人il-23抗原結(jié)合蛋白的制作方法
【專利說明】人IL-23抗原結(jié)合蛋白
[0001] 本申請(qǐng)為分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的申請(qǐng)日為2010年10月26日，申請(qǐng)?zhí)枮?201080059062. X(PCT/US2010/054148)，發(fā)明名稱為"人 IL-23 抗原結(jié)合蛋白"。
[0002] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用 本申請(qǐng)依據(jù)35 U.S.C. 119(e)，要求保護(hù)于2009年10月26日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?61/254, 982和于2010年9月9日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?1/381，287的權(quán)益，所述申請(qǐng)通 過引用并入本文中。
[0003] 背景 白介素23 (IL-23)這種異二聚體細(xì)胞因子是促炎細(xì)胞因子的有效誘導(dǎo)物。IL-23與異 二聚體細(xì)胞因子白介素12 (IL-12)有關(guān)，二者都共有共同的p40亞基。在IL-23中，獨(dú)特 的pl9亞基與p40亞基共價(jià)結(jié)合。在IL-12中，獨(dú)特的亞基為p35 (Oppmann等，Immunity, 2000，13: 713-715)。IL-23異二聚體蛋白為分泌性的。象IL-12-樣，IL-23由抗原呈遞 細(xì)胞（例如樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）因響應(yīng)激活刺激例如CD40連接、Toll樣受體激動(dòng)劑和 病原體而表達(dá)。IL-23結(jié)合異二聚體受體，所述受體包含IL-12RM亞基（其與IL-12受 體共有）和獨(dú)特的受體亞基IL-23R。IL-12受體由IL-12R0 1和IL-12R0 2組成。IL-23 結(jié)合其異二聚體受體，并通過JAK2和Tyk2傳導(dǎo)信號(hào)以激活STAT1、3、4和5 (Parham等，J. Immunol. 2002，168:5699-708)。所述受體亞基主要在激活的或記憶T細(xì)胞和自然殺傷細(xì) 胞上共表達(dá)，在樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和滑膜成纖維細(xì) 胞上亦以較低水平表達(dá)。IL-23和IL-12對(duì)不同的T細(xì)胞亞群起作用，在體內(nèi)起基本上不同 的作用。
[0004] IL-23對(duì)激活的和記憶T細(xì)胞起作用，并促進(jìn)T細(xì)胞亞群Thl7的存活和擴(kuò)增。Thl7 細(xì)胞產(chǎn)生包括11-6、幾-17、了即€1、幾-22和61^5?在內(nèi)的促炎細(xì)胞因子。幾-23亦對(duì)自然 殺傷細(xì)胞、樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞起作用，以誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子表達(dá)。不象IL-23, IL-12誘導(dǎo) 幼稚⑶4+ T細(xì)胞分化為成熟的產(chǎn)IFNy效應(yīng)細(xì)胞Thl，并通過刺激IFNy生產(chǎn)誘導(dǎo)NK和細(xì) 胞毒性T細(xì)胞的功能。先前認(rèn)為在很多自身免疫性疾病中由IL-12驅(qū)動(dòng)的Thl細(xì)胞為病原 性T細(xì)胞亞群，然而，最近在炎性腸病、銀肩病、炎性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化癥模型中的動(dòng)物 研宄（其中評(píng)估了 IL-12與IL-23相比的單獨(dú)貢獻(xiàn)），堅(jiān)定地確定在自身免疫/炎性疾病 中是 IL-23 而不是 IL-12 為關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)者（Ahern 等，Immun. Rev. 2008 226:147-159 ;Cua 等，Nature 2003 421:744-748 ;Yago 等，Arthritis Res and Ther. 2007 9(5): R96)。認(rèn) 為IL-12在針對(duì)很多細(xì)胞內(nèi)病原體和病毒的保護(hù)性先天免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答發(fā)展 中及在腫瘤免疫監(jiān)視中起關(guān)鍵作用。參見Kastelein等，Annual Review of Immunology, 2007，25: 221-42 ;Liu，等，Rheumatology, 2007，46(8): 1266-73 ;Bowman 等，Current Opinion Infectious Diseases, 2006 19:245-52 ;Fieschi 和 Casanova, Eur. J. Immunol. 2003 33:1461-4 ;Meeran 等，Mol. Cancer Ther. 2006 5: 825-32 ;Langowski 等，Nature 2006 442: 461-5。因此，與IL-12及IL-23雙重抑制相比，IL-23特異性抑制 (寬免IL-12或共享的p40亞基）應(yīng)該具有潛在更優(yōu)越的安全特性。
[0005] 因此，抑制人IL-23而寬免IL-12的IL-23特異性拮抗劑（例如至少結(jié)合IL-23的 獨(dú)特的P19亞基或結(jié)合IL-23的pl9和p40亞基二者的抗體）的使用，應(yīng)該提供等于或大 于IL-12拮抗劑或p40拮抗劑的效力而無與抑制IL-12關(guān)聯(lián)的可能風(fēng)險(xiǎn)。業(yè)已闡述了選擇 用于抑制重組IL-23的鼠、人源化和噬菌體展示抗體；參見例如美國(guó)專利7, 491，391、WIPO[0006] 簡(jiǎn)述 提供結(jié)合IL-23尤其是天然人IL-23的抗原結(jié)合蛋白。人IL-23抗原結(jié)合蛋白可降低、 抑制、干擾和/或調(diào)節(jié)至少一種與IL-23相關(guān)的生物反應(yīng)，如此，用于改善IL-23相關(guān)疾病 或病癥的影響?？衫鐚L-23抗原結(jié)合蛋白用于降低、抑制、干擾和/或調(diào)節(jié)IL-23信號(hào) 傳導(dǎo)、IL-23對(duì)Thl7細(xì)胞的激活、IL-23對(duì)NK細(xì)胞的激活或誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生。
[0007] 亦提供包括細(xì)胞系在內(nèi)的表達(dá)系統(tǒng)用于生產(chǎn)IL-23抗原結(jié)合蛋白，并提供診斷和 治療與人IL-23相關(guān)疾病的方法。
[0008] 提供的結(jié)合IL-23的一些抗原結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)重鏈可變區(qū)并包含至少一 個(gè)輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自以下的⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3 :與表3中所示的 CDRH1相差不超過1個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的CDRH1 ;與表3中所示的CDRH2相差不超 過3個(gè)、2個(gè)或1個(gè)氨基酸取代、插入和/或缺失的CDRH2 ;與表3中所示的CDRH3相差不超 過3個(gè)、2個(gè)或1個(gè)氨基酸取代、插入和/或缺失的⑶RH3 ;所述至少一個(gè)輕鏈可變區(qū)包含選 自以下的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3 :與表3中所示的⑶RL1相差不超過3個(gè)、2個(gè)或1個(gè)氨基 酸取代、插入和/或缺失的CDRL1;與表3中所示的CDRL2相差不超過1個(gè)氨基酸取代、插入 或缺失的CDRL2 ;與表3中所示的CDRL3相差不超過1個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的CDRL3。 在一個(gè)實(shí)施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含：選自SEQ ID N0: 91、94、97、100和 103 的 CDRH1;選自 SEQ ID NO: 92、95、98、101、104、107和110的〇)冊(cè)2;選自5￡0 10勵(lì)： 93、96、99、102和105的〇)冊(cè)3;選自5￡010勵(lì)：62、65、68、71和74的〇)虬1 ;選自5￡010 N0: 63、66、69、72、75和78的〇)虬2;和選自5￡010勵(lì)：64、67、70和73的〇)虬3。在另一 實(shí)施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含：選自SEQ ID N0: 91、106、109、112和115 的 CDRH1;選自 SEQ ID N0: 113、116、118、120、121和122的〇)冊(cè)2;選自5￡0 10勵(lì)：108、 111、114、117 和 119 的 CDRH3;選自 SEQ ID NO: 77、80、83、85、86、87、88、89和90的〇)虬1; 為 SEQ ID NO: 81 的 CDRL2;和選自 SEQ ID NO: 76、79、82 和 84 的 CDRL3。在另一實(shí)施方 案中，提供包含至少一個(gè)重鏈可變區(qū)和至少一個(gè)輕鏈可變區(qū)的分離的抗原結(jié)合蛋白。在又 一實(shí)施方案中，提供如上所述的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含至少兩個(gè)重鏈可變區(qū)和至少 兩個(gè)輕鏈可變區(qū)。在又一實(shí)施方案中，提供分離的抗原結(jié)合蛋白，其中抗原結(jié)合蛋白與標(biāo)記 基團(tuán)偶聯(lián)。
[0009] 亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其選自：a)具有CDRH1為SEQ ID N0: 129、CDRH2 為 SEQ ID NO: 132、CDRH3 為 SEQ ID NO: 136 和 CDRL1 為 SEQ ID NO: 123、 CDRL2 為 SEQ ID NO: 81 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 76 的抗原結(jié)合蛋白；b)具有 CDRH1 為 SEQ ID NO: 131、CDRH2 為 SEQ ID NO: 134、CDRH3 為 SEQ ID NO: 137 和 CDRL1 為 SEQ ID NO: 124、CDRL2 為 SEQ ID NO: 126 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 128 的抗原結(jié)合蛋白；c) a)具有 CDRH1 為 SEQ ID NO: 130、CDRH2 為 SEQ ID NO: 133、CDRH3 為 SEQ ID NO: 99 和 CDRL1 為 SEQ ID NO: 68、CDRL2 為 SEQ ID NO: 69 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 67 的抗原結(jié)合蛋白；和 d)具有 CDRH1 為 SEQ ID NO: 91、CDRH2 為 SEQ ID NO: 135、CDRH3 為 SEQ ID NO: 138 和 CDRL1 為 SEQ ID NO: 125、CDRL2 為 SEQ ID NO: 127 和 CDRL3 為 SEQ ID NO: 64 的抗原結(jié) 合蛋白。
[0010]亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自以下的至少一個(gè)重鏈可變 區(qū)和至少一個(gè)輕鏈可變區(qū)：包含SEQ ID NO: 31的31-35、50-65和99-113位氨基酸殘基 的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 1的23-36、52-58和91-101位氨基酸殘基的輕鏈可變 區(qū)；包含SEQ ID N0: 34的31-35、50-65和99-110位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)、包含SEQ ID N0: 36的31-35、50-66和99-110位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID N0: 4的 23- 36、52-62和97-105位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 38的31-35、50-66 和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 7的23-34、50-61和94-106 位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID N0: 40的31-35、50-66和99-114位氨基酸殘 基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID N0: 9的24-34、50-56和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可 變區(qū)；包含SEQ ID N0: 42的31-35、50-66和99-114位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含 SEQ ID N0: 11的23-34、50-61和94-106位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID N0: 44的31-35、50-65和98-107位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 13的24-34、 50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 46或SEQ ID NO: 153的 31-37、52-67和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID N015的24-34、50-56 和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 48的31-37、52-67和100-109位 氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID N0: 17的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的 輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID N0: 50的31-37、52-67和101-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)， 和包含SEQ ID N0: 19的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 52的31-35、50-65和98-107位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 21的 24- 34、50-56和98-107位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID NO: 54的31-37、52-67 和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO: 23的24-34、50-56和89-97 位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)；包含SEQ ID N0: 56的31-37、52-67和100-109位氨基酸殘 基的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID N0: 25的24-34、50-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可 變區(qū)；以及包含SEQ ID N0: 58的31-37、52-57和100-109位氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)，和 包含SEQ ID N0: 27的24-34、500-56和89-97位氨基酸殘基的輕鏈可變區(qū)。
[0011]本文提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)， 其中重鏈可變區(qū)序列與表2中所示的重鏈可變區(qū)序列相差不超過13、12、11、10、9、8、7、6、 5、4、3、2或1個(gè)氨基酸取代、添加和/或缺失；和其中輕鏈可變區(qū)序列與表1中所示的輕鏈 可變區(qū)序列相差不超過13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個(gè)氨基酸取代、添加和/或缺 失。
[0012]亦提供結(jié)合IL-23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其選自：a) SEQ ID N0: 140重鏈可變 區(qū)和SEQ ID NO: 30輕鏈可變區(qū)；b) SEQ ID NO: 141重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 61輕鏈 可變區(qū)；c) SEQ ID NO: 142重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 4輕鏈可變區(qū)；和d) SEQ ID NO: 143重鏈可變區(qū)和SEQ ID NO: 139輕鏈可變區(qū)。
[0013] 亦提供包含重鏈可變區(qū)及輕鏈可