專利名稱：一種從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素a的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法。
背景技術(shù)：
蔓性千斤拔素A (flemiphilippinin A)為黃酮類物質(zhì)，分子式C30H3206，分子量488，結(jié)構(gòu)式
研究發(fā)現(xiàn)，蔓性千斤拔素A具有較強(qiáng)清除人體自由基作用和抗腫瘤作用。千斤拔，別名蔓性千斤拔、一條根、鉆地風(fēng)等。為豆科千斤拔屬植物千斤拔，以根入藥。具有祛風(fēng)利濕，消瘀解毒功效。通過文獻(xiàn)檢索，未發(fā)現(xiàn)有制備蔓性千斤拔素A專一方法。如文獻(xiàn)“蔓性千斤拔總黃酮的提取與分析”，該文獻(xiàn)研究的包括蔓性千斤拔素A在內(nèi)的多種黃酮混合物提取方法。再如文獻(xiàn)“千斤拔異戊烯基黃酮研究”和文獻(xiàn)“千斤拔化學(xué)成分研究”以及文獻(xiàn)“蔓性千斤拔化學(xué)成分與質(zhì)量控制研究”，都是以多種成分為研究對象，采用萃取和固體填充柱分離。如上所述，這些傳統(tǒng)制備方法多存在溶劑用量大、收率低、制備量小、污染嚴(yán)重、能耗高等諸多缺陷，不利于蔓性千斤拔素A應(yīng)用和更廣泛的藥理研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的快速、簡便的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素 A的方法，其特征在于以下步驟
a取千斤拔藥材粉碎40-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力20-30MPa、溫度 40-60°C的條件下，通入液態(tài)C02和夾帶劑超臨界萃取2-3小時，在壓力5_10MPa，溫度 50-60°C解析得萃取物；
b上述萃取物用適量飽和石灰水溶解，離心，離心液調(diào)節(jié)ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收試劑得粗提物；
c把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得蔓性千斤拔素A。
所述的夾帶劑可選甲醇、乙醇、丙酮或氯仿溶液，用量為原料的1-3倍量。所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選三元溶劑體系，優(yōu)選氯仿、甲醇、水，比例為3-7 2-3 2-5，下相為流動相，上相為固定相。所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選四元溶劑體系，優(yōu)選正己烷、乙酸乙酯、 甲醇、水，比例為1-5:1-10:2-7:1-5，下相為流動相，上相為固定相。所述的高速逆流色譜分離時主機(jī)轉(zhuǎn)速可為700-1000rpm，流動相流速為Hml/
mirio本發(fā)明的優(yōu)點是
1.方法采用超臨界C02萃取，減少了有機(jī)試劑用量，提取效率高，不造成污染，提取時間短；
2.方法還采用了高速逆流色譜分離，分離速度快、周期短，樣品無損失，溶劑可以循環(huán)使用，不產(chǎn)生廢棄物，產(chǎn)品純度高。
具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明。實施例1
千斤拔藥材后粉碎60目，取2kg加入超臨界萃取釜中，通入液態(tài)C02，設(shè)置在萃取壓力 20MPa、溫度40°C，達(dá)到上述參數(shù)后，調(diào)整液態(tài)C02流速為20kg/h，并以2L/h流速通入90% 甲醇溶液，動態(tài)萃取3小時，在壓力5MPa，溫度50°C調(diào)件下解析，回收試劑得到萃取物100g。 萃取物加200ml飽和石灰水溶解，過濾，濾液鹽酸調(diào)節(jié)ph2，加等體積氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到Ilg粗提物。取氯仿、甲醇、水按4:3:2混合，混合后充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱， 同時開轉(zhuǎn)主機(jī)SOOrpm，泵入下相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為3ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，濃縮干燥得黃色粉末蔓性千斤拔素Al. 3g，經(jīng)HPLC檢測，純度98. 2%。實施例2:
千斤拔藥材后粉碎80目，取2kg加入超臨界萃取釜中，通入液態(tài)C02，設(shè)置在萃取壓力 30MPa、溫度60°C，達(dá)到上述參數(shù)后，調(diào)整液態(tài)C02流速為23kg/h，并以2L/h流速通入95% 乙醇溶液，動態(tài)萃取2小時，在壓力7MPa，溫度60°C調(diào)件下解析，回收試劑得到萃取物84g。 萃取物加150ml飽和石灰水溶解，過濾，濾液鹽酸調(diào)節(jié)ph5，加等體積氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到7. 5g粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按2:4:3:2混合，混合后充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉(zhuǎn)主機(jī)700rpm，泵入下相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，濃縮干燥得黃色粉末蔓性千斤拔素Al. 5g，經(jīng)HPLC檢測，純度96. 9%。實施例3:
千斤拔藥材后粉碎80目，取2kg加入超臨界萃取釜中，通入液態(tài)C02，設(shè)置在萃取壓力 25MPa、溫度55°C，達(dá)到上述參數(shù)后，調(diào)整液態(tài)C02流速為2^g/h，并以lL/h流速通入氯仿溶液，動態(tài)萃取2小時，在壓力9MPa，溫度50°C調(diào)件下解析，回收試劑得到萃取物45g。萃取物加80ml飽和石灰水溶解，過濾，濾液鹽酸調(diào)節(jié)ph5，加等體積氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到5g粗提物。 取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按2:4:3:1混合，混合后充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉(zhuǎn)主機(jī)IOOOrpm，泵入下相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為lml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，濃縮干燥得黃色粉末蔓性千斤拔素Al. Ig,經(jīng)HPLC檢測，純度98. 9%。
權(quán)利要求
1.一種從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于以下步驟a取千斤拔藥材粉碎40-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力20-30MPa、溫度 40-600C的條件下，通入液態(tài)C02和夾帶劑超臨界萃取2-3小時，在壓力5_10MPa，溫度 50-60°C解析得萃取物；b上述萃取物用適量飽和石灰水溶解，離心，離心液調(diào)節(jié)ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收試劑得粗提物；c把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得蔓性千斤拔素A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步驟a 中所述的夾帶劑可選甲醇、乙醇、丙酮或氯仿溶液，用量為原料的1-3倍量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步驟 c中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選三元溶劑體系，優(yōu)選氯仿、甲醇、水，比例為 3-7 2-3 2-5，下相為流動相，上相為固定相。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步驟c 中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選四元溶劑體系，優(yōu)選正己烷、乙酸乙酯、甲醇、 水，比例為1-5 1-10 2-7 1-5，下相為流動相，上相為固定相。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于步驟c 中所述的高速逆流色譜分離時可調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速為700-1000rpm，流動相流速為Uml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于以下步驟a取千斤拔藥材粉碎40-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力20-30MPa、溫度40-60℃的條件下，通入液態(tài)CO2和夾帶劑超臨界萃取2-3小時，在壓力5-10MPa，溫度50-60℃解析得萃取物；b上述萃取物用適量飽和石灰水溶解，離心，離心液調(diào)節(jié)ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收試劑得粗提物；c把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得蔓性千斤拔素A。本發(fā)明的方法步驟操作簡便，效率高，污染少，周期短，所得產(chǎn)品純度高，易于規(guī)模化制備。
文檔編號C07D493/04GK102391275SQ20111030355
公開日2012年3月28日 申請日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司