提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其包括以下步驟：(1)將取好材的老鼠食管進行包埋，選用冰凍切片方法將老鼠食道橫斷面包被于載玻片對應的孔徑內(nèi)；(2)將恒溫干燥箱調(diào)至25±5℃，使切好的老鼠食道切片在干燥箱內(nèi)恒溫干燥40至100分鐘，干燥后獲得包被的角蛋白抗原；通過改變抗原的處理方式，使抗原的高級結構得以保存，保留更多的抗原決定簇，能夠結合更多的特異性抗體，從而有效提升包被角蛋白抗原的反應活性。
【專利說明】提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法。

【背景技術】
[0002] 目前，免疫學檢測技術及其產(chǎn)品已廣泛應用于重大傳染性疾病、自身免疫性疾病、 腫瘤標志物、食品安全及優(yōu)生優(yōu)育等眾多檢測領域，在這些檢測技術如間接免疫熒光試驗、 酶聯(lián)免疫吸附試驗，酶聯(lián)免疫斑點法試驗，膠體金快速檢測試驗中，抗原的包被都是檢測前 必不可少的重要環(huán)節(jié)。目前抗原的包被都是根據(jù)抗原自身的特點，如等電點、自身結構、所 帶電荷等選擇相應的包被方法，包被的結果是通過物理或化學作用使抗原吸附于包被載體 表面，使得后續(xù)的免疫反應得以進行。現(xiàn)有包被技術所忽略的問題是抗原吸附于載體表面 后所產(chǎn)生的空間結構變化，這種變化會導致位于抗原表面的一部分抗原決定簇埋藏于抗原 結構內(nèi)部，無法與其對應的特異性抗體發(fā)生結合，由此而產(chǎn)生的特異性結合的抗體數(shù)量就 會減少，最終導致檢測靈敏°c水平有所下降。因而如何解決抗原表面的抗原決定簇減少這 個問題，成為提升抗原反應活性、提高檢測靈敏1:水平以及改善產(chǎn)品性能的關鍵。因此，有 待研究提升抗原反應活性的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的主要目的在于克服現(xiàn)有產(chǎn)品存在的上述缺點，而提供一種提升包被角蛋 白抗原反應活性的工藝方法，通過改變抗原的處理方式，使抗原的高級結構得以保存，保留 更多的抗原決定簇，能夠結合更多的特異性抗體，從而有效提升包被角蛋白抗原的反應活 性。
[0004] 本發(fā)明的目的是由以下技術方案實現(xiàn)的。
[0005] 本發(fā)明提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0006] (1)將取好材的老鼠食管進行包埋，選用冰凍切片方法將老鼠食道橫斷面包被于 載玻片對應的孔徑內(nèi)；（2)將恒溫干燥箱調(diào)至25±5°C，使切好的老鼠食道切片在干燥箱內(nèi) 恒溫干燥40至100分鐘，干燥后獲得包被的角蛋白抗原。
[0007] 前述的提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其中，所述冰凍切片機的型號 為LEICA 1900,切片時的箱體溫度為零下15至25°C，凍頭溫度為零下25至30°C，切片厚度 是4至8微米。
[0008] 前述的提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其中，所述干燥箱的型號為 LEICA 3420。
[0009] 本發(fā)明權利要求1所述提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法在間接免疫熒 光試驗中的應用。
[0010] 本發(fā)明提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法的有益效果，通過改變抗原的處 理方式，使抗原的高級結構得以保存，保留更多的抗原決定簇，能夠結合更多的特異性抗 體，從而有效提升包被角蛋白抗原的反應活性。影響包被角蛋白抗原活性的因素有很多，其 中組織切片厚度、干燥方法、干燥溫度、以及干燥時間等因素的選擇都至關重要，本發(fā)明采 用特定的切片厚度、有效的干燥方法和干燥條件獲得的包被角蛋白抗原陽性檢出率可提高 到88%，可見與現(xiàn)有技術相比，采用本發(fā)明工藝方法能夠有效提升包被角蛋白抗原的反應活 性。

【具體實施方式】
[0011] 本發(fā)明提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其包括以下步驟：（1)將取好 材的老鼠食管進行包埋，選用冰凍切片方法將老鼠食道橫斷面包被于載玻片對應的孔徑 內(nèi)；（2)將恒溫干燥箱調(diào)至25±5°C，使切好的老鼠食道切片在干燥箱內(nèi)恒溫干燥40至100 分鐘，干燥后獲得包被的角蛋白抗原。
[0012] 本發(fā)明提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其中，所述冰凍切片機的型號 為LEICA 1900,切片時的箱體溫度為零下15至25°C，凍頭溫度為零下25至30°C，切片厚度 是4至8微米。所述干燥箱的型號為LEICA 3420。
[0013] 本發(fā)明權利要求1所述提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法在間接免疫熒 光試驗中的應用。
[0014] 本發(fā)明提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法的特點是：老鼠食道的結構分為 四層，從外到內(nèi)分別是肌層、黏膜層、基底層和角質(zhì)層，本發(fā)明工藝方法所取得的角蛋白抗 原存在于最內(nèi)側的角質(zhì)層。本發(fā)明工藝方法通過冰凍切片技術獲得老鼠食道的組織切片， 再通過恒溫干燥方式獲得干燥的老鼠食道橫斷面，即要取得的角蛋白抗原。
[0015] 本發(fā)明的工藝方法通過冰凍切片方法，待組織片與包被載體吸附后在一定溫度烘 干后處理來達到提升包被抗原的反應活性，提高檢測靈敏度的目的。冰凍切片過程較簡單， 組織中的水分起著包埋劑的作用，組織不經(jīng)固定即可進行冰凍切片，切片厚度一般可在2-8 微米，組織沒有收縮，易保持生活時原有狀態(tài)，可有效保存抗原的高級結構，彌補吸附載體 后產(chǎn)生的構象變化所引起的抗原表面抗原決定簇減少的問題，同時又避免了對于抗原高級 結構整體性地破壞，不會干擾免疫反應。烘干的處理方式會使抗原在處理過程中保持活性 穩(wěn)定，較長的處理時間會使處理效果達到最終的平衡，使差異化降到最低的程度。需要注意 的是，不同的處理方法對抗原結構產(chǎn)生的影響不盡相同，所帶來的抗原決定簇變化是不能 完全預見的，因此針對不同的具體抗原應采用區(qū)別性的處理方法。
[0016] 實施例1
[0017] 采用ELISA方法檢測的角蛋白抗體陰陽性血清，其中1-50例為陽性樣本血清， 51-70例為陰性樣本血清。
[0018] A組：進口德國歐蒙角蛋白抗體間接免疫熒光法檢測試劑盒。
[0019] B組：將取好材的老鼠食管進行包埋，選用冰凍切片方法將老鼠食道橫斷面包被 于載玻片對應的孔徑內(nèi)；其中冰凍切片機為LEICA 1900型號，切片時的箱體溫度為零下 15°C，凍頭溫度為零下25°C，切片厚度是6微米，獲得角蛋白抗原。
[0020] C 組：
[0021] (1)包被：將取好材的老鼠食管進行包埋，選用冰凍切片方法將老鼠食道橫斷面包 被于載玻片對應的孔徑內(nèi)；其中冰凍切片機為LEICA 1900型號，切片時的箱體溫度為零下 15°C，凍頭溫度為零下25°C，切片厚度是6微米；
[0022] (2)干燥：將恒溫干燥箱調(diào)至30°C，使切好的老鼠食道切片在干燥箱內(nèi)恒溫干燥 Ih;其中干燥箱為LEICA 3420型號，干燥溫度為30°C，干燥時間lh，采用恒溫干燥方式。干 燥后即獲得包被的角蛋白抗原。
[0023] 通過抗原抗體反應對比以上三組實驗的效果。結果見表1。
[0024] 表 1 :

【權利要求】
1. 一種提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其特征在于，包括w下步驟： (1)將取好材的老鼠食管進行包埋，選用冰凍切片方法將老鼠食道橫斷面包被于載玻 片對應的孔徑內(nèi)；（2)將恒溫干燥箱調(diào)至25 + 5C，使切好的老鼠食道切片在干燥箱內(nèi)恒溫 干燥40至100分鐘，干燥后獲得包被的角蛋白抗原。
2. 根據(jù)權利要求1所述的提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其特征在于，所 述冰凍切片機的型號為LEICA 1900,切片時的箱體溫度為零下15至25C，凍頭溫度為零下 25至3(TC，切片厚度是4至8微米。
3. 根據(jù)權利要求1所述的提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法，其特征在于，所 述干燥箱的型號為LEICA 3420。
4. 如權利要求1所述提升包被角蛋白抗原反應活性的工藝方法在間接免疫英光試驗 中的應用。
【文檔編號】G01N21/64GK104344982SQ201310343208
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年8月8日 優(yōu)先權日:2013年8月8日
【發(fā)明者】賈江濤 申請人:北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)學科技有限公司