實施方案中，包含單一重鏈和/或輕鏈或其部分。可通過重組DNA技術(shù)產(chǎn)生這些生物學(xué)活性片段，或可通過酶促或化學(xué)裂解抗原結(jié)合蛋白(包括完整抗體)來產(chǎn)生這些生物學(xué)活性片段。片段包括但不限于免疫學(xué)功能片段，例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、結(jié)構(gòu)域抗體和單鏈抗 體，并可自任何哺乳動物來源獲得，所述哺乳動物來源包括但不限于人、小鼠、大鼠、駱駝或兔。進(jìn)一步預(yù)期本文所公開的抗原結(jié)合蛋白的功能部分例如一個或多個CDR，可與第二蛋白質(zhì)或與小分子共價結(jié)合，以創(chuàng)造針對體內(nèi)特定靶標(biāo)并具有雙功能治療特性或具有延長血清半衰期的治療劑。術(shù)語“競爭”當(dāng)在抗原結(jié)合蛋白(例如中和抗原結(jié)合蛋白或中和抗體)上下文中使用時，意指通過以下測定所測定的抗原結(jié)合蛋白之間的競爭，所述測定中在試驗中的抗原結(jié)合蛋白(例如抗體或其免疫學(xué)功能片段)防止或抑制參考抗原結(jié)合蛋白(例如配體或參考抗體)與共同抗原(例如IL-23蛋白或其片段)特異性結(jié)合?？墒褂帽姸囝愋偷母偁幮越Y(jié)合測定，例如固相直接或間接放射免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心競爭測定(參見例如 Stahli 等，1983，Methods in Enzymology 92:242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA (參見例如Kirkland等，1986，J. Immunol.137:3614-3619)、固相直接標(biāo)記測定、固相直接標(biāo)記夾心測定(參見例如Harlow和Lane,1988, Antibodies, Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press);用 1-125 標(biāo)記的固相直接標(biāo)記RIA (參見例如Morel等，1988，Molec. Immunol. 25:7-15);固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA (參見例如Cheung等，1990，Virology 176:546-552);和直接標(biāo)記RIA (Moldenhauer 等，1990，Scand. J. Tmmuno1. 32:77-82)。通常所述測定涉及使用與固體表面結(jié)合的純化的抗原或荷有以下抗原結(jié)合蛋白中的任一種的細(xì)胞未標(biāo)記的試驗抗原結(jié)合蛋白和標(biāo)記的參考抗原結(jié)合蛋白。通過在試驗抗原結(jié)合蛋白存在下測定與固體表面或細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記的量來測量競爭性抑制。通常試驗抗原結(jié)合蛋白過量存在。通過競爭測定(競爭抗原結(jié)合蛋白)鑒定的抗原結(jié)合蛋白，包括與參考抗原結(jié)合蛋白結(jié)合相同表位的抗原結(jié)合蛋白，和與足夠靠近參考抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的表位的鄰近表位結(jié)合以發(fā)生位阻的抗原結(jié)合蛋白。通常當(dāng)競爭抗原結(jié)合蛋白過量存在時，其會抑制參考抗原結(jié)合蛋白與共同抗原的特異性結(jié)合達(dá)至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70% 或 75%。在一些情況下，抑制結(jié)合達(dá)至少 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更多。術(shù)語〃表位〃或〃抗原決定簇〃是指抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的抗原上的位點。表位可由相鄰氨基酸或通過蛋白質(zhì)的三級折疊而并置的不相鄰氨基酸形成。由相鄰氨基酸形成的表位通常在暴露于變性溶劑時仍保留，而通過三級折疊形成的表位通常在用變性溶劑處理時失去。表位決定簇可包括分子的化學(xué)活性表面聚簇(grouping),例如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷?；蚧酋；⒖删哂刑厥獾娜S結(jié)構(gòu)特點和/或特殊的電荷特點。表位通常包括呈獨特空間構(gòu)象的至少 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35 個氨基酸?？捎帽绢I(lǐng)域已知方法來測定表位。IL-23抗原結(jié)合蛋白
本文所用“抗原結(jié)合蛋白”意指特異性結(jié)合特定靶標(biāo)抗原的蛋白質(zhì)；本文提供的抗原為IL-23，尤其是人IL-23，包括天然人IL-23。本文提供的抗原結(jié)合蛋白與IL-23的獨特的P19亞基的至少一部分互相作用，可檢測地結(jié)合IL-23 ;但不以任何顯著性與IL-12 (例如 IL-12的p40和/或p35亞基)結(jié)合，因此“寬免IL-12”。因而，本文提供的抗原結(jié)合蛋白能夠影響IL-23活性，而沒有可能出現(xiàn)抑制IL-12或共有的p40亞基的可能風(fēng)險?？乖Y(jié)合蛋白可影響IL-23與其受體相互作用的能力，例如通過影響與受體的結(jié)合，例如通過干擾受體締合。具體而言，所述抗原結(jié)合蛋白完全或部分降低、抑制、干擾或調(diào)節(jié)IL-23的一種或多種生物活性。與不存在抗原結(jié)合蛋白時的反應(yīng)相比，存在抗原結(jié)合蛋白時所述抑制或中和破壞生物反應(yīng)，其可用本領(lǐng)域已知和本文所述的測定來測定。本文提供的抗原結(jié)合蛋白抑制IL-23誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生，例如全血細(xì)胞中IL-23誘導(dǎo)的IL-22產(chǎn)生和NK及全血細(xì)胞中IL-23誘導(dǎo)的IFNy表達(dá)。生物活性的降低可為約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高。抗原結(jié)合蛋白可包含與抗原結(jié)合的部分，任選包含允許抗原結(jié)合部分采用促進(jìn)抗原結(jié)合蛋白與所述抗原結(jié)合的構(gòu)象的支架或構(gòu)架部分?？乖Y(jié)合蛋白實例包括抗體、抗體片段(例如抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物?？乖Y(jié)合蛋白可包含具嫁接CDR或CDR衍生物的備選蛋白質(zhì)支架或人工支架。所述支架包括但不限于源自抗體的支架，其包含引入以例如穩(wěn)定抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)的突變；以及全合成支架，其包含例如生物相容聚合物。參見例如 Korndorfer 等，Proteins: Structure, Function, andBioinformatics, (2003)第 53 卷，第 I 期:121-129 ；Roque 等，Biotechnol. Prog.,2004，20:639-654。另外，可使用肽抗體模擬物(“PAM”)以及基于抗體模擬物的支架，其用纖連蛋白組分作為支架。本文所述某些抗原結(jié)合蛋白為抗體或源自抗體。所述抗原結(jié)合蛋白包括但不限于單克隆抗體、雙特異性抗體、微型抗體(minibody)、結(jié)構(gòu)域抗體、合成抗體、抗體模擬物、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、抗體融合物、抗體綴合物、單鏈抗體及其各自的片段。在一些情況下，抗原結(jié)合蛋白為抗體的免疫學(xué)片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2或scFv)。本文進(jìn)一步闡述及定義各種結(jié)構(gòu)。提供的某些抗原結(jié)合蛋白可包含一個或多個本文所述的⑶R (例如1、2、3、4、5、6或更多個CDR)。在一些情況下，抗原結(jié)合蛋白包含(a)多肽結(jié)構(gòu)；和(b)被插入到多肽結(jié)構(gòu)中和/或與多肽結(jié)構(gòu)連接的一個或多個CDR。多肽結(jié)構(gòu)可采取多種不同的形式。例如，其可為或包含天然存在的抗體或其片段或變體的構(gòu)架，或可實際上完全合成。下文進(jìn)一步闡述各種多肽結(jié)構(gòu)的實例。當(dāng)解離平衡常數(shù)(KD) ( IO-8 M時，認(rèn)為本發(fā)明抗原結(jié)合蛋白“特異性結(jié)合”其靶標(biāo)抗原。當(dāng)KD彡5 X 10_9 M時，抗原結(jié)合蛋白以“高親和力”特異性結(jié)合抗原，當(dāng)KD彡5 X 10, M時，抗原結(jié)合蛋白以“極高親和力”特異性結(jié)合抗原。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白將以彡5 X 10_12 M的KD與人IL-23結(jié)合，在又一實施方案中，其將以KD彡5
X10_13 M結(jié)合。在本發(fā)明另一實施方案中，抗原結(jié)合蛋白具有彡5 X 10_12 M的KD和約彡5X10—6 1/s的Koff。在另一實施方案中，Ktjff為彡5X10_71/s。另一方面提供具有至少一天體外或體內(nèi)(例如當(dāng)給予人受試者時)半衰期的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白具有至少三天的半衰期。在另一實施方案中，抗體或其部分具有4天或更長的半衰期。在另一實施方案中，抗體或其部分具有8天或更長的半衰期。在另一實施方案中，衍生或修飾抗體或其抗原結(jié)合部分使得其與未衍生或未修飾的抗體相比具有更長的半衰期。在另一實施方案中，抗原結(jié)合蛋白含有點突變以提高血清半衰期，例如在WIPO公開號WO 00/09560中所述。 在其中抗原結(jié)合蛋白用于治療應(yīng)用的實施方案中，抗原結(jié)合蛋白可降低、抑制、干擾或調(diào)節(jié)IL-23的一種或多種生物學(xué)活性，例如誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生。IL-23具有很多不同的生物學(xué)作用，其可在不同細(xì)胞類型中以很多不同測定來測量；已知所述測定的實例，其在本文中提供。提供的一些抗原結(jié)合蛋白具有通常與天然存在的抗體相關(guān)的結(jié)構(gòu)。這些抗體的結(jié)構(gòu)單元通常包含一個或多個四聚物，每一個由兩個相同的多肽鏈對組成，但哺乳動物的一些物種亦產(chǎn)生僅具有單個重鏈的抗體。在典型的抗體中，每雙或每對包括一條全長“輕”鏈(在某些實施方案中，約25 kDa)和一條全長“重”鏈(在某些實施方案中，約50-70 kDa)。每一單獨的免疫球蛋白鏈由若干“免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域”組成，每一個結(jié)構(gòu)域由大約90-110個氨基酸組成并表現(xiàn)特征性的折疊模式。這些結(jié)構(gòu)域為組成抗體多肽的基本單位。每條鏈的氨基末端部分通常包括負(fù)責(zé)抗原識別的可變區(qū)。羧基末端部分比鏈的其它末端在進(jìn)化上更保守，被稱為“恒定區(qū)”或“C區(qū)”。通常將人輕鏈分為K和\輕鏈，這些中的每一個含有一個可變區(qū)和一個恒定結(jié)構(gòu)域(CLl)。通常將z重鏈分為U、S、Y、a或e鏈，這些限定抗體的同種型分別為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有幾個亞型，包括但不限于IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。IgM亞型包括IgM和IgM2。IgA亞型包括IgAl和IgA2。在人中，IgA和IgD同種型含有四條重鏈和四條輕鏈；IgG和IgE同種型含有兩條重鏈和兩條輕鏈；IgM同種型含有五條重鏈和五條輕鏈。重鏈恒定區(qū)(CH)通常包含可負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的一個或多個結(jié)構(gòu)域。重鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的數(shù)量視同種型而定。例如，IgG重鏈每一條含有3個CH區(qū)結(jié)構(gòu)域，稱為CH1、CH2和CH3。提供的抗體可具有任何這些同種型和亞型，例如IL-23抗原結(jié)合蛋白為IgGI、IgG2或IgG4亞型的。若期需IgG4，亦可期需將點突變(CPSCP_>CPPCP)引入鉸鏈區(qū)(如Bloom等，1997，Protein Science 6:407中所述)，以降低形成可導(dǎo)致IgG4抗體的異質(zhì)性的H鏈內(nèi)二硫鍵的傾向。可用亞類轉(zhuǎn)換方法將屬于一種類型的本文提供的抗體改變?yōu)椴煌念愋?。參見例如Lantto等，2002，Methods Mol. Biol. 178:303-316。在全長輕鏈和重鏈中，可變區(qū)和恒定區(qū)由約12或更多個氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈亦包括約10多個氨基酸的“D”區(qū)。參見例如Fundamental Immunology,第2版，第7章(Paul, W.編輯)1989，New York: Raven Press。每一輕鏈/重鏈對的可變區(qū)通常形成抗原結(jié)合位點?？勺儏^(qū)
本文提供的各種重鏈和輕鏈可變區(qū)(或結(jié)構(gòu)域)在表I和2中描述。這些可變區(qū)中的每一個可例如與上述重鏈和輕鏈恒定區(qū)連接。另外，如此產(chǎn)生的重鏈和輕鏈序列中的每一個可組合以形成完全抗原結(jié)合蛋白結(jié)構(gòu)。提供含有至少一個重鏈可變區(qū)(VH)和/或至少一個輕鏈可變區(qū)(VL)的抗原結(jié)合蛋白，所述重鏈可變區(qū)選自VH1、VH2、VH3、VH4、VH5、VH6、VH7、VH8、VH9、VH10、VH11、VH12、VHl3, VH14、VHl5 和 VH16 ;所述輕鏈可變區(qū)選自VLU VL2、VL3、VL4、VL5、VL6、VL7、VL8、VL9、VL10、VL11、VL12、VL13、VL14、VL15 和 VL16，其如下表 I 和 2 所示。表2中所列重鏈可變區(qū)的每一種可與表I中所示的任何輕鏈可變區(qū)組合，以形成抗原結(jié)合蛋白。在一些情況下，抗原結(jié)合蛋白包括來自表I和2中所列的那些的至少一個 重鏈可變區(qū)和/或一個輕鏈可變區(qū)。在一些情況下，抗原結(jié)合蛋白包括來自表I和2中所列的那些的至少兩個不同的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)。重鏈可變區(qū)的各種組合可與任何輕鏈可變區(qū)的各種組合組合。在其它情況下，抗原結(jié)合蛋白含有兩個相同的輕鏈可變區(qū)和/或兩個相同的重鏈可變區(qū)。舉例而言，抗原結(jié)合蛋白可為抗體或免疫學(xué)功能片段，其包含如表I和2中所列的輕鏈可變區(qū)對和重鏈可變區(qū)對的組合中的兩個輕鏈可變區(qū)和兩個重鏈可變區(qū)。所述包含兩個相同的重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗原結(jié)合蛋白實例包括抗體A VH14/ VL14 ;抗體B VH9/VL9 ;抗體 C VHlO/ VLlO ;抗體 D VH15/ VL15 ;抗體 E VHl/ VLl ;抗體 F VHll/ VLll ;抗體G VH12/ VL12 ;抗體 H VH13/ VL13 ;抗體 I VH8/ VL8 ;抗體 J VH3/ VL3 ;抗體 K VH7/ VL7 ；抗體 L VH4/ VL4 ;抗體 M VH5/ VL5 和抗體 N VH6/ VL6。提供的一些抗原結(jié)合蛋白包含重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)包含僅以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個氨基酸殘基與選自表I和2的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)的序列不同的氨基酸序列，其中每一所述序列差異獨立為一個氨基酸的缺失、插入或取代。在一些抗原結(jié)合蛋白中，輕鏈和重鏈可變區(qū)包含與表 I 和 2 提供的氨基酸序列具有至少 70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。其它抗原結(jié)合蛋白，例如，抗體或免疫學(xué)功能片段，亦包括本文所述的變體重鏈區(qū)形式和/或變體輕鏈區(qū)形式。術(shù)語“同一性”是指兩個或更多個多肽分子或兩個或更多個多核苷酸的序列之間的關(guān)系，其通過比對和比較序列來測定。“同一性百分比”意指被比較的分子的氨基酸或核苷酸之間相同殘基的百分比，基于正被比較的最小分子的大小來計算·
權(quán)利要求
1.一種結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含至少一個重鏈可變區(qū)和至少一個輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3 a)與表3中所示的CDRHl相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的CDRHl； b)與表3中所示的CDRH2相差不超過3個氨基酸取代、插入和/或缺失的CDRH2； c)與表3中所示的CDRH3相差不超過3個氨基酸取代、插入和/或缺失的CDRH3； 所述輕鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3 d)與表3中所示的⑶RLl相差不超過3個氨基酸取代、插入和/或缺失的⑶RLl； e)與表3中所示的⑶RL2相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL2； f)與表3中所示的⑶RL3相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL3。
2.權(quán)利要求I的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含至少一個重鏈可變區(qū)，亦包含至少一個輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3 a)與表3中所示的CDRHl相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的CDRHl； b)與表3中所示的CDRH2相差不超過2個氨基酸取代、插入和/或缺失的CDRH2； c)與表3中所示的CDRH3相差不超過2個氨基酸取代、插入和/或缺失的CDRH3； 所述輕鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3 d)與表3中所示的⑶RLl相差不超過2個氨基酸取代、插入和/或缺失的⑶RLl； e)與表3中所示的⑶RL2相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL2； f)與表3中所示的⑶RL3相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL3。
3.權(quán)利要求I的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含至少一個重鏈可變區(qū)，亦包含至少一個輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3 a)與表3中所示的CDRHl相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的CDRHl； b)與表3中所示的CDRH2相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的CDRH2； c)與表3中所示的CDRH3相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的CDRH3； 所述輕鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3 d)與表3中所示的⑶RLl相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RLl； e)與表3中所示的⑶RL2相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL2； f)與表3中所示的⑶RL3相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失的⑶RL3。
4.一種結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白選自a)具有CDRHl 為 SEQ ID NO: 129、CDRH2 為 SEQ ID NO: 132、CDRH3 為 SEQ ID NO: 136及 CDRLl 為 SEQ ID NO: 123、CDRL2 為 SEQ ID NO: 81 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 76 的抗原結(jié)合蛋白；b)具有CDRHl 為 SEQ ID NO: 131、CDRH2 為 SEQ ID NO: 134、CDRH3 為 SEQ ID NO: 137及 CDRLl 為 SEQ ID NO: 124、CDRL2 為 SEQ ID NO: 126 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 128 的抗原結(jié)合蛋白；c)a)具有 CDRHl 為 SEQ ID NO: 130、CDRH2 為 SEQ ID NO: 133、CDRH3 為 SEQ ID NO:·99 及 CDRLl 為 SEQ ID NO: 68、CDRL2 為 SEQ ID NO: 69 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 67 的抗原結(jié)合蛋白；和d)具有CDRHl 為 SEQ ID NO: 91、CDRH2 為 SEQ ID NO: 135、CDRH3 為 SEQ ID NO: 138及 CDRLl 為 SEQ ID NO: 125、CDRL2 為 SEQ ID NO: 127 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 64 的抗原結(jié)合蛋白。
5.權(quán)利要求I的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含 選自以下的 CDRHl :SEQ ID NO: 91、94、97、100 和 103 ; 選自以下的 CDRH2 :SEQ ID NO: 92、95、98、101、104、107 和 110 ; 選自以下的 CDRH3 :SEQ ID NO: 93、96、99、102 和 105 ; 選自以下的 CDRLl :SEQ ID NO: 62、65、68、71 和 74 ; 選自以下的 CDRL2 :SEQ ID NO: 63、66、69、72、75 和 78 ;和選自以下的 CDRL3 :SEQ ID NO: 64、67、70 和 73。
6.權(quán)利要求I的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含 選自以下的 CDRHl :SEQ ID NO: 91、106、109、112 和 115 ; 選自以下的 CDRH2 :SEQ ID NO: 113、116、118、120、121 和 122 ; 選自以下的 CDRH3 :SEQ ID NO: 108、111、114、117 和 119 ; 選自以下的 CDRLl :SEQ ID NO: 77、80、83、85、86、87、88、89 和 90 ;CDRL2 為 SEQ ID NO: 81 ;和 選自以下的 CDRL3 :SEQ ID NO: 76、79、82 和 84。
7.一種結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含選自以下的至少一個重鏈可變區(qū)和至少一個輕鏈可變區(qū) a)包含SEQID NO: 31的31_35、50_65和99-113位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: I的23-36、52-58和91-101位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； b)包含SEQID NO: 34的31-35、50-65和99-110位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO: 36的31_35、50_66和99-110位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 4的23-36、52-62和97-105位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； c)包含SEQID NO: 38的31_35、50_66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 7的23-34、50-61和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； d)包含SEQID NO: 40的31_35、50_66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 9的24-34、50-56和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； e)包含SEQID NO: 42的31_35、50_66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 11的23-34、50-61和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； f)包含SEQID NO: 44的31_35、50_65和98-107位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 13的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； g)包含SEQID NO: 46或153的31_37、52_67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID N015的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； h)包含SEQID NO: 48的31_37、52_67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 17的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； i)包含SEQID NO: 50的31_37、52_67和101-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 19的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； j)包含SEQ ID NO: 52的31_35、50_65和98-107位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 21的24-34、50-56和98-107位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；k)包含SEQ ID NO: 54的31_37、52_67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 23的24_34、50_56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)； I)包含SEQ ID NO: 56的31_37、52_67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 25的24_34、50_56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；和 m)包含SEQ ID NO: 58的31_37、52_57和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)；和 包含SEQ ID NO: 27的24-34、500-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)。
8.權(quán)利要求I的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含至少一個重鏈可變區(qū)和至少一個輕鏈可變區(qū)。
9.權(quán)利要求I的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含至少兩個重鏈可變區(qū)和至少兩個輕鏈可變區(qū)。
10.一種結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合蛋白包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中所述重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過13個氨基酸取代、添加和/或缺失；和其中所述輕鏈可變區(qū)序列與表I中所示的輕鏈可變區(qū)序列相差不超過13個氨基酸取代、添加和/或缺失。
11.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過11個氨基酸取代、插入和/或缺失。
12.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過5個氨基酸取代、插入和/或缺失。
13.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過2個氨基酸取代、插入和/或缺失。
14.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過I個氨基酸取代、插入或缺失。
15.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變區(qū)序列與表I中所示的輕鏈可變區(qū)序列相差不超過7個氨基酸取代、插入和/或缺失。
16.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變區(qū)序列與表I中所示的輕鏈可變區(qū)序列相差不超過4個氨基酸取代、插入和/或缺失。
17.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變區(qū)序列與表I中所示的輕鏈可變區(qū)序列相差不超過2個氨基酸取代、插入和/或缺失。
18.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變區(qū)序列與表I中所示的輕鏈可變區(qū)序列相差不超過I個氨基酸取代、插入和/或缺失。
19.一種選自以下的結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白 a)SEQ ID NO: 140重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 30輕鏈可變區(qū)； b)SEQ ID NO: 141重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 61輕鏈可變區(qū)； c)SEQ ID NO: 142重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 4輕鏈可變區(qū)；和 d)SEQ ID NO: 143重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 139輕鏈可變區(qū)。
20.一種結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含 由與 SEQ ID NO: 31、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56 和 58 具有至少 90% 序列同一性的氨基酸序列組成的重鏈可變區(qū)；和 包含與 SEQ ID NO: 1、4、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25 和 27 具有至少 90%序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
21.權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白， 重鏈可變區(qū)由與 SEQ ID NO: 31、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56 和 58 具有至少95%序列同一性的氨基酸序列組成；和 輕鏈可變區(qū)包含與 SEQ ID NO: 1、4、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25 和 27 具有至少95%序列同一性的氨基酸序列。
22.權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含 由與 SEQ ID NO: 31、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56 和 58 具有至少 97% 序列同一性的氨基酸序列組成的重鏈可變區(qū)；和 包含與 SEQ ID NO: 1、4、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25 和 27 具有至少 97%序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
23.權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含 由與 SEQ ID NO: 31、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56 和 58 具有至少 98% 序列同一性的氨基酸序列組成的重鏈可變區(qū)；和 包含與 SEQ ID NO: 1、4、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25 和 27 具有至少 98%序列同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
24.權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含 選自 SEQ ID NO: 44、46、48、50、52、54、56、58 和 153 的重鏈可變區(qū)和 選自 SEQ ID NO: 13、15、17、19、21、23、25 和 27 的輕鏈可變區(qū)。
25.權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含 選自SEQ ID NO: 31、34、36、38、40和42的重鏈可變區(qū)和 選自SEQ ID NO: 1、4、7、9和11的輕鏈可變區(qū)。
26.—種結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，包含選自以下的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū) a)SEQ ID NO: 31重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: I輕鏈可變區(qū)； b)SEQ ID NO: 34或36重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 4輕鏈可變區(qū)； c)SEQ ID NO: 38重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 7輕鏈可變區(qū)； d)SEQ ID NO: 40重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 9輕鏈可變區(qū)； e)SEQ ID NO: 42重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 11輕鏈可變區(qū)； f)SEQ ID NO: 44重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 13輕鏈可變區(qū)； g)SEQ ID NO: 46或153重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 15輕鏈可變區(qū)； h)SEQ ID NO: 48重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 17輕鏈可變區(qū)； i)SEQ ID NO: 50重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 19輕鏈可變區(qū)； j) SEQ ID NO: 52重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 21輕鏈可變區(qū)； k) SEQ ID NO: 54重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 23輕鏈可變區(qū)； I) SEQ ID NO: 56重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 25輕鏈可變區(qū)；和 m) SEQ ID NO: 58重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 27輕鏈可變區(qū)。
27.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含SEQ ID NO: 15的30、31、32、49、50、52、53、56、92和94位殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于10 A2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。
28.—種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含SEQ ID NO: 46的31-35、54、58-60、66和101-105位殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于10 A2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。
29.—種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含SEQ ID NO: I的31-34、51、52、55、68、93和98位殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于10 A2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。
30.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁包含 SEQ ID NO: 31 的 1、26、28、31、32、52、53、59、76、101、102 和104-108位殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于10 A2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。
31.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 46的32-35、54、58-60、66和101-105位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。
32.權(quán)利要求31的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 46的31-35、54、56、58-60、66和101-105位殘基5 A或更近。
33.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 15的30-32、49、52、53、91-94和96位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。
34.權(quán)利要求33的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 15的30-32，49、50、52、53、56、91_94和96位殘基5 A 或更近。
35.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: 31的26-28、31、53、59、102和104-108位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。
36.權(quán)利要求35的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離 SEQ ID NO: 31 的 1、26-28、30-32、52、53、59、100 和 102-108 位殘基5 A或更近。
37.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: I的31-34、51、52、55、68和93位殘基5 A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。
38.權(quán)利要求37的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離SEQ ID NO: I的29、31-34、51、52、55、68、93和100位殘基5 A或更近。
39.權(quán)利要求1、4、7、10、19、20、26-31、33、35或37的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白為抗體。
40.權(quán)利要求39的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗體為單克隆抗體、重組抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗體片段。
41.權(quán)利要求40的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗體片段為Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、雙抗體或單鏈抗體分子。
42.權(quán)利要求40的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白為人抗體。
43.權(quán)利要求40的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白為單克隆抗體。
44.權(quán)利要求39的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白屬于IgGl型、IgG2型、IgG3型或IgG4型。
45.權(quán)利要求44的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白屬于IgGl型或IgG2型。
46.一種編碼權(quán)利要求1、4、7、10、19、20或26的抗原結(jié)合蛋白的分離的核酸分子。
47.權(quán)利要求46的分離的核酸分子，其中至少一個重鏈可變區(qū)由選自以下的分離的核 酸分子編碼SEQ ID NO: 32、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59 和 152 ;和至少一個輕鏈可變區(qū)由選自以下的分離的核酸分子編碼SEQ ID NO: 2、5、6、8、10、12、14、16、.18、20、22、24、26 和 28。
48.權(quán)利要求47的核酸分子，其中所述核酸分子與調(diào)控序列可操作地連接。
49.一種包含權(quán)利要求46的核酸分子的載體。
50.一種包含權(quán)利要求46的核酸分子的宿主細(xì)胞。
51.—種包含權(quán)利要求49的載體的宿主細(xì)胞。
52.一種足以用作雜交探針、PCR引物或測序引物的分離的多核苷酸，其為權(quán)利要求47的核酸分子的片段或其互補序列。
53.—種制備權(quán)利要求I、4、7、10、19、20或26的抗原結(jié)合蛋白的方法,所述方法包括從分泌所述抗原結(jié)合蛋白的宿主細(xì)胞制備所述抗原結(jié)合蛋白的步驟。
54.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁，包含如SEQ ID NO: 145中所述的人IL-23pl9亞基的46-58位殘基內(nèi)的殘基接觸、112-120位殘基內(nèi)的殘基接觸和155-163位殘基內(nèi)的殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于IOA2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。
55.權(quán)利要求54的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時形成的覆蓋補丁，進(jìn)一步包含如SEQ ID NO: 147中所述的人IL_23p40亞基的121-125位殘基內(nèi)的殘基接觸，其中所述殘基接觸具有大于或等于IOA2的差值，其如通過溶劑暴露表面積所測定。
56.一種結(jié)合人IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離如SEQ ID NO: 145中所述的人IL-23pl9亞基的以下殘基5A或更近46-58位殘基內(nèi)的殘基，112-123位殘基內(nèi)的殘基，和155-163位殘基內(nèi)的殘基；其如通過X射線晶體學(xué)所測定。
57.權(quán)利要求56的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中當(dāng)所述抗原結(jié)合蛋白與人IL-23結(jié)合時，所述抗原結(jié)合蛋白離如SEQ ID NO: 147中所述的人IL-23p40亞基的121-125位殘基內(nèi)的殘基5A或更近，其如通過X射線晶體學(xué)所測定。
58.權(quán)利要求1、4、7、10、19、20、26-31、33、35、37、54或56的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白具有選自以下的至少一種特性 a)降低人IL-23活性；b)降低促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生； c)以彡5X10_8 M的Kd與人IL-23結(jié)合； d)具有彡5X 10_6 1/s的Koff速率；和 e)具有彡400pM的IC500
59.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求I、4、7、10、19、20或26的至少一種抗原結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的賦形劑。
60.權(quán)利要求59的藥物組合物，其進(jìn)一步包含標(biāo)記基團(tuán)或效應(yīng)基團(tuán)。
61.權(quán)利要求60的藥物組合物，其中所述標(biāo)記基團(tuán)選自同位素標(biāo)記、磁性標(biāo)記、氧化還原活性部分、光學(xué)染料、生物素化基團(tuán)和被第二報道分子識別的預(yù)定多肽表位。
62.權(quán)利要求60的藥物組合物，其中所述效應(yīng)基團(tuán)選自放射性同位素、放射性核素、毒素、治療基團(tuán)和化療基團(tuán)。
63.權(quán)利要求60的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白與標(biāo)記基團(tuán)偶聯(lián)。
64.一種用于治療或預(yù)防患者中的與IL-23有關(guān)的病況的方法，所述方法包括給予有需要的患者有效量的權(quán)利要求1、4、7、10、19、20或26的至少一種分離的抗原結(jié)合蛋白。
65.權(quán)利要求64的方法，其中所述病況選自炎性病癥、風(fēng)濕病、自身免疫性疾病、腫瘤病癥和胃腸道病癥。
66.權(quán)利要求65的方法，其中所述病況選自多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、銀屑病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病關(guān)節(jié)炎、自身免疫性心肌炎；1型糖尿病和強直性脊柱炎。
67.權(quán)利要求64的方法，其中所述分離的抗原結(jié)合蛋白質(zhì)單獨或作為聯(lián)合療法給予。
68.一種降低患者中的IL-23活性的方法，所述方法包括給予有效量的權(quán)利要求1、4、7、10、19、20或26的至少一種抗原結(jié)合蛋白。
69.權(quán)利要求68的降低IL-23活性的方法，其中所述IL-23活性誘導(dǎo)產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子。
全文摘要
本發(fā)明提供與人IL-23蛋白結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白。亦提供編碼所述抗原結(jié)合蛋白的核酸、編碼所述抗原結(jié)合蛋白的載體和細(xì)胞以及IL-23抗原結(jié)合蛋白用于診斷和治療目的的用途。
文檔編號C07K16/24GK102741285SQ201080059062
公開日2012年10月17日 申請日期2010年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者D.E.皮珀, H.塞爾恩, J.C.奧奈爾, J.D.鄭, J.E.托恩, R.R.克徹姆, 孫雨, 張宇 申請人:安姆根有限公司