專利名稱：一種利用食用菌副產(chǎn)物分離提取活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于活性肽的提取方法，具體涉及利用食用菌副產(chǎn)物提取活性肽的技術(shù)。
背景技術(shù)：
肽(Peptides)是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類生物活性化合物，研究表明它可調(diào)節(jié)和抑制生物體內(nèi)的酶，具有免疫調(diào)節(jié)，抗血栓，抗高血壓，降膽固醇，抑制細(xì)菌、病毒，抗癌作用和抗氧化、清除自由基作用等，因此，活性肽是篩選藥物、制備疫苗和食品添加劑的天然資源寶庫(kù)，近年來(lái)日益受到各國(guó)人們的重視。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)消化道酶促水解后主要以小肽的形式吸收，比完全游離氨基酸更易、更快被機(jī)體吸收利用，在蛋白質(zhì)的肽鏈內(nèi)部可能存在著多功能區(qū)，這說(shuō)明蛋白質(zhì)是生物活性肽的前體，以為原料，選擇合適的蛋白酶水解這些多肽鏈，把其有生物活性的鏈片段釋放出來(lái)從而可制備出具有生理功能的食用菌活性肽。公開(kāi)號(hào)為CN03157121.2，發(fā)明名稱“大豆蛋白活性肽的制作方法”的發(fā)明專利， 公開(kāi)了一種大豆活性肽的制作方法；公開(kāi)號(hào)為CN00111376. 3，發(fā)明名稱“營(yíng)養(yǎng)活性肽添加劑的制作方法”的發(fā)明專利，公開(kāi)了一種新的營(yíng)養(yǎng)活性肽添加劑的制備方法；公開(kāi)號(hào)為 CN200810051141.0，發(fā)明名稱“一種玉米蛋白活性肽及其制備工藝”的發(fā)明專利，公開(kāi)了一種玉米活性肽的制作方法；公開(kāi)號(hào)為CN200710061492. 5，發(fā)明名稱“香菇抽提物的生產(chǎn)工藝”的發(fā)明專利，公開(kāi)了一種香菇抽提物的生產(chǎn)工藝；上述的分離方法價(jià)格昂貴，不適合工業(yè)化大生產(chǎn)。在活性多肽的工業(yè)生產(chǎn)中，目前的提取方法有很多種，如化學(xué)分離純化法、化學(xué)合成法、水解法、超濾法、層析法、電泳法等，在實(shí)際應(yīng)用中，常常采用上述幾種方法的組合對(duì)特定多肽類物質(zhì)進(jìn)行分離純化，一般采用化學(xué)法較多，主要是生產(chǎn)活性多肽的原料多種多樣，現(xiàn)行的工藝還比較粗糙，缺乏針對(duì)性以及投入較大、成本偏高，純度不高，分離困難等。采用傳統(tǒng)的化學(xué)分離純化法、化學(xué)合成法生產(chǎn)活性肽存在步驟繁瑣，分離困難，產(chǎn)品質(zhì)量和收率不穩(wěn)定等弊端，同時(shí)對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染?，F(xiàn)有技術(shù)未有采用復(fù)合酶酶解結(jié)合膜分離技術(shù)提取食用菌活性肽的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是采用簡(jiǎn)單易行的方法，生產(chǎn)食用菌活性肽，克服現(xiàn)有工藝比較粗糙， 缺乏針對(duì)性以及投入較大、成本偏高，純度不高，分離困難等技術(shù)的不足，采用雙酶酶解結(jié)合膜分離技術(shù)制備活性肽，反應(yīng)溫和，工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品肽含量豐富，質(zhì)量顯著優(yōu)于同類產(chǎn)品。本發(fā)明的技術(shù)方案本發(fā)明采用食用菌副產(chǎn)物如金針菇、杏鮑菇、蘑菇等，經(jīng)過(guò)預(yù)處理，采用復(fù)合酶解， 滅酶，并經(jīng)過(guò)濾，離心，所得粗提物經(jīng)膜分離，最后經(jīng)真空濃縮、噴霧干燥制備食用提取活性肽。本發(fā)明包括以下步驟
(1)預(yù)處理用食用菌副產(chǎn)物如金針菇、杏鮑菇、蘑菇等，洗干凈，搗碎，并碾磨呈糊狀。(2)酶解使水與物料料液重量比為1 12 16，PH值調(diào)整為7 9，溫度為35 55°C，添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1.2 1 1.2 1 1.2，底物物料與復(fù)合酶濃度重量比為3 5%，酶解時(shí)間3 5小時(shí)。(3)滅酶將酶解液升溫到80 90°C，保持15 20min，滅酶，同時(shí)離心分離酶解液。(4)初濾取酶解液經(jīng)板框過(guò)濾機(jī)初濾，濾材為尼龍濾布。(5)精濾粗濾液經(jīng)截留粒徑0. 1 0. 2μ m的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓 0. 15 0. 2MPa。(6)超濾精濾液再經(jīng)截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾， 濾過(guò)壓0. 15 0. 25MPa，截留收獲分子量為小于8000Da的肽液。(7)真空濃縮、噴霧干燥在60 80°C情況下，減壓濃縮至波美度25 30° Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥時(shí)，進(jìn)品溫度為130 138°C，出口溫度70 75°C。上述酶解步驟中優(yōu)選料液重量比為1 16，PH值為9，溫度為50°C，堿性蛋白酶、 木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比為1 1 1，底物物料與復(fù)合酶濃度重量比為3%，酶解時(shí)間 3小時(shí)；滅酶酶解液升溫優(yōu)選到90°C，保持20min ；精濾優(yōu)選0. 1 μ m的醋酸纖維有機(jī)膜、濾過(guò)壓優(yōu)選0. 15MPa ；；超濾濾過(guò)壓優(yōu)選0. 2MPa ；真空濃縮、噴霧干燥優(yōu)選在60°C情況下，減壓濃縮至波美度25° Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)品溫度為138°C，出口溫度75°C。上述方法提取的產(chǎn)品小肽(分子量SOOODa以下)含量大于80%。本發(fā)明利用食用菌提取活性肽，把酶解與膜分離技術(shù)結(jié)合在一起，利用膜分離產(chǎn)物，底物和酶被截留，不斷添加底物，即可以反復(fù)利用酶并得到高產(chǎn)率多肽產(chǎn)品的目的，它不僅提高了水的利用率，而且有利用于產(chǎn)品的分離純化。本發(fā)明采用雙酶酶解提取食用菌活性肽，具有反應(yīng)條件溫和、水解程度高，水解時(shí)間短，提取率高、成本低，生產(chǎn)過(guò)程中活性肽不會(huì)受到破壞等的特點(diǎn)，并且可以生產(chǎn)大量的小肽，不會(huì)對(duì)反應(yīng)環(huán)境造成危害。本發(fā)明采用雙酶酶解技術(shù)與膜分離技術(shù)結(jié)合，反應(yīng)條件溫和，容易分離多肽，工藝簡(jiǎn)單，得率高，得率大于9%，活性肽80%以上分布在8000Da以下。本發(fā)明采用雙酶酶解及膜分離工程技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了生產(chǎn)的食用菌活性肽產(chǎn)品收率高、分子量小，保持其原有天然品質(zhì)和性能，下表是本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比在生產(chǎn)周期、產(chǎn)品純度、產(chǎn)品產(chǎn)率方面的效果比較
現(xiàn)有技術(shù)本發(fā)明生產(chǎn)周期25 30小時(shí)18 20小時(shí)產(chǎn)品純度30% 40%以上分布在 8000Da以下80%以上分布在8000Da以下產(chǎn)品產(chǎn)率5 6%9 10%本發(fā)明工藝提取的食用菌副產(chǎn)物分離提取的活性肽，經(jīng)檢測(cè)下列指標(biāo)感官指標(biāo)為淡黃色粉末，味微苦。
理化指標(biāo)肽(8000Da以下)彡 80%砷(以As 計(jì))彡 1. Omg/kg汞(以Hg 計(jì))彡 0. 3mg/kg細(xì)菌指標(biāo)大腸菌群;^90MPN/100g霉菌彡 25cfu/g
菌落總數(shù)< 10000cfu/g 酵母彡25cfu/g
水分< 9%
鉛(以1 計(jì))彡1. 5mg/kg致病菌(沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌)不得檢出
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1用金針菇洗干凈，搗碎，并碾磨呈糊狀，使水與物料重量比為1 15，PH值調(diào)整為 9，溫度為50°C，添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1 1，底物物料與復(fù)合酶濃度重量比為3%，酶解時(shí)間3小時(shí)后，將酶解液升溫到90°C，保持20min，滅酶，同時(shí)離心分離酶解液；取酶解液經(jīng)板框過(guò)濾機(jī)初濾，濾材為尼龍濾布；粗濾液經(jīng)截留粒徑0. 1 μ m的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓為0. 15MPa ；精濾液再經(jīng)截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾，濾過(guò)壓0. 2MPa，截留收獲分子量為小于SOOODa的肽液；肽液真空濃縮、噴霧干燥，在70°C情況下，減壓濃縮至波美度Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥時(shí)，進(jìn)品溫度為138°C，出口溫度75°C。實(shí)施例2用香菇洗干凈，搗碎，并碾磨呈糊狀，使水與物料重量比為1 12，PH值調(diào)整為7， 溫度為35°C，添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1 1，底物物料與復(fù)合酶濃度重量比為3%，酶解時(shí)間4小時(shí)后，將酶解液升溫到85°C，保持18min，滅酶，同時(shí)離心分離酶解液；取酶解液經(jīng)板框過(guò)濾機(jī)初濾，濾材為尼龍濾布；粗濾液經(jīng)截留粒徑0. 2 μ m的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓為0. 2MPa ；精濾液再經(jīng)截留分子量6000Da的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾，濾過(guò)壓0. 25MPa，截留收獲分子量為小于7000Da的肽液；肽液真空濃縮、噴霧干燥，在80°C情況下，減壓濃縮至波美度30° Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥時(shí)，進(jìn)品溫度為i:35°C，出口溫度72°C。實(shí)施例3用金針菇洗干凈，搗碎，并碾磨呈糊狀，使水與物料重量比為1 12，PH值調(diào)整為 8，溫度為55°C，添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1 1，底物物料與復(fù)合酶重量比為3%，酶解時(shí)間5小時(shí)后，將酶解液升溫到80°C，保持15min，滅酶，同時(shí)離心分離酶解液；取酶解液經(jīng)板框過(guò)濾機(jī)初濾，濾材為尼龍濾布；粗濾液經(jīng)截留粒徑0. 15 μ m的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓為0. 2MPa ；精濾液再經(jīng)截留分子量6000Da的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾，濾過(guò)壓0. 15MPa，截留收獲分子量為小于6000Da的肽液；肽液真空濃縮、噴霧干燥，在60°C情況下，減壓濃縮至波美度25° Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥時(shí)，進(jìn)品溫度為130°C，出口溫度70°C。
權(quán)利要求
1.一種食用菌活性肽的提取分離方法，食用菌洗凈，搗碎，并碾磨呈糊狀，其特征在于包括下列步驟(1)酶解水與物料料液重量比為1:12 16，PH值調(diào)整為7 9，溫度為35 55°C， 添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1. 2:1 1. 2:1 1. 2，底物物料與復(fù)合酶濃度比為重量比3 5%，酶解時(shí)間3 5小時(shí)；(2)滅酶將酶解液升溫到80 90°C，保持15 20min，滅酶，同時(shí)離心分離酶解液；(3)初濾取酶解液經(jīng)板框過(guò)濾機(jī)初濾，濾材為尼龍濾布；(4)精濾粗濾液經(jīng)截留粒徑0.1 0. 2 μ m的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓0. 15 0.20MPa ；(5)超濾精濾液再經(jīng)截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾，濾過(guò)壓0. 15 0. 25MPa，截留收獲分子量為小于8000Da的肽液；(6)真空濃縮、噴霧干燥在60 80°C情況下，減壓濃縮至波美度25 30°Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥時(shí)，進(jìn)品溫度為130 138°C，出口溫度70 75°C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用菌活性肽的提取分離方法，其特征在于包括下列步驟(1)酶解水與物料料液重量比為1:16，PH值調(diào)整為9，溫度為50°C，添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1:1:1，底物物料與復(fù)合酶濃度比為3%，酶解時(shí)間3小時(shí)；(2)滅酶將酶解液升溫到90°C，保持20min，滅酶，同時(shí)離心分離酶解液；(3)初濾取酶解液經(jīng)板框過(guò)濾機(jī)初濾，濾材為尼龍濾布；(4)精濾粗濾液經(jīng)截留粒徑0.1 μ m的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓0. 15MPa ；(5)超濾精濾液再經(jīng)截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾，濾過(guò)壓0. 2MPa，截留收獲分子量為小于SOOODa的肽液；(6)真空濃縮、噴霧干燥在60°C情況下，減壓濃縮至波美度25°Be的浸膏后進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥時(shí)，進(jìn)品溫度為138°C，出口溫度75°C。
全文摘要
本發(fā)明目的是采用雙酶酶解結(jié)合膜分離技術(shù)制備食用菌活性肽，反應(yīng)溫和，工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品肽含量豐富，用食用菌副產(chǎn)物如金針菇、杏鮑菇、蘑菇等,經(jīng)過(guò)預(yù)處理，采用添加堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1～1.2:1～1.2:1～1.2，復(fù)合酶解3～5小時(shí)，滅酶，并經(jīng)過(guò)濾，離心，所得粗提物經(jīng)膜分離，截留粒徑0.1～0.2μm的醋酸纖維有機(jī)膜精濾，濾過(guò)壓0.15～0.2MPa；精濾液再經(jīng)截留分子量小于8000Da的芳香聚酰胺類有機(jī)復(fù)合膜超濾，濾過(guò)壓0.15～0.25MPa，截留收獲分子量為小于8000Da的肽液，最后經(jīng)真空濃縮、噴霧干燥制備食用提取活性肽。
文檔編號(hào)C07K1/34GK102199647SQ20111007280
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者梅躍明 申請(qǐng)人:梅躍明