專利名稱：白蛋白衍生物和變體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白蛋白衍生物和變體和/或包含此類白蛋白衍生物和變體的融合多肽。
本發(fā)明進一步涉及白蛋白衍生物和變體和/或包含此類白蛋白衍生物和變體的融合多肽作為供藥物遞送、多肽穩(wěn)定性和體內(nèi)半壽期延長或調(diào)節(jié)的工具中的用途。
發(fā)明背景
白蛋白是天然見于哺乳動物血漿中的蛋白，在血漿中，其為最豐富的蛋白。其在維持血液理想的滲透壓方面發(fā)揮重要作用，并在血流中的多種物質(zhì)的轉(zhuǎn)運中具有作用。
白蛋白在體內(nèi)與其受體，即新生兒Fe受體(FcRn) “Brambell”結(jié)合，且已知該相互作用對于增加白蛋白的血漿半壽期是重要的。FcRn是膜結(jié)合蛋白，在多種細胞和組織類型中表達，并已發(fā)現(xiàn)其降低白蛋白的胞內(nèi)降解的速率(Roopenian D. C.和Akilesh, S. (2007)，Nat. Rev. Immunol 7，715-725.)。FcRn有助于維持哺乳動物如人血清的高水平的IgG和白蛋白。
盡管現(xiàn)有技術(shù)中已表征了 FcRn-免疫球蛋白G(IgG)相互作用，對FcRn-白蛋白相互作用的表征和理解尚不充分。主要白蛋白-FcRn結(jié)合位點位于域III (DIII 381-585)內(nèi)(Andersen 等(2010)Clinical Biochemistry 43,367-372)。然而，本領(lǐng)域已知IgG和白蛋白非協(xié)同性結(jié)合于FcRn上的不同位點(Andersen等(2006), Eur. J. Immunol 36，3044-3051;Chaudhury 等(2006), Biochemistry 45,4983-4990)。
人類血清白蛋白(HSA)已表征為585個氨基酸的多肽，其序列可見于 Peters,T. ,Jr. (1996)Al I about Albumin:Biohemistry, Genetics and Medical, Applications pplO,Academic Press, Inc. , Orlando(ISBN 0-12-552110-3)。白蛋白具有對FcRn的特征性pH-依賴性結(jié)合，其中它在酸性pH如pH 6. O結(jié)合，但在中性以上的pH如pH 7. 4不結(jié)合。
已發(fā)現(xiàn)HSA的血漿半壽期為大約19日(Peters, T.，Jr (1985) Adv. ProteinChem. 37, 161-245 ；Peters,Τ. , Jr. (1996)All about Albumin,Academic Press,Inc. , San Diego,CA. (page 245-246)) ；Benotti P, Blackburn GL:Crit Care Med(1979) 7:520-525)。一個天然存在的、具有取代D494N的點突變體，具有較低的血漿半壽期(Biochim Biophys Acta. 1991，1097:49-54)。該單個取代在此變體/突變體中生成 N-連接糖基化位點，該位點不存在于野生型(Wt)HSA中。不知道觀察到的導(dǎo)致血漿半壽期的變化歸因于在該位點的潛在糖基化還是氨基酸變化自身。
白蛋白是被視為具有長血漿半壽期的血漿蛋白，且因為該特性，已提出將其用于藥物遞送。已將白蛋白綴合于藥學(xué)上有益的化合物(W00069902A)。因此，已發(fā)現(xiàn)所得的綴合物血衆(zhòng)半壽期一般顯著長于有益化合物本身的血衆(zhòng)半壽期。
此外，已將白蛋白融合于治療上有益的肽(W) 01/79271 A和TO03/59934 A)，這通常導(dǎo)致融合多肽具有所述治療上有益的肽的活性和以及長血漿半壽期，其與所述治療上有益的肽本身的血漿半壽期相比顯著較長。
Otagiri 等(2009) ,Biol. Pharm, Bull. 32 (4)，527-534 公開了已知 77 個白蛋白變體，其中25個見于域III。已顯示缺乏羧基端最后175個氨基酸的天然變體具有減少的半壽期(Andersen 等(2010), Clinical Biohemistry43, 367-372)。Iwao 等(2007)使用小鼠模型研究了天然存在的人白蛋白變體的半壽期，并發(fā)現(xiàn)K541E和K560E具有減少的半壽期，E501K和E570K具有增加的半壽期，而K573E對半壽期幾乎無作用(Iwao等(2007)B.B. A. Proteins andProteomics 1774,1582-1590)。
Galliano 等(1993)Biochim. Biophys. Acta 1225，27-32 公開了天然變體 E505K。 Minchiotti 等(1990)公開了天然變體 K536E。Minchiotti 等(1987)Biochim. Biophys. Acta 916，411-418 公開了天然變體 K574N。Takahashi 等(1987)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84,4413-4417 公開了天然變體 D550G。Carlson 等(1992). Proc. Nat. Acad. Sci. USA 89，8225-8229 公開了天然變體 D550A。
WO 2007112940公開了包含至少一個白蛋白域III和至少一個治療模塊的構(gòu)建體，和此類構(gòu)建體在藥物半壽期延長中的用途。
白蛋白具有允許多種配體結(jié)合的固有能力，這些配體與白蛋白相締合(締合物)。 已利用該特性以延長此類前述配體的血漿半壽期，例如延長具有非共價結(jié)合于白蛋白的能力的藥物的血漿半壽期。這亦可通過將幾乎不具或不具白蛋白結(jié)合特性的藥學(xué)上有益的化合物與具有白蛋白結(jié)合特性的模塊相結(jié)合來實現(xiàn)。參見綜述文獻Kratz (2008). Journal of Controlled Release 132，171-183 及其中的參考文獻。
US7，253，259公開了通過基因重組技術(shù)產(chǎn)生的蛋白，其包括至少一個選自血清白蛋白的域Ι、π和III的域，但與天然白蛋白具有不同結(jié)構(gòu)；以及公開了產(chǎn)生該蛋白的方法。
白蛋白用于制備藥學(xué)上有益的化合物，其中此種制備物可例如但不限于白蛋白的納米顆?；蛭⒚最w粒。在這些實例中，藥學(xué)上有益的化合物或化合物的混合物的遞送可受益于白蛋白對FcRn受體親和力的改變，其中對于遞送手段而言，已顯示所述有益化合物與白蛋白相締合。
影響形成的綴合物或融合多肽的血漿半壽期的延長的準確特性或相關(guān)性質(zhì)尚不清楚(例如，但不限于I.even川Uurtzhals P 等 Biochem. J. 1995; 312:725-731)，但其似乎直接涉及其包含的白蛋白模塊和選擇的藥學(xué)上有益的化合物/肽。會需要能夠控制給定白蛋白域III衍生物，片段，或其變體，以及綴合物、融合物或締合物的血漿半壽期，從而使得與所述綴合物/融合物的組分本身給出的血漿半壽期相比，可獲得更長或更短的血漿半壽期。這會允許根據(jù)旨在治療的適應(yīng)癥的詳情定制設(shè)計特定藥物。
已知白蛋白在腫瘤中蓄積并發(fā)生分解代謝，亦顯示其在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的發(fā)炎的關(guān)節(jié)中蓄積。參見 Kratz (2008) Journal of Controlled Release 132，171-183 的綜述文獻和其中的參考文獻。預(yù)計對于FcRn親和力增加的HSA變體對于藥學(xué)上有益的化合物的遞送和/或靶向(如被動靶向)會是有利的。
可期望獲得對FcRn幾乎無或無結(jié)合的白蛋白變體，以供提供較短的半壽期或受控的血清藥代動力學(xué)，如Vania Kenanova,Tove Olafsen,Felix Bergara和Anna Wu(2009)J. Nucl. Med. ; 50 (Supplement 2) : 1582)所述。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一方面提供了白蛋白衍生物或變體，其片段，或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述白蛋白衍生物或變體或其片段包含或由如下組成白蛋白域III或衍生物或其變體，以及至少一個其它白蛋白域，片段或衍生物或其變體。優(yōu)選地，第一方面并不包括野生型白蛋白自身。然而，所述第一方面可包括經(jīng)修飾的野生型白蛋白，其修飾使其包含或由如下組成野生型白蛋白和改變，如添加一個或多個(幾個)來自任何白蛋白的域，一個或多個(幾個) 點突變，融合于有益模塊，綴合于有益模塊和/或與有益模塊締合。
在一個優(yōu)選實施方案中，所述白蛋白衍生物或變體，其片段，或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽在對應(yīng)于 SEQ ID N0:31或SEQ ID NOil(HSA)中選自下組的一個或多個(幾個)位置的位置的位置中包含一個或多個(幾個)取代、插入或缺失，最優(yōu)選取代417，440，464，490，492，493，494， 495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550，573， 574，575，577，578，579，580，581，582和584，或由在所述位置取代、插入或缺失(最優(yōu)選取代)一個或多個(幾個)氨基酸的序列組成。
在第二個方面，本發(fā)明涉及分離的多核苷酸，其編碼任何本發(fā)明的衍生物或變體， 例如(i)核酸，其編碼白蛋白衍生物，其片段，或者包含所述白蛋白衍生物或其片段或由所述白蛋白衍生物或其片段組成的融合多肽，(ii)包含所述核酸的質(zhì)粒，和(iii)包含所述質(zhì)粒的宿主細胞。
根據(jù)本發(fā)明，包含白蛋白衍生物或變體，或其片段，以及至少一種治療或診斷模塊的綴合物，形成本發(fā)明的第三個方面。
本發(fā)明的第四個方面提供了融合多肽，其包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段以及至少一種治療性蛋白或肽或者由所述物質(zhì)組成。本發(fā)明的第五個方面涉及白蛋白的衍生物或變體或其片段與另一種化合物的“締合物”，該化合物與衍生的白蛋白、變體白蛋白或其片段通過非共價結(jié)合而結(jié)合或綴合。
本發(fā)明的第六個方面涉及組合物，優(yōu)選藥物組合物，其包含或由如下組成與治療性、藥物性或其它有益多肽綴合、融合或締合的白蛋白衍生物，片段，其變體，或者融合多肽 (所述融合多肽包含所述白蛋白衍生物、片段、其變體或由所述白蛋白衍生物、片段、其變體組成)。
本發(fā)明的第七個方面涉及產(chǎn)生所述衍生物或變體的方法。
本發(fā)明的第八個方面涉及所述衍生物和/或變體在顯影中的用途，例如綴合物、 締合物或融合多肽在動物或人類顯影目的中的用途。
本發(fā)明的第九個方面涉及治療方法和/或本發(fā)明的多肽序列或核苷酸序列在治療方法中的用途。
第十個方面，本發(fā)明涉及組合物，其包含根據(jù)本發(fā)明的衍生的白蛋白，變體白蛋白，其締合物或其片段，衍生的或變體白蛋白片段或其締合物或者包含衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽。
附圖簡述
圖I :A) shFcRn-GST 與野生型 HSA 和野生型 HSA 衍生物(2000-0. 9nM)在(A)pH6.O和(B)pH 7. 4的結(jié)合。ELISA值代表重復(fù)測量的平均值。
圖2 :代表性感應(yīng)譜(sensorgram),顯示I μ M的野生型HSA和野生型HSA衍生物對固定化的 shFcRn-GSTC1400RU)在 pH 6. O 和 pH 7. 4 的結(jié)合。(A)DI-DII (B)DI-DIII, (C) DII-DIII，(D)DIII，(E)DIII-DIII 和(F)野生型 HSA。
圖3 :將分別給出在55nM，166nM和500nM，和500nM和1500nM的最終樣品濃度的野生型HSA和野生型HSA域構(gòu)建體的系列稀釋與shFcRn (50nM)預(yù)溫育，并針對固定化的 HSA(^2600RU)進行注射。注射在25 °C以50 μ 1/min的流速在pH 6. O進行。
圖4 :下述氨基酸序列的多重比對⑴全長成熟HSA(Hu_l_2_3)，(ii)白蛋白變體，其包含HSA的域I和域III(Hu_l_3)，(iii)白蛋白變體，其包含HSA的域II和域 III (Hu_2_3), (iv)全長恒河猴 / 稱猴(Macaca mulatta)白蛋白(Mac_mul), (V)全長大鼠 (Rattus norvegicus)白蛋白(大鼠)和(vi)全長小鼠(Musmusculus)白蛋白(小鼠)。 位置500、550和573(相對于全長HSA)由箭頭指示。在圖4中，域1、11和III稱作1、2和 3 (分別)。
圖5:來自人、綿羊、小鼠、兔和山羊的成熟血清白蛋白和來自黑猩猩(“Chimp”)、 恒河猴/獼猴、倉鼠、豚鼠、大鼠、牛、馬、驢、犬、雞和豬的不成熟白蛋白的氨基酸序列的多重比對。域1、2和3的起始和終止氨基酸(如Dockal等，(The Journal of Biological C hemistry, 1999, Vol. 274(41) :29303-29310))所定義)針對成熟人血清白蛋白標出。
圖6 :質(zhì)粒pDB2305的概略圖。
圖7 :總結(jié)體內(nèi)生成表達質(zhì)粒的概略圖。A.使用PCR生成兩個PCR片段。片段I和 2與Acc65I/BamHI消化的pDB3936在其5’和3’端分別分享247個堿基對(bp)和217bp的同源性。片段I和2分別在其3’和5’端彼此分享27-30bp的同源性。B.將純化的PCR片段與Acc65I/BamHI消化的pDB3936 —同用于共轉(zhuǎn)化釀酒酵母(S. cerevisiae)BXP10cir°o X=前導(dǎo)序列。Y=白蛋白DI+DII。Z=白蛋白DIII。十字代表體內(nèi)重組。
圖8 :代表性感應(yīng)譜，其顯示10 μ M的HSA域III及其變體對固定化的 shFcRn-HIS ( 2100RU)在 pH 5. 5 的結(jié)合。圖 8A :DIII 野生型和 DIII K573D，圖 8B :DIII 野生型和 DIII K573H，圖 8C :DIII 野生型和 DIII K573N，圖 8D :DIII 野生型和 DIII K573W, 圖 8E =DIII 和 DIII Q580K。
圖9 :白蛋白和衍生物及其變體(一些綴合于HRP)的非還原性SDS-PAGE分析⑴ 標記(SeeBlue ), (2)HRP 標樣，(3) DI+DIII+DIII :HRP (I μ g), (4)白蛋白標樣(lug), (5) DI+DIII-HRP(I μ g), (6)DI+DIII K500A-HRP(I μ g)，(7)DI+DIII K573P-HRP(I μ g)，(8) DI+DIII K573Y-HRP(1μ g)，(9)DI+DIIID550N-HRP(I μ g)，(10)DIII+DI-HRP(I μ g)，(11) HRP和白蛋白標樣的混合物(各I μ g)，(12) HRP+和白蛋白標樣的混合物(各2 μ g)。


圖10，代表性感應(yīng)譜，其顯示10 μ M綴合于HRP的HSA DI+III (及其變體)對固定化的 shFcRn-HISC1500RU)在 pH 5. 5 的結(jié)合。(1)DI+DIII K573P-HRP，(2)野生型 HSA，(3)DI+DIII 野生型-HRP 和(4)DI+DIII K500A-HRP。
圖11:代表性感應(yīng)譜，顯示1(^] 融合于肥4 011+111和011+111 K573P的N端的IL-Ira對固定化的shFcRn-HIS C2100RU)在pH 5. 5的結(jié)合。
圖12 :代表性感應(yīng)譜，顯示10 μ M DIII、融合的DIII和融合的DIII Κ573Ρ的HSA 串聯(lián)重復(fù)對scFvri500RU)在pH 5. 5的結(jié)合。
圖13 :代表性感應(yīng)譜，顯示10 μ M DIII、融合的DIII和融合的DIII D550N的HSA 串聯(lián)重復(fù)對scFvri500RU)在pH 5. 5的結(jié)合。
圖14 :代表性感應(yīng)譜，顯示10 μ M DIII、融合的DIII和融合的DIII Κ573Ρ的HSA 串聯(lián)重復(fù)對IL-Ira( 1500冊)在pH 5. 5的結(jié)合。
圖15 :代表性感應(yīng)譜，顯示10 μ M DIII、融合的DIII和融合的DIII D550N的HSA 串聯(lián)重復(fù)對IL-Ira( 1500冊)在pH 5. 5的結(jié)合。
圖16 :用UV光㈧和商業(yè)性蛋白質(zhì)染料⑶顯現(xiàn)融合于熒光素的DI+DIII變體蛋白。白蛋白和衍生物及其變體(一些綴合于F5M)的非還原性SDS-PAGE分析(1) 標記(SeeBlue ) (10 μ L)，(2)HSA_F5M 對照(I μ g)，(3)標記(See Blue ) (10 μ L), (4) DI+DII I+DIII-F5M (I μ g)，(5) DI+DII I 野生型 _F5M(1 μ g)，(6)DI+DIIIK500A_F5M(1 μ g)， (7)DI+DIII K573P-F5M(1μ g)，(8)DI+DIII K573Y-F5M (I μ g)，(9)DI+DIII D550N-F5M(1 μ g)，(10)DIII+DI_F5M(1 μ g), (11)標記(SeeBlue ) (10 μ L)。
圖17 :代表性感應(yīng)譜，顯示 1(^] 野生型肥4，HSA DI+DIII K573P-F5M，HSA DI+DIII K500A-F5M 對固定化的 shFcRn-HIS ( 1500冊)在 ρΗ5· 5 的結(jié)合。
圖18 :代表性感應(yīng)譜，顯示 10 μ M 野生型 HSA，HSA DI+DIII+DIII-F5M, HSA DI+DIII-F5M 對固定化的 shFcRn-HIS C1500RU)在 ρΗ5· 5 的結(jié)合。
發(fā)明詳述
本發(fā)明的第一方面涉及白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述白蛋白衍生物或變體或其片段包含或由如下組成第一白蛋白域III，片段或衍生物或其變體，以及至少一個第二白蛋白域，片段或衍生物或其變體。優(yōu)選地，所述衍生物或變體并非天然存在的衍生物或變體如來自如下之一的野生型白蛋白人；靈長類如黑猩猩、大猩猩或恒河猴/ 獼猴；兔；嚙齒類如小鼠、大鼠和倉鼠；牛；馬類如馬或驢；山羊；綿羊；犬；豚鼠；雞和豬。所述第一方面可以或可以不包括白蛋白衍生物或變體，其包含或由如下組成野生型白蛋白的域I、II和III (或其片段)，以及來自任何白蛋白如來自人或本文中公開的其它物種的白蛋白的一個或多個(幾個)其它域(或其片段)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的一些白蛋白衍生物或變體，其片段或融合多肽并不包含白蛋白的域I (或其片段)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一些白蛋白衍生物或變體，其片段或融合多肽并不包含白蛋白的域II (或其片段)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的其它白蛋白衍生物或變體，其片段或融合多肽包含白蛋白的域III以及白蛋白的域1(或其片段)或域11(或其片段)之一或兩者。
本發(fā)明基于下述發(fā)現(xiàn)包含第一白蛋白域III和至少一種第二白蛋白域的多肽， 片段或衍生物或其變體，與對應(yīng)的域III自身相比具有對FcRn更強的結(jié)合。這根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)特別是WO 2007112940是令人意想不到的，在該文中似乎域III的氨基酸殘基涉及白蛋白與FcRn受體的相互作用，其涉及延長循環(huán)中例如血漿中的白蛋白的半壽期。已知域III 負責(zé)白蛋白與FcRn的結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“白蛋白”意指與HSA具有相同和/或非常相似三維結(jié)構(gòu)，并具有長血漿半壽期的蛋白質(zhì)。如SEQ ID Ν0:31或SEQ ID Ν0:1中公開的HSA或其任何天然存在的等位基因，是根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選白蛋白。本領(lǐng)域技術(shù)人員亦會了解 HSA域III衍生物，片段，其變體的所述的特征對于其它依照所述的本發(fā)明的非人白蛋白亦會是可能的。
因此根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽與白蛋白類似，具有長血漿半壽期的益處。
本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽的大小可根據(jù)片段的大小，域的數(shù)量，融合多肽的非白蛋白部分的大小等而變化。原則上，其大小可在略微大于域III的大小及其之上變動，但實踐中優(yōu)選其大小大約為天然白蛋白的大小。不愿拘于任何理論，認為大于腎閾值的大小，如天然白蛋白的大小，對于高血漿半壽期是理想的。因此，優(yōu)選本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，和/或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的綴合物具有40-80kDa范圍，優(yōu)選50-70kDa的范圍，更優(yōu)選55-65kDa的范圍，和最優(yōu)選大約60kDa的大小。
HSA是根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的白蛋白，并為組成為585個氨基酸殘基并具有67kDa的分子量的蛋白質(zhì)。在其天然形式其不受糖基化。HSA的氨基酸序列示于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I。本領(lǐng)域技術(shù)人員會了解可存在天然等位基因，其基本上具有與HSA相同的性質(zhì)， 但與SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I相比具有一個或多個(幾個)氨基酸改變，且本發(fā)明人亦涵蓋了使用此類天然等位基因作為根據(jù)本發(fā)明的親本白蛋白。
白蛋白一般具有大約20日或更長的長血漿半壽期，例如HSA具有19日的血漿半壽期。已知HSA的長血漿半壽期是通過與其受體FcRn的相互作用介導(dǎo)的，然而，對HSA的長血漿半壽期之后的準確機理的理解或認識對于本發(fā)明不是必需的。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“白蛋白”意指與HSA具有相同或非常類似的三維結(jié)構(gòu)，并具有長血漿半壽期的蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的白蛋白蛋白質(zhì)的實例可提出人血清白蛋白(例如 AAA98797 或 P02768-1，SEQ ID NO:31 或 SEQ ID 勵1(成熟)，SEQ ID N0:4(不成熟))， 靈長類血清白蛋白(如黑猩猩血清白蛋白(例如預(yù)測的序列XP_517233. 2 SEQ ID NO:5), 大猩猩血清白蛋白或恒河猴/獼猴血清白蛋白(例如NP_001182578，SEQ ID N0:6)，嚙齒類血清白蛋白(如倉鼠血清白蛋白(例如A6YF56，SEQ ID NO: 7)，豚鼠血清白蛋白(例如 Q6WDN9-1, SEQ ID N0:8)，小鼠血清白蛋白(例如 AAH49971 或 P07724-1 Version 3，SEQ ID NO:9)和大鼠血清白蛋白(例如 AAH85359 或 P02770-1 Version 2，SEQ ID NO: 10)))， 牛血清白蛋白(例如奶牛(COW)血清白蛋白P02769-1，SEQ ID NO: 11)，馬類血清白蛋白如馬血清白蛋白(例如P35747-1，SEQ ID NO: 12)或驢血清白蛋白(例如Q5XLE4-1，SEQ ID NO: 13)，兔血清白蛋白(例如P49065-1 Version 2，SEQ ID NO: 14)，山羊血清白蛋白(例如 ACF10391，SEQ ID NO: 15)，綿羊血清白蛋白(例如 P14639-1，SEQ ID NO: 16)，狗血清白蛋白(例如 P49822-1，SEQ ID NO: 17)，雞血清白蛋白(例如 P19121-1 Version 2, SEQ ID NO: 18)和豬血清白蛋白(例如 P08835-1 Version2,SEQ ID NO: 19)。HSA，如 SEQ ID N0:31 或SEQ ID N0:1中所公開的，或其任何天然存在的等位基因，是根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的白蛋白。
根據(jù)本發(fā)明，親本白蛋白，其片段，或包含白蛋白或其片段或由白蛋白或其片段組成的融合多肽的白蛋白部分，一般與SEQ ID NO:31或SEQ ID NO: I所示的HSA序列具有至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少85%，優(yōu)選至少86%，優(yōu)選至少87%，優(yōu)選至少88%，優(yōu)選至少89%，優(yōu)選至少90%，優(yōu)選至少91%，優(yōu)選至少92%，優(yōu)選至少93%，優(yōu)選至少 94%，優(yōu)選至少95%，更優(yōu)選至少96%，更優(yōu)選至少97%，更優(yōu)選至少98%和最優(yōu)選至少99%的序列同一性。
所述親本優(yōu)選包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的氨基酸序列的至少一部分或由其組成。在另一個實施方案中，所述親本包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的至少一部分或由其組成。
在另一個實施方案中，所述親本是SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的至少一部分的等位衍生物或變體。
術(shù)語“分離的衍生物”或“分離的變體”意指經(jīng)人力修飾的衍生物或變體。在一個實施方案中，如通過SDS-PAGE或GP-HPLC確定的，該衍生物或變體為至少1%純的，例如至少5%純的，至少10%純的，至少20%純的，至少40%純的，至少60%純的，至少80%純的，和至少90%純的。
術(shù)語“基本上純的衍生物”或“基本上純的變體”意指一種制備物，其包含以重量計至多10%，至多8%，至多6%，至多5%，至多4%，至多3%，至多2%，至多I %，和至多O. 5%的與其天然或重組結(jié)合的其他多肽物質(zhì)。優(yōu)選地，所述衍生物或變體以存在于該制備物中的總多肽物質(zhì)重量計是至少92%純的，例如至少94%純的，至少95%純的，至少96%純的，至少 97%純的，至少98%純的，至少99%純的，至少99. 5%純的，和100%純的。本發(fā)明的衍生物或變體優(yōu)選為基本上純的形式。其可通過，例如，以公知的重組方法或經(jīng)典的純化方法制備該變體而達成。
術(shù)語“成熟多肽”意指經(jīng)翻譯和任何翻譯后修飾，如N末端加工、C末端截短、糖基化、磷酸化等之后的最終形式的多肽。在一個實施方案中，所述成熟多肽是氨基酸I至585。
術(shù)語“成熟多肽編碼序列”意指編碼成熟多肽的多核苷酸。在一個方面，所述成熟多肽編碼序列是SEQ ID NO:2的核苷酸I至1758。
術(shù)語“FcRn”意指人新生兒Fe受體(FcRn)。‘shFcRn’是FcRn的可溶性重組形式。 術(shù)語smFcRn是小鼠新生Fe受體的可溶性重組形式。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“白蛋白衍生物，其片段或包含所述白蛋白衍生物或其片段或由所述白蛋白衍生物或其片段組成的融合多肽”意指非天然的，經(jīng)工程改造的分子，其包含指定的白蛋白域或由指定的白蛋白域組成。因此，該術(shù)語并不包括天然的全長白蛋白或包含全長白蛋白的融合多肽。術(shù)語“衍生物”包括在一個或多個(幾個)位置包含一個或多個改變，例如取代、插入和/或缺失的白蛋白多肽。取代意指用不同氨基酸替代占據(jù)某位置的氨基酸；缺失意指去除占據(jù)某位置的氨基酸；而插入意指緊接著占據(jù)某位置的氨基酸添加 1，2或3個，或更多個氨基酸，插入可為在氨基酸的C側(cè)或N側(cè)，但通常是在氨基酸的C偵U。
術(shù)語“變體”包括白蛋白或白蛋白衍生物或其融合蛋白，其中所述白蛋白衍生物或融合物通過化學(xué)手段而改變，所述手段如多肽的翻譯后衍生化或修飾，例如PEG化和/或?qū)⑺璧哪K(如治療性模塊)綴合于巰基基團，如由未配對的半胱氨酸提供的巰基基團。術(shù)語“變體”亦包括根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物的融合蛋白，其中所述衍生物并未通過化學(xué)手段改變。
術(shù)語“衍生物”和“變體”可以或可以不互換使用。
白蛋白為蛋白質(zhì)，并構(gòu)成哺乳動物血漿中最豐富的蛋白質(zhì)，且來自大量和多樣哺乳動物的白蛋白已經(jīng)通過生化方法和/或序列信息表征。幾種白蛋白，例如HSA，亦已通過晶體學(xué)方法表征，并確定了其結(jié)構(gòu)，且已顯示白蛋白組成為三個不同的域，稱為域I、域II 和域III。
本發(fā)明的域可原則上來源于任何白蛋白，然而優(yōu)選所述域來源于人血清白蛋白， 靈長類血清白蛋白如黑猩猩血清白蛋白、大猩猩血清白蛋白或恒河猴/獼猴血清白蛋白， 嚙齒類血清白蛋白如兔血清白蛋白、小鼠白蛋白和大鼠血清白蛋白，牛血清白蛋白，馬血清白蛋白，驢血清白蛋白，倉鼠血清白蛋白，山羊血清白蛋白，綿羊血清白蛋白，犬血清白蛋白，膝鼠血清白蛋白，雞血清白蛋白和豬血清白蛋白。
根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的白蛋白是具有SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中所示序列的 HSA，且本發(fā)明優(yōu)選的白蛋白域是HSA域I，其組成為SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的氨基酸殘基I至194± I至15個氨基酸；HSA域II，其組成為SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的氨基酸殘基192至387± I至15個氨基酸；和HSA域III，其組成為SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的氨基酸殘基381至585± I至15個氨基酸，或這些域的一個或多個(幾個)的組合， 例如域I和2，域2和3，或域I和3融合在一起。對于白蛋白域的準確邊界并無廣泛接受的慣例，且對于每個域，上述提及的范圍的重疊以及在域的N端和/或C端允許加減1，2，3，4， 5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15個氨基酸，優(yōu)選I至15個氨基酸，更優(yōu)選I至10個氨基酸，最優(yōu)選I至5個氨基酸的變化長度，允許長度上的總變化高至30個氨基酸，優(yōu)選高至20 個氨基酸，更優(yōu)選高至10個氨基酸，反映了這個事實，且對于在域之間邊界上的氨基酸殘基屬于一個或另一個域可能有一些歧異的觀點。出于相同理由，可能可以發(fā)現(xiàn)與上述數(shù)值不同的對白蛋白域的氨基酸殘基的提及，然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員會了解如何基于文獻中的教導(dǎo)和上述教導(dǎo)鑒定白蛋白域。非人白蛋白的對應(yīng)域可通過與HSA使用Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48 443-453)的比對來鑒定，所述算法如 EMBOSS軟件包(EMBOSS :歐洲分子生物學(xué)開放軟件組(The European MolecularBiology Open Software Suite),Rice 等，2000,Trends Genet. 16:276-277)的 Needle 程序，優(yōu)選為3.O. O版或之后的版本中執(zhí)行的。所用的可選參數(shù)為缺口開放罰分(gap open penalty) 10， 缺口延伸罰分(gap extension penalty) O. 5，和 EBL0SUM62 (BL0SUM62 的 EMBOSS 版)取代矩陣。亦可使用其它的比對工具，例如本文中所述的MUSCLE。
所述域亦可根據(jù)Dockal 或 Kjeldsen 來定義Dockal 等(The Journal ofBiological Chemistry, 1999, Vol. 274 (41) : 29303-29310)將 HSA 的域定義為:域 I :氨基酸I至197,域II :氨基酸189至385,域III :氨基酸381至585。Kjeldsen等(Protein Expression and Purification, 1998, Vol 13:163-169)將域定義為:域 I :氨基酸 I 至 192, 域II :氨基酸193至382，域III :氨基酸383至585。
因此，在本發(fā)明中，優(yōu)選下述域定義氨基酸數(shù)對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I (HSA)中的那些。然而，使用這些數(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可鑒定出其它白蛋白序列中的對應(yīng)域。
域I可以或可以不從氨基酸I起始,且可以或可以不在任何氨基酸192，193，194，195，196或197，優(yōu)選任何氨基酸192，194或197終止。
域II可以或可以不從氨基酸189，190，191，192或193，優(yōu)選任何氨基酸189，192 或193起始，且可以或可以不在任何氨基酸382，383，384，385，386或387，優(yōu)選任何氨基酸 382,285(385)或 387 終止。
域III可以或可以不從氨基酸381，382或383，優(yōu)選氨基酸381或383起始，且可以或可以不在氨基酸585終止。
非人白蛋白中的域可具有與HSA相同或不同的氨基酸長度和/或殘基數(shù)量。舉例而言，可使用HSA和一個或多個(幾個)其它白蛋白，片段，衍生物，變體和/或融合物準備多重比對或逐對比對以供鑒定對應(yīng)于HSA的域1、2和/或3的域。合適的比對的實例在圖 5中給出。圖5使用MUSCLE和Boxshade以對圖4所述相同的方式構(gòu)建。為清楚起見，提供了 HSA、綿羊、小鼠、兔和山羊白蛋白的成熟序列(即在前導(dǎo)序列和原(肽)序列之后的第一個氨基酸開始編號)，而任何其它提供的白蛋白序列是不成熟序列(即包括前導(dǎo)序列，原肽序列(若存在)和成熟白蛋白序列)。對于人，綿羊，兔，和小鼠白蛋白的域坐標的實例在實施例中給出?？蓪⑦@些坐標應(yīng)用于本發(fā)明的任何方面。對于所有白蛋白的域坐標可從合適的比對,如圖5，通過鑒定對應(yīng)于一個或多個(幾個)HSA的域坐標(如本文中所公開)的氨基酸而鑒定或外推出。通常域坐標使用成熟白蛋白的第一個氨基酸作為位置I來命名，因此前導(dǎo)序列和/或原肽的氨基酸序列通常在此情況下忽略。
第一白蛋白域III，片段或衍生物或其變體，可原則上為任何白蛋白域III，然而優(yōu)選HSA域III (例如SEQ ID NO: 23)，片段或衍生物或其變體。
在整個說明書中，包含域I和域II的分子可稱作‘DI-DII’或稱作‘DI+DII’或稱作‘D1+D2’或稱作D1-D2’。類似地，包含域I和域III的分子可稱作任何的‘DI-DIII’或稱作‘DI+DIII’或稱作‘D1+D3’或稱作D1-D3’。因此，包含域II和域III的分子可稱作 ‘DII-DIII’或稱作‘DII+DIII’或稱作‘D2+D3’或稱作 D2-D3’。此外，如“HSA 1/2-RSA 3” 的命名意指該分子包含HSA域1，HSA域2和RSA域3，其與HSA域I，HSA域II和RSA域 III相同。
對于白蛋白域，術(shù)語“衍生物”意指多肽與所述白蛋白域在其天然形式(下文中稱作親本域)具有類似的一級和/或三級結(jié)構(gòu)，但與所述親本域在一個或多個(幾個)位置相差一個或多個(幾個)氨基酸殘基的一個或多個(幾個)取代、插入和/或缺失。所述衍生物可通過人為介入修飾編碼親本域的核酸序列并在合適的宿主生物中使用本領(lǐng)域已知技術(shù)表達經(jīng)修飾的核酸序列來獲得。
術(shù)語“片段”意指從白蛋白的氨基和/或羧基端和/或白蛋白的內(nèi)部區(qū)缺失一個或多個(幾個)氨基酸、保留結(jié)合于FcRn的活性的多肽。片段可包含或組成為一個不中斷的來源于HSA的序列，或其可包含或組成為兩個或更多個來源于HSA的序列。根據(jù)本發(fā)明的片段具有至少或多于大約20個氨基酸殘基，優(yōu)選至少或多于30個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于40個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于50個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于75個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于100個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于200個氨基酸殘基， 更優(yōu)選至少或多于300個氨基酸殘基，甚至更優(yōu)選至少或多于400個氨基酸殘基且最優(yōu)選至少或多于500個氨基酸殘基的大小。
對于本發(fā)明的第一白蛋白域III，術(shù)語“片段”意指具體相關(guān)白蛋白域的保留了結(jié)合FcRn的能力的部分。片段可組成為一個不中斷的來源于親本域的序列，或可包含或組成為兩個或更多個來源于親本域的序列。根據(jù)本發(fā)明的片段具有至少或多于大約20個氨基酸殘基，優(yōu)選至少或多于30個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于40個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于50個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于75個氨基酸殘基，且最優(yōu)選至少或多于100 個氨基酸殘基的大小。
所述至少一種第二白蛋白域，片段或衍生物或其變體可原則上為任何白蛋白域， 片段或衍生物或其變體。
對于本發(fā)明的第二白蛋白域，術(shù)語“變體”意指具體相關(guān)白蛋白域的一部分。片段可組成為一個不中斷的來源于親本域的序列，或可包含或組成為兩個或更多個來源于親本域的序列。根據(jù)本發(fā)明的片段具有至少或多于大約20個氨基酸殘基，優(yōu)選至少或多于30 個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于40個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少或多于50個氨基酸殘基， 更優(yōu)選至少或多于75個氨基酸殘基，且最優(yōu)選至少或多于100個氨基酸殘基的大小。
所述第一白蛋白域III，片段或衍生物或其變體，以及所述至少一個第二白蛋白域，片段或衍生物或其變體，可來源于相同物種，或其可來源于不同物種。舉例而言，所述第一白蛋白域III，片段或衍生物或其變體可為HSA域III，而所述至少一個第二白蛋白域，片段或衍生物或其變體為小鼠血清白蛋白域II，或所述第一白蛋白域III，片段或衍生物或其變體可為兔血清白蛋白域III而所述至少一個第二白蛋白域，片段或衍生物或其變體為人血清白蛋白域I。
所述白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽包含或組成為至少兩個白蛋白域或其片段，且其可包含或組成為多于兩個域。原則上對于可組合于根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽的白蛋白域或其片段的數(shù)量并無上限，然而，優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽包含或組成為2或3個白蛋白域，最優(yōu)選2個域。
作為根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽的實例可提出白蛋白域I+白蛋白域III (例如SEQ ID N0:22)，白蛋白域11+白蛋白域III (例如SEQ ID N0:21)，白蛋白域III+白蛋白域III (例如SEQ IDN0:24)，白蛋白域III+白蛋白域I以及白蛋白域III+白蛋白域II。
優(yōu)選的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，包含或組成為來源于一個物種的白蛋白域III以及來源于不同物種的白蛋白域I和II。實例包括白蛋白衍生物，其組成為來源于人血清白蛋白的域I和II以及來源于兔血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO:25)，衍生物，其組成為來源于兔血清白蛋白的域I和II以及來源于人血清白蛋白的域III (例如 SEQ ID N0:26)，衍生物，其組成為來源于綿羊血清白蛋白的域I和II以及來源于人血清白蛋白的域ΠΙ(例如SEQ ID Ν0:27)，以及衍生物，其組成為來源于人血清白蛋白的域I和域II以及來源于小鼠血清白蛋白的域III (例如SEQ ID Ν0:29)。這些組合物與衍生物的域 III衍生自的完整白蛋白相比，具有令人驚訝地不同的對FcRn的結(jié)合性質(zhì)。
組成為來源于人血清白蛋白的域I和II以及來源于兔血清白蛋白的域III (例如 SEQ ID NO: 25)的衍生物，組成為來源于綿羊血清白蛋白的域I和II以及來源于人血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO:27)的衍生物，以及組成為來源于人血清白蛋白的域I和II 以及來源于小鼠血清白蛋白的域III (例如SEQ ID N0:29)的衍生物與人血清白蛋白相比具有更強的對FcRn的結(jié)合。組成為來自兔血清白蛋白的域I和II以及來自人血清白蛋白的域III (例如SEQID NO:26)的衍生物與HSA相比具有更弱的對FcRn的結(jié)合。亦考慮了衍生物的變體并包含于本發(fā)明。
在一個實施方案中白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽中的一個或多個(幾個) 白蛋白域III在對應(yīng)于HSA中選自下組一個或多個(幾個)的位置的一個或多個位置中包含一個或多個(幾個)改變?nèi)缛〈笔Щ虿迦?17，440，464，490，492，493，494，495， 496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550，573，574， 575，577，578，579，580，581，582和584，或由在所述位置改變?nèi)缛〈⑷笔Щ虿迦胍粋€或多個(幾個)氨基酸的序列組成。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這些氨基酸殘基對于血清白蛋白與FcRn受體的相互作用是重要的，且在這些位置的一個或多個的改變會改變根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽對于FcRn受體的結(jié)合，并由此改變其血漿半壽期。在一個或多個(幾個)位置的改變可獨立地選自取代、插入和缺失。優(yōu)選取代。
根據(jù)本發(fā)明，所述衍生的或變體白蛋白，其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽的白蛋白部分通常具有域III，其與HSA域III的序列(如本文中關(guān)于SEQ IDN0:31或SEQ ID N0:1定義的)具有至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少81%，82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%或 89%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，更優(yōu)選至少96%，更優(yōu)選至少97%，更優(yōu)選至少98%和最優(yōu)選至少99%的氨基酸序列同一性。甚至更優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明，所述衍生的或變體白蛋白，其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽的白蛋白部分通常具有域III，其與白蛋白如任何SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I 的氨基酸 381 至 585，或SEQ ID NO: 4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18 或19,SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I (人血清白蛋白)的一個或多個(幾個)中的等同位置， 具有至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少81%，82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% 或89%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，更優(yōu)選至少96%，更優(yōu)選至少97%，更優(yōu)選至少98%和最優(yōu)選至少99%的氨基酸序列同一'丨生。
在一個進一步的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，所述白蛋白的衍生物或變體，其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽具有的血漿半壽期與親本白蛋白其片段或包含所述親本白蛋白或其片段或由所述親本白蛋白或其片段組成的融合多肽的血漿半壽期相比更長。根據(jù)該實施方案的實例包括白蛋白的衍生物或變體，其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽，它們包含或由如下組成在對應(yīng)于HSA中下組的一個或多個(幾個)位置中的一個或多個(幾個)取代E492，N503, D550和K573。優(yōu)選對應(yīng)于HSA中E492的位置的氨基酸在用G殘基取代，在對應(yīng)于在HSA中的N503的位置的氨基酸用H或K殘基取代，在對應(yīng)于的位置的氨基酸D550在HSA中用取代E殘基，而在對應(yīng)于在HSA中的K573的位置的氨基酸用A或P殘基取代。同樣優(yōu)選的是衍生物或變體，其中對應(yīng)于在HSA中的E492的氨基酸用G殘基取代，而對應(yīng)于在HSA中的K573的氨基酸用A 或P殘基取代。其它優(yōu)選的衍生物或變體具有多個取代，分別對應(yīng)于在HSA中的E492用H 殘基，在HSA中的E501用P，在HSA中的N503用H，在HSA中的E505用D，在HSA中的T506 用S，在HSA中的T540用S，在HSA中的K541用E取代。
在一個進一步的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，白蛋白的衍生物或變體，其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽具有的血漿半壽期與親本白蛋白其片段或包含所述親本白蛋白或其片段或由所述親本白蛋白或其片段組成的融合多肽的血漿半壽期相比更短。根據(jù)該實施方案的實例包括白蛋白的衍生物或變體，其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽，它們在對應(yīng)于HSA中下組的一個或多個(幾個)位置中包含取代Q417, H440, H464, D494, E495, T496, P499, K500, E501, H510, H535, K536, P537, K538，K541，D550N, D494+T496 或 E492+V493。優(yōu)選的取代包括對應(yīng)于在 HSA 中 Q417A，H440A, H464Q, D494E+Q417H, D494N, Q, A, E495Q, A, T496A, D494N+T496A 或，P499A, K500A E501A, E501Q, H510Q, H535Q, K536A, P537A, K538A, K541G, K541A K541D 或 D550N 的取代。
除了在對應(yīng)于下組位置的一個或多個(幾個)位置中的一個或多個(幾個)取代、 插入或缺失(其中優(yōu)選取代)之外SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的417，440，464，490， 492，493，494，495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541， 542，550，573，574，575，577，578，579，580，581，582 和 584，根據(jù)本發(fā)明的衍生的或變體白蛋白，其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽可在分子的其它位置包含其它取代、缺失或插入。此類其它的取代、缺失或插入可用于改變分子的其它性質(zhì)，如但不限于改變的糖基化；導(dǎo)入表面的反應(yīng)性基團如巰基基團，去除/生成氨甲?；稽c等等。
可加以改變以在表面上提供反應(yīng)性殘基并可有利地應(yīng)用于本發(fā)明的殘基已在未公開的專利申請EP 2009 152 625 (通過提述并入本文)中披露。特別優(yōu)選的殘基包括對應(yīng)于HSA中在與FcRn相互作用的區(qū)之外的位置的位置。
作為可在SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中或在其它白蛋白中的相應(yīng)位置(如SEQ ID NO:4至19中)進行以在表面上提供反應(yīng)性巰基基團的改變的實例包括L585C，DlC, A2C, D562C, A364C, A504C, E505C, T79C, E86C, D129C, D549C, A581C, D121C, E82C, S270C, A578C,L595LC,D1DC,A2AC,D562DC,A364AC,A504AC,E505EC,T79TC,E86EC,D129DC, D549DC, A581AC, A581AC, D121DC, E82EC, S270SC, A579AC,C360*，C316*，C75*，C168*，C558*，C361*， C91*，C124*，C169*和C567*。或者，可將半胱氨酸殘基添加至白蛋白的N端或C端區(qū)。
在一個實施方案中，在本發(fā)明的衍生物或變體中的改變的數(shù)量為I至20個氨基酸，例如I至10和I至5，如1，2，3，4，5，6，7，8，9或10個改變。
所述衍生的或變體白蛋白，其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽與親本白蛋白域，其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白域或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白域或其片段組成的融合多肽相比具有改變的血漿半壽期。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，親本白蛋白域來自HSA，而衍生的或變體白蛋白， 其片段或包含所述衍生的或變體白蛋白域或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白域或其片段組成的融合多肽與HSA域，對應(yīng)片段或包含HSA域或其片段或由HSA域或其片段組成的融合多肽相比具有改變的血漿半壽期。
一種確定衍生的或變體白蛋白對FcRn的親和力與親本白蛋白相比是更高或是更低的方法是使用如下文中所述的表面等離子共振測定法(SurfacePlasmon Resonance, SPR)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會理解其它方法可用于確定衍生的或變體白蛋白對FcRn的親和力與親本白蛋白對FcRn的親和力相比是更高或是更低，例如，確定并比較結(jié)合常數(shù)KD。因此， 根據(jù)本發(fā)明，具有與天然HSA的KD相比較低KD的衍生的或變體白蛋白視為與HSA相比具有更高血漿半壽期，而具有與天然HSA的KD相比較高KD的變體白蛋白視為與HSA相比具有更低血漿半壽期。
所述白蛋白的衍生物或變體或其片段或包含白蛋白或其片段或由白蛋白或其片段組成的融合多肽包含或由如下組成在對應(yīng)于HSA (SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I)中選自下組的位置的一個或多個(幾個)位置的一個或多個(幾個)改變，如取代，缺失或插入 417，440，464，490，492，493，494，495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536， 537，538，540，541，542，550，573，574，575，577，578，579，580，581,582 和 584。所述取代可為任何取代，其中在天然白蛋白序列中的氨基酸用選自剩余19中天然存在的氨基酸的不同氨基酸取代。為了避免疑問，本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用本文中使用的命名法鑒定在HSA的域中或在另一個白蛋白的白蛋白、域或片段中的位置。
在一個實施方案中，衍生物或變體在對應(yīng)于SEQ IDN0:31或SEQ ID NO: I中的位置 417，440，464，490，492，493，494，495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536， 537，538，540，541，542，550，573，574，575，577，578，579，580，581,582 和 584 的一個或多個 (幾個)位置包含改變。在另一個實施方案中，衍生物或變體在對應(yīng)于SEQ ID N0:31或 SEQ ID NO: I 中下述任何的兩個位置包含改變417，440，464，490，492，493，494，495，496， 499，500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550，573，574，575， 577，578，579，580，581，582和584。在另一個實施方案中，衍生物或變體在對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中下述任何位置的三個位置包含改變417，440，464，490，492，493， 494，495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550， 573，574，575，577，578，579，580，581，582和584。在另一個實施方案中，衍生物或變體在對應(yīng)于 SEQ ID NO: 31 或 SEQ ID NO: I 中位置 417，440，464，490，492，493，494，495，496，499， 500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550，573，574，575，577， 578，579，580，581，582和584的各個位置包含改變。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ IDN0:1的成熟多肽的取代Q417A，H。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代H440Q。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代H464Q。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A490D。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代E492G，T, P, H。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代V493P，L。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的D494N，Q，A，E，P。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代E495Q，A。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代T496A。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ IDN0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代P499A。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的K500E，G，D，A，S，C，P， H，F(xiàn)，N，W，T，M，Y，V，Q，L，I，R。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID NO:31 或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代E501A，P，Q。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代N503K，D，H。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A504E。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的包含取代E505K，D。 在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQID N0:1的成熟多肽的取代T506F，S。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I 的成熟多肽的取代H510Q。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或 SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代H535Q。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代K536A。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代P537A。在另一個實施方案中， 所述衍生物或變體包含SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代K538A，H。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 T540S。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代K541A，D，G，N，E。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31 或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代E542P，D。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代D550N。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代K573Y，W，P，H，F(xiàn)，V，I，T， N, S, G, M，C，A，E，Q，R，L，D。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或 SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代K574N。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ IDN0:1的成熟多肽的取代Q580K。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代L575F。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A577T，E。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代 A578R, S0在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代S579C，T。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或 SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代Q580K。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A581D。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A582T。在另一個實施方案中， 所述衍生物或變體包含SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代G584A。
在一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置417的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置417的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 或 His 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 Q417A, H0
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置440的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置440的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 H440Qo
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置464的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置464的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代 H464Q0
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置490的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置490的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A490G。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置492的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置492的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Gly 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的 E492G。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置493的位置包含改變。在另一個方面，在對應(yīng)于位置493的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Pro 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的V493P。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置494的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置494的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Asn, Gln 或 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代D494N，Q, A0
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置495的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置495的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Gln 或 Ala 取代。 在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代E495Q或A。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置496的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置496的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的T496A。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置499的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置499的位置的氨基酸用Ala, Arg, Asn, Asp, Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的 P499A。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置500的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置500的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 K500E, G, D, A, S，C，P, H, F，N, ff, Τ, M, Y, V, Q, L, I, R。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置501的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置501的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代，優(yōu)選用 Ala 或 Gln 取代以減少親和力而用Pro取代以增加親和力。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代E501A，Q，P。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置503的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置503的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Asp 或 Lys 或 His 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代N503D，K, H。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置504的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置504的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代A504。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置505的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置505的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID Ν0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的E505D。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置506的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置506的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的T506S，F(xiàn)。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置510的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置510的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Gln 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 H510Qo
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置535的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置535的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Gln 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代 H535Q0
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置536的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置536的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的代 K536A。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置537的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置537的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 P537A。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置538的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置538的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 K538H, A0
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置540的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置540的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代T540S。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置541的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置541的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Gly, Asp 或 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代K541G，D, A，N。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置542的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置542的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Asp 或 Pro 取代。 在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的 E542D，P。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置550的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置550的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val 取代，優(yōu)選用 Asn 取代以減少親和力，優(yōu)選用Glu取代以增加親和力。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置573的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置573的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu,27Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Tyr, Trp, Pro, His, Phe, Val, He, Thr, Asn, Ser, Gly, Met, Cys, Ala, Glu, Gin, Arg, Leu, Asp 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含取代SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的 K573Y, W, P, H, F，V, I, T, N, S，G, M, C，A, E, Q, R, L, D。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置574的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置574的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Asn 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 K574N。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置575的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置575的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Phe 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 L575F。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置577的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置577的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Thr 或 Glu 取代。 在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 A577TE。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置578的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置578的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Arg 或 Ser 取代。 在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 A578R, S。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置579的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置579的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Cys 或 Thr 取代。 在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 S579C，T。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置580的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置580的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Lys 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 Q580K。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置581的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置581的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Asp 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代 A581D。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置582的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置582的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Thr 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含TSEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽的取代 A582T。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)于位置584的位置包含改變。在另一個實施方案中，在對應(yīng)于位置584的位置的氨基酸用Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gin,Glu, Gly, His, He, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr,或 Val,優(yōu)選用 Ala 取代。在另一個實施方案中，所述衍生物或變體包含SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1的成熟多肽的取代 G584A。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)中的位置494和496的位置包含改變，如上述那些。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)中的位置492和493的位置包含改變，如上述那些。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)中的位置494和417的位置包含改變，如上述那些。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)中的位置492和503的位置包含改變，如上述那些。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)中的位置492和573的位置包含改變，如上述那些。
在另一個實施方案中，所述衍生物或變體在對應(yīng)中的位置492，503，和573的位置包含改變，如上述那些。
在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，所述衍生的或變體白蛋白或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽在對應(yīng)于HSA中選自下組的位置的位置含有一個取代SEQ ID NO: 31 或 SEQ ID NO: I 中的 417，440，464，490，492，493，494，495，496，499， 500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550，573，574，575，577， 578，579，580，581，582和584，條件是所述衍生的或變體白蛋白并非由具有取代D494N, E501K, K541E, D550G, A, K573E 或 K574N 的 SEQ ID NO: 31 或 SEQ ID NO: I 組成的衍生物或變體。根據(jù)本發(fā)明，所述衍生的或變體白蛋白，其片段或包含衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽在對應(yīng)于在HSA中的其它位置的一個或多個(幾個)位置可包含其它取代、插入或缺失。
在另一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，所述衍生的或變體白蛋白或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽在對應(yīng)于HSA中選自下組的位置的位置含有兩個，三個，四個，五個，六個，七個，Λ個，九個，十個，i^一個，十二個，十三個,十四個,十五個，十六個，十七個，十八個，十九個，二十個或甚至更多取代SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I 的 417，440，464，490，492，493，494，495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535， 536，537，538，540，541，542，550，573，574，575，577，578，579，580，581，582 和 584。根據(jù)本發(fā)明，所述衍生的或變體白蛋白或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽可在對應(yīng)于HSA中其它位置的位置包SEQIDN0:31或 SEQIDNO: ISEQIDN0:31或 SEQIDNO: ISEQIDN0:31或 SEQIDNO: ISEQIDN0:31或 SEQIDNO: ISEQIDN0:31或 SEQIDNO: ISEQIDN0:31或 SEQIDNO: I含其它取代、插入或缺失。
在一個進一步的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，所述白蛋白的衍生物或變體或其片段， 或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽具有的血漿半壽期與親本白蛋白，其片段或包含親本白蛋白或其片段或由親本白蛋白或其片段組成的融合多肽的血漿半壽期相比更長。根據(jù)該實施方案的實例包括白蛋白的衍生物或變體或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽，它們在對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1中的492， 503，542，550，573，574，580，581，582或584的位置包含取代。根據(jù)本發(fā)明的該實施方案， 優(yōu)選的取代包括對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中492的位置的氨基酸用G殘基取代，對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中503的位置的氨基酸用H或K殘基取代，對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置550的氨基酸用E殘基取代，在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31 或 SEQ ID NO: I 中的位置 573 的氨基酸用 Y，W, P，H, F，V, I, T，N, S，G，M, C，A, E, Q, R, L 或D殘基取代，在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中的位置574的氨基酸殘基用N殘基取代，或?qū)?yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置580的氨基酸用K殘基取代。其它優(yōu)選的衍生物或變體在對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置492具有用G殘基的取代和在對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置573具有用用A或P殘基的取代。其它優(yōu)選的衍生物或變體具有多個取代，其對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置492及在SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中位置503用H殘基的取代。
其它優(yōu)選的衍生物或變體具有在對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置 492用G殘基的取代和在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中的位置503用H或K的取代和在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中的位置573用A或P殘基的取代。
在一個進一步的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，所述白蛋白的衍生物或變體或其片段， 或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段或由所述衍生的或變體白蛋白或其片段組成的融合多肽具有的血漿半壽期與親本白蛋白，其片段或包含親本白蛋白或其片段的融合多肽的血漿半壽期相比更短。根據(jù)該實施方案的實例包括白蛋白的衍生物或變體或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽，它們在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I 中的 417，440，494，495，496，499，500，501，536，537，538，541，494+496 或 492+493 的位置包含取代。優(yōu)選的取代包括對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQID勵1中的0417八，H440Q， D494E+Q417H, D494N, Q, A, E495Q, A, T496A, D494N+T496A 或，P499A, K500A, E501A, E501Q, K536A, P537A, K538A, K541G, K541A K541D 或 D550N 的取代。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，所述白蛋白的衍生物或變體或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽喪失了結(jié)合FcRn的能力。與此相關(guān)，所述白蛋白的衍生物或變體或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽視為喪失結(jié)合FcRn的能力，若在下文中所述的SPR測定中對所述衍生物或變體測得的共振單位低于對于相應(yīng)的親本白蛋白或其片段測得的共振單位的10%。根據(jù)該實施方案的實例包括白蛋白的衍生物或變體或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽，它們在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: I中的464，500，510或535的位置包含取代。優(yōu)選的取代包括對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ IDN0:1中的H464Q，K500A, P, C，S，A, D, G H510Q 或 H535Q 的取代。
除了在對應(yīng)于SEQID N0:31 或SEQ ID NO: I 中的位置417，464，490，492，493，494， 495，496，499，500，501，503，504，505，506，510，535，536，537，538，540，541，542，550，573， 574，580581，582和584的一個或多個(幾個)位置的一個或多個(幾個)取代之外，根據(jù)本發(fā)明的所述衍生的或變體白蛋白或其片段，或包含所述衍生的或變體白蛋白或其片段的融合多肽在分子的其它位置可含有其它取代、缺失或插入。此類其它的取代、缺失或插入可用于改變分子的其它性質(zhì)，如但不限于改變的糖基化；導(dǎo)入表面的反應(yīng)性基團如巰基基團， 去除/生成氨甲?；稽c等等。
可加以改變以在表面上提供反應(yīng)性殘基并可有利地應(yīng)用于本發(fā)明的殘基已在未公開的專利申請WO 2010/092135 (通過提述并入本文)中披露。特別優(yōu)選的殘基包括對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的位置的位置。
作為可在SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中或其它白蛋白的相應(yīng)位置加以改變以提供表面上的活性巰基基團的改變包括對應(yīng)于SEQ ID N0:31或SEQ IDN0:1中下述改變的改變L585C, DlC, A2C, D562C, A364C, A504C, E505C, T79C, E86C, D129C, D549C, A581C, D121C, E82C, S270C, A578C, L595LC, D1DC, A2AC, D562DC, A364AC, A504AC, E505EC, T79TC, E86EC, D129DC, D549DC, A581AC, A581AC, D121DC, E82EC, S270SC, A579AC, C360*，C316*， C75*，C168*，C558氺,C361*，C91*，C124*，C169*和C567*。或者，可將半胱氨酸殘基添加至白蛋白的N或C端。
在第二個方面，本發(fā)明涉及分離的多核苷酸，其編碼本發(fā)明的任何多肽，例如，(I) 核酸，其編碼白蛋白衍生物或變體，其片段，或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段的融合多肽，(ii)包含所述核酸的質(zhì)粒，和(iii)包含所述質(zhì)粒的宿主細胞。本發(fā)明亦涉及核酸構(gòu)建體，其包含編碼本發(fā)明的衍生物或變體的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地連接于一個或多個(幾個)調(diào)控序列，所述調(diào)控序列指導(dǎo)所述編碼序列在合適的宿主細胞中在與所述調(diào)控序列相容的條件下表達。在本發(fā)明的該第二個方面，所述親本優(yōu)選由多核苷酸編碼，所述多核苷酸在非常低嚴格條件，低嚴格條件，中等嚴格條件，中_高嚴格條件，高嚴格條件或非常高嚴格條件下與以下雜交(i) SEQ ID NO: 2的成熟多肽編碼序列(SEQ IDNO: 3 NCBI Reference Sequence:NM_000477. 5, SEQ ID N0:3 為基因組 DNA) ； (ii)編碼成熟多肽的 cDNA 序列(cDNA 是 SEQ ID NO: 2);或(iii)⑴或(ii)的全長互補鏈(J. Sambrook, E. F. Fritsch 和 T. Maniatis, 1989, Molecular Cloning, ALaboratory Manual,第 2 版，Cold Spring Harbor, New York)。
SEQ ID NO:2的多核苷酸或其亞序列，以及SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其片段， 可用于設(shè)計核酸探針，以根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)公知的方法從不同屬和種的菌株鑒定和克隆編碼親本的DNA。具體而言，根據(jù)標準的Southern印跡方法，可將這些探針用于與感興趣的屬或種的基因組或cDNA雜交，以鑒定和從其中分離相應(yīng)的基因。這些探針可明顯短于完整序列， 但長度上應(yīng)為至少14，例如至少25，至少35，或至少70個核苷酸。優(yōu)選地，所述核酸探針是至少100個核苷酸長度，例如，至少200個核苷酸，至少300個核苷酸，至少400個核苷酸， 至少500個核苷酸，至少600個核苷酸，至少700個核苷酸，至少800個核苷酸，或至少900 個核苷酸的長度。DNA和RNA探針二者均可使用。通常將探針標記以檢測相應(yīng)的基因(例如，用32P、3H、35S、生物素或抗生物素蛋白(avidin)標記)。本發(fā)明涵蓋此類探針。
可從由這些其它生物體制備的基因組DNA或cDNA文庫中篩選與上述探針雜交并編碼親本的DNA?？梢酝ㄟ^瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳，或通過其它分離技術(shù)分離來自這些其它生物體的基因組或其它DNA?？梢詫碜晕膸斓腄NA或分離的DNA轉(zhuǎn)移至硝化纖維素(nitrocellulose)或其它合適的載體材料并且固定于其上。為了鑒定與SEQ ID NO:2 或其亞序列同源的克隆或DNA,將所述載體材料用在Sounthern印跡中。
就本發(fā)明而言，雜交表示多核苷酸在非常低至非常高的嚴格條件下與標記的核苷酸探針雜交，所述核苷酸探針對應(yīng)于SEQ ID NO:2中所示的多核苷酸，其互補鏈，或其亞序列?？墒褂美鏧射線片(X-ray film)或任何其他本領(lǐng)域中已知的檢測手段來檢測與所述探針雜交的分子。
在一個實施方案中，所述核酸探針是SEQ ID NO:2的成熟多肽編碼序列。在另一個實施方案中，所述核酸探針是SEQ ID N0:2的核苷酸I至1758。在另一個方面，所述核酸探針是編碼SEQ ID NO: I的多肽或其片段的多核苷酸。在另一個方面，所述核酸探針是 SEQ ID NO:2。
對于長度至少100個核苷酸的長探針，將非常低至非常高的嚴格條件定義為在 42°C，在5X SSPE、0. 3% SDS,200 μ g/ml已剪切并且變性的鮭精DNA中，并且對于非常低和低嚴格性為25%的甲酰胺、對于中和中-高嚴格性為35%的甲酰胺、或?qū)τ诟吆头浅８邍栏裥詾?0%的甲酰胺,根據(jù)標準的Southern印跡法進行預(yù)雜交和雜交最佳12至24小時。使用2X SSC、0. 2%SDS在45。。(非常低嚴格性)，在50°C (低嚴格性)，在55°C (中嚴格性)， 在60°C (中-高嚴格性)，在65°C (高嚴格性)，或70°C (非常高嚴格性)將載體材料最終洗滌三次，每次15分鐘。
對于長度大約15個核苷酸至大約70個核苷酸的短探針，將嚴格條件定義為在比使用根據(jù) Bolton 和 McCarthy 的計算法(1962, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:1390)計算出的 T111 低大約 5°C至大約 10°C，在 O. 9M NaCl，O. 09MTris-HCl pH 7. 6,6mM EDTA, O. 5%NP_40, I XDenhardt 溶液，ImM 焦憐酸鈉(sodium pyrophosphate), ImM 憐酸二氫鈉(sodium monobasic phosphate), 0. ImM ATP 和 O. 2mg 每 ml 的酵母 RNA 中，根據(jù)標準的 Southern 印跡步驟進行預(yù)雜交和雜交最佳12至24小時。將所述載體材料在6X SSC加O. 1%SDS中最終洗滌一次15分鐘，并用6XSSC在比計算的Tm低5°C至I (TC的溫度洗滌兩次，每次15分鐘。
所述親本可由多核苷酸編碼，所述多核苷酸與SEQ ID NO:2的成熟多肽編碼序列具有至少60%，例如至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，或100%序列同一性，并編碼能夠作為白蛋白起作用的多肽。在一個實施方案中，所述親本由包含SEQ ID N0:2或由SEQ ID N0:2組成的多核苷酸編碼。
根據(jù)本發(fā)明的第三個方面，根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段的融合蛋白可使用本領(lǐng)域中公知的技術(shù)綴合于第二分子。 所述第二分子可包含診斷模塊或由診斷模塊組成，且在該實施方案中所述綴合可用作如在顯影中的診斷工具，或所述第二分子可為治療化合物，且在該實施方案中所述綴合物可用于治療目的，其中所述綴合物具有所述治療化合物的治療特性以及白蛋白的改變的血漿半壽期，這來源于其與白蛋白衍生物，片段，其變體的綴合。白蛋白和治療分子的綴合物在本領(lǐng)域中是已知的，且已驗證此類綴合物與未綴合的游離的治療分子本身相比具有較長的血漿半壽期。所述綴合物可方便地通過白蛋白衍生物，片段，衍生物或其變體的表面上存在的游離巰基基團連接。該巰基基團的存在可為天然存在的(例如，所述游離巰基基團可等同于成熟HSA的氨基酸殘基34)，或使用遺傳工程和綴合物化學(xué)領(lǐng)域公知的技術(shù)工程改造入該多肽。或者，所述綴合物可通過HSA域III衍生物，片段，或其變體的表面上提供的其它游離巰基基團連接，例如如于共同未決的專利申請(EP 2009 152 625. 1，通過提述并入本文)公開的。
根據(jù)本發(fā)明的白蛋白綴合物的半壽期與綴合伴侶分子自身的半壽期相比可更長或更短。根據(jù)本發(fā)明的白蛋白綴合物的半壽期與包含天然HSA (而非根據(jù)本發(fā)明的白蛋白變體或衍生物)和該綴合分子的類似/等同的白蛋白綴合物的半壽期相比可為更長或更短。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，將所述衍生的或變體白蛋白及其片段綴合于有益的治療化合物，并將該綴合物用于治療有此需要的患者中的病狀，其中所述病狀響應(yīng)該特別選定的治療化合物。用于將此種治療化合物綴合于衍生的或變體白蛋白或其片段的技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的。WO 2009/019314公開了適于將治療化合物綴合于多肽的技術(shù)的實例，且該技術(shù)亦可適用于本發(fā)明。此外，WO 2009/019314公開了可綴合于取代的轉(zhuǎn)鐵蛋白的化合物和模塊的實例，且這些實例亦可應(yīng)用于本發(fā)明。WO 2009/019314的教導(dǎo)通過提述并入本文。
HSA以其天然形式含有一個游離巰基基團，其可方便地用于綴合。作為該實施方案中的具體實施方案，所述衍生的或變體白蛋白或其片段可包含提供用于在其表面生成其他游離巰基基團的進一步修飾。這具有下述益處使得所述衍生的或變體白蛋白或其片段的有效負載增加，從而可將超過一個分子的治療化合物綴合于每分子的衍生的或變體白蛋白或其片段，或可將兩個或更多個不同的治療化合物綴合于每分子的衍生的或變體白蛋白或其片段，例如，將具有靶向特性的化合物如對例如腫瘤具特異性的抗體；以及細胞毒性藥物綴合于衍生的或變體白蛋白或其片段，由此構(gòu)建針對腫瘤的高度特異性藥物。對可修飾以在表面提供更多游離巰基基團的特定殘基的教導(dǎo)亦可見于共同未決的專利申請WO 2010/092135，其通過提述并入本文。
根據(jù)本發(fā)明的第四個方面，根據(jù)本發(fā)明的白蛋白衍生物，片段，及其變體亦可與非白蛋白多肽融合伴侶相融合。所述融合伴侶原則上可為任何多肽，但一般優(yōu)選所述融合伴侶是具有治療或診斷特性的多肽。包含白蛋白的融合多肽在本領(lǐng)域中是已知的。已發(fā)現(xiàn)此種包含白蛋白以及融合伴侶多肽或由白蛋白以及融合伴侶多肽組成的融合多肽與未融合的融合伴侶多肽自身相比具有較長的血漿半壽期。根據(jù)本發(fā)明，可改變本發(fā)明的融合多肽相對于現(xiàn)有技術(shù)的相應(yīng)融合多肽的血漿半壽期。關(guān)于白蛋白與融合伴侶多肽的融合的進一步教導(dǎo)，以及合適的融合伴侶多肽的實例可見于WO 01/79271 A和W003/59934 A。根據(jù)本發(fā)明的白蛋白融合物的半壽期與融合伴侶多肽自身的半壽期相比可更長或更短。根據(jù)本發(fā)明的白蛋白融合物的半壽期與包含天然HSA(而非根據(jù)本發(fā)明的白蛋白變體或衍生物)和該融合伴侶或由天然HSA和該融合伴侶組成的類似/等同的白蛋白融合物的半壽期相比可為更長或更短。
對于本發(fā)明的所有方面，融合伴侶多肽和/或綴合物可包含下述一種或多種(幾種)4-1ΒΒ配體，5-螺旋，人C-C趨化因子，人L105趨化因子，命名為huL105_3.的人L105趨化因子，由Y-干擾素誘導(dǎo)的單核因子(MIG)，部分CXCR4B蛋白，血小板堿性蛋白(PBP)， α I-抗胰蛋白酶，ACRP-30類似物；補體成分ClqC，腺樣-表達的趨化因子(ADEC)，aFGF ； FGF-1, AGF, AGF蛋白，白蛋白，依托泊苷(etoposide),血管他丁(angiostatin),炭疽疫苗， 對腦衰蛋白有特異性的抗體，antistasin,抗TGF β家族抗體，抗凝血酶III (antithrombin III), APM-I ；ACRP-30 ;Famoxin,載脂蛋白物種(apo-lipoprotein species),芳基硫酸酯酶 B (ArylsulfataseB)，b57 蛋白，BCMA，B-血小板球蛋白(β -TG), bFGF ;FGF2，凝血因子， BMP 加工酶 Furin，BMP-10，BMP-12，BMP-15，BMP-17，BMP-18，BMP-2B，BMP-4，BMP-5，BMP-6， BMP-9，骨形態(tài)形成蛋白-2，降鈣素(calcitonin)，鈣激活中性蛋白酶-10a，鈣激活中性蛋白酶-10b，鈣激活中性蛋白酶-10c，癌癥疫苗，羧肽酶，C-C趨化因子，MCP2，CCR5變體， CCR7, CCR7, CDlla Mab, CD 137 ;4_1BB 受體蛋白，CD20 Mab, CD27, CD27L, CD30, CD30 配體， ⑶33免疫毒素，⑶40，⑶40L，⑶52 Mab, Cerebus蛋白，嗜酸細胞活化趨化因子(Chemokine Eotaxin)，趨化因子hIL_8，趨化因子hMCPl，趨化因子hMCPla，趨化因子hMCPlb，趨化因子 hMCP2,趨化因子hMCP3，趨化因子hSDFlb，趨化因子MCP-4，趨化因子TECK和TECK變體， 趨化因子樣蛋白IL-8M1全長和成熟，趨化因子樣蛋白IL-8M10全長和成熟，趨化因子樣蛋白IL-8M3，趨化因子樣蛋白IL-8M8全長和成熟，趨化因子樣蛋白IL-8M9全長和成熟，趨化因子樣蛋白PF4-414全長和成熟，趨化因子樣蛋白PF4-426全長和成熟，趨化因子樣蛋白PF4-M2全長和成熟，霍亂疫苗，Chondromodulin樣蛋白，c_kit配體；SCF ;肥大細胞生長因子；MGF ;纖維肉瘤來源的干細胞因子，CNTF及其片段(如CNTFAxl5' (AxokineTM))， 前體或活性形式的凝血因子，膠原，補體C5 Mab，結(jié)締組織活化蛋白-III，CTAA16. 88 Mab, CTAP-III, CTLA4-Ig, CTLA-8，CXC3, CXC3, CXCR3 ;CXC 趨化因子受體 3，cyanovirin-N, Darbepoetin,命名為 exodus,命名為 huL105_7.，DIL-40, DNA 酶，EDAR, EGF 受體 Mab, ENA-78,內(nèi)皮他丁(Endostatin),嗜酸細胞活化趨化因子(Eotaxin),上皮嗜中性粒細胞活化蛋白-78，EPO受體；EP0R,紅細胞生成素(erythropoietin) (EPO)和EPO模擬物，優(yōu)托品(Eutropin)，Exodus蛋白，因子IX，因子VII，因子VIII，因子X和因子XIII，F(xiàn)AS配體抑制蛋白(DcR3)，F(xiàn)asL, FasL, FasL, FGF, FGF-12 ;成纖維細胞生長因子同源因子_1， FGF-15, FGF-16, FGF-18，F(xiàn)GF-3 ;INT_2，F(xiàn)GF-4 ;白樹霉素(gelonin)，HST-I ;HBGF_4， FGF-5, FGF-6 ;肝素結(jié)合分泌的轉(zhuǎn)化因子-2 (Heparinbinding secreted transforming factor-2), FGF-8, FGF-9 ;神經(jīng)膠質(zhì)活化因子，纖維蛋白原(fibrinogen), flt-1, flt-3 配體，促卵泡激素α亞基，促卵泡激素β亞基，促卵泡素(Follitropin), Fractalkine, 片段，肌纖維蛋白肌I丐蛋白I (Troponin I), FSH,半乳糖苷酶(Galactosidase),半乳凝素-4 (Galectin-4)，G-CSF，⑶F-I，基因療法，神經(jīng)膠質(zhì)瘤-衍生的生長因子，胰高血糖素， 胰高血糖素樣肽，葡糖腦苷酯酶(Glucocerebrosidase),葡糖氧化酶(glucose oxidase), 葡糖苷酶(Glucosidase), Glycodelin-A ;黃體酮相關(guān)子宮內(nèi)膜蛋白，GM-CSF，促性腺素 (gonadotropin)，粒細胞趨化蛋白_2 (GCP-2)，粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子，生長激素， 生長相關(guān)癌基因_ α (GR0- α ),生長相關(guān)癌基因β (GR0- β ),生長相關(guān)癌基因Y (GR0- Y ), hAPO-4 ；TR0Y, hCG，乙型肝炎表面抗原，乙型肝炎疫苗，HER2受體Mab，水蛭素(hirudin)， HIV gpl20, HIV gp41，HIV抑制肽，HIV抑制肽，HIV抑制肽，HIV蛋白酶抑制肽，HIV-I蛋白酶抑制劑，HPV疫苗，人6CKine蛋白，人Act_2蛋白，人脂肪形成抑制因子，人B細胞刺激因子-2受體，人β _趨化因子Hl305 (MCP-2)，人C-C趨化因子DGWCC，人CC趨化因子ELC蛋白，人CC型趨化因子白細胞介素C，人CCC3蛋白，人CCF18趨化因子，命名為SLC ( 二級淋巴趨化因子)的人CC-型趨化因子蛋白，人趨化因子β-8短形式(short form)，人趨化因子C10，人趨化因子CC-2，人趨化因子CC-3，人趨化因子CCR-2，人趨化因子Ck β -7，人趨化因子ΕΝΑ-78，人趨化因子嗜酸細胞活化趨化因子，人趨化因子GRO α，人趨化因子GRO α， 人趨化因子GROP，人趨化因子HCC-I，人趨化因子HCC-I，人趨化因子1-309，人趨化因子 ΙΡ-10，人趨化因子L105_3，人趨化因子L105_7，人趨化因子MIG，人趨化因子MIG- β蛋白， 人趨化因子MIP-I α，人趨化因子MIPl β，人趨化因子ΜΙΡ_3 α，人趨化因子ΜΙΡ_3 β，人趨化因子PF4，人趨化因子蛋白331D5，人趨化因子蛋白61164，人趨化因子受體CXCR3，人趨化因子SDFl α，人趨化因子SDFlP，人趨化因子ZSIG-35，人Chrl9Kine蛋白，人CKP-9， 人CK0-9，ACX3C 111氨基酸趨化因子，人DNAX白細胞介素-40，人DVic-I C-C趨化因子，人EDIRF I蛋白序列，人EDIRF II蛋白序列，人嗜曙紅細胞CC型趨化因子嗜酸細胞活化趨化因子，人嗜曙紅細胞-表達的趨化因子(EEC)，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白C(Human fast twitch skeletal muscle troponinC),人快速顫搐骨骼肌肌韓蛋白I,人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白亞基C，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白亞基I蛋白，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白亞基T，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白T，人胎兒脾臟表達的趨化因子，F(xiàn)SEC，人GM-CSF受體， 人gro-α趨化因子，人gro-β趨化因子，人gro-γ趨化因子，人IL-16蛋白，人IL-1RD10 蛋白序列，人IL-1RD9，人IL-5受體a鏈，人IL-6受體，人IL-8受體蛋白hIL8RA，人IL-8 受體蛋白hIL8RB，人IL-9受體蛋白，人IL-9受體蛋白變體#3，人IL-9受體蛋白變體片段， 人IL-9受體蛋白變體片段#3，人白細胞介素I δ，人白細胞介素10，人白細胞介素10，人白細胞介素18,人白細胞介素18衍生物,人白細胞介素-I β前體,人白細胞介素-I β前體, 人白細胞介素-I受體輔助蛋白，人白細胞介素-I受體拮抗劑β，人白細胞介素-I型_3受體，人白細胞介素_10(前體)，人白細胞介素-10 (前體)，人白細胞介素-11受體,人白細胞介素_1240kD亞基,人白細胞介素-12β -I受體,人白細胞介素-12β -2受體,人白細胞介素-12ρ35蛋白，人白細胞介素-12ρ40蛋白，人白細胞介素-12受體,人白細胞介素-13 a 受體，人白細胞介素-13 β受體，人白細胞介素-15，來自克隆Pl的人白細胞介素-15受體，人白細胞介素-17受體，人白細胞介素-18蛋白(IL-18),人白細胞介素-3,人白細胞介素_3受體，人白細胞介素_3變體，人白細胞介素_4受體，人白細胞介素_5，人白細胞介素-6，人白細胞介素_7，人白細胞介素-7，人白細胞介素-8(IL-8)，人胞內(nèi)IL-I受體拮抗劑，人IP-10和HIV-I gpl20超變區(qū)融合蛋白，人ΙΡ-10和人Muc-I核心表位(VNT)融合多肽，人肝和活化調(diào)節(jié)趨化因子(LARC) ,ALkn-I全長和成熟蛋白，人乳腺相關(guān)趨化因子 (MACK)蛋白全長和成熟，人成熟趨化因子CkP-7，人成熟gro-a，用于治療敗血病的人成熟gro-γ多肽，人MCP-3和人Muc-I核心表位(VNT)融合蛋白，人MIlO蛋白，人MIlA蛋白， 人單核細胞化學(xué)引誘物因子hMCP-Ι，人單核細胞化學(xué)引誘物因子hMCP-3，人單核細胞趨化前蛋白(MCPP)序列，人神經(jīng)趨化因子(neurotactin)趨化因子樣域，人非-ELR CXC趨化因子H174，人非-ELR CXC趨化因子IP10，人非-ELR CXC趨化因子Mig，人PAI-I突變體，具有IL-16活性的人蛋白，具有IL-16活性的人蛋白，人二級淋巴樣趨化因子(SLC)，人SISD 蛋白，人STCP-I，人基質(zhì)細胞衍生的趨化因子，SDF-I，人T細胞混合淋巴細胞反應(yīng)表達的趨化因子(TMEC)，人胸腺和活化調(diào)節(jié)細胞因子(TARC)，人胸腺表達的，人TNF- α，人TNF- α， 人TNF-β (LT-α)，人類型CC趨化因子嗜酸細胞活化趨化因子3蛋白序列，人類型II白細胞介素-I受體，人野生型白細胞介素_4 (hIL-4)蛋白，人ZCHEM0-8蛋白，人源化抗VEGF抗體，及其片段，人源化抗VEGF抗體,及其片段,透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase), ICE IOkD亞基，ICE 20kD亞基，ICE 22kD亞基，艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(Iduronate-2-sulfatase)，艾杜糖苷酸酶(Iduronidase)，IL-I α，IL-I β，IL-I 抑制劑(IL-Ii)，IL-I 成熟，IL-IO 受體， IL-11，IL-11，IL-12p40 亞基，IL-13，IL-14，IL-15，IL-15 受體，IL-17，IL-17 受體，11-17 受體，11-17受體，IL-19，IL-Ii片段，ILl-受體拮抗劑，IL-21 (TIF)，含IL-3的融合多肽，IL-3 突變體蛋白，IL-3變體，IL-3變體，IL-4，IL-4突變蛋白，IL-4突變蛋白Y124G，IL-4突變蛋白Y124X，IL-4突變蛋白，11-5受體，IL_6，11-6受體，IL-7受體克隆，IL-8受體，IL-9成熟蛋白變體(Metll7型)，免疫球蛋白或基于免疫球蛋白的分子，或任一者的片段(例如Small Modular ImmunoPharmaceuticalTM(“SMIP”)或 dAb,Fab，片段，F(xiàn) (ab，) 2, scAb, scFv 或 scFv 片段)，包括但不限于纖溶酶原，流感疫苗，抑制素(Inhibin) α，抑制素β，胰島素，胰島素樣生長因子，整聯(lián)蛋白Mab，間-α胰蛋白酶抑制劑，間-α胰蛋白酶抑制劑，干擾素誘導(dǎo)蛋白(IP-IO)，干擾素(如干擾素α種和亞種，干擾素β種和亞種，干擾素Y種和亞種)，干擾素(如干擾素α種和亞種，干擾素β種和亞種，干擾素Y種和亞種)，白細胞介素6,白細胞介素8(IL-8)受體，白細胞介素8受體B,白細胞介素-I α，白細胞介素_2受體相關(guān)蛋白Ρ43，白細胞介素_3，白細胞介素_4突變蛋白，白細胞介素-8(IL-8)蛋白，白細胞介素-9，白細胞介素-9(IL-9)成熟蛋白(Thrll7型)，白細胞介素(如IL10，IL11和IL2)， 白細胞介素(如IL10，ILll和IL2)，日本腦炎疫苗，Kalikrein抑制劑，角質(zhì)細胞生長因子， Kunitz域蛋白(如抑肽酶(aprotinin),淀粉狀前體蛋白和WO 03/066824中所述那些,具有或不具有白蛋白融合)，Kunitz域蛋白(如抑肽酶(aprotinin),淀粉狀蛋白前體蛋白和 WO 03/066824中所述那些，具有或不具有白蛋白融合)，LACI，乳鐵蛋白(Iactoferrin)， 潛在的TGF-β結(jié)合蛋白II，來普汀/瘦素(I印tin)，肝表達的趨化因子-I (LVEC-I)Jf 表達的趨化因子-2(LVEC-2)，LT-α，LT-β，黃體化激素，萊姆病疫苗，淋巴細胞趨化因子 (Lymphotactin)，巨噬細胞衍生的趨化因子類似物MDC (η+1)，巨噬細胞衍生的趨化因子類似物MDC-eyfy，巨噬細胞衍生的趨化因子類似物MDC_yl，巨噬細胞衍生的趨化因子，MDC, 巨噬細胞衍生的趨化因子(MDC)，Maspin ;蛋白酶抑制劑5，MCP-I受體，MCP-la, MCP-Ib, MCP-3，MCP-4受體，M-CSF，黑素瘤抑制蛋白，膜結(jié)合蛋白，Met 117人白細胞介素9，ΜΙΡ-3 α， ΜΙΡ-3 β , MIP-Γ , MIRAP，修飾的Rantes，單克隆抗體，MP52，突變白細胞介素6 S176R，肌纖維收縮蛋白肌I丐蛋白I,利鈉肽(Natriuretic Peptide),神經(jīng)生長因子-β ,神經(jīng)生長因子-β 2，神經(jīng)菌毛素(NeuiOpilin) _1，神經(jīng)菌毛素_2，神經(jīng)趨化因子，神經(jīng)營養(yǎng)因子-3， 神經(jīng)營養(yǎng)因子_4，神經(jīng)營養(yǎng)因子_4a，神經(jīng)營養(yǎng)因子_4b，神經(jīng)營養(yǎng)因子-4c，神經(jīng)營養(yǎng)因子-4d，嗜中性粒細胞活化肽-2(NAP-2)，N0G0-66受體，NOGO-A, NOGO-B, N0G0-C，命名為 PTEC的新β -趨化因子，N-端修飾趨化因子GroHEK/hSDF-Ι α，N-端修飾趨化因子GroHEK/ hSDF-Ι β，Ν-端修飾趨化因子met-hSDF-Ι α，N-端修飾趨化因子met-hSDF-Ι β，OPGL，成骨蛋白-I ；0Ρ-1 ;ΒΜΡ-7，成骨蛋白-2，0X40 ;ACT_4，0X40L，催產(chǎn)素(神經(jīng)垂體素運載蛋白I)， 甲狀旁腺素，Patched, Patched-2, PDGF-D,百日咳類毒素(Pertussistoxoid),垂體表達的趨化因子(PGEC)，胎盤生長因子，胎盤生長因子-2，纖溶酶原活化物抑制劑-I ;PAI-1，纖溶酶原活化物抑制劑_2 ;PAI-2，纖溶酶原活化物抑制劑-2 ;PAI-2，血小板衍生的生長因子， 血小板衍生的生長因子Bv-sis，血小板衍生的生長因子前體A，血小板衍生的生長因子前體B，血小板Mab，血小板衍生的內(nèi)皮細胞生長因子(I3D-ECGF)，血小板衍生的生長因子A鏈， 血小板衍生的生長因子B鏈，用于治療敗血病的多肽，前原載脂蛋白“米蘭”變體(Pr印roap olipoprotein“milano”variant)，前原載脂蛋白“巴黎”變體，前凝血酶(pre-thrombin),靈長類CC趨化因子〃 ILINCK 〃，靈長類CXC趨化因子〃 IBICK 〃，胰島素原，促乳素(Prolactin)， 促乳素2，prosaptide，蛋白酶抑制肽，蛋白C，蛋白S，凝血酶原，尿激酶原，RANTES, RANTES 8-68, RANTES 9_68，RANTES肽，RANTES受體，重組白細胞介素-16，抵抗素(Resistin)，局限曲菌素(restrictocin),逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑，蓖麻毒蛋白(ricin),輪狀病毒疫苗， RSV Mab,阜草素(saporin),八疊球菌(sarcin),分泌和跨膜多肽,分泌和跨膜多肽,血清膽堿酯酶，血清蛋白(如凝血因子)，可溶性BMP受體激酶蛋白-3，可溶性VEGF受體，干細胞抑制因子，葡萄球菌疫苗，基質(zhì)衍生的因子-I α，基質(zhì)衍生的因子-I β，物質(zhì)P (速激肽)， Τ1249 肽，Τ20 肽，Τ4 內(nèi)切核酸酶，TACI, Tare, TGF-β 1，TGF-β 2，Thrl 17 人白細胞介素 9， 凝血酶，促血小板生成素(thiOmbopoietin)，促血小板生成素衍生物1，促血小板生成素衍生物2，促血小板生成素衍生物3，促血小板生成素衍生物4，促血小板生成素衍生物5，促血小板生成素衍生物6，促血小板生成素衍生物7，胸腺表達的趨化因子(TECK)，促甲狀腺激素(Thyroid stimulating Hormone)，蝶抗凝妝，Tim-1 蛋白，TNF-α 前體,TNF-R, TNF-RII ； TNF p75受體；死亡受體，tPA,轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin),轉(zhuǎn)化生長因子β,肌I丐蛋白肽， 截短的單核細胞趨化蛋白2(6-76)，截短的單核細胞趨化蛋白2 (6-76)，截短的RANTES蛋白(3-68),腫瘤壞死因子,尿酸氧化酶,尿激酶,加壓素(Vasopressin)(神經(jīng)垂體素運載蛋白(Neurophysin II))，VEGFR-3 ;flt_4，VEGF 受體；KDR ；flk-l, VEGF-110, VEGF-121, VEGF-I38,VEGF-I45,VEGF-162,VEGF-165,VEGF-182,VEGF-189,VEGF-206,VEGF-D,VEGF-E ； VEGF-X, von Willebrand因子，野生型單核細胞趨化蛋白2，野生型單核細胞趨化蛋白2， ZTGF-β9 ；
此外，綴合物可包含一種或多種(幾種)化療藥如13_順_視黃酸 (13-cis-Retinoic Acid),2-CdA,2-氯脫氧腺苷(2-Chlorodeoxyadenosine), 5-阿扎胞苷(5-Azacitidine), 5-氟尿卩密唳(5-Fluorouracil), 5-FU, 6-巰基嘌呤(6_Mercaptopurine),6_MP,6_TG,6_ 硫代鳥嘌呤(6-Thioguanine), A, Abraxane, Accutane !放線菌素-D(Actinomycin-D),阿霉素(Adriamycin ) AdniciI , Agvyliivi^ ·, Λ !；i-C'O Π K',阿地白介素(Aldesleukin),阿侖單抗(Alemtuzumab), ALIMTA,阿利維 A 酸(Alitretinoin)， Λ丨k;〗ban-A(:)d 愛克蘭(AlkeiiinW).全反視黃酸(All-transretinoic Acid)，α 干擾素，六甲蜜胺(Altretamine),甲氨蝶呤 (Amethopterin)，氨憐汀(Amifostine)，氨魯米特(Aminoglutethimide)，阿那格雷 (Anagrelide) , Anandron ，阿那曲唑(Anastrozole)，阿糖胞苷(Arabinosylcytosine)， Ara-C, Aranesp ，Aredia , Arimidex , Aromasin Απ^ιιοη , 二氧化二 砷(Asenic Trioxide),天冬酰胺酶(Asparaginase), ATRA, Avastin ,阿扎胞苷(Azacitidine), BCG, BCNU,貝伐單抗(Bevacizumab),貝沙羅汀(Bexarotene), BEXXAR ,比卡魯胺(Bicalutamide), BiCNU，Blenoxane ，博來霉素(Bleomycin), Bortezomib,白消安(Busulfan)，Busuliex^ , C225,亞葉酸隹丐(CalciumLeucovorin)， CanipaUld Campiosaril11喜樹喊-11 (Camptothecin-Il),卡培他濱(Capecitabine), Carac ,卡鉬(Carboplatin)，卡莫司汀(Carmustine), Carmustineffafer,康士德(Casodex )，CC-5013，CCNU，CDDP，CeeNU, Cenbidine 西妥昔單抗(Cetuximab)， 苯丁酸氮芥(Chlorambucil)，順鉬(Cisplatin)，亞葉酸因子(Citrovorum Factor)， 克拉屈濱(Cladribine)，可的松(Cortisone)，Cosmegen , CPT-II,環(huán)磷酰胺 (Cyclophosphamide)， Cytadren⑩，阿糖胞苷(Cytarabine)，阿糖胞苷脂質(zhì)體(Cytarabine Liposomal)，賽德薩(Cytosar)-U ，Cytoxan ，達卡巴曝(Dacarbazine)，Dacogen, 更生霉素(Dactinomycin)，Darbepoetin Alfa，Dasatinib,柔紅霉素(Daunomycin)， 柔紅霉素(Daunorubicin)，鹽酸柔紅霉素(DaunorubicinHydrochloride)，柔紅霉素脂質(zhì)體(Daunorubicin Liposomal)，DaunoXonie:立.,地卡特隆(Decadron)，地西他濱 (Decitabine)，Ddta-Corte 働，EMtaSOW ，地尼白介素-毒素連接物(Denileukin diftitox)，DepoCyt ，地塞米松(Dexamethasone)，醋酸地塞米松(Dexamethasone acetate)，地塞米松憐酸鈉(Dexamethasone SodiumPhosphate)，地塞米松(Dexasone)， 右雷佐生(Dexrazoxane)，DHAD，DIC, Diodex,多西紫杉醇(Docetaxel)，多柔比星(Doxorubicin)，多柔比星脂質(zhì)體(Doxorubicin liposomal)，Droxia ，DTIC, ) i(M)omd I)uralone^\Eligard ，Ellence ，樂沙定(Eloxatin) , Elspar ，Emcyt ，表柔比星(Epirubicin)，阿法依伯汀(Epoetin alfa)， Erbitux ，Erlotinib，歐文氏菌屬 L-天冬酸胺酶(Erwinia L-asparaginase)，雌莫司汀(Estramustine)，氨磷汀(Ethyol)，Etopoplios 1 依托泊苷(Etoposide)，磷酸依托泊苷(Etoposide Phosphate)，Eulexin , Evista ，依西美坦(Exemestane)，法樂通 (Fareston) ，F(xiàn)astodex /Fgmara(R)5非格司亭(Filgrastim)，氟尿苷(Floxuridine)， Iludarali ,氟達拉濱(Fludarabine)，F(xiàn)tuoroplex—，氟尿啼 P定(Fluorouracil)，氟尿啼唳(Fluorouracil)(乳膏)，氟甲睪酮(Fluoxymesterone),氟他胺(Flutamide)，亞葉酸(Folinic Acid)，l.'UDR/R，氟維司群(Fulvestrant), G-CSF, Gefitinib,吉西他濱(Gemcitabine)，吉姆單抗(Gemtuzumab)奧佐米星(ozogamicin)，健擇(Geinzar) ， Gleevec , GHadel Wafer, GM-CSF，戈舍瑞林(Goserelin)，粒細胞集落剌激因子，粒細胞巨噬細胞集落剌激因子，Halotestin ，Herceptin ，地塞米松(Hexadrol)，克瘤靈(Hexalen) ，六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)，HMM,和美新(HyCMTltin) ，輕基服 (Hydrea) ，醋酸氫化可的松(Hydrocort Acetate)⑩，氧化可的松(Hydrocorti sone)， 氫化可的松磷酸鈉(Hydrocortisone Sodium Phosphate)，氫化可的松琥拍酸鈉 (Hydrocortisone Sodium Succinate)，氫化可的松憐酸(HydrocortonePhosphate)，輕服(Hydroxyurea)，替伊莫單抗(Ibritumomab)，替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)， Idamycill 4尹達比星(Idarubicin)，Ifex ，IFN- α，異環(huán)憐酉先胺(Ifosfamide)，IL-11， IL-2，甲橫酸伊馬替尼(Imatinib mesylate)，咪唑羧酸胺(Imidazole Carboxamide)，干擾素alfa，干擾素Alfa-2b(PEG綴合物)，白細胞介素_2，白細胞介素-11，Intron A (干擾素 alfa-2b)，IreSSa⑩，伊立替康(Irinotecan)，異維 A 酸(Isotretinoin)， Kidrolase⑩ LanaC0lt 5 Lapatinib, L-天冬酉先胺酶，LCR, Lenalidomide,來曲唑 (Letrozole)，亞葉酸媽(Leucovorin)，苯丁酸氮芥(Leukeran)，Leukine ，亮丙瑞林 (Leuprolide)，長春新減(Leurocristine), Leustatin ，脂質(zhì)體 Ara_C，Liquid PredKs 洛莫司汀(Lomustine)，L-PAM, L-沙可來新(L-Sarcolysin)，Lupron⑩，Lupron DepoKd:, M, Matulane⑩，Maxidex，氮芥(Mechlorethamine)，鹽酸氮芥(MechlorethamineHydrochloride)，Medralone s 美卓樂(Med ι I) ，梅格施(Megace) ，甲地孕酮(Megestrol)，醋酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)，美法侖(Melphalan),疏嘌呤 (Mercaptopurine),美司鈉(Mesna), Mesnex ,甲氨蝶呤(Methotrexate),甲氨蝶呤鈉(Methotrexate Sodium),甲潑尼龍(Methylprednisolone), Metic.Olten ，絲裂霉素 (Mitomycin)，絲裂霉素 _C (Mitomycin-C)，米托蒽醌(Mitoxantrone), M-Prednisol , MTC，MTX，Μ-ustargen ，氮芥(Mustine)，Mutamycin ,馬利蘭(Myleran) , Mylocel , Mylolarg ,諾維本(Navelbine) ，萘拉濱(Nelarabine), 'Neosar , Neulasta , Neimiega ，優(yōu)保津(Neupogen) ，Nexavar , Nilandron ，尼魯米特(Nilutamide), Nipeni ,氮芥(Nitrogen Mustard), Novaldex ,能滅瘤(Novantrone) ,奧曲肽 (Octreotide)，醋酸奧曲肢(Octreotide acetate) , OflCOSpar 安可平(Oncovin) , Ontak , Onxal , Oprevelkin, Orapred ，Orasone⑩I奧沙利鉬(Oxaliplatin)，紫杉醇(Paclitaxel),蛋白結(jié)合紫杉醇，帕米磷酸(Pamidronate), Panitumumab,Pam'etin. ,伯爾定(ParapliUin)息-Pediapred 8 , PEG 干擾素，培門冬酶(Pegaspargase), PEG 菲格司亭(Pegfilgrastim)，PEG-INTRON , PEG-L-天冬酰胺酶，培美曲塞(PEMETREXED)，噴司他丁(Pentostatin),苯丙氨酸氮芥(Phenylalanine Mustard),丨Maiiriol1H iJiai'ino!-AQ 5 潑尼松龍(Prednisolone)，潑尼松(Prednisone), Prelone ，丙卡巴肼(Procarbazine)， I5ROCRΓ!' , Proleukin ，具有卡莫司汀(Carmustine)植入物的 Prolifeprospan 20, Purinethol ) K 雷洛昔芬(Raloxifene), Revlimid Rheumatrex ，Wtuxan , 利妥昔單抗(Rituximab)，RofeiOn-A (干擾素Alfa-2a), .Rubex ，柔紅霉素鹽酸鹽(Rubidomycinhydrochloride)，善得定(SMrKloslaliis)-R: Sandostatin LAR 3沙格司亭(Sargramostim)，Solll-Corte Solll-Medrol ，Sorafenib，SPRYCEL , STI-571,鏈佐星(Streptozocin)，SU11248，Sun itinib,S UtCllt ，他莫昔芬(Tamoxifen)， Tarceva , Targretin ^ 泰素(Taxol) ，泰索帝(Taxotere) ，Temodai#，替莫唑胺(Temozolomide)，替尼泊苷(Teniposide)，TESPA，沙利度胺(Thalidomide)， Thaloillid ，TheraCys 硫鳥卩票呤(Thioguanine)，Thioguanine Tabloid 3 Thiophosphoamide， Thioplex ’ 塞替派(Thiotepa), TICE , Toposar ,托泊替康(Topotecan),托瑞米芬(Toremifene),托西莫單抗(Tosisumomab),曲妥單抗 (Trastuzumab)，維 A 酸(Tretinoin)，Trexall , Trisenox ，TSPA, TYKERB , VCR, Vectibix TM，Velban ，Velcade ，凡畢士(VePesid) ，Vesanoid ，Viadur , vidaza· ， 長春堿(Vinblastine),硫酸長春堿(Vinblastine Sulfate), Vincasar Pfs ,長春新堿 (Vincristine),長春瑞濱(Vinorelbine),酒石酸長春瑞濱(Vinorelbinetartrate), VLB, VM-26, Vorinostat, VP-16,威猛(Vl丨mon) ,希羅達((Xeloda) ，Zanosar ，Zevalin , Zineeard⑩I諾雷德(Zoladex) ，卩坐來膦酸(Zoledronic acid), Zolinza, Zometa ;放射性藥品如碳-11，碳-14，鉻-51，鈷-57，鈷-58，鉺-169，氟-18，鎵-67，金-198，銦-111， 銦-113m，碘-123，碘-125，碘-131，鐵-59，氪-81m，氮-13，氧-15，磷-32，錸-186，銣-82， 釤-153，硒-75，鍶-89，锝-99m,鉈-201，氚，氙-127，氙-133，釔-90 ;顯像劑如釓，磁鐵礦 / 磁石(magnetite)，錳，锝，1125，1131，P32，T1201，碘帕醇(Iopamidol), PET-FDG0
此類多肽和化學(xué)化合物可稱作診斷模塊，治療模塊或有益模塊。
可將一種或多種治療多肽融合于白蛋白的N端，C端，插入白蛋白結(jié)構(gòu)中的環(huán) (loop)，或其任意組合。其可包含或其可不包含將融合多肽多種組分分開的接頭序列。
涉及白蛋白或其片段的融合的教導(dǎo)在本領(lǐng)域是已知的，且本領(lǐng)域技術(shù)人員會知道此類教導(dǎo)亦可適用于本發(fā)明。WO 2001/79271 A和WO 2003/59934 A亦包含可融合于白蛋白或其片段的治療多肽的實例，且這些實例亦適用于本發(fā)明。
根據(jù)本發(fā)明的融合或綴合多肽的白蛋白衍生物，片段，或其變體部分一般而言與其親本白蛋白的對應(yīng)部分的序列具有至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少81%， 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%,或 94%,更優(yōu)選至少 95%,更優(yōu)選至少96%，更優(yōu)選至少97%，更優(yōu)選至少98%和最優(yōu)選至少99%的序列同一性。
在一個優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的融合或綴合多肽的白蛋白衍生物，片段，或其變體部分一般而言與SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中所示的HSA的對應(yīng)部分的序列具有至少60%，優(yōu)選至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少85%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，更優(yōu)選至少96%，更優(yōu)選至少97%，更優(yōu)選至少98%和最優(yōu)選至少99%的序列同一性。
兩個氨基酸序列間或兩個核苷酸序列間的相關(guān)性由參數(shù)“序列同一性”描述。
就本發(fā)明而言，兩個氨基酸序列之間的同一性程度使用如EMBOSS軟件包 (EMBOSS The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice 等，2000， Trends in Genetics 16:276-277)的Needle程序,優(yōu)選為3. 0. 0版或之后的版本中執(zhí)行的 Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48 443-453)確定。 所用的可選參數(shù)為缺口開放罰分(gap open penalty) 10,缺口延伸罰分(gap extension penalty) 0. 5，和EBL0SUM62 (BL0SUM62的EMBOSS版)取代矩陣。使用標記為“最長同一性” 的Needle輸出(使用-nobrief選項獲得)作為百分比同一'I"生并如下計算
(相同的殘基X100)/(比對長度-比對中缺口總數(shù))。
在描述本發(fā)明的多種衍生物或變體中，為了方便參照，采用下文所述的命名法。在所有情況下，使用通用的IUPAC單字母或三字母氨基酸縮寫。
就本發(fā)明而言，兩個脫氧核糖核苷酸序列之間的序列同一性程度使用如EMBOSS 軟件包(EMBOSS :The European Molecular Biology Open SoftwareSuite, Rice 等，2000, 見上)的Needle程序，優(yōu)選為3. 0. O版或之后的版本中執(zhí)行的Needleman-Wunsch算法 (Needleman和Wunsch，1970，見上)確定。所用的可選參數(shù)為缺口開放罰分10，缺口延伸罰分0. 5，和EDNAFULL (NCBINUC4. 4的EMBOSS版)取代矩陣。使用標記為”最長同一性”的 Needle輸出(使用-nobrief選項獲得)作為百分比同一'I"生并如下計算
(相同的脫氧核糖核苷酸X100)/(比對長度_比對中缺口總數(shù))
就本發(fā)明而言，將公開于SEQ ID N0:31或SEQ ID N0:1中的成熟多肽用于確定在其他白蛋白中對應(yīng)的氨基酸殘基。將其他白蛋白的氨基酸序列與公開于SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I中的成熟多肽進行比對，并基于該比對，使用如EMBOSS包 (EMBOSS:The European Molecular Biology OpenSoftware Suite, Rice 等，2000，Trends Genet. 16:276-277)的 Needle 程序(優(yōu)選版本 3. 0. 0 或更新)中執(zhí)行的 Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch, 1970，J. Mol. Biol. 48:443-453)確定了對應(yīng)于 SEQ ID N0:31 或SEQ ID NO: I所公開的成熟多肽中任何氨基酸殘基的氨基酸位置編號。
在其他白蛋白中鑒定對應(yīng)的氨基酸殘基可通過使用“ClustalW” (Larkin等，2007，Bioinformatics 23:2947-2948)比對多個多肽序列來確認。
當(dāng)其他多肽(或蛋白)從SEQ ID N0:31或SEQ ID NO: I的成熟多肽分歧到傳統(tǒng)的基于序列的比較無法檢測出其關(guān)系的程度時(Lindahl和Elofsson, 2000，J. Mol. Biol. 295:613-615)，可使用其他逐對序列比較算法。在基于序列的搜索中較高的敏感度可使用采用多肽家族的概率表現(xiàn)(probabilistic representation)(序型)來搜索數(shù)據(jù)庫的搜索程序獲得。舉例而言，PSI-BLAST程序通過迭代的(iterative)數(shù)據(jù)庫搜索過程來產(chǎn)生序型，并能夠檢測出較遠的同源物(Atschul等，1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)。 當(dāng)多肽的家族或超家族在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫中具有一個或多個代表時，甚至可達成更高的敏感度。程序如 GenTHREADER(Jones 1999, J. Mol. Biol. 287:797-815;McGuffin 和 Jones, 2003, Bioinformatics 19:874-881)使用來自多個來源(PSI-BLAST、二級結(jié)構(gòu)預(yù) 則(secondary structureprediction)、結(jié)構(gòu) I匕對序型(stuctural alignment profile) 以及溶解勢(solvationpotential))的信息作為向預(yù)測查詢序列(query sequence) 的結(jié)構(gòu)折疊(stuctural fold)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的輸入。類似地，Gough等，2000，J. Mol. Biol. 313:903-919的方法可用于將未知結(jié)構(gòu)的序列在存在于SCOP數(shù)據(jù)庫中的超家族模型內(nèi)進行比對。這些比對繼而能夠用于生成多肽的同源性模型，且上述模型可就準確度使用多種為此目的開發(fā)的工具加以評價。
對于已知結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，可用數(shù)種工具和資源以供找回(retrieve)和生成結(jié)構(gòu)比對。舉例而言，已將SCOP超家族的蛋白質(zhì)進行了結(jié)構(gòu)比對，且這些比對是可獲取并可下載的。兩個或更多蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)可使用多種算法，如距離比對矩陣(distance alignment matrix)(Holm 和 Sander,1998，Proteins 33:88-96)或組合延伸(combinatorial extension) (Shindyalov 和 Bourne, 1998, ProteinEngineering 11:739-747)進行比對， 且這些算法的執(zhí)行可另外用于查詢具有目標結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫，以發(fā)現(xiàn)可能的結(jié)構(gòu)同源物 (例如 Holm 和 Park, 2000, Bioinformatics 16:566-567)。另一種比對程序是 MUSCLE (通過 log-期待的多重序列比較(Multiple sequence comparison by log-expectation, RobertC.Edgar,版本 3. 6, http://www. drive5. com/muscle;Edgar(2004)Nucleic Acids Research32 (5)，1792-97 和 Edgar (2004) BMC Bioinformatics, 5 ⑴113))，其可以以用戶說明(版本3. 6，2005年7月)中所述的缺省設(shè)定使用。比3. 6更遲的MUSCLE版本亦可用于本發(fā)明的任何方面。
在描述本發(fā)明的白蛋白衍生物或變體時，為了參照方便起見，采用了下述的命名法。使用通用的IUPAC單字母縮寫或三字母氨基酸縮寫。
取代。對于氨基酸取代，使用下述命名法初始氨基酸，位置，取代氨基酸。相應(yīng)地， 在226位用丙氨酸取代蘇氨酸命名為“Thr226Ala”或“T226A”。多重突變用加號(“ + ”) 分開，例如，“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”，代表在205和411位分別用精氨酸 (R)取代甘氨酸(G)，以及用苯丙氨酸(F)取代絲氨酸(S)的突變。附圖亦使用(“/”)，例如“E492T/N503D”，這應(yīng)視作可與(“ +，，)互換。
逾失。對于氨基酸缺失，使用了如下命名法初始氨基酸，位置*。相應(yīng)地，在位置195缺失甘氨酸命名為“Glyl95*”或“G195*”。多個缺失由加號(“ + ”)分開，例如 “Glyl95*+Ser411*，，或 “G195*+S411*，，。
通入。對于氨基酸插入，使用了如下的命名法初始氨基酸，位置，初始氨基酸，新插入的氨基酸。因此，在位置195的甘氨酸之后插入賴氨酸命名為“Glyl95GlyLys”或 “G195GK”。多個氨基酸的插入命名為[初始氨基酸，位置，初始氨基酸，新插入的氨基酸 #1，新插入的氨基酸#2 ;等等]。例如，在位置195的甘氨酸之后插入賴氨酸和丙氨酸記為 “Glyl95GlyLysAla” 或 “G195GKA”。
在此情況下，通過在插入的氨基酸殘基前的氨基酸殘基的位置號添加小寫字母而對插入的氨基酸殘基進行編號。因此，在上一例子中序列為
親本變體
權(quán)利要求
1.一種白蛋白衍生物或變體，其片段或包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段的融合多肽，其中所述白蛋白衍生物或變體或其片段包含或由如下組成白蛋白域III或衍生物或其變體，和至少一個其它白蛋白域，片段或衍生物或其變體，其中所述衍生物或變體并非天然存在的白蛋白衍生物或變體。
2.權(quán)利要求I的白蛋白衍生物或變體，其片段或融合多肽，其中所述天然存在的衍生物或變體是來自下述之一的野生型白蛋白人；靈長類，如黑猩猩，大猩猩或恒河猴/獼猴 (macaque);兔;嚙齒類如小鼠，大鼠和倉鼠;牛;馬類如馬或驢;山羊；綿羊；犬；豚鼠；雞和豬。
3.權(quán)利要求I或2的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述白蛋白域III 或衍生物或其變體來源于人血清白蛋白；靈長類血清白蛋白，如黑猩猩血清白蛋白，大猩猩血清白蛋白或恒河猴/獼猴血清白蛋白；兔血清白蛋白；嚙齒類血清白蛋白如小鼠白蛋白， 大鼠血清白蛋白和倉鼠血清白蛋白；牛血清白蛋白；馬類血清白蛋白如馬血清白蛋白或驢血清白蛋白；山羊血清白蛋白；綿羊血清白蛋白；犬血清白蛋白；豚鼠血清白蛋白；雞血清白蛋白和豬血清白蛋白。
4.權(quán)利要求I至3任一項的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述白蛋白域III或衍生物或其變體與SEQ ID NO: 31或SEQID NO: I的域III具有至少80%序列同一性，優(yōu)選至少85%序列同一性，更優(yōu)選至少90%序列同一性，甚至更優(yōu)選至少90%序列同一性和最優(yōu)選至少98%序列同一'丨生。
5.權(quán)利要求4的白蛋白衍生物或變體，其中所述域III或衍生物或其變體與SEQID NO: 31或SEQ ID NO: I的氨基酸381至585具有至少80%序列同一性，優(yōu)選至少85%序列同一性，更優(yōu)選至少90%序列同一性，甚至更優(yōu)選至少90%序列同一性和最優(yōu)選至少98%序列同一I"生。
6.權(quán)利要求I至5任一項的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述至少一種其它白蛋白域，片段或衍生物或其變體選自域I，域II和域III。
7.權(quán)利要求6的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述至少一種其它白蛋白域，片段或衍生物或其變體來源于人血清白蛋白；靈長類血清白蛋白，如黑猩猩血清白蛋白，大猩猩血清白蛋白或恒河猴/獼猴血清白蛋白；嚙齒類血清白蛋白如兔血清白蛋白，小鼠白蛋白和大鼠血清白蛋白；牛血清白蛋白；馬類血清白蛋白；驢血清白蛋白；倉鼠血清白蛋白；山羊血清白蛋白；綿羊血清白蛋白；犬血清白蛋白；豚鼠血清白蛋白；雞血清白蛋白和豬血清白蛋白。
8.權(quán)利要求7的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述白蛋白衍生物或變體由如下組成來源于人血清白蛋白的域I和II和來源于兔血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO:25)，來源于兔血清白蛋白的域I和II和來源于人血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO:26)，來源于綿羊血清白蛋白的域I和II和來源于人血清白蛋白的域III (例如SEQ IDNO:27)，來源于人血清白蛋白的域I和II和來源于小鼠血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO:29)，來源于人血清白蛋白的域I和II和來源于綿羊血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO: 28)，或來源于小鼠血清白蛋白的域I和II和來源于人血清白蛋白的域III (例如SEQ ID NO:30)。
9.權(quán)利要求7的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述至少一種其它白蛋白域，片段或衍生物或其變體與它的親本白蛋白的對應(yīng)域具有至少80%序列同一性，優(yōu)選至少85%序列同一性，更優(yōu)選至少90%序列同一性，甚至更優(yōu)選至少90%序列同一性和最優(yōu)選至少98%序列同一性。
10.權(quán)利要求8的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述至少一種其它白蛋白域，片段或衍生物或其變體與具有SEQ IDN0:31或SEQ ID NO: I的HSA的對應(yīng)域具有至少80%序列同一性，優(yōu)選至少85%序列同一性，更優(yōu)選至少90%序列同一性，甚至更優(yōu)選至少90%序列同一性和最優(yōu)選至少98%序列同一性。
11.前述任一項權(quán)利要求的白蛋白衍生物或變體，其片段或融合多肽，其中所述白蛋白衍生物或變體，其片段或融合多肽包含選自下組的氨基酸序列或由選自下組的氨基酸序列組成(i)由人血清白蛋白域I和人血清白蛋白域II組成的分子(例如SEQ ID NO:20)( )由人血清白蛋白域II和人血清白蛋白域III組成的分子(例如SEQ ID N0:21),(iii)由人血清白蛋白域I和人血清白蛋白域III組成的分子(例如SEQID NO:22),和(iv)由人血清白蛋白域III的兩個拷貝組成的分子(例如SEQID N0:24)。
12.權(quán)利要求I至11任一項的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中至少一個域III在對應(yīng)于SEQ ID NO: 31或SEQ ID NOil(HSA)中選自下組的位置的位置包含一個或多個取代573, 500，550，417，440，464，490，492，493，494，495，496，499，501，503，504，505， 506，510，535，536，537，538，540，541，542，574，575，577，578，579，580，581,582 和 584。
13.權(quán)利要求12的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其中所述在對應(yīng)于SEQ ID NOil(HSA)中的位置的位置的一個或多個取代選自K573Y, W, P，H，F(xiàn)，V，I, Τ, N, S, G, Μ, C，A, E, Q, R, L, D, K500E, G, D, A, S, C, P, H, F, N, ff, T, M, Y, V, Q, L, I, R, Q417A, H440A, H464Q, E492G, D494N, Q, A, E495Q, A, T496A, D494E+Q417H, D494N+T496A, E492G+V493P, P499A, E501A, Q, N503H, K, H510Q, H535Q, K536A, P537A, K538A, K541G, D, D550E, N, E492G+K573P, A,或 E492G/N503H/K573P。
14.前述任一項權(quán)利要求的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其包含一個或多個其它突變，所述突變在分子表面構(gòu)筑一個或多個巰基基團。
15.權(quán)利要求14的白蛋白衍生物或變體，其片段或者包含所述白蛋白衍生物或變體或其片段或由所述白蛋白衍生物或變體或其片段組成的融合多肽，其具有選自對應(yīng)于如下的取代的組的取代SEQ ID N0:31 或SEQ ID NO: I 中的 L585C，D1C，A2C，D562C，A364C，A504C， E505C, T79C, E86C, D129C, D549C, A581C, D121C, E82C, S270C, A578C, L595LC, D1DC, A2AC, D562DC, A364AC, A504AC, E505EC, T79TC, E86EC, D129DC, D549DC, A581AC, A581AC, D121DC, E82EC, S270SC, A579AC, C360*，C316*，C75*，C168*，C558*，C361*，C91*，C124*，C169* 和 C567*。
16.一種綴合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求I至15任一項的白蛋白衍生物或變體或其片段， 和結(jié)合于白蛋白部分的治療性或診斷性或其它有益模塊。
17.一種核酸，其編碼權(quán)利要求I至15任一項的白蛋白衍生物，其片段或包含所述白蛋白衍生物或其片段或由所述白蛋白衍生物或其片段組成的融合多肽，優(yōu)選包含于質(zhì)粒或表達構(gòu)建體中。
18.—種宿主細胞，其包含權(quán)利要求17的核酸。
19.一種組合物，優(yōu)選藥物組合物，其包含權(quán)利要求I至15的白蛋白衍生物，其片段或融合多肽或包含所述白蛋白衍生物或其片段的締合物。
20.前述任一項權(quán)利要求的白蛋白變體或衍生物或其融合物、綴合物、締合物、組合物， 編碼所述變體，衍生物或融合物的核酸或宿主細胞，所述白蛋白變體，衍生物，或其衍生物、 綴合物、締合物或組合物具有(i)與天然HSA和/或包含天然HSA的融合物或綴合物，締合物或組合物相比較長的血漿半壽期，或(ii)與天然HSA和/或包含天然HSA的融合物或綴合物，締合物或組合物相比較短的血漿半壽期。
21.前述任一項權(quán)利要求的白蛋白變體或衍生物，其綴合物，締合物，組合物，編碼前述任一項權(quán)利要求的融合物的核酸或宿主細胞，所述融合物、綴合物、締合物或組合物具有 (i)與包含天然HSA的白蛋白融合物，綴合物，締合物或組合物相比較長的血漿半壽期，或 ( )與包含天然HSA的融合物，綴合物，締合物或組合物相比較短的血漿半壽期。
22.前述任一項權(quán)利要求的白蛋白變體或衍生物的融合物，或其綴合物或締合物或組合物，其中所述融合物或綴合物或締合物包含一個或多個選自如下的模塊(i)4-lBB配體，5-螺旋，人C-C趨化因子，人L105趨化因子，命名為huL105_3.的人 L105趨化因子，由Y-干擾素誘導(dǎo)的單核因子(MIG)，部分CXCR4B蛋白，血小板堿性蛋白 (PBP)，α I-抗胰蛋白酶，ACRP-30同源物;補體成分Clq C，腺樣-表達的趨化因子(ADEC)， aFGF ；FGF-1, AGF, AGF 蛋白，白蛋白，依托泊苷(etoposide),血管他丁(angiostatin), 炭疽疫苗，對腦衰蛋白有特異性的抗體，antistasin,抗TGF β家族抗體，抗凝血酶 III (anti thrombin III), APM-I ;ACRP_30 ；Famoxin,載脂蛋白物種(apo-lipoprotein species),芳基硫酸酯酶B (Arylsulfatase B), b57蛋白，BCMA, β-血小板球蛋白蛋白(β-TG)，bFGF ;FGF2，凝血因子，BMP 加工酶 Furin，BMP-10，BMP-12，BMP-15，BMP-17， BMP-18, BMP-2B, BMP-4，BMP-5，BMP-6，BMP-9，骨形態(tài)形成蛋白-2，降鈣素(calcitonin)， 鈣激活中性蛋白酶-10a，鈣激活中性蛋白酶-10b，鈣激活中性蛋白酶-10c，癌癥疫苗，羧肽酶，C-C 趨化因子，MCP2, CCR5 變體，CCR7, CCR7, CDlla Mab, CD 137受體蛋白，CD20 Mab, CD27, CD27L, CD30, CD30 配體，CD33 免疫毒素，CD40, CD40L, CD52 Mab, Cerebus 蛋白，嗜酸細胞活化趨化因子(Chemokine Eotaxin)，趨化因子hIL_8，趨化因子hMCPl， 趨化因子hMCPla，趨化因子hMCPlb，趨化因子hMCP2，趨化因子hMCP3，趨化因子hSDFlb， 趨化因子MCP-4，趨化因子TECK和TECK變體，趨化因子樣蛋白IL-8M1全長和成熟，趨化因子樣蛋白IL-8M10全長和成熟，趨化因子樣蛋白IL-8M3，趨化因子樣蛋白IL-8M8全長和成熟，趨化因子樣蛋白IL-8M9全長和成熟，趨化因子樣蛋白PF4-414全長和成熟， 趨化因子樣蛋白PF4-426全長和成熟，趨化因子樣蛋白PF4-M2全長和成熟，霍亂疫苗， Chondromodulin樣蛋白，c_kit配體；SCF ;肥大細胞生長因子；MGF ;纖維肉瘤來源的干細胞因子，CNTF及其片段(如CNTFAxl5' (Axokine ))，前或活性形式的凝血因子，膠原，補體 C5 Mab，結(jié)締組織活化蛋白-III，CTAA16. 88 Mab, CTAP-III, CTLA4_Ig，CTLA-8，CXC3, CXC3, CXCR3 ;CXC 趨化因子受體 3，cyanovirin-N，Darb印oetin，命名為 exodus，命名為 huL105_7.，DIL-40, DNA 酶，EDAR, EGF 受體 Mab，ENA-78，內(nèi)皮他丁(Endostatin)，嗜酸細胞活化趨化因子(Eotaxin)，上皮嗜中性粒細胞活化蛋白-78，EPO受體；EP0R，紅細胞生成素(erythropoietin) (EPO)和 EPO 模擬物，優(yōu)托品(Eutropin), Exodus 蛋白，因子 IX,因子 VII，因子 VIII，因子 X 和因子 XIII，F(xiàn)AS 配體抑制蛋白(DcR3)，F(xiàn)asL, FasL, FasL, FGF, FGF-12 ;成纖維細胞生長因子同源因子-1，F(xiàn)GF-15, FGF-16，F(xiàn)GF-18，F(xiàn)GF-3 ；INT-2, FGF-4 ； 白樹霉素(gelonin)，HST-I ;HBGF_4，F(xiàn)GF-5，F(xiàn)GF-6 ;肝素結(jié)合分泌的轉(zhuǎn)化因子_2 Ofeparin binding secreted transformingfactor-2), FGF-8, FGF-9 ;神經(jīng)膠質(zhì)活化因子，纖維蛋白原(fibrinogen), flt-1, flt_3配體,促卵泡激素α亞基,促卵泡激素β亞基,促卵泡素 (Follitropin), Fractalkine,片段,肌纖維蛋白肌I丐蛋白I (Troponin I), FSH，半乳糖苷酶(Galactosidase),半乳凝素-4 (Galectin-4), G-CSF, GDF-1,基因療法,神經(jīng)膠質(zhì)瘤衍生生長因子，胰高血糖素，胰高血糖素樣肽，葡糖腦苷酯酶(Glucocerebrosidase),葡糖氧化酶(glucose oxidase),葡糖苷酶(Glucosidase), Glycodelin-A ;黃體酮相關(guān)子宮內(nèi)膜蛋白，GM-CSF，促性腺素(gonadotropin)，粒細胞趨化蛋白_2 (GCP-2)，粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子，生長激素，生長相關(guān)癌基因a (Growth related oncogene-α ) (GR0-α ), 生長相關(guān)癌基因β (Growthrelated oncogene-β (GRO-β )),生長相關(guān)癌基因Y (Growth related oncogene- y (GROi))，hAPO-4 ；TR0Y, hCG，乙型肝炎表面抗原，乙型肝炎疫苗， HER2 受體 Mab，水蛭素(hirudin), HIV gpl20, HIV gp41，HIV 抑制肽，HIV 抑制肽，HIV 抑制肽，HIV蛋白酶抑制肽，HIV-I蛋白酶抑制劑，HPV疫苗，人6CKine蛋白，人Act-2蛋白， 人脂肪形成抑制因子，人B細胞刺激因子_2受體，人β -趨化因子Η1305 (MCP-2)，人C-C 趨化因子DGWCC，人CC趨化因子ELC蛋白，人CC型趨化因子白細胞介素C，人CCC3蛋白， 人CCF18趨化因子，命名為SLC ( 二級淋巴樣趨化因子)的人CC-型趨化因子蛋白，人趨化因子β -8短形式(short form)，人趨化因子C10，人趨化因子CC-2，人趨化因子CC-3，人趨化因子CCR-2，人趨化因子Ck β -7，人趨化因子ΕΝΑ-78，人趨化因子嗜酸細胞活化趨化因子，人趨化因子GROa，人趨化因子GROa，人趨化因子GROP，人趨化因子HCC-1，人趨化因子HCC-1，人趨化因子1-309，人趨化因子ΙΡ-10，人趨化因子L105_3，人趨化因子L105_7， 人趨化因子MIG，人趨化因子MIG-β蛋白，人趨化因子MIP-I a，人趨化因子MIPl β，人趨化因子MIP-3 a，人趨化因子ΜΙΡ-3 β，人趨化因子PF4，人趨化因子蛋白331D5，人趨化因子蛋白61164，人趨化因子受體CXCR3，人趨化因子SDFl a，人趨化因子SDFlP，人趨化因子 ZSIG-35，人Chrl9Kine蛋白，人CK β-9，人CK β-9，人CX3C 111氨基酸趨化因子，人DNAX 白細胞介素-40，人DVic-IC-C趨化因子，人EDIRF I蛋白序列，人EDIRF II蛋白序列，人嗜曙紅細胞CC型趨化因子嗜酸細胞活化趨化因子，人嗜曙紅細胞-表達的趨化因子(EEC)，人快速顫搐骨豁肌肌韓蛋白C (Human fast twitch skeletal muscle troponin C),人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白I，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白亞基C，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白亞基 I蛋白，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白亞基T，人快速顫搐骨骼肌肌鈣蛋白T，人胎兒脾臟表達的趨化因子，F(xiàn)SEC，人GM-CSF受體，人gro-α趨化因子，人gro-β趨化因子，人gro-γ趨化因子，人IL-16蛋白，人IL-1RD10蛋白序列，人IL-1RD9，人IL-5受體α鏈，人IL-6受體，人IL-8受體蛋白hIL8RA，人IL-8受體蛋白hIL8RB，人IL-9受體蛋白，人IL-9受體蛋白變體#3，人IL-9受體蛋白變體片段，人IL-9受體蛋白變體片段#3，人白細胞介素I δ，人白細胞介素10，人白細胞介素10，人白細胞介素18，人白細胞介素18衍生物，人白細胞介素-1β前體,人白細胞介素-1β前體，人白細胞介素-I受體輔助蛋白，人白細胞介素-I受體拮抗劑β，人白細胞介素-I型-3受體，人白細胞介素-10 (前體)，人白細胞介素-10 (前體)，人白細胞介素-11受體，人白細胞介素-1240kD亞基,人白細胞介素-12 β -I受體,人白細胞介素_12β -2受體，人白細胞介素_12ρ35蛋白，人白細胞介素_12ρ40蛋白，人白細胞介素-12受體,人白細胞介素-13 α受體,人白細胞介素-13 β受體,人白細胞介素_15， 來自克隆Pl的人白細胞介素-15受體，人白細胞介素-17受體,人白細胞介素-18蛋白 (IL-18)，人白細胞介素_3，人白細胞介素-3受體，人白細胞介素_3變體，人白細胞介素_4 受體，人白細胞介素_5，人白細胞介素_6，人白細胞介素-7，人白細胞介素-7，人白細胞介素-8 (IL-8)，人胞內(nèi)IL-I受體拮抗劑，人ΙΡ-10和HIV-1 gpl20超變區(qū)融合蛋白，人IP-10 和人Muc-I核心表位(VNT)融合多肽，人肝和活化調(diào)節(jié)趨化因子(LARC)，人Lkn-I全長和成熟蛋白，人乳腺相關(guān)趨化因子(MACK)蛋白全長和成熟，人成熟趨化因子Cki3-7，人成熟 gro-a，用于治療敗血病的人成熟gro-Y多肽，人MCP-3和人Muc-I核心表位(VNT)融合蛋白，人MI10蛋白，人MIIA蛋白，人單核細胞化學(xué)引誘物因子hMCP-Ι，人單核細胞化學(xué)引誘物因子hMCP-3,人單核細胞趨化前蛋白(MCPP)序列,人神經(jīng)趨化因子(neurotactin)趨化因子樣域，人非-ELRCXC趨化因子Hl74，人非-ELR CXC趨化因子IP10，人非-ELR CXC趨化因子Mig，人PAI-I突變體，具有IL-16活性的人蛋白，具有IL-16活性的人蛋白，人二級淋巴樣趨化因子(SLC)，人SISD蛋白，人STCP-1，人基質(zhì)細胞衍生的趨化因子，SDF-1，人T 細胞混合淋巴細胞反應(yīng)表達的趨化因子(TMEC)，人胸腺和活化調(diào)節(jié)細胞因子(TARC)，人胸腺表達的，人TNF- α，人TNF- α，人TNF- β (LT- α )，人類型CC趨化因子嗜酸細胞活化趨化因子3蛋白序列，人類型II白細胞介素-I受體，人野生型白細胞介素_4(hIL-4)蛋白，人 ZCHEM0-8蛋白，人源化抗VEGF抗體，及其片段，人源化抗VEGF抗體，及其片段，透明質(zhì)酸酶 (Hyaluronidase), ICE IOkD 亞基，ICE 20kD 亞基，ICE 22kD 亞基，艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(Iduronate-2-sulfatase)，艾杜糖苷酸酶(Iduronidase)，IL-1 α，IL-1 β，IL-1 抑制劑 (IL-Ii)，IL-I 成熟，IL-10 受體，IL-11，IL-11，IL_12p40 亞基，IL-13，IL-14，IL-15，IL-15 受體，IL-17, IL-17受體，11-17受體，11-17受體，IL-19, IL-Ii片段，ILl-受體拮抗劑， IL-21 (TIF)，含IL-3的融合多肽，IL-3突變體蛋白，IL-3變體，IL-3變體，IL_4，IL-4突變蛋白，IL-4突變蛋白Y124G，IL-4突變蛋白Y124X，IL-4突變蛋白，11-5受體，IL-6，11-6 受體，IL-7受體克隆，IL-8受體，IL-9成熟蛋白變體(Metll7型)，免疫球蛋白或基于免疫球蛋白的分子，或任一者的片段(例如 Small Modular ImmunoPharmaceutical ( “SMIP”) 或dAb，F(xiàn)ab’片段，F(xiàn)(ab’)2，scAb，scFv或scFv片段)，包括但不限于纖溶酶原，流感疫苗， 抑制素(Inhibin) α，抑制素β，胰島素，胰島素樣生長因子，整聯(lián)蛋白Mab，間-α胰蛋白酶抑制劑，間-α胰蛋白酶抑制劑，干擾素Y-誘導(dǎo)蛋白(ΙΡ-10)，干擾素(如干擾素α種和亞種，干擾素β種和亞種，干擾素Y種和亞種)，干擾素(如干擾素α種和亞種，干擾素β種和亞種，干擾素Y種和亞種)，白細胞介素6，白細胞介素8(IL-8)受體，白細胞介素8受體B,白細胞介素-I α，白細胞介素-2受體相關(guān)蛋白ρ43,白細胞介素_3，白細胞介素-4突變蛋白，白細胞介素_8(IL-8)蛋白，白細胞介素_9，白細胞介素-9(IL-9)成熟蛋白 (Thrll7型)，白細胞介素(如IL10，IL11和IL2)，白細胞介素(如IL10，ILll和IL2)，日本腦炎疫苗，Kalikrein抑制劑,角質(zhì)細胞生長因子,Kunitz域蛋白(如抑肽酶(aprotinin), 淀粉狀前體蛋白和WO 03/066824中所述那些，具有或不具有白蛋白融合)，Kunitz域蛋白 (如抑肽酶(aprotinin)，淀粉狀蛋白前體蛋白和WO 03/066824中所述那些，具有或不具有白蛋白融合)，LACI，乳鐵蛋白(Iactoferrin)，潛在的TGF-β結(jié)合蛋白II，來普汀/瘦素 (Ieptin)，肝表達的趨化因子-I (LVEC-I)，肝表達的趨化因子-2 (LVEC-2)，LT-α，LT-β， 黃體化激素，萊姆病疫苗，淋巴細胞趨化因子(Lymphotactin)，巨噬細胞衍生的趨化因子類似物MDC (η+1)，巨噬細胞衍生的趨化因子類似物MDC-eyfy，巨噬細胞衍生的趨化因子類似物MDC-yl，巨噬細胞衍生的趨化因子，MDC,巨噬細胞衍生的趨化因子(MDC)，Maspin ;蛋白酶抑制劑5，MCP-I受體，MCP-la, MCP-lb, MCP-3，MCP-4受體，M-CSF，黑素瘤抑制蛋白，膜結(jié)合蛋白，Metll7人白細胞介素9，ΜΙΡ-3α，ΜΙΡ-3 β，MIP-Y，MIRAP，修飾的Rantes，單克隆抗體，MP52，突變白細胞介素6 S176R，肌纖維收縮蛋白肌鈣蛋白I，利鈉肽(Natriuretic Peptide),神經(jīng)生長因子-β，神經(jīng)生長因子_β 2,神經(jīng)菌毛素(Neuropilin)-I,神經(jīng)菌毛素_2，神經(jīng)趨化因子，神經(jīng)營養(yǎng)因子_3，神經(jīng)營養(yǎng)因子-4，神經(jīng)營養(yǎng)因子_4a，神經(jīng)營養(yǎng)因子_4b，神經(jīng)營養(yǎng)因子-4c，神經(jīng)營養(yǎng)因子-4d，嗜中性粒細胞活化肽-2 (NAP-2) ,N0G0-66受體，NOGO-A, NOGO-B, N0G0-C，命名為PTEC的新β -趨化因子，N-端修飾趨化因子GroHEK/ hSDF-Ι α，N-端修飾趨化因子GroHEK/hSDF-Ι β，N-端修飾趨化因子met-hSDF-Ι α，N-端修飾趨化因子 met-hSDF-Ιβ，0PGL，成骨蛋白-I ;0Ρ_1 ;ΒΜΡ_7，成骨蛋白-2，0X40 ;ACT_4， 0X40L，催產(chǎn)素(神經(jīng)垂體素運載蛋白I)，甲狀旁腺素，Patched, Patched-2，PDGF-D，百日咳類毒素(Pertussistoxoid)，垂體表達的趨化因子(PGEC)，胎盤生長因子，胎盤生長因子_2，纖溶酶原活化物抑制劑-I ;PAI-1，纖溶酶原活化物抑制劑-2 ;PAI-2，纖溶酶原活化物抑制劑_2 ；PAI-2，血小板衍生的生長因子，血小板衍生的生長因子Bv-sis，血小板衍生的生長因子前體A，血小板衍生的生長因子前體B，血小板Mab，血小板衍生的內(nèi)皮細胞生長因子(H)-ECGF)，血小板衍生的生長因子A鏈，血小板衍生的生長因子B鏈，用于治療敗血病的多肽，前原載脂蛋白“米蘭”變體(Preproapolipoprotein “miIano” variant),前原載脂蛋白“巴黎”變體，前凝血酶(pre-thrombin)，靈長類CC趨化因子"ILINCK"，靈長類CXC趨化因子〃IBICK 〃，胰島素原，促乳素(Prolactin)，促乳素2，prosaptide，蛋白酶抑制肽，蛋白C，蛋白S，凝血酶原，尿激酶原，RANTES, RANTES 8-68, RANTES 9-68, RANTES肽， RANTES受體,重組白細胞介素-16,抵抗素(Resistin),局限曲菌素(restrictocin),逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑，蓖麻毒蛋白(ricin),輪狀病毒疫苗，RSV Mab,阜草素(saporin), 八疊球菌(sarcin)，分泌和跨膜多肽，分泌和跨膜多肽，血清膽堿酯酶，血清蛋白(如凝血因子)，可溶性BMP受體激酶蛋白-3，可溶性VEGF受體，干細胞抑制因子，葡萄球菌疫苗， 基質(zhì)衍生的因子-I α，基質(zhì)衍生的因子-I β，物質(zhì)P (速激肽)，Τ1249肽，Τ20肽，Τ4內(nèi)切核酸酶，TACI, Tare, TGF-β 1，TGF-β 2，Thrll7人白細胞介素9，凝血酶，促血小板生成素 (thrombopoietin)，促血小板生成素衍生物1，促血小板生成素衍生物2，促血小板生成素衍生物3，促血小板生成素衍生物4，促血小板生成素衍生物5，促血小板生成素衍生物6，促血小板生成素衍生物7,胸腺表達的趨化因子(TECK),促甲狀腺激素(Thyroid stimulating Hormone)，蜱抗凝肽，Tim-I 蛋白，TNF-α 前體，TNF-R, TNF-RII ；TNF p75 受體；死亡受體， tPA,轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin),轉(zhuǎn)化生長因子β ,肌I丐蛋白肽,截短的單核細胞趨化蛋白 2(6-76)，截短的單核細胞趨化蛋白2 (6-76)，截短的RANTES蛋白(3_68)，腫瘤壞死因子， 尿酸氧化酶，尿激酶，加壓素(Vasopressin)(神經(jīng)垂體素運載蛋白II), VEGF R-3 VEGF 受體；KDR ；flk-l, VEGF-110, VEGF-121, VEGF-138, VEGF-145, VEGF-162, VEGF-165, VEGF-182, VEGF-189, VEGF-206，VEGF-D, VEGF-E ；VEGF-X, von Willebrand 因子，野生型單核細胞趨化蛋白2，野生型單核細胞趨化蛋白2，ZTGF-β 9 ；(ii)化療藥如13_ 順-視黃酸(13-cis-Retinoic Acid), 2_CdA, 2-氯脫氧腺苷(2-Chlorodeoxyadenosine),5_ 阿扎胞苷(5-Azacitidine),5_ 氟尿卩密 P定 (5-Fluorouracil), 5-FU, 6-疏基嘌呤(6_Mercaptopurine), 6-MP, 6-TG, 6-硫代鳥嘌呤(6-Thioguanine)，A, Abraxane, Acc.utane ，放線菌素 _D (Actinomycin-D)，阿霉素 (AdriamyciiT!-!')- Aiinicii^i, Agryiin^i, Ah-Cort電、阿地白介素(Aldesleukin),阿侖單抗 (Alemtuzumab),ALIMTA,阿利維 A 酸(Alitretinoin)，愛克蘭(Alkenui.叫, 全反視黃酸(All-transretinoic Acid), α干擾素，六甲蜜胺(Altretamine),甲氨蝶呤(Amethopterin),氨憐汀(Amifostine),氨魯米特(Aminoglutethimide),阿那格雷 (Anagrelide) , Anandron ，阿那曲唑(Anastrozole),阿糖胞苷(Arabinosylcytosine)， Ara-c, Aranesp ，Aredia Arimidex ，Aromasin > Arranon ，三氧化二 砷(Arsenic Trioxide)，天冬酰胺酶(Asparaginase)，ATRA, Avastin ,阿扎胞苷(Azacitidine), BCG, BCNU,貝伐單抗(Bevacizumab),貝沙羅汀(Bexarotene), BEXXAR⑩，比卡魯胺(Bicalutamide), BiCNU,博來霉素(Bleomycin),Bortezomib,白消安(Busulfan), BusuIfbxH C225,亞葉酸隹丐(Calcium Leucovorin), Campaill , C'ainpiOSarj_C:’喜樹喊-Il (Camptothecin-11)，卡培他濱(Capecitabine)， Carac ,卡鉬(Carboplatin)，卡莫司汀(Carmustine)，Carmustine Wafer,康士德 (Casodex^·), CC-5013, CCNU, CDDP，CeeNU, Cenibiiiine^,西妥昔單抗(Cetuximab)， 苯丁酸氮芥(Chlorambucil)，順鉬(Cisplatin)，亞葉酸因子(Citrovorum Factor)， 克拉屈濱(Cladribine),可的松(Cortisone), Cosmcgcivli - CPT-II,環(huán)憐酸胺 (Cyclophosphamide), Cytadien.+ ，阿糖胞苷(Cytarabine)，阿糖胞苷脂質(zhì)體(Cytarabine Liposomal)，賽德薩(C ytosar)-!丨 C ytoxan:-^;n 達卡巴曝(Dacarbazine)，Dacogen, 更生霉素(Dactinomycin)，Darbepoetin Alfa，Dasatinib,柔紅霉素(Daunomycin)， 柔紅霉素(Daunorubicin)，鹽酸柔紅霉素(DaunorubicinHydrochloride)，柔紅霉素脂質(zhì)體(Daunorubicin Liposomal)，DaunoXome ，地卡特隆(Decadron)，地西他濱 (Decitabine)，Delta-Cortef 5 DdtoSOne ，地尼白介素-毒素連接物(Denileukin diftitox)，DepoCyt ，地塞米松(Dexamethasone)，醋酸地塞米松(Dexamethasone acetate)，地塞米松憐酸鈉(Dexamethasone SodiumPhosphate)，地塞米松(Dexasone)， 右雷佐生(Dexrazoxane)，DHAD, DIC, Diodex,多西紫杉醇(Docetaxel)，:Doxii:K，多柔比星(Doxorubicin)，多柔比星脂質(zhì)體(Doxorubicin liposomal)，Droxia ，DTIC， DTIC-Dome , Duralone , Efildex , Eligard , Ellence ，樂沙定(Eloxatin) , Elspar $ Emcyt 3 表柔比星(Epirubicin)，阿法依伯汀(Epoetin alfa)， Erbitux ，Erlotinib，歐文氏菌屬 L-天冬酸胺酶(Erwinia L-asparaginase)，雌莫司汀(Estramustine)，氨憐汀(Ethyol)，Etopoplios ，依托泊苷(Etoposide)，憐酸依托泊苷(Etoposide Phosphate)，Eulexifl ，Evista ,依西美坦(Exemestane)，法樂通 (FarestOfl) , Faslodex ,Femara ，非格司亭(Filgrastim)，氟尿苷(Floxuridine)， Hudara⑩，氟達拉濱(Fludarabine)，F(xiàn)luoroplex ，氟尿啼 P定(Fluorouracil)，氟尿啼 P定(Fluorouracil)(乳膏)，氟甲睪酮(Fluoxymesterone)，氟他胺(Flutamide)，亞葉酸(Folinic Acid)，HDRt氟維司群(Fulvestrant), G-C SF, Gefitinib,吉西他濱(Gemcitabine)，吉姆單抗(Gemtuzumab)奧佐米星(ozogamicin)，健擇(Geilizar) ， Gleevec m, GliadelGM-CSF，戈舍瑞林(Goserelin)，粒細胞集落剌激因子，粒細胞巨噬細胞集落剌激因子，Halotestin 5 Hereeptin ，地塞米松(Hexadrol)，克瘤靈(HeMlen)(I)3 六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)，HMM,和美新(Hycamtill) 5 輕基服 (Hydrea) ，醋酸氫化可的松(Hydrocort Acetate) ，氫化可的松(Hydrocortisone)， 氫化可的松磷酸鈉(Hydrocortisone Sodium Phosphate)，氫化可的松琥拍酸鈉 (Hydrocortisone Sodium Succinate)，氫化可的松憐酸(HydrocortonePhosphate)，輕服(Hydroxyurea)，替伊莫單抗(Ibritumomab)，替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)， Idamycine^伊達比星(Idarubicin)，Ifex 3 IFN- α，異環(huán)磷酰胺(Ifosfamide)，IL-11， IL-2，甲橫酸伊馬替尼(Imatinib mesylate)，咪唑羧酸胺(Imidazole Carboxamide)，干擾素alfa,干擾素Alfa-2b (PEG綴合物)，白細胞介素_2，白細胞介素-11，Intron A (干擾素 alfa-2b)，Iressa 伊立替康(Irinotecan)，異維 A 酸(Isotretinoin)， Kidroiasc^ l.aimori私 Lapatinib, L-天冬酰胺酶，LCR, Lenalidomide,來曲唑 (Letrozole)，亞葉酸媽(Leucovorin)，苯丁酸氮芥(Leukeran)，Leukine ，亮丙瑞林 (Leuprolide)，長春新減(Leurocristine)，Leustatin ，脂質(zhì)體 Ara_C，Liquid Pred 3 洛莫司汀(Lomustine)，L-PAM, L-沙可來新(L-Sarcolysin)，Lupron 5 Lupron Depot ， M，M a TH lane:H i Max i dex,氮芥(Mechlorethamine)，鹽酸氮芥(Mechlorethamine Hydrochloride)，Medraloiie .美卓樂(Medrol)·，梅格施(Megaee) 5 甲地孕酮 (Megestrol)，醋酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)，美法侖(Melphalan)，疏卩票呤 (Mercaptopurine)，美司鈉(Mesna)，Mesnex ，甲氨蝶呤(Methotrexate)，甲氨蝶呤鈉(Methotrexate Sodium)，甲潑尼龍(Methylprednisolone)，絲裂霉素 (Mitomycin)，絲裂霉素-C (Mitomycin-C)，米托蒽醌(Mitoxantrone)，M-Prednisol , MTC，MTX，Mustargen⑩，氮芥(Mustine)，Mutamycin⑩，馬利蘭(Myleran)⑩,Mylocel , Mylotarg ，諾維本(Navdbine) ’ 萘拉濱(Nelarabine)，Neosar ^ Neulasta , Neumega 5優(yōu)保津《Neupogen) ，Nexavar , Nilandron ，尼魯米特(Nilutamide)， Nipent ，氮芥(Nitrogen Mustard)，Novaldex ，能滅瘤(Novantrone) i 奧曲肽 (Octreotide)，醋酸奧曲月太(Octreotide acetate)，OllCOSpar ，安可平(Oncovin) , Ontak 5 Onxal ，Oprevelkin，Orapred_, 0_Olie 5奧沙利鉬(Oxaliplatin)，紫杉醇(Paclitaxel)，蛋白結(jié)合紫杉醇，帕米磷酸(Pamidronate)，Panitumumab,panretin^；1 J白爾定(Paraplatin)⑩，Pediapred ,PEG 干擾素，培門冬酶(Pegaspargase)，PEG 菲格司亭(Pegfilgrastim)，PEG-INTRON ，PEG-L-天冬酰胺酶，培美曲塞(PEMETREXED)，噴司他丁(Pentostatin)，苯丙氨酸氮芥(Phenylalanine Mustard), !iIatinoI^'- Phitinol-AQ 潑尼松龍(Prednisolone)，潑尼松(Prednisone)，Preloiie ，丙卡巴肼(Procarbazine), PROCRin 丨h(huán).olcukinK、具有卡莫司汀(Carmustine)植入物的 Prolifeprospan 20， Purinethol ，R，雷洛昔芬(Raloxifene)，Revlimid . Rheumatrex , Ritiixan , 利妥昔單抗(Rituximab)，Roferon-A (干擾素Alfa_2a)，Rubex ，柔紅霉素鹽酸鹽(Rubidomycinhydrochloride)，善得定(Sandostatin) 3 Sandostatin LAR , 沙格司亭(Sargramostim)，Sok卜Corte働，Solll-Medrol 5 Sorafenib, SPRYCEL , STI-571，鏈佐星(Streptozocin)，SU11248，Sunitinib, Slltent 5他莫昔芬(Tamoxifen)， Tarceva , Targrctin 5 泰素(Taxol) ，泰索帝(Taxotere) ，Temodar ,替莫唑胺(Temozolomide)，替尼泊苷(Teniposide)，TESPA，沙利度胺(Thalidomide)， Thalomid ，TheraCys ，硫鳥卩票呤(Thioguanine)，Thioguanine Tabloid , Thiophosphoamide， Thioplex⑩，塞替派(Thiotepa)，TICE , Toposar ，托泊替康(Topotecan)，托瑞米芬(Toremifene)，托西莫單抗(Tositumomab)，曲妥單抗 (Trastuzumab),維 A酸(Tretinoin)，Trexall , Tris€I10X TSPA, TYKERB ，VCR， Vectibix ，Vdban⑩，Veleade⑩，凡畢士(VePeski) ，Vesanoid , Viadur , Vidaa , 長春堿(Vinblastine)，硫酸長春堿(Vinblastine Sulfate)，Vincasar PfggJ5長春新堿 (Vincristine)，長春瑞濱(Vinorelbine)，酒石酸長春瑞濱(Vinorelbinetartrate), VLB, vm-26, Vorinostat, VP-16，威猛(Vumoii) ，希羅達((Xdoda) ^Zanosar 5Zevalin , Zinecard ，諾雷德(Zoladex) ，P坐來膦酸(Zoledronic acid) , Zolinza, Zometa ;放射性藥品如碳-11，碳-14，鉻-51，鈷-57，鈷-58，鉺-169，氟-18，鎵-67，金-198，銦-111， 銦-113m，碘-123，碘-125，碘-131，鐵-59，氪-81m，氮-13，氧-15，磷-32，錸-186，銣-82， 衫-153,砸-75,銀-89,得-99m, 它-201,氣,氣 _127，氣 _133，宇乙-90 ;和 / 或(iii)顯像劑如禮，磁鐵礦/磁石(magnetite),猛,锝，1125, 1131, P32, T1201,碘帕醇 (Iopamidol), PET-FDG0
全文摘要
本發(fā)明公開了包含或組成為域III和至少一種其它域的白蛋白衍生物，其中所述衍生物或變體并非天然存在的白蛋白衍生物或變體。所述衍生物可用于綴合物和融合物多肽。
文檔編號C07K14/765GK102939304SQ201180028537
公開日2013年2月20日 申請日期2011年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日
發(fā)明者A·普魯姆里奇, D·斯里普, I·桑德利, J·T·安德森, J·卡梅隆, L·伊萬斯, G·S·阿思瓦爾, E·阿倫, E·P·弗里斯 申請人:諾維信生物制藥丹麥公司