專利名稱：一種硫糖肽的純化工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)藥物硫糖肽技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種硫糖肽的純化工藝。
背景技術(shù)：
硫糖肽是由豬十二指腸的提取物糖肽，經(jīng)過硫酸化得到的一種硫酸多酯。硫糖肽是胃保護(hù)和抗?jié)兯幬?，適用于治療十二指腸潰瘍和胃炎。目前在意大利上市，國內(nèi)尚未見報(bào)道。藥物的藥效與硫含量的高低息息相關(guān)。現(xiàn)有硫糖肽原料藥一般存在純度不高，一般低于95%，硫含量偏低，一般低于14. 8%，會(huì)嚴(yán)重影響藥效的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決以上問題，本發(fā)明提供了一種純化硫糖肽、提高硫含量的硫糖肽的純化工藝。本發(fā)明是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的 一種硫糖肽的純化工藝，包括以下步驟
(1)樣品準(zhǔn)備將硫糖肽粗品溶解于lwt%的氯化鈉溶液中，硫糖肽濃度為5wt%，用醋酸調(diào)節(jié)PH值為6. 0 ；
(2)緩沖溶液的配制分別配制濃度為1襯％、4襯％和10wt%的氯化鈉緩沖溶液，分別加入醋酸0. 05M，調(diào)節(jié)pH為6. 0 ；
(3)離子層析柱預(yù)處理離子交換柱中填充瓊脂糖凝膠6B，填充體積與被分離樣品的體積比為1 :2，用10襯％的氯化鈉緩沖溶液沖洗離子交換柱，緩沖液用量為3倍樹脂體積， 然后用lwt%的氯化鈉緩沖溶液平衡離子交換柱，緩沖液用量為3倍樹脂體積；
(4)樣品上柱流速控制2倍樹脂體積/h，上完樣品后，用lwt%的氯化鈉緩沖溶液沖洗，緩沖液用量為1倍樹脂體積；
(5)洗滌用4wt%的氯化鈉緩沖溶液洗滌離子交換柱1小時(shí)，流速為2倍樹脂體積/h；
(6)洗脫用10wt%氯化鈉緩沖溶液洗脫離子交換柱1小時(shí)，流速為2倍樹脂體積/h， 得洗脫液；
(7)超濾脫鹽將洗脫液用孔徑0.45 μ m濾膜過濾，然后用3萬分子量的超濾膜進(jìn)行超濾脫鹽至鹽度2%，再濃縮至洗脫液體積的3/4 ；
(8)沉淀、干燥用95%以上的乙醇按體積比1:1將濃縮液在攪拌條件下沉淀，所得沉淀脫水干燥，得到純化的硫糖肽。瓊脂糖凝膠6B載量為110mg/mL，粒徑45_165Mm。本發(fā)明的有益效果經(jīng)過純化的硫糖肽，純度能達(dá)到99. 5%以上，硫含量15. 3%以上，彌補(bǔ)了硫糖肽純度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作為標(biāo)準(zhǔn)品使用，節(jié)約了購買標(biāo)準(zhǔn)品的成本。


附圖1為使用本發(fā)明純化工藝純化得到的硫糖肽使用液相色譜法檢測得到的譜圖， 附圖2為購自韓國的硫糖肽標(biāo)準(zhǔn)品使用液相色譜法檢測得到的譜圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
硫糖肽的純化工藝，包括以下步驟
(1)樣品準(zhǔn)備取硫糖肽粗品10g，純度為85%，含硫量為14.5%，溶解于lwt%的氯化鈉溶液中，硫糖肽濃度為5wt%，用醋酸調(diào)節(jié)pH值為6. 0，共200mL ；
(2)緩沖溶液的配制分別配制濃度為1襯％、4襯％和10wt%的氯化鈉緩沖溶液，分別加入醋酸0. 05M，調(diào)節(jié)pH為6. 0 ；
(3)離子層析柱預(yù)處理離子交換柱中填充載量為110mg/ml的DEAE-s印harose6B， 填充100ml，用10wt%的氯化鈉緩沖液沖洗離子交換柱，緩沖液用量為300mL，然后用lwt% 的氯化鈉緩沖液平衡離子交換柱，緩沖液用量為300mL ；
(4)樣品上柱流速控制200mL/h，上完樣品后，用lwt%的氯化鈉緩沖液沖洗，緩沖液用量為IOOmL ；
(5)洗滌用4wt%的氯化鈉緩沖液洗滌離子交換柱1小時(shí)，流速為200mL/h；
(6)洗脫用10襯％氯化鈉緩沖液洗脫離子交換柱1小時(shí)，流速為200mL/h，得洗脫液 200mL ；
(7)超濾脫鹽將洗脫液用孔徑0.45 μ m濾膜過濾，然后用3萬分子量的超濾膜進(jìn)行超濾脫鹽至鹽度2%，再濃縮至150ml ；
(8)沉淀、干燥用95%的乙醇按體積比1:1將濃縮液在攪拌條件下沉淀，所得沉淀脫水干燥，得到純化的硫糖肽。以韓國的硫糖肽標(biāo)準(zhǔn)品作為標(biāo)準(zhǔn)，采用外標(biāo)法測得本發(fā)明純化工藝得到的硫糖肽含量為102%，硫含量為15. 5%，譜圖如附圖1和附圖2所示。說明本發(fā)明的純化工藝得到的硫糖肽純度已經(jīng)超過硫糖肽標(biāo)準(zhǔn)品，本身已經(jīng)可以作為標(biāo)準(zhǔn)品使用。
權(quán)利要求
1.一種硫糖肽的純化工藝，其特征是包括以下步驟(1)樣品準(zhǔn)備將硫糖肽粗品溶解于lwt%的氯化鈉溶液中，硫糖肽濃度為5wt%，用醋酸調(diào)節(jié)PH值為6. O ；(2)緩沖溶液的配制分別配制濃度為1襯％、4襯％和10wt%的氯化鈉緩沖溶液，分別加入醋酸0. 05M，調(diào)節(jié)pH為6. 0 ；(3)離子層析柱預(yù)處理離子交換柱中填充瓊脂糖凝膠6B，填充體積與被分離樣品的體積比為1 :2，用10wt%的氯化鈉緩沖溶液沖洗離子交換柱，用量為3倍樹脂體積，然后用 lwt%的氯化鈉緩沖溶液平衡離子交換柱，用量為3倍樹脂體積；(4)樣品上柱流速控制2倍樹脂體積/h，上完樣品后，用lwt%的氯化鈉緩沖溶液沖洗，用量為1倍樹脂體積；(5)洗滌用4wt%的氯化鈉緩沖溶液洗滌離子交換柱1小時(shí)，流速為2倍樹脂體積/h；(6)洗脫用10wt%氯化鈉緩沖溶液洗脫離子交換柱1小時(shí)，流速為2倍樹脂體積/h， 得洗脫液；(7)超濾脫鹽將洗脫液用孔徑0.45 μ m濾膜過濾，然后用3萬分子量的超濾膜進(jìn)行超濾脫鹽至鹽度2%，再濃縮至洗脫液體積的3/4 ；(8)沉淀、干燥用95%以上的乙醇按體積比1:1將濃縮液在攪拌條件下沉淀，所得沉淀脫水干燥，得到純化的硫糖肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化工藝，其特征在于瓊脂糖凝膠6B載量為110mg/mL，粒徑 45-165Mm。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學(xué)藥物硫糖肽技術(shù)領(lǐng)域一種硫糖肽的純化工藝。包括將硫糖肽粗品溶解于氯化鈉溶液中；配制pH為6.0濃度為1wt%、4wt%和10wt%的氯化鈉緩沖溶液；離子層析柱預(yù)處理；樣品上柱上完樣品用1wt%的氯化鈉緩沖液沖洗；洗滌用4wt%的氯化鈉緩沖液洗滌離子交換柱；洗脫用10wt%氯化鈉緩沖液洗脫離子交換柱得洗脫液；超濾脫鹽將洗脫液過濾，超濾脫鹽；沉淀干燥用乙醇將濃縮液沉淀，所得沉淀脫水干燥，得到純化的硫糖肽。經(jīng)過純化的硫糖肽，純度能達(dá)到99.5%以上，硫含量15.3%以上，彌補(bǔ)了硫糖肽純度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作為標(biāo)準(zhǔn)品使用，節(jié)約了購買標(biāo)準(zhǔn)品的成本。
文檔編號C07K2/00GK102321151SQ201110227778
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月10日
發(fā)明者李全義, 李剛, 王新志 申請人:山東眾山生物科技有限公司