專利名稱：體外檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑和方法
體外檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，涉及細(xì)胞免疫學(xué)檢驗(yàn)方法，具體地說，涉及一種體外檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑和方法。
背景技術(shù)：
由人結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)所引起的結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的傳染病。近二、三十年來由于人口流動(dòng)，耐藥結(jié)核菌傳播，艾滋病等因素影響，結(jié)核病疫情在全球范圍內(nèi)回升。如今已成為超過了狂犬病的在所有傳染病中的最大死亡原因，成為青年人的第一殺手。全球1/3的人口(約20億)感染了結(jié)核菌，95%發(fā)生在發(fā)展中國家。其中，2000萬是活動(dòng)性結(jié)核病患者，每年新增加800 1000萬肺結(jié)核患者， 其中，75 %的人年齡在15 50歲。全球每天有8000人、每年有200 300萬人死于結(jié)核病，其中，發(fā)展中國家占98%。我國疫情也相當(dāng)嚴(yán)重，是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)的國家之一。結(jié)核病人數(shù)位居世界第二，僅次于印度。全國超過1/3的人口 0億)感染了結(jié)核菌， 其中10%的人發(fā)生結(jié)核病。如果得不到有效控制，在未來10年里，可能有3000萬人發(fā)生結(jié)核病。由于存在早期診斷困難，在全國實(shí)施直接督導(dǎo)治療(DOTS)策略后，中國的結(jié)核發(fā)病率并沒有預(yù)期地出現(xiàn)明顯下降，這與潛在的大量未被診斷出的潛伏感染以及痰菌陰性結(jié)核病人未被及時(shí)診斷有關(guān)，這些感染者成為一個(gè)巨大的結(jié)核病源，DOTS計(jì)劃能針對發(fā)病的肺結(jié)核患者，而對于控制潛伏感染的病人或者痰菌陰性的癥狀不典型的患者沒有貢獻(xiàn)?，F(xiàn)有的臨床實(shí)驗(yàn)診斷方法包括以結(jié)核菌素(PPD)試驗(yàn)檢測Mtb感染者的遲發(fā)性超敏反應(yīng)、痰涂片抗酸染色尋找Mtb、Mtb的分離培養(yǎng)、血清抗體檢測及核酸成分檢測等。這些方法在結(jié)核的實(shí)驗(yàn)診斷和研究中發(fā)揮了重要作用。但也還存在一些不足，如難以早期診斷及很好地預(yù)測預(yù)后、培養(yǎng)法耗時(shí)長，需要4 8周時(shí)間；痰涂片抗酸染色等不能診斷肺外結(jié)核且敏感性差；難以準(zhǔn)確了解機(jī)體實(shí)際感染及免疫狀態(tài)；而艾滋病合并結(jié)核時(shí)PPD試驗(yàn)常常為陰性，出現(xiàn)典型結(jié)核臨床表現(xiàn)時(shí)病人一般已進(jìn)入終末期；由于PPD試驗(yàn)和抗體檢測采用的大多為多成分抗原，并不能將Mtb感染者與卡介苗(BCG)接種者和非結(jié)核分枝桿菌 (如艾滋病人群常感染的鳥-胞內(nèi)分枝桿菌等)感染者區(qū)分開。因此，為解決現(xiàn)有的臨床實(shí)驗(yàn)診斷方法的局限性，研究靈敏度高、特異性好的細(xì)胞免疫學(xué)臨床實(shí)驗(yàn)診斷方法非常必要。特異性抗原診斷一直是確認(rèn)和評(píng)估病原體感染及感染狀況較為可靠的方法，且有早期診斷價(jià)值，已經(jīng)在HBV、HCV、HIV等疾病的診斷方面獲得了廣泛的應(yīng)用。由于人體在對抗結(jié)核桿菌的感染中，細(xì)胞免疫起到了關(guān)鍵性的作用，所以尋找結(jié)核桿菌特異性的T細(xì)胞抗原和檢測T細(xì)胞免疫反應(yīng)已經(jīng)成為近年來研究的熱點(diǎn)。國際上已有報(bào)道的T-SPOT. TB試劑正是使用結(jié)核桿菌的特異性蛋白抗原ESAT-6和CFP-10中的一些多肽，以ELISP0T方法 (如T-SPOT. TB試劑)診斷結(jié)核早期感染(專利號(hào)CN 1350546A)。但有研究顯示T-SP0T. TB試劑在一些國家的效果并不理想，推測可能與這些國家人群的主要組織相容性抗原有不同而所使用的多肽主要是針對歐洲國家人群篩選而出、以及這些國家人群非結(jié)核分枝桿菌感染率高等有關(guān)。另外T-SPOT. TB試劑價(jià)格昂貴，每一人份約合80美元，在發(fā)展中國家難以推廣。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是為了提供一種體外檢測結(jié)核分枝桿菌感染的試劑，它具有靈敏度高、不受BCG疫苗及非結(jié)核分枝疫苗桿菌干擾、特異性好、既能檢測活動(dòng)性的肺結(jié)核患者、又能檢測潛伏感染的病人、還可以檢測健康的結(jié)核分枝桿菌接觸者的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的目的還在于提供一種檢測結(jié)核分枝桿菌感染的方法。本發(fā)明的目的還在于進(jìn)一步提供基于上述多肽的診斷試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的還在于進(jìn)一步提供基于上述多肽及M233多肽混合多肽診斷試劑
品.ο為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計(jì)方案以O(shè)verlap (重疊)方法設(shè)計(jì)Mtb特有而其他分枝桿菌(包括卡介苗和非結(jié)核分枝桿菌等)不具有的早期分泌抗原靶位-6 (ESAT-6) 21條多肽，每一多肽含15個(gè)氨基酸，以 ELISP0T (酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法)對PPD陽性結(jié)核病人淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測，篩選出1條與T-SP0T. TB試劑所使用不同的特異性T細(xì)胞反應(yīng)性Mtb多肽多肽M232氨基酸序列為SEQ ID No. 1, 本發(fā)明也可以是其類似物，所述的類似物是指具有80%以上同源性的氨基酸序列，優(yōu)選 90%以上同源性序列。本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種檢測結(jié)核桿菌感染的方法，通過使用M232多肽或其類似物，與結(jié)核桿菌宿主的T細(xì)胞相接觸，檢測從T細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子，確定T細(xì)胞是否識(shí)別M232多肽。所述宿主通常指人，也可以是其他哺乳動(dòng)物，如牛、羊、豬、嚙齒動(dòng)物等。所述結(jié)核桿菌感染，通常指的是患有活動(dòng)性或潛伏性結(jié)核桿菌感染的人群，也可以是健康的接觸者，其已是暴露于結(jié)核桿菌中。因此此方法可用于調(diào)查健康接觸人群受結(jié)核感染情況。上述方法中所述的T細(xì)胞通常在體內(nèi)被來自結(jié)核桿菌的抗原預(yù)先致敏，這些T細(xì)胞可在宿主的外周血液、肺泡灌洗液、胸水、腦脊液、淋巴結(jié)及其它包含T細(xì)胞組織中被檢出。此T細(xì)胞主要是⑶4+T細(xì)胞，也可以是⑶8+T細(xì)胞等。方法中所述的識(shí)別，通常是通過測定T細(xì)胞與蛋白或多肽接觸后兩者的結(jié)合或狀態(tài)的變化來確定的。狀態(tài)變化主要由于MHC(主要組織相容性復(fù)合體)/肽復(fù)合物與TCR(T 細(xì)胞受體)特異的結(jié)合而誘發(fā)的T細(xì)胞的激活，它可以是T細(xì)胞開始分泌細(xì)胞因子或分泌量的增加，可以是T細(xì)胞攝入物質(zhì)量的增加，也可以是T細(xì)胞大小、數(shù)量(增殖)或表面標(biāo)志的改變。所述T細(xì)胞因子包括IFN- y、IL-2、TNF- α等。具有代表性的是采用預(yù)先加入的抗體與分泌的細(xì)胞因子相結(jié)合，通過測定抗體或抗體復(fù)合物的存在來檢測所述的因子。所述的抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體， 也可以是商品化購買的或者使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備的。測定細(xì)胞因子的方法選自ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)、ELISP0T(酶聯(lián)免疫斑點(diǎn))、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色、四聚體染色、 Immunoblotting(免疫印跡)、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)等。檢測蛋白/多肽與T細(xì)胞的結(jié)合也可以通過細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色與四聚體染色技術(shù)以及流式細(xì)胞儀(FACSR)分析來進(jìn)行。通常在已接觸抗原的T細(xì)胞的出現(xiàn)頻率是 10_3 10_6，如果被分選細(xì)胞的頻率高于正常對照值，則可定量確定細(xì)胞已接觸此抗原。方法中所述T細(xì)胞可以是體外分離的，也可以是未加工過的或者是體內(nèi)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，從血液或其他樣本中分離單核細(xì)胞(PBMC)，其中將包括T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞(APC)。APC可將抗原肽遞呈給T細(xì)胞。APC可以是天然生成的或者是人工APC。典型的APC是在體外新分離的細(xì)胞或經(jīng)過培養(yǎng)的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，將多肽加入包含了 T細(xì)胞和APC的實(shí)驗(yàn)中一同孵育。此處APC 參與了遞呈抗原多肽到T細(xì)胞的過程。如使用可以被T細(xì)胞識(shí)別而無需由APC遞呈的肽時(shí)， APC不是必需的，如前一種肽的類似物-MHC/肽的四聚體。蛋白或多肽與T細(xì)胞接觸的時(shí)間長短可以根據(jù)所測定的識(shí)別方法有所變化。具有代表性的是，實(shí)驗(yàn)中加入IO4 IO7的分離單核細(xì)胞(PBMC)或50 500ul的全血。加入蛋白或多肽的濃度是0. 1 100ug/ml。T細(xì)胞與蛋白或多肽一起孵育的典型時(shí)間是6 36小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將5X IO5體外分離的PBMC與終濃度10ug/ml多肽在37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育22小時(shí)。也可以在體內(nèi)檢查以確定T細(xì)胞對蛋白或多肽的識(shí)別。具有代表性的是，體內(nèi)注射此抗原物質(zhì)或施給肽的類似物如MHC/肽四聚體或施給表達(dá)此抗原物質(zhì)的多核苷酸?？梢酝ㄟ^DTH反應(yīng)的出現(xiàn)來指示肽在體內(nèi)的識(shí)別，例如檢查硬化、紅斑或水腫等。本發(fā)明的再一個(gè)方面，提供了表達(dá)M232多肽的核苷酸序列和M232多肽的制備方法。所屬的表達(dá)M232多肽的核苷酸序列可以通過化學(xué)合成等方法制備。所述的M232多肽可以是是天然分離的，也可以是人工合成的。一種具有代表性的方法是，由較長的融合蛋白制備M232多肽，此融合蛋白代表性的包含M232多肽，具有代表性的是MHC/肽融合蛋白。所述肽也可以由多肽經(jīng)過物理或化學(xué)裂解所產(chǎn)生。所述的多肽也可以是由固相甲?；铣蓛x按照相關(guān)合成儀的操作說明書合成的。所用的融合蛋白是經(jīng)過果蠅S2 (Schneider 2)重組蛋白，在每個(gè)蛋白的N端添加一小段His-tag以方便純化。具體包括如下步驟1)表達(dá)M232多肽或肽的類似物的基因擴(kuò)增和克隆，具有代表性的是肽/MHC Class ΙΙα或β鏈融合基因的擴(kuò)增和克隆；幻構(gòu)建ρΜΤ重組載體；3)Μ232多肽或融合蛋白真核誘導(dǎo)表達(dá)；4)Μ232多肽或融合蛋白的分離純化。方法中所述的擴(kuò)增可以使用PCR、重組法或人工合成方法獲得。所用的表達(dá)載體是真核表達(dá)載體PMT (Invitrogen)，也可以是其它真核或原核表達(dá)載體，如昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)和大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)等。本發(fā)明的再一個(gè)方面，提供實(shí)施此檢測方法的試劑盒，所述的試劑盒包括Μ232多肽或其類似物，以及一種檢測T細(xì)胞對蛋白或多肽或多肽類似物識(shí)別的工具。
試劑盒中還可以包括陽性對照和陰性對照，陽性對照所選用的抗原對大多數(shù)個(gè)體的T細(xì)胞均能產(chǎn)生應(yīng)答，如市售的PMA (佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯)、Ionomycin (離子霉素)。陰性對照不加入抗原成份，選用培養(yǎng)基或其他緩沖液。本發(fā)明還提供M232多肽的應(yīng)用，用以產(chǎn)生M232多肽特異的抗體。此抗體可通過抗原對宿主動(dòng)物免疫，經(jīng)純化產(chǎn)生的抗體。該抗體能夠特異地與抗原物質(zhì)結(jié)合，通常可根據(jù)來源分為單克隆抗體或多克隆抗體。產(chǎn)生抗體的方法是本領(lǐng)域內(nèi)公知的，多克隆抗體通常包括使用抗原(蛋白或多肽)免疫宿主動(dòng)物，一段時(shí)間后從血清中分離免疫球蛋白，如 IgG等；產(chǎn)生單克隆抗體的方法包括無限增殖產(chǎn)生目的抗體的細(xì)胞，通常將來自被接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的脾細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，來產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞(具體參見Kohler and Milstein, 1975Nature 256，495 497)。適用于產(chǎn)生單克隆或多克隆抗體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括山羊、兔、 大鼠或小鼠等。本發(fā)明能有效地體外檢測結(jié)核病和/或其潛伏感染，同時(shí)不受BCG疫苗(卡介苗) 及非結(jié)核分枝桿菌的干擾，具有價(jià)廉、靈敏度高和特異性好的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明克服了 T-SP0T. TB試劑在一些國家的效果不理想的缺點(diǎn)，尤其適用于對中國人種結(jié)核病和/或其潛伏感染的檢測。

圖1為ELISP0T結(jié)果判定實(shí)例，其中左上為M232的檢測結(jié)果；右上為M232+M233 混合多肽的檢測結(jié)果；左中為陰性對照；右中為陽性(PMA+Inomycin)對照；左下為不加生物素標(biāo)記的抗人IFN-YmAb對照；右下為背景對照。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1M232多肽的制備以ELISP0T對PPD陽性結(jié)核病人淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測，篩選以O(shè)verlap (重疊)方法設(shè)計(jì)的早期分泌抗原靶位-6 (ESAT-6) 21條多肽(每一多肽含15個(gè)氨基酸)，篩選出1條特異性T細(xì)胞反應(yīng)性Mtb多肽，包括以下步驟(1)以O(shè)verlap方法設(shè)計(jì)多肽，每一多肽含15個(gè)氨基酸(aa)，得到21條多肽序列，通過固相甲?；铣蓛x按合成儀說明書的實(shí)驗(yàn)條件合成。多肽以DMSO溶解，配置成10mg/ml的儲(chǔ)存液。臨用前以RPMI1640培養(yǎng)液(注RPMI為“Roswell Park Memorial Institute,，，“洛斯維公園紀(jì)念研究所”的縮寫，1640是培養(yǎng)基代號(hào))稀釋至使用濃度 10 μ g/ml0(2)從廣州市胸科醫(yī)院收集PPD陽性結(jié)核病人血液，每份約2 5ml。(3)用Ficol 1淋巴細(xì)胞分離液分離末梢血PBMC，PBMC重懸于RlO培養(yǎng)液 (RPMI1640培養(yǎng)液中含10%小牛血清)備用。(4)選擇帶PVDF膜96孔板作為反應(yīng)板，用抗人Y -干擾素(IFNY)單克隆抗體 (mAb)包被過夜，第二天加入5X105PBMC和目標(biāo)多肽，每一測定設(shè)立3孔，孵育18h。設(shè)立下列對照孔PMA和Ionomycin作為陽性對照，不加多肽作陰性對照，不加細(xì)胞作背景對照，并作一組不加生物素標(biāo)記抗人IFN y mAb對照。第三天，依次加入生物素標(biāo)記抗人IFN y mAb,鏈霉親合素-堿性磷酸酶作反應(yīng)，BCIP/NBT (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽/氯化硝基四氮唑藍(lán))顯色。結(jié)果在ELISPOT Reader閱讀器上讀取。以SFC (Spot-forming cells，細(xì)胞形成斑點(diǎn)數(shù)VlO6PBMC > 50作為判斷為陽性。(5)篩選得到1條特異性T細(xì)胞反應(yīng)性Mtb多肽M232。以DMSO溶解，配置成IOmg/ ml的儲(chǔ)存液。臨用前以RPMI1640培養(yǎng)液稀釋至使用濃度10 μ g/ml。實(shí)施例2以ELISPOT對310例PPD陽性結(jié)核病人淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測1材料與方法1. 1實(shí)驗(yàn)材料從廣州市胸科醫(yī)院收集310例PPD陽性結(jié)核病人血液，每份約2 5ml ο1. 2結(jié)核病人末梢血淋巴細(xì)胞(PBMC)分離用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC， PBMC重懸于RlO培養(yǎng)液(RPMI1640培養(yǎng)液中含10%小牛血清)備用。1. 3ELISP0T分析選擇帶PVDF膜96孔板作為反應(yīng)板，用抗人、~干擾素(IFN y ) 單克隆抗體(HiAb)包被過夜，第二天加入5 X IO5PBMC和多肽Μ232，每一測定設(shè)立3孔，孵育 18h。設(shè)立下列對照孔PMA和Ionomycin作為陽性對照，不加多肽作陰性對照，不加細(xì)胞作背景對照，并作一組不加生物素標(biāo)記抗人IFNymAb對照。第三天，依次加入生物素標(biāo)記抗人正^^—！^，鏈霉親合素-堿性磷酸酶作反應(yīng)^口？/?。　帮@色。結(jié)果在ELISPOT Reader閱讀器上讀取。以SFC(Spot-forming cells)/IO6PBMC > 50作為判斷為陽性。2結(jié)果310例標(biāo)本陽性檢出242例，陽性率78 %，SFC(Spot-forming cells)/IO6PBMC 平均在 90 以上。對照實(shí)驗(yàn)表明，無一健康對照者(0/10)對M232產(chǎn)生陽性應(yīng)答，即其特異性為 100%。且未發(fā)現(xiàn)BCG疫苗使用健康人群和鳥-胞內(nèi)分枝桿菌感染患者出現(xiàn)陽性反應(yīng)。實(shí)施例3以ELISPOT對5 例PPD陽性結(jié)核病人淋巴細(xì)胞檢測混合多肽 M232+M233(l 1)效果M233多肽系本申請人申請的200810220523. 1專利申請中公開的多肽，其氨基酸序列為:SEQ ID No. 2。1材料與方法1. 1實(shí)驗(yàn)材料從廣州市胸科醫(yī)院收集5 例PPD陽性結(jié)核病人血液，每份約2 5ml ο1. 2結(jié)核病人末梢血淋巴細(xì)胞(PBMC)分離用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC， PBMC重懸于RlO培養(yǎng)液(RPMI1640培養(yǎng)液中含10%小牛血清)備用。1. 3經(jīng)過合成M232、M233多肽，分別以DMSO溶解，配置成10mg/ml的儲(chǔ)存液，臨用前各取適量以RPMI1640培養(yǎng)液稀釋M232、M233至使用濃度均為10 μ g/ml。1.4ELISP0T分析選擇帶PVDF膜96孔板作為反應(yīng)板，用抗人Y -干擾素(IFNY) 單克隆抗體(mAb)包被過夜，第二天加入5\10節(jié)81 和混合多肽11232+11233(1 1)，每一測定設(shè)立3孔，孵育18h。設(shè)立下列對照孔PMA和Ionomycin作為陽性對照，不加多肽作陰性對照，不加細(xì)胞作背景對照，并作一組不加生物素標(biāo)記抗人IFNymAb對照。第三天，依次加入生物素標(biāo)記抗人IFN y mAb，鏈霉親合素-堿性磷酸酶作反應(yīng)，BCIP/NBT顯色。結(jié)果在 ELISPOT Reader 閱讀器上讀取。以 SFC(Spot-forming cells)/IO6PBMC > 50 作為判斷為陽性。
2結(jié)果5 例標(biāo)本陽性檢出492例，陽性率93 %，SFC (Spot-forming cells)/IO6PBMC 平均在 280 以上。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑盒，其包括M232及M233 混合多肽，以及一種檢測T細(xì)胞對蛋白或多肽或其類似物識(shí)別的工具，該混合多肽檢測試劑盒具有優(yōu)先于單一多肽作為檢測試劑的效果，具有更高的靈敏度。
權(quán)利要求
1.一種檢測結(jié)核桿菌感染的試劑，包含SEQ ID No. 1所代表的M232多肽。
2.權(quán)利要求1所述的M232多肽的制備方法，具體包括如下步驟1)表達(dá)M232多肽的基因擴(kuò)增和克隆；2)構(gòu)建pMT重組載體；3)M232多肽或融合蛋白真核誘導(dǎo)表達(dá)；4)M232多肽或融合蛋白的分離純化。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的M232多肽的制備方法，其特征在于融合蛋白為MHC/肽融合蛋白。
4.一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的方法為，通過使用M232多肽，與結(jié)核桿菌宿主的T細(xì)胞相接觸，檢測從T細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子，確定T細(xì)胞是否識(shí)別M232多肽。
5.一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑盒，包括M232多肽，以及一種檢測T細(xì)胞對蛋白或多肽或其類似物識(shí)別的工具。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑盒，其特征在于其中的檢測識(shí)別工具包含IFN-Y抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑盒，其特征在于其中的T 細(xì)胞來源于血液、肺泡灌洗液、胸水、腦脊液、淋巴結(jié)或其它包含T細(xì)胞的組織。
8.M232多肽在制備該多肽的特異性抗體的應(yīng)用。
9.一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑盒，包括M232及M233多肽，以及一種檢測T細(xì)胞對蛋白或多肽或其類似物識(shí)別的工具。
10.一種表達(dá)M232多肽的多核苷酸序列。
全文摘要
一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑和方法，包含早期分泌抗原靶位-6(ESAT-6)多肽中篩選出的1段特異性T細(xì)胞反應(yīng)性多肽SEQ ID No.1所代表的M232多肽；通過使用M232多肽，與結(jié)核桿菌宿主的T細(xì)胞相接觸，檢測從T細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子，確定T細(xì)胞是否識(shí)別M232多肽。它具有靈敏度高、不受BCG疫苗及非結(jié)核分枝疫苗桿菌干擾、特異性好、既能檢測活動(dòng)性的肺結(jié)核患者、又能檢測潛伏感染的病人、還能用于檢測健康的結(jié)核分枝桿菌接觸者的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明尤其適用于對中國人種結(jié)核病和/或其潛伏感染的檢測。本發(fā)明還涉及一種體外檢測結(jié)核桿菌感染的試劑盒，包括M232及M233兩種混合多肽，以及一種檢測T細(xì)胞對蛋白或多肽或其類似物識(shí)別的工具。
文檔編號(hào)C07K19/00GK102305855SQ20111013036
公開日2012年1月4日 申請日期2011年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月19日
發(fā)明者方毅敏, 賴小敏 申請人:中山大學(xué)