專利名稱：從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物提取領(lǐng)域，具體涉及從惡性雜草植物紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法。
背景技術(shù)：
紫莖澤蘭(Eupatorium adenophorum Spreng)，別名破壞草、解放草、飛機(jī)草等，為菊科澤蘭屬植物。該植物在我國(guó)云南、廣西、四川等地分布廣泛，資源極為豐富，屬于熱帶、 亞熱帶入侵雜草植物，給當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)造成極大危害，對(duì)當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)安全造成極大威脅。β-欖香烯，拉丁名為β-Elemenum，英文名為β-elemene，化學(xué)名為(1S，2S， 4R) 1-甲基-1-乙烯基-2，4- 二異丙烯基環(huán)己烷。結(jié)構(gòu)式如下 β-欖香烯為我國(guó)通過“七五”、“八五”、“九五”等一系列國(guó)家科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目， 是從傳統(tǒng)中藥中自主研發(fā)出的抗腫瘤新藥，已應(yīng)用于臨床，并被列入國(guó)家基本藥物和全國(guó)醫(yī)保用藥目錄。臨床應(yīng)用表明，欖香烯不僅具有很強(qiáng)的殺滅腫瘤細(xì)胞和抑制腫瘤生長(zhǎng)作用，還可以通過激活免疫系統(tǒng)使機(jī)體獲得明顯的免疫保護(hù)效應(yīng)，具有抗癌譜廣、高效、無肝腎損害、無骨髓抑制、副作用少等特點(diǎn)，是人類今后一個(gè)時(shí)期內(nèi)治療腫瘤的首選藥物，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求量大。目前，欖香烯主要依賴于從中藥莪術(shù)、沒藥、香茅、一枝黃花中提取， 尚未發(fā)現(xiàn)有從紫莖澤蘭中提取分離得到欖香烯的報(bào)道。由于中藥莪術(shù)、沒藥、香茅、一枝黃花均為中藥，成本相對(duì)較高，并且其中欖香烯的含量不高，提取純化的成本較高， 導(dǎo)致欖香烯的價(jià)格極為昂貴，嚴(yán)重妨礙了該藥的推廣應(yīng)用。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)紫莖澤蘭中欖香烯含量遠(yuǎn)高于中藥莪術(shù)、沒藥、香茅、一枝黃花，并且紫莖澤蘭為入侵雜草植物，資源豐富，其原料成本也遠(yuǎn)比這些原料低。故本發(fā)明欲提供一種從紫莖澤蘭中有效提取欖香烯的方法，為大幅度降低欖香烯的生產(chǎn)成本、以及開發(fā)、利用、治理紫莖澤蘭這種世界性惡性雜草植物開辟了新的途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯的方法。
經(jīng)發(fā)明人檢測(cè)發(fā)現(xiàn)紫莖澤蘭中的β “欖香烯主要分布于其葉和莖中(占全草總量的90%以上)。其中，以葉中含量最高(約為0. 4-0. 6%),而在根、花等其他器官中含量極低或基本沒有。對(duì)比分析結(jié)果表明，紫莖澤蘭葉中欖香烯含量遠(yuǎn)高于中藥莪術(shù)、沒藥、香茅、一枝黃花的含量。本發(fā)明提取方法中所使用的原料主要為紫莖澤蘭的莖、葉中的至少一種或其混合，若原料中混有根、花、果實(shí)等其他器官也不會(huì)影響提取分離欖香烯，但會(huì)影響提取方法的收率，故優(yōu)選以紫莖澤蘭的莖、葉中的至少一種或其混合為原料。本發(fā)明提取方法如下Α、原料準(zhǔn)備主要以紫莖澤蘭的莖、葉中的至少一種或其混合為原料，鮮品打漿或干燥粉碎；B、揮發(fā)油提取從步驟A所得原料中提取得到揮發(fā)油；C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行柱層析，收集洗脫液，除去洗脫液中的溶齊U，得到β-欖香烯粗品。進(jìn)一步的，還可以將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的β -欖香烯粗品進(jìn)行進(jìn)一步精制，得到純度更高的欖香烯精制品。即精制步驟D為將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的欖香烯粗品，采用分子蒸餾或制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行精制獲得高純度的β“欖香烯。采用上述方法處理紫莖澤蘭的莖、葉步驟B提取通常可獲得β-欖香烯含量大于20%的揮發(fā)油；采用柱層析等方法處理通常可獲得欖香烯含量大于40%，甚至高達(dá) 60%的欖香烯粗品；最終，進(jìn)一步精制揮發(fā)油或欖香烯粗品，依據(jù)“目標(biāo)含量”收集含欖香烯的純化成分，通?？色@得欖香烯含量大于90%，甚至高達(dá)98%的β-欖香烯精制品。其中，提取揮發(fā)油時(shí)可采用以下五種方法之一提取揮發(fā)油方法一水蒸氣蒸餾法(1)經(jīng)步驟A處理的原料進(jìn)行常壓蒸餾，得到餾出液；(2)在餾出液中加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑，萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。其中，蒸餾時(shí)優(yōu)選以水為主要溶劑，加入提高提取系統(tǒng)沸點(diǎn)和防止皂化起泡的材料。如，加入乙二醇是提高蒸餾恒沸液的溫度，加入乙醇是消除蒸餾中產(chǎn)生的皂化起泡現(xiàn)象，加入沸石是防止蒸餾時(shí)爆沸。故可利用現(xiàn)有的、已知的、 常規(guī)的、可預(yù)料的、具有上述功用的材料替換乙二醇、乙醇、沸石以達(dá)到相同的目的。方法二 浸漬法(1)經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚或甲醇中的至少一種或其任意比例混合的有機(jī)溶劑浸提、過濾，得浸提液；(2)浸提液除去溶劑后加入濃度20-80% ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。方法三連續(xù)逆流提取法

(1)經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚或甲醇中的至少一種或其任意比例混合的有機(jī)溶劑連續(xù)逆流提取，得提取液；(2)去除提取液中的溶劑后加入濃度20-80% ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。方法四微波萃取法(1)經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚或甲醇中的至少一種或其任意比例混合的有機(jī)溶劑，在微波萃取裝置中，采用功率300-800W萃取300-800S，得提取液；(2)提取液去除溶劑后加入濃度20-80% ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。方法五超臨界萃取法(1)經(jīng)步驟A處理的原料，用超臨界CCV流體萃取器進(jìn)行萃取，萃取壓力20_30MPa， 萃取溫度30-50°C，萃取時(shí)間1. 5-3h，得萃取產(chǎn)物；(2)萃取產(chǎn)物中加入濃度20-80% ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。上述五種揮發(fā)油提取法萃取時(shí)采用沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑是因?yàn)槿舴悬c(diǎn)高于60°C，除去溶劑時(shí)會(huì)將β _欖香烯一并除去，故選擇沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取分離欖香烯。其中，步驟C柱層析可采用的方法如下方法1 將步驟B得到的揮發(fā)油上大孔樹脂層析柱，用水、甲醇、乙醇、丙酮中的至少一種或其任意比例混合的溶劑洗脫，流速為1-4%柱體積/min，收集含β-欖香烯的洗脫液，去除溶劑，加入濃度20-80% ν/ν的乙醇后，用沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得β -欖香烯粗品?；虿捎梅椒? 將步驟B得到的揮發(fā)油上硅膠層析柱或銀離子硅膠層析柱，用沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑洗脫，流速為1-4%柱體積/min，收集含β-欖香烯的洗脫液， 除去溶劑，得到欖香烯粗品。其中，獲得β _欖香烯精制品時(shí)，可將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟D得到的粗品采用下列方法之一進(jìn)行精制，獲得高純度的欖香烯。精制時(shí)通常是依據(jù)“目標(biāo)含量”收集含欖香烯的純化成分，通?？色@得欖香烯含量大于90%，甚至高達(dá)98%的β-欖香烯精制品。精制方法1 分子蒸餾法時(shí)將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的β _欖香烯粗品進(jìn)行分子蒸餾，收集欖香烯達(dá)到目標(biāo)含量的餾出液，即得欖香烯精制品。精制方法2 高效液相色譜系統(tǒng)制備法將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的 β"欖香烯粗品通過制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，收集β _欖香烯達(dá)到目標(biāo)含量的流出液，除去溶劑即得β-欖香烯精制品。本發(fā)明提取方法所得β -欖香烯精品純度至少大于90%，甚至可高達(dá)98%，產(chǎn)率可高達(dá)70%，為有效利用惡性雜草植物紫莖澤蘭提供了一種新的途徑，更為獲得β-欖香烯提供一種全新的、便宜的、有效的方法。
具體實(shí)施例方式發(fā)明人采用高效液相色譜精密測(cè)定發(fā)現(xiàn)紫莖澤蘭中的β "欖香烯主要分布于其葉和莖中(占全草總量的90%以上)。其中，以葉中含量最高(約為0.4-0.6%)，而在根、 花等其他器官中含量極低或基本沒有。并且對(duì)比分析結(jié)果表明，紫莖澤蘭葉中欖香烯含量遠(yuǎn)高于中藥莪術(shù)、沒藥、香茅、一枝黃花的含量。本發(fā)明提取方法如下 A、原料準(zhǔn)備以紫莖澤蘭的莖、葉至少一種或其混合為原料，鮮品打漿或干燥粉碎；B、提取揮發(fā)油從步驟A所得原料中得到揮發(fā)油；C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行柱層析，收集洗脫液，除去洗脫液中溶劑， 得到欖香烯粗品。精制步驟D為將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的欖香烯粗品，采用分子蒸餾或制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行精制獲得高純度的β“欖香烯。一、提取揮發(fā)油時(shí)可采用以下五種方法之一提取揮發(fā)油方法一、水蒸氣蒸餾法經(jīng)步驟A處理的原料加入水為主的溶劑進(jìn)行常壓蒸餾，得到含β-欖香烯的餾出液；在所得餾出液中加入石油醚、環(huán)己烷、正己烷、苯、乙醚等沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑，萃取至少2次，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶齊U，即得揮發(fā)油。其中，蒸餾時(shí)優(yōu)選以水為主要溶劑，加入乙二醇、乙醇。因地區(qū)原因沸點(diǎn)低， 加入乙二醇可提高蒸餾恒沸液的溫度；加入乙醇是為了消除蒸餾中產(chǎn)生的皂化起泡現(xiàn)象； 還可加入沸石是以防止蒸餾時(shí)爆沸。故可利用現(xiàn)有的、已知的、常規(guī)的、可預(yù)料的、具有上述功用的材料替換乙二醇、乙醇、沸石以達(dá)到相同的目的。方法二、浸漬法經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚、或甲醇等有機(jī)溶劑浸提 2-4次、過濾，合并提取液并去除溶劑，加入20-80%的乙醇溶液，用石油醚等有機(jī)溶劑萃取至少2次，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。方法三、連續(xù)逆流提取法經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚、或甲醇等有機(jī)溶劑連續(xù)逆流提取3-4次，得到提取液。去除提取液中的溶劑，加入20-80%的乙醇溶液，用石油醚、環(huán)己烷、正己烷、苯、乙醚等沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取至少2次，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。方法四、微波萃取法經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚、或甲醇等有機(jī)溶劑， 在微波萃取裝置中，300-800W的功率下萃取300-800S，萃取2_4次，過濾合并提取液。去除提取液中的溶劑，加入20-80%的乙醇溶液，用石油醚、環(huán)己烷、正己烷、苯、乙醚等沸點(diǎn)小于 60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取至少2次，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。方法五、超臨界萃取法經(jīng)步驟A處理的原料，用超臨界CO2流體萃取器進(jìn)行萃取， 萃取壓力20-30MPa，萃取溫度30_50°C，萃取時(shí)間1. 5_3h。在萃取產(chǎn)物中，加入20-80%的乙醇溶液，用石油醚、環(huán)己烷、正己烷、苯、乙醚等沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑，至少萃取2次，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。經(jīng)比較，上述五種方法均可從原料中得到揮發(fā)油(β_欖香烯含量> 20% )。但最佳的提取方法為連續(xù)逆流提取法和水蒸氣蒸餾法，其中連續(xù)逆流提取法具有提取率高， 溶劑用量較少等優(yōu)點(diǎn)，但提取所得揮發(fā)油中欖香烯含量較低；水蒸氣蒸餾法具有操作簡(jiǎn)便、提取所得揮發(fā)油中欖香烯含量較高的優(yōu)點(diǎn)，揮發(fā)油純度通常為30%，甚至可達(dá) 40%，但提取率偏低。其中，連續(xù)逆流提取條件為加入原料量(g)3_7倍體積(mL)的丙酮做溶劑，室溫下浸泡至少lh，恒溫(20-3(TC )氣浴振蕩(100-140r/min)連續(xù)逆流提取至少1次，每次不少于1. 5h。優(yōu)化參數(shù)為加入原料量(g)5倍體積(mL)的丙酮做溶劑，室溫下浸泡4h，恒溫 (250C )氣浴振蕩(120r/min)連續(xù)逆流提取3次，第1次提取2. 5h，第2次提取3. 5h，第3 次提取3h。水蒸氣蒸餾法提取條件為取步驟A得到的原料，放入蒸餾瓶中，加入原料量 (g)3-7倍量(mL)的水、1-3倍量(mL)的乙二醇、少量乙醇、沸石，加溫常壓蒸餾， 收集 80-150°C的餾出液。優(yōu)化參數(shù)為取步驟A得到的原料，放入蒸餾瓶中，加入原料量(g)5倍量(mL)的水、2倍量(mL)的乙二醇、少量乙醇、沸石，加溫常壓蒸餾，收集80-150°C的餾出液。二、柱層析方法如下柱層析時(shí)，發(fā)明者采取硅膠、銀離子硅膠、DlOl大孔樹脂、HP20大孔樹脂做層析介質(zhì)均可從紫莖澤蘭的揮發(fā)油中分離得到欖香烯粗品，欖香烯純度通?？?gt;40%。 可采用的方法如下方法一、大孔樹脂法將步驟B得到的揮發(fā)油上大孔樹脂層析柱，用水、甲醇、乙醇、丙酮等溶劑或其混合溶液洗脫，流速為1-4%柱體積/min，收集含β-欖香烯的洗脫液， 去除溶劑，加入20-80%的乙醇溶液，用石油醚等有機(jī)溶劑萃取至少2次，分離上層有機(jī)相， 除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得β -欖香烯粗品。方法二、硅膠法將步驟B得到的揮發(fā)油上硅膠層析柱或銀離子硅膠層析柱，用石油醚洗脫，流速為1-4%柱體積/min，收集含β-欖香烯的洗脫液，除去溶劑，得到β-欖香烯粗品。具體的，優(yōu)化的層析條件為以ΗΡ20為層析介質(zhì)，先后分別以2倍柱體積的蒸餾水、80 %乙醇、85 %乙醇、90 %乙醇、95 %乙醇、無水乙醇進(jìn)行洗脫，流速2 %柱體積/min。按此條件進(jìn)行柱層析，β “欖香烯粗品的純度> 60%，回收率> 85%。三、精制方法如下精制時(shí)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)采取分子蒸餾法、高效液相色譜系統(tǒng)制備法均可從揮發(fā)油或粗品中，分離獲得高純度的欖香烯。分子蒸餾優(yōu)選的方法為將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的粗品進(jìn)行減壓分餾，收集76-78°C /40Pa的餾分，即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。高效液相色譜系統(tǒng)制備優(yōu)選的方法之一為將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的粗品用下列高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離島津高效液相色譜儀LC-10A，C18制備柱 (IOmmX 150mm)，洗脫劑為乙醇/水/乙腈=70/20/10 (V/V)，流速為2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 210nm;進(jìn)樣體積lmL。收集β -欖香烯流出液，按1 1比例加入石油醚，反復(fù)萃取三次。 分離合并石油醚層，加入Na2SO4干燥10-24h，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到純品(純度> 98%，產(chǎn)率> 75% )。以下通過本發(fā)明制備實(shí)例說明本發(fā)明的有益效果。實(shí)施例1蒸餾法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、揮發(fā)油的提取取步驟A得到的原料100g，放入蒸餾瓶中，加入去離子水或蒸餾水500mL、乙二醇200mL、乙醇50mL、沸石3_5粒，加溫常壓蒸餾，收集80_150°C的餾出液。在得到的餾出液中，按1 1比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 40% )。C、高效液相制備將步驟B得到的揮發(fā)油用下列高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離 島津高效液相色譜儀LC-10A，C18制備柱(IOmmX 150mm)，洗脫劑為乙醇/水/乙腈= 70/20/10 (V/V)，流速為2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；進(jìn)樣體積lmL。收集β -欖香烯流出液，按1 1比例加入石油醚，反復(fù)萃取三次。分離合并 石油醚層，加入Na2SO4干燥10-24h， 60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到純品(純度> 98%，產(chǎn)率> 75% )。實(shí)施例2蒸餾法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集紫莖澤蘭莖和葉，用粉碎機(jī)打成漿狀。B、揮發(fā)油的提取取步驟A得到的原料100g，放入蒸餾瓶中，加入去離子水或蒸餾水500mL，乙二醇200mL、乙醇50mL，沸石3_5粒，加溫常壓蒸餾，收集80_150°C的餾出液。在得到的餾出液中，按1 1.5比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 35% )。C、高效液相制備將步驟B得到的揮發(fā)油用下列高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離 島津高效液相色譜儀LC-10A，C18制備柱(IOmmX 150mm)，洗脫劑為乙醇/水/乙腈= 70/20/10 (V/V)，流速為2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；進(jìn)樣體積lmL。收集β -欖香烯流出液，按1 1比例加入石油醚，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，加入Na2SO4干燥10-24h， 60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到純品(純度> 97%，產(chǎn)率> 73% )。實(shí)施例3蒸餾法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集紫莖澤蘭莖和葉，用粉碎機(jī)打成漿狀。B、揮發(fā)油的提取取步驟A得到的原料100g，放入蒸餾瓶中，加入去離子水或蒸餾水500mL，乙二醇200mL、乙醇50mL，沸石3_5粒，加溫常壓蒸餾，收集80_150°C的餾出液。在得到的餾出液中，按1 1比例加入環(huán)己烷，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 37% )。C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油，上300mL HP20大孔樹脂層析柱，先后分別以 600mL的蒸餾水、80 %乙醇、85 %乙醇、90 %乙醇、95 %乙醇、無水乙醇進(jìn)行洗脫，流速6mL/ min0收集β-欖香烯含量>60%的洗脫液，按1 1比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到粗品(純度>60%)。D、分子蒸餾將步驟C得到的粗品進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分，即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 73% )。實(shí)施例4蒸餾法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集紫莖澤蘭莖和葉，用粉碎機(jī)打成漿狀。B、揮發(fā)油的提取取步驟A得到的原料100g，放入蒸餾瓶中，加入去離子水或蒸餾水500mL，乙二醇200mL、乙醇50mL，沸石3_5粒，加溫常壓蒸餾，收集80_150°C的餾出液。在得到的餾出液中，按1 1比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 35% )。C、分子蒸餾將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分， 即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。實(shí)施例5連續(xù)逆流提取法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯
Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，用粉碎機(jī)打成漿狀。B、連續(xù)逆流提取取步驟A原料100g，放入三角瓶中，連續(xù)逆流提取三次，每次加入丙酮500mL，震蕩(轉(zhuǎn)速60-100r/min)提取4_8h，溫度20_25°C。過濾合并提取液，減壓濃縮除去溶劑，加入50%乙醇IOOmL,再用IOOmL石油醚(沸程30_60°C )萃取3次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 20% )。C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油，上300mL HP20大孔樹脂層析柱，先后分別以 600mL的蒸餾水、80 %乙醇、85 %乙醇、90 %乙醇、95 %乙醇、無水乙醇進(jìn)行洗脫，流速6mL/ min0收集β-欖香烯含量>60%的洗脫液，按1 1比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到粗品(純度>60%)。
D、分子蒸餾將步驟C得到的粗品進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分，即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。實(shí)施例6連續(xù)逆流提取法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、連續(xù)逆流提取取步驟A原料100g，放入三角瓶中，連續(xù)逆流提取三次，每次加入石油醚500mL，震蕩(轉(zhuǎn)速60-100r/min)提取4_8h，溫度20_25°C。過濾合并提取液，減壓濃縮除去溶劑，加入50%乙醇IOOmL,再用IOOmL石油醚(沸程30_60°C )萃取3次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 20% )。C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油，上300mL HP20大孔樹脂層析柱，先后分別以 600mL的蒸餾水、80 %乙醇、85 %乙醇、90 %乙醇、95 %乙醇、無水乙醇進(jìn)行洗脫，流速6mL/ min0收集β-欖香烯含量>60%的洗脫液，按1 1比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到粗品(純度>60%)。D、分子蒸餾將步驟C得到的粗品進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分，即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。實(shí)施例7連續(xù)逆流提取法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、連續(xù)逆流提取取步驟A原料100g，放入三角瓶中，連續(xù)逆流提取三次，每次加入甲醇500mL，震蕩(轉(zhuǎn)速60-100r/min)提取4_8h，溫度20_25°C。過濾合并提取液，減壓濃縮除去溶劑，加入50%乙醇IOOmL,再用IOOmL石油醚(沸程30_60°C )萃取3次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 20% )。C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油，上300mL HP20大孔樹脂層析柱，先后分別以 600mL的蒸餾水、80 %乙醇、85 %乙醇、90 %乙醇、95 %乙醇、無水乙醇進(jìn)行洗脫，流速6mL/ min0收集β-欖香烯含量>60%的洗脫液，按1 1比例加入石油醚(沸程30-60°C)，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到粗品(純度>60%)。D、分子蒸餾將步驟C得到的粗品進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分，即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。實(shí)施例8連續(xù)逆流提取法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、連續(xù)逆流提取取步驟A原料100g，放入三角瓶中，連續(xù)逆流提取三次，每次加入甲醇500mL，震蕩(轉(zhuǎn)速60-100r/min)提取4_8h，溫度20_25°C。過濾合并提取液，減壓濃縮除去溶劑，加入50%乙醇IOOmL,再用IOOmL石油醚(沸程30_60°C )萃取3次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 20% )。C、高效液相制備將步驟B得到的揮發(fā)油用下列高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離 島津高效液相色譜儀LC-10A，C18制備柱(IOmmX 150mm)，洗脫劑為乙醇/水/乙腈= 70/20/10 (V/V)，流速為2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；進(jìn)樣體積lmL。收集β -欖香烯流出液，按1 1比例加入石油醚，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，加入Na2SO4干燥10-24h， 60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到純品(純度> 98%，產(chǎn)率> 75% )。實(shí)施例9浸漬法從紫 莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、浸漬法步驟A處理的原料100g，，加入500ml丙酮浸提3次，每次2小時(shí)，過濾， 合并提取液并去除丙酮，加入50%乙醇IOOmL,再用IOOmL石油醚(沸程30-60°C )萃取2 次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到揮發(fā)油(純度> 20% )。C、高效液相制備將步驟B得到的揮發(fā)油用下列高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離 島津高效液相色譜儀LC-10A，C18制備柱(IOmmX 150mm)，洗脫劑為乙醇/水/乙腈= 70/20/10 (V/V)，流速為2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；進(jìn)樣體積lmL。收集β -欖香烯流出液，按1 1比例加入石油醚，反復(fù)萃取三次。分離合并石油醚層，加入Na2SO4干燥10-24h， 60°C真空旋轉(zhuǎn)抽干溶劑，得到純品(純度> 98%，產(chǎn)率> 75% )。其中，步驟B采用石油醚或甲醇浸提時(shí)，純品純度及產(chǎn)率與采用丙酮浸提相當(dāng)。實(shí)施例10微波萃取法從紫莖澤蘭中提取分離β -欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、微波萃取步驟A處理的原料100g，，在微波萃取裝置中，功率800W萃取400s， 加入丙酮萃取3次，過濾合并提取液。去除提取液中的溶劑，加入50 %乙醇IOOmL,再用 IOOmL石油醚(沸程30-60°C )萃取2次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到揮發(fā)油(純度>20%)。C、分子蒸餾將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分， 即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。其中，步驟B采用石油醚或甲醇浸提時(shí)，純品純度及產(chǎn)率與采用丙酮浸提相當(dāng)。實(shí)施例11超臨界萃取法從紫莖澤蘭中提取分離欖香烯Α、原料準(zhǔn)備收集新鮮紫莖澤蘭莖和葉，太陽(yáng)下自然曬干，粉碎，過40目篩。B、超臨界萃取步驟A處理的原料100g，，用超臨界CO2流體萃取器進(jìn)行萃取，控制萃取壓力20-30MPa，萃取溫度30_50°C，萃取時(shí)間2h。在萃取產(chǎn)物中，加入50%乙醇IOOmL, 再用IOOmL石油醚(沸程30-60°C)萃取2次。分離合并石油醚層，60°C真空旋轉(zhuǎn)蒸干溶齊U，得到揮發(fā)油(純度>20%)。C、分子蒸餾將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行減壓分餾，收集76_78°C /40Pa的餾分， 即為純品(純度> 90%，產(chǎn)率> 70% )。
權(quán)利要求
1.從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法，其特征在于步驟如下Α、原料準(zhǔn)備主要以紫莖澤蘭的莖、葉中的至少一種或其混合為原料，鮮品打漿或干燥粉碎；B、揮發(fā)油提取從步驟A所得原料中提取得到揮發(fā)油；C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行柱層析，收集洗脫液，除去洗脫液中的溶劑，得到β-欖香烯粗品。
2.從紫莖澤蘭中提取分離欖香烯的方法，其特征在于步驟如下Α、原料準(zhǔn)備主要以紫莖澤蘭的莖、葉中的至少一種或其混合為原料，鮮品打漿或干燥粉碎；B、揮發(fā)油提取從步驟A所得原料中提取得到揮發(fā)油；C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行柱層析，收集洗脫液，除去洗脫液中的溶劑，得到欖香烯粗品；D、精制將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的欖香烯粗品，采用分子蒸餾或制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行精制獲得β“欖香烯精制品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從紫莖澤蘭中提取分離欖香烯的方法，其特征在于 步驟B采用水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油時(shí)，方法如下(1)經(jīng)步驟A處理的原料進(jìn)行常壓蒸餾，得到餾出液；(2)在餾出液中加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑，萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油；蒸餾時(shí)優(yōu)選以水為主要溶劑，溶劑系統(tǒng)中加入提高溶劑系統(tǒng)沸點(diǎn)和防止皂化起泡，爆沸的材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法，其特征在于 步驟B采用浸漬法提取揮發(fā)油時(shí)，方法如下(1)經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚或甲醇中的至少一種或其任意比例混合的有機(jī)溶劑浸提、過濾，得浸提液；(2)浸提液除去溶劑后加入濃度20-80%ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法，其特征在于 步驟B采用連續(xù)逆流提取法提取揮發(fā)油時(shí)，方法如下(1)經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚或甲醇中的至少一種或其任意比例混合的有機(jī)溶劑連續(xù)逆流提取，得提取液；(2)去除提取液中的溶劑后加入濃度20-80% ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于600C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法，其特征在于 步驟B采用微波萃取法提取揮發(fā)油時(shí)，方法如下(1)經(jīng)步驟A處理的原料加入丙酮、石油醚或甲醇中的至少一種或其任意比例混合的有機(jī)溶劑，在微波萃取裝置中，采用功率300-800W萃取300-800S，得提取液；(2)提取液去除溶劑后加入濃度20-80%ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法，其特征在于 步驟B采用超臨界萃取法提取揮發(fā)油時(shí)，方法如下(1)經(jīng)步驟A處理的原料，用超臨界C02流體萃取器進(jìn)行萃取，萃取壓力20-30MPa，萃取溫度30-50°C，萃取時(shí)間1. 5-3h，得萃取產(chǎn)物；(2)萃取產(chǎn)物中加入濃度20-80%ν/ν的乙醇，加入沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得揮發(fā)油。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從紫莖澤蘭中提取分離β-欖香烯的方法，其特征在于 步驟C中柱層析采用如下方法分離純化方法1 將步驟B得到的揮發(fā)油上大孔樹脂層析柱，用水、甲醇、乙醇、丙酮中的至少一種或其任意比例混合的溶劑洗脫，流速為1-4%柱體積/min，收集含欖香烯的洗脫液， 去除溶劑，加入濃度20-80% ν/ν的乙醇后，用沸點(diǎn)小于60°C的非極性有機(jī)溶劑萃取，收集上層有機(jī)相，除去上層有機(jī)相中的有機(jī)溶劑，即得欖香烯粗品；或方法2:將步驟B得到的揮發(fā)油上硅膠層析柱或銀離子硅膠層析柱，用沸點(diǎn)小于60°C 的非極性有機(jī)溶劑洗脫，流速為1-4%柱體積/min，收集含β-欖香烯的洗脫液，除去溶劑， 得到欖香烯粗品。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從紫莖澤蘭中提取分離欖香烯的方法，其特征在于當(dāng)步驟D采用分子蒸餾法時(shí)，方法如下將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的β-欖香烯粗品進(jìn)行分子蒸餾，收集欖香烯達(dá)到目標(biāo)含量的餾出液，即得欖香烯精制品。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的β-欖香烯精制方法，其特征在于當(dāng)步驟D采用高效液相色譜系統(tǒng)制備法時(shí)，方法如下將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的β-欖香烯粗品通過制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，收集β _欖香烯達(dá)到目標(biāo)含量的流出液，除去流出液中的溶劑即得欖香烯精制品。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物提取領(lǐng)域，目的是提供一種利用惡性雜草植物紫莖澤蘭為原料，從中提取分離β-欖香烯的方法。本發(fā)明方法如下A、原料準(zhǔn)備以紫莖澤蘭的莖、葉為原料，鮮品打漿或干燥粉碎；B、揮發(fā)油提取從原料中得到揮發(fā)油；C、柱層析將步驟B得到的揮發(fā)油進(jìn)行柱層析，收集洗脫液，除去洗脫液中的溶劑，得到β-欖香烯粗品；D、精制將步驟B得到的揮發(fā)油或步驟C得到的粗品，采用分子蒸餾或制備型高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行精制獲得高純度的β-欖香烯。本發(fā)明提取所得β-欖香烯產(chǎn)品純度高，產(chǎn)率高，成本低，為紫莖澤蘭開發(fā)利用和治理以及獲得β-欖香烯提供一種全新的、廉價(jià)的、有效的途徑。
文檔編號(hào)C07C7/04GK102432419SQ20111045752
公開日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者劉文權(quán), 李勇, 趙牧, 閻妍, 韋會(huì)平, 魏小慶 申請(qǐng)人:攀枝花學(xué)院