專利名稱：復(fù)合藥物組合物以及對與呼吸系統(tǒng)疾病或病癥相關(guān)的疾病或病癥進行治療的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含(a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、(b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及(C)活性強化形式的抗嗎啡抗體；以及對急性和慢性呼吸道紊亂或病癥以及咳嗽癥狀進行治療的方法。
背景技術(shù)：
幾個世紀(jì)以來，人類呼吸道感染和咳嗽造成了廣泛的痛苦。通常認為這些感染由微生物如細菌和病毒引起，所述微生物可通過空氣傳播或通過直接接觸傳染。感染早期階段的特征通常為鼻竇充血，常伴有過多的粘液產(chǎn)生。隨后，所述感染可向下擴散至喉嚨、支氣管和肺。普通感冒(人類最常見的病痛之一，也稱為非變應(yīng)性鼻炎、病毒性上呼吸道感染、病毒性URI)是一種接觸傳染性傳染病,該病長期以來一直都是花費時間和金錢的痛苦根源，也是就醫(yī)的主要原因。雖然已提出并使用了許多療法來治療和/或預(yù)防上呼吸道感染及其癥狀，但是這些療法的效力和副作用仍有許多待改進之處。抗生素(其由執(zhí)業(yè)醫(yī)師以令人不安的頻率開出)在理論上和實踐中都是無效的，因為普通感冒是由病毒而非細菌引起(GonzalesR 等，“Antibiotic prescribing for adults with colds, upper respiratory tractinfections, and bronchitis by ambulatory care physicians，，，JAMA, Sep.17,1997, 278(11)901-4 ；Mainous A.G.等,“Antibiotics and upper respiratory infection:do somefolks think there i s a cure for the common cold ，，，J Fam Pract, 1996 年 4 月，42，357-61)。非處方感冒藥總是通過抗組胺之類試劑的作用(抗組胺類藥物，例如苯海拉明)、或者通過對自主神經(jīng)系統(tǒng)的各種作用(如麻黃堿)來局部地抑制癥狀?？人孕袨槭且环N防御反射。然而，持續(xù)咳嗽是不正常的，它常常是由于URTI。當(dāng)咳嗽變得過度和/或嚴重時，它能顯著地影響個人的生活質(zhì)量。已經(jīng)證實的是，非處方咳嗽抑制劑(supressants)和祛痰藥(expectorants)被證明無效。此外，已經(jīng)證實的是,這些藥物中的許多特別是在兒童中造成了不良副作用。據(jù)美國胸內(nèi)科醫(yī)師學(xué)會稱，唯一被證明有利的處方咳嗽藥是可待因。然而，據(jù)記載，處方可待因衍生產(chǎn)品只在造成副作用(如胃腸便秘、鎮(zhèn)靜以及呼吸抑制)的劑量下才能抑制咳嗽。發(fā)現(xiàn)幾乎沒有藥品用來解決咳嗽。因此，需要有效預(yù)防和/或治療上呼吸道感染(包括普通感冒及其癥狀)的藥劑。本發(fā)明涉及此類藥劑以及對上呼吸系統(tǒng)疾病或病癥及其癥狀進行預(yù)防和/或治療的方法。本專利申請的發(fā)明人Dr.0leg 1.Epshtein已發(fā)現(xiàn)了經(jīng)順勢療法技術(shù)強化的極度稀釋形式(或極低形式)抗體(活性強化形式，activated-potentiated form)的治療效果。美國專利號7，582，294公開了通過給予抗前列腺特異性抗原(PSA)的、順勢療法活性形式的抗體來治療良性前列腺增生癥(Benign Prostatic Hyperplasia)或前列腺炎(prostatitis)的藥劑。激肽為借助于其如下能力參與炎癥過程的低分子量肽:激活內(nèi)皮細胞，并因此引起血管舒張、血管通透性增加、一氧化氮產(chǎn)生以及花生四烯酸的動員。緩激肽最具有這一組血管活性物質(zhì)的特征。Kaplan AP, Joseph K, Silverberg Μ., Pathways for bradykininformation and inflammatory disease, J Allergy Clin Tmmunol.,2002 Feb 109 (2):195-209。當(dāng)炎癥、創(chuàng)傷、燒傷、休克、變態(tài)反應(yīng)和特定心血管疾病發(fā)生時，緩激肽被釋放。一旦釋放，緩激肽啟動或增強來自白細胞的介質(zhì)的分泌，所述分泌激發(fā)感覺傳入神經(jīng)末梢。緩激肽受體在咳嗽的誘發(fā)中起重要作用。緩激肽具有血管活性性質(zhì)，并通過影響上呼吸道的粘膜層來誘發(fā)咳嗽。Epstein等，Ultralow doses of antibodiesto inflammatory mediators:Antitussive properties of antibodies tobradykinin, histamine and serotonin, Bulletin of Experimental Biology andMedicine,增刊I, 2003,第146-149頁。已知極低劑量的抗緩激肽抗體(Epstein等,2003)。組胺牽涉到很多醫(yī)學(xué)病癥，包括炎癥、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、特應(yīng)性皮炎以及慢性阻塞性肺病(C0PD)。組胺通過影響特異性的組胺受體來產(chǎn)生作用，所述組胺受體主要有四種類型:H1、H2、H3和H4。特定的醫(yī)學(xué)病癥涉及特定的組胺受體亞型。Hl受體拮抗劑(抗組胺劑)廣泛用于治療變態(tài)反應(yīng)，所述變態(tài)反應(yīng)包括變應(yīng)性鼻炎(花粉癥)、蕁麻疹、昆蟲叮咬和藥物超敏反應(yīng)。常常將H2受體拮抗劑用作胃酸分泌抑制劑。它們在治療消化性潰瘍中用作首選藥物、在治療卓-艾氏綜合征(Zollinger-Ellison syndrome)中用作二線藥物、以及用于對回流性食管炎進行治療。H3可能對前庭輸入(vestibular inputs)進行調(diào)節(jié)(Chavez2005)。H4受體可能參與了炎癥作用。已證明極低劑量的抗組胺抗體具有抗?jié)兓钚裕琄rylova等,Antiulcer activityof ultralow doses of antibodies to histamine under experimental conditions,BullExp Biol Med 2003 Jan,135 Suppl 7:80_2。嗎啡是一種主要用于減輕疼痛的強效麻醉性鎮(zhèn)痛藥。嗎啡還用于心力衰竭性呼吸困難的管理、肺水腫和咳嗽、作為鎮(zhèn)靜劑、以及用于腹瀉控制。嗎啡最重要的作用是鎮(zhèn)痛、催目民、呼吸抑制、中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制劑作用、以及作為局部麻醉劑。嗎啡通過注射有效地給藥，但是在藥學(xué)和醫(yī)療領(lǐng)域中，似乎缺乏藥學(xué)上可接受的物質(zhì)手段(material means)用于將嗎啡作為鎮(zhèn)痛劑、麻醉輔助劑、鎮(zhèn)咳藥進行口服給予以及用于非特異性止瀉治療。已知極低劑量的抗嗎啡抗體。Beregovoi等，Effect of antibodies to morphinein ultralow doses on induction of long-term potentiation in hippocampal slicesfrom rats with chronic morphine dependence,Bull Exp Biol Med.2003 Jan;135 Suppl7:26-8。存在著對用于呼吸系統(tǒng)紊亂和咳嗽的新療法的持續(xù)需要。


圖1示出了夜間咳嗽強度的變化，所述夜間咳嗽強度基于咳嗽強度量表進行評價，變化以各組平均分計(％)。圖2示出了日間咳嗽強度的變化， 所述日間咳嗽強度基于咳嗽強度量表進行評價，變化以各組平均分計(％)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種組合物以及對上呼吸道病癥或紊亂及其相關(guān)癥狀進行治療和預(yù)防的方法。在一個方面，本發(fā)明提供了復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。在一個變型中，本發(fā)明提供了復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體；其中，抗體針對的是整個緩激肽或其片段。在一個變型中，本發(fā)明提供了復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體；其中，抗體針對的是整個組胺或其片段。在一個變型中，本發(fā)明這一方面的復(fù)合藥物組合物包含活性強化形式的抗緩激肽抗體，所述抗體處于浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液(homeopathic dilutions)的混合物形式。所述活性強化形式的抗組胺抗體處于可隨后浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。所述活性強化形式的抗嗎啡抗體處于可隨后浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200 )順勢療法稀釋液的混合物形式。在一個變型中，本發(fā)明這一方面的復(fù)合藥物組合物包含活性強化形式的抗組胺抗體，所述抗體處于浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。所述活性強化形式的抗緩激肽抗體處于可隨后浸潰至固態(tài)載體上的(C12.C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。所述活性強化形式的抗嗎啡抗體處于可隨后浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。在一個變型中，本發(fā)明這一方面的復(fù)合藥物組合物包含活性強化形式的抗嗎啡抗體，所述抗體處于浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。所述活性強化形式的抗緩激肽抗體處于可隨后浸潰至固態(tài)載體上的(C12.C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。所述活性強化形式的抗組胺抗體處于可隨后浸潰至固態(tài)載體上的(C12、C30和C50)或(C12、C30和C200)順勢療法稀釋液的混合物形式。活性強化形式的抗緩激肽抗體優(yōu)選為單克隆抗體、多克隆抗體或天然抗體，更優(yōu)選為多克隆抗體。在本發(fā)明這一方面的一個變型中，所述活性強化形式的抗緩激肽抗體通過連續(xù)的百倍稀釋(successive centesimal dilution)、且每次稀釋時均伴以振蕩而制備。活性強化形式的抗組胺抗體優(yōu)選為單克隆抗體、多克隆抗體或天然抗體，更優(yōu)選為多克隆抗體。在本發(fā)明這一方面的一個變型中，所述活性強化形式的抗組胺抗體通過連續(xù)的百倍稀釋、且每次稀釋時均伴以振蕩而制備?；钚詮娀问降目箚岱瓤贵w優(yōu)選為單克隆抗體、多克隆抗體或天然抗體，更優(yōu)選為多克隆抗體。在本發(fā)明這一方面的一個變型中，所述活性強化形式的抗嗎啡抗體通過連續(xù)的百倍稀釋、且每次稀釋時均伴以振蕩而制備。在另一方面，本發(fā)明提供了對呼吸系統(tǒng)疾病或病癥進行治療的方法，所述方法包括向有需要的患者給予:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。優(yōu)選地，以復(fù)合的藥物組合物形式給予活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體、以及活性強化形式的抗嗎啡抗體。在另一方面，本發(fā)明提供了通過給予復(fù)合藥物組合物對患有呼吸道紊亂或病癥的患者進行治療的方法，其中，所述組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。在一個變型中，所述呼吸道紊亂或病癥為病毒性呼吸道感染。在另一變型中，所述呼吸道紊亂或病癥為急性上呼吸道紊亂。在另一變型中，所述呼吸道紊亂或病癥為慢性上呼吸道紊亂。在另一方面，本發(fā)明提供了通過給予復(fù)合藥物組合物對患有上呼吸道紊亂或病癥的癥狀的患者進行治療的方法，其中，所述組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。在一個變型中，所述呼吸道紊亂或病癥的癥狀為咳嗽。在本發(fā)明的一個變型中，提供了以每日1-4次給予如下各劑型:1-2單位劑型的活性強化形式的抗緩激肽抗體、1-2單位劑型的活性強化形式的抗組胺抗體以及1-2單位劑型的活性強化形式的抗嗎啡抗體。所述1-2單位劑型的各活性強化形式抗體優(yōu)選以每日2次進行給予。在本發(fā)明這一方面的優(yōu)選 變型中，提供了以復(fù)合組合物的1-2單位劑型、各劑型以每日1-4次進行給予，所述復(fù)合組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。優(yōu)選1-2單位劑型以每日2次進行給予。在本發(fā)明這一方面的另一優(yōu)選的變型中，所述復(fù)合物以I單位劑型、優(yōu)選以每日2次進行給予，所述劑型包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。
具體實施例方式參考所附的權(quán)利要求書對本發(fā)明進行限定?？紤]到權(quán)利要求書，下述術(shù)語匯編提供了有關(guān)定義。本文所使用的術(shù)語“抗體”意味著特異性地結(jié)合至另一分子的特定空間和極性結(jié)構(gòu)、并因此被定義為與另一分子的特定空間和極性結(jié)構(gòu)互補的免疫球蛋白。權(quán)利要求書中所列舉的抗體可包括完整的免疫球蛋白或其片段，可為天然抗體、多克隆抗體或單克隆抗體，并可包括多個類及同種型，例如IgA, IgD, IgE, IgGU IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。免疫球蛋白的片段可包括Fab、Fv和F(ab’)2以及Fab’等。單數(shù)“抗體(antibody)”包括復(fù)數(shù)“抗體(antibodies)”。相對于本文所列舉的抗體，術(shù)語“活性強化形式”或“強化形式”分別用于表示任意的抗體初始溶液的順勢療法強化產(chǎn)物?！绊槃莜煼◤娀北硎纠庙槃莜煼ǖ姆椒▽τ嘘P(guān)物質(zhì)的初始溶液賦予順勢療法效力(potency)。盡管不限于此，但是“順勢療法強化”可包括例如結(jié)合外部處理、尤其是(機械)振蕩的重復(fù)的連續(xù)稀釋。換句話說，根據(jù)順勢療法技術(shù)，對抗體的初始溶液進行連續(xù)的重復(fù)稀釋并對每次獲得的溶液進行多次豎直振蕩。抗體處于溶劑(優(yōu)選水或水-乙醇混合物)中的初始溶液的優(yōu)選濃度范圍為約0.5mg/ml至約5.0mg/mlo制備各組分(即抗體溶液)的優(yōu)選過程為:使用抗體初級基質(zhì)溶液(primary matrixsolution)(原始ET劑,mother tincture)分別被稀釋 10012、1003° 和 1002°° 倍的 3 種水稀釋液或水-醇稀釋液的混合物，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液(C12、C30和C200);或者使用抗體初級基質(zhì)溶液分別被稀釋10012、1003°和1005°倍的3種水稀釋液或水-醇稀釋液的混合物，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液(C12、C30和C50)。在美國專利號7，572，441和7，582，294中描述了順勢療法強化的實例，以引用的方式將其內(nèi)容整體并入本文并用于所述目的。同時，術(shù)語“活性強化形式”用在權(quán)利要求書中，術(shù)語“極低劑量”用在實施例中。術(shù)語“極低劑量”在通過研究和使用順勢療法稀釋和強化形式的物質(zhì)而產(chǎn)生的領(lǐng)域中成為行業(yè)術(shù)語。術(shù)語“極低劑量”意味著完全支持并與權(quán)利要求書中所使用的術(shù)語“活性強化”形式基本上同義。換句話說，當(dāng)存在三個因素時，抗體處于“活性強化”或“強化”形式。首先，“活性強化”形式的抗體為順勢療法領(lǐng)域廣泛接受的制備方法的產(chǎn)品。其次，“活性強化”形式的抗體必須具備通過現(xiàn)代藥物學(xué)廣泛接受的方法確定的生物活性。第三，“活性強化”形式的抗體所表現(xiàn)出的生物活性不能由順勢療法方法終產(chǎn)物中的分子形式抗體的存在加以解釋。例如，活性強化形式的抗體可通過使處于分子形式的初始獨立抗體經(jīng)受伴以外部作用(如機械振蕩)的連續(xù)多重稀釋而制備。濃度降低過程中的外部處理還可通過例如暴露至超聲、電磁或其它物理因素來完成。V.Schwabe, “Homeopathic medicines”, M., 1967,美國專利號7，229，648和4，311，897 (以引用的方式將其內(nèi)容整體并入本文并用于所述目的)描述了順勢療法領(lǐng)域中廣泛接受的順勢療法強化方法。這一過程使得初始分子形式抗體的分子濃度均勻降低。重復(fù)這一過程直至獲得期望的順勢療法效力。對于單獨的抗體，可通過將中間稀釋液在期望的藥理學(xué)模型中進行生物測試來確定所需的順勢療法效力。盡管不限于此，但是“順勢療法強化”可包括例如與外部處理、尤其是豎直(機械)振蕩相結(jié)合的重復(fù)的連續(xù)稀釋。換句話說，根據(jù)順勢療法技術(shù)，對抗體的初始溶液進行連續(xù)的重復(fù)稀釋并對每次獲得的溶液 進行多次豎直振蕩?？贵w處于溶劑(優(yōu)選水或水-乙醇混合物)中的初始溶液的優(yōu)選濃度范圍為約0.5mg/ml至約5.0mg/ml。制備各組分(即抗體溶液)的優(yōu)選過程為:使用抗體初級基質(zhì)溶液(原始酊劑)分別被稀釋10012、1003°和1002°°倍的3種水稀釋液或水-醇稀釋液的混合物，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液C12、C30和C200 ;或者使用抗體初級基質(zhì)溶液分別被稀釋10012、IOO30和1005°倍的3種水稀釋液或水-醇稀釋液的混合物，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液C12、C30和C50。例如在美國專利號7，229，648和4，311，897中，也提供了如何獲得期望效力的實例，以引用方式將其并入本文用于所述目的。在下文將更加詳細地描述適用于本文所述的“活性強化”形式抗體的過程。關(guān)于用順勢療法對人類受試者進行治療已有許多爭議。雖然本發(fā)明依靠已接受的順勢療法方法來獲得“活性強化”形式的抗體，但是其并不僅僅依賴于在人類受試者中進行順勢療法來證明其活性。本申請的發(fā)明人出乎預(yù)料地發(fā)現(xiàn)、并在已接受的藥理學(xué)模型中充分證明，由起始分子形式的抗體進行連續(xù)多次稀釋而最終得到的溶劑具有明確的活性，且與痕量分子形式抗體在目標(biāo)稀釋液中的存在無關(guān)。將本文所提供的“活性強化”形式的抗體在廣泛接受的藥理學(xué)活性模型中(在適當(dāng)?shù)捏w外實驗中或于合適的動物模型中在體內(nèi))測試其生物活性。下文進一步提供的實驗提供了在此類模型中的生物活性的證據(jù)。人類臨床研究也提供了如下證據(jù):在動物模型中觀察到的活性被很好地轉(zhuǎn)換至人類治療。人類研究還提供了如下證據(jù):本文所述的“活性強化”形式可用于對在醫(yī)學(xué)科學(xué)中作為病理癥狀而廣泛接受的具體人類疾病或紊亂進行治療。同樣，所要求保護的“活性強化”形式的抗體僅涵蓋溶液或固體制劑，所述溶液或固體制劑的生物活性不能由初始、起始溶液中余留的分子形式抗體的存在進行解釋。換句話說，雖然“活性強化”形式的抗體可包含痕量的初始分子形式抗體也在考慮之列，但是由于連續(xù)稀釋后余留的分子形式抗體的濃度極低，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員不能以任何程度的合理性將在已接受的藥理學(xué)模型中觀察到的生物活性歸因于余留的分子形式抗體。雖然本發(fā)明并不受任何具體理論的限制，但是本發(fā)明的“活性強化”形式抗體的生物活性并不歸因于初始分子形式的抗體。優(yōu)選“活性強化”形式的抗體處于液體形式或固體形式，其中，初始分子形式抗體的濃度低于所接受的分析技術(shù)(如毛細管電泳和高效液相色譜)的檢測限。特別優(yōu)選“活性強化”形式的抗體處于液體形式或固體形式，其中，初始分子形式抗體的濃度低于阿伏伽德羅常數(shù)。在分子形式治療物質(zhì)的藥物學(xué)中，通常制作劑量-響應(yīng)曲線，在該曲線中，以藥理學(xué)響應(yīng)水平對給予受試者或在體外進行測試的活性藥物的濃度作圖。產(chǎn)生任何可檢測響應(yīng)的藥物最低水平被稱為閾劑量(threshold dose)。特別在考慮之列并優(yōu)選的是，“活性強化”形式的抗體以低于所給定生物學(xué)模型中的分子形式抗體的閾劑量的濃度包含分子抗體(如果有的話)。術(shù)語“咳嗽強度量表”是指由患者對日間和夜間咳嗽嚴重程度進行主觀評價的問卷，其由下列以0-5分進行評定的問題組成:曰間O分-不咳嗽I分-一次短期咳嗽

2分-多于兩次短期咳嗽3分-不干擾慣?；顒拥念l繁咳嗽4分-干擾慣常活動的頻繁咳嗽5分-一天中多數(shù)時間困擾于咳嗽夜間O分-不咳嗽I分-只在醒來時咳嗽/只在即將入睡時咳嗽2分-由于咳嗽而醒來一次或較早醒來3分-由于咳嗽而頻繁醒來4分-一晚多數(shù)時間頻繁咳嗽5分-困擾于咳嗽本發(fā)明提供了復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。如上文所述，所述復(fù)合物的各單獨組分由于其各自單獨的醫(yī)藥用途而為大家所熟知。然而，本專利申請的發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，給予所述復(fù)合物顯著地減輕了咳嗽癥狀，并有助于對上呼吸道紊亂或病癥進行治療。根據(jù)本發(fā)明這一方面的復(fù)合藥物組合物可處于液態(tài)或固態(tài)形式。藥物組合物中所含的各活性強化形式抗體由初始分子形式的抗體通過順勢療法領(lǐng)域所接受的方法制備。起始抗體可為根據(jù)已知方法制備的單克隆抗體或多克隆抗體，所述已知方法例如 Immunotechniques, G.Frimel, M., “Meditsyna”，1987,第 9-33 頁;“Hum.Antibodies.Monoclonal and recombinant antibodies, 30years after，，，Laffly E., Sodoyer R.著，2005，Vol.14.，N 1-2.，第33-55頁中所述，以引用的方式將其內(nèi)容并入本文。單克隆抗體可通過如雜交瘤技術(shù)獲得。所述方法的初始步驟包括基于已在多克隆抗血清制備過程中開發(fā)出的原則進行免疫。工作的進一步步驟包括制備出產(chǎn)生具有相同特異性的抗體克隆的雜交細胞。其各自的分離使用與多克隆抗血清制備的情況中相同的方法進行。多克隆抗體可通過動物的主動免疫獲得。為了這一目的，例如使合適的動物(如兔)接受適當(dāng)抗原(緩激肽、組胺或嗎啡)的一系列注射。動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，以已知方法從動物中進行收集。這一過程使得能夠制備富含單特異性抗體的血清。如果需要的話，包含抗體的血清例如可通過使用親和色譜、鹽沉淀分級分離或離子交換色譜進行純化?？蓪⑺玫降慕?jīng)純化的、富含抗體的血清用作制備活性強化形式抗體的起始材料。所得到的處于溶劑(優(yōu)選水或水-乙醇混合物)中的初始抗體溶液的優(yōu)選濃度范圍為約0.5mg/ml至約5.0mg/ml。制備本發(fā)明所述復(fù)合藥物的各組分的優(yōu)選過程為:使用抗體初級基質(zhì)溶液分別被稀釋10012、IOO30和1005°倍的3種水-醇稀釋液的混合物，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液C12、C30和C50 ;或者使用抗體初級基質(zhì)溶液分別被稀釋10012、1003°和1002°°倍的3種水-醇稀釋液的混合物，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液C12、C30和C200。為制備固體劑型，將固態(tài)載體通過順勢療法方法所獲得的期望稀釋 液進行處理。為獲得本發(fā)明復(fù)合物的固體單位劑型，用各稀釋液對載體物質(zhì)進行浸潰。為制備期望的復(fù)合劑型，兩種浸潰順序都是適合的。在優(yōu)選的實施方式中，用于包含本發(fā)明所述藥物組合物的活性強化形式制劑的起始材料是針對相應(yīng)抗原(即，緩激肽、組胺或嗎啡)的動物產(chǎn)多克隆抗體。為獲得活性強化形式的抗緩激肽多克隆抗體，可將期望的抗原作為免疫原注射入實驗動物、優(yōu)選兔中。特別在考慮之列的是，將以下序列的緩激肽作為合適的抗原:SEQ.1D.N0.1Arg Pro Pro Gly Phe Ser Pro Phe ArgI59制備起始抗緩激肽多克隆抗體的示例性過程可描述如下。在采血前7-9天，將期望抗原經(jīng)1-3次靜脈注射至兔，以增高兔血流中的多克隆抗體水平。一旦免疫后，采集血樣以測試抗體水平。通常，可溶性抗原免疫反應(yīng)在抗原第一次注射后40-60天內(nèi)達到最高水平。第一個免疫周期結(jié)束后，兔具有30天的康復(fù)期，之后經(jīng)另外的1-3次靜脈注射進行再免疫。為獲得包含期望抗體的抗血清,從兔中收集免疫后的兔血液并置于50ml離心管中。用木質(zhì)藥匙將管壁上所形成的產(chǎn)物凝塊移除，將棒置于管中心的凝塊中。然后將血液放置于冷卻器中于約40°C的溫度下過夜。第二天，將藥匙上的凝塊移除，將剩余液體在13000轉(zhuǎn)/分下離心lOmin。上清液體為目標(biāo)抗血清。所獲得的抗血清通常為黃色。向抗血清中加入20wt%的NaN3至最終濃度為0.02%并在_20°C的溫度下于冷凍狀態(tài)貯存至使用，或者不加入NaN3而在-70°C的溫度下貯存至使用。為了從抗血清中分離目標(biāo)抗緩激肽抗體，下述固相吸附順序很適合:將IOml兔抗血清用0.15M的NaCl稀釋2倍，之后加入6.26g Na2SO4,混合并在4°C下孵育12-16小時。將沉淀物經(jīng)離心移除，在IOml磷酸鹽緩沖液中稀釋并使用相同的緩沖液在環(huán)境溫度下透析過夜。移除沉淀物后，將溶液加樣至用磷酸鹽緩沖液平衡后的DEAE-纖維素柱。通過在280nm處對洗脫液的光密度進行測量來確定抗體餾分。使用親和色譜法，通過將所獲得的抗緩激肽抗體加至色譜介質(zhì)的不溶性基質(zhì)上、并隨后用濃的鹽溶液洗脫，對所分離出的粗抗體進行純化。將所得到的緩沖溶液用作順勢療法稀釋方法的起始溶液，所述順勢療法稀釋方法用來制備活性強化形式的抗體。抗原純化的抗緩激肽多克隆兔抗體的初始基質(zhì)溶液的優(yōu)選濃度為 0.5-5.0mg/ml,優(yōu)選 2.0-3.0mg/ml?？墒褂妙愃朴谏鲜鲇糜诰徏る牡姆椒▽W(xué)，并將與KLH綴合的嗎啡半琥珀酸鹽/酯用作免疫原來獲得抗嗎啡多克隆抗體?？墒褂蒙鲜龇椒▽W(xué)、并使用佐劑和商業(yè)上制造的組胺二鹽酸鹽，來獲得抗組胺(其為生物胺，化學(xué)式為C5H9N3的4-(2-氨基乙基)-咪唑或β -咪唑基乙胺)多克隆抗體?；钚詮娀问降膹?fù)合物各組分可由初始溶液經(jīng)順勢療法強化來制備，優(yōu)選使用通過連續(xù)稀釋來成比例降低濃度的如下方法:將I份的各在先溶液(preceding solution)(由初始溶液開始)連續(xù)稀釋于9份(十倍稀釋)、或連續(xù)稀釋于99份(百倍稀釋)、或連續(xù)稀釋于999份(千倍稀釋)的中性溶劑中，用濃度范圍為約0.5mg/ml至約5.0mg/ml的處于溶齊U(優(yōu)選水或水-乙醇混合物)中的初始抗體溶液伴以外部作用來起始。所述外部作用優(yōu)選包括每次稀釋時的多次豎直振 蕩(稀釋增效法，dynamization)。優(yōu)選將單獨的容器用于后續(xù)各次稀釋直至所需效力水平或稀釋系數(shù)。這一方法在順勢療法領(lǐng)域中被廣泛接受。參見例如 V.Schwabe,“Homeopathic medicines，，,Μ.,1967,第 14-29 頁，以引用的方式將其并入本文用于所述目的。例如，為了制備第12百倍稀釋液(表示為C12)，將I份濃度為3.0mg/ml的抗緩激肽抗體的初始基質(zhì)溶液稀釋于99份中性水溶劑或水-醇溶劑(優(yōu)選15%乙醇)中，并隨后進行多次(10次以上)豎直振蕩以制成第I百倍稀釋液(表示為Cl)。第2百倍稀釋液(C2)由第I百倍稀釋液Cl制備。將這一過程重復(fù)11次，從而制得第12百倍稀釋液C12。因此，第12百倍稀釋液C12表示通過將I份濃度為3.0mg/ml的抗緩激肽抗體的初始基質(zhì)溶液在處于不同容器內(nèi)的99份中性溶劑中連續(xù)稀釋12次所獲得的溶液，相當(dāng)于百倍順勢療法稀釋液C12。以相應(yīng)的稀釋系數(shù)進行類似過程，獲得C30、C50和C200稀釋液?？蓪⒅虚g稀釋液在期望的生物模型中進行測試以檢測活性。用于本發(fā)明復(fù)合物中的優(yōu)選的兩種活性強化形式抗體為C12、C30和C50稀釋液的混合物或C12、C30和C200稀釋液的混合物。當(dāng)將活性物質(zhì)的多種順勢療法稀釋液(主要為百倍稀釋液)的混合物用作生物活性液體組分時，組合物的各組分(如，C12、C30、C50、C200)分別根據(jù)上述過程制備，直至獲得倒數(shù)第二份稀釋液(例如，分別直至C11、C29和C199)，然后根據(jù)混合物組成將I份的各組分加入一個容器中，并與所需量的溶劑(如，用97份以進行百倍稀釋)進行混合。
可將活性物質(zhì)作為多種順勢療法稀釋液、例如十倍和/或百倍稀釋液(D20、C30、ClOO或C12、C30、C50或C12、C30、C200等)的混合物來使用，其效力通過在合適的生物模型、例如本文實施例所述的模型中對稀釋液進行測試，從而以實驗的方式確定。在強化和濃度降低的過程中，可將豎直振蕩替代為外部暴露至超聲、電磁場、或順勢療法領(lǐng)域中接受的任何類似的外部作用過程。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選可處于液體或固體單位劑型的形式。藥物組合物優(yōu)選的液體形式為混合物，優(yōu)選活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體以及活性強化形式的抗嗎啡抗體處于1:1:1比例的混合物。優(yōu)選的液態(tài)載體為水或水-乙醇混合物。優(yōu)選處于固體單位劑型的藥物組合物由藥學(xué)上可接受的載體的顆粒制備，所述顆粒預(yù)先用活性強化形式抗體的水稀釋液或水-醇稀釋液飽和。固體劑型可為藥學(xué)領(lǐng)域中已知的任何劑型，包括片劑、膠囊、錠劑及其它。作為非活性藥物成分，可使用葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉、異麥芽糖、異麥芽酮糖醇及制藥中使用的其它單糖、寡糖和多糖，還可使用上述非活性藥物成分與其它藥學(xué)上可接受的賦形劑的工藝混合物，所述賦形劑如異麥芽酮糖醇、交聯(lián)聚維酮、甜蜜素(sodium cyclamate)、糖精鈉、無水檸檬酸等，包括潤滑劑、崩解劑、粘結(jié)劑和著色劑。優(yōu)選的載體為乳糖和異麥芽酮糖醇。藥物劑型可進一步包含標(biāo)準(zhǔn)藥物賦形劑，例如微晶纖維素、硬脂酸鎂和檸檬酸。優(yōu)選處于固體單位劑型的藥物組合物由藥學(xué)上可接受的載體的顆粒制備，所述顆粒預(yù)先用如下抗體的水稀釋液或水-醇稀釋液飽和:活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體以及活性強化形式的抗嗎啡抗體。優(yōu)選的載體為異麥芽酮糖醇。藥物劑型可進一步包含標(biāo)準(zhǔn)藥物賦形劑，例如微晶纖維素、硬脂酸鎂和交聯(lián)聚維酮。制備固體單位劑型的實施例如下所述。為制備固體口服劑型，將異麥芽酮糖醇的顆粒用活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體以及活性強化形式的抗嗎啡抗體的水溶液或水-醇溶液、以Ikg抗體溶液對5kg或IOkg載體(1:5至1:10)的比例進行浸潰。為有效浸潰，使異麥芽酮糖醇顆粒在沸騰床設(shè)備(如，fflittlin GmbH的“ Hiitt I in Pilotlab”)中的流化床中接受飽和灌洗(saturation irrigation),隨后經(jīng)由加熱的空氣流在低于40°C的溫度下進行干燥。將用活性強化形式抗體飽和的估計量的干燥顆粒(9.5-98重量份)置于混合器內(nèi)，并與2-88重量份的“非飽和”純異麥芽酮糖醇(用于在不降低治療功效的情況下，降低成本、簡化和加速工藝方法的目的)、0.5-0.7重量份的甜蜜素(sodium cyclamate),0.1-1.5重量份的硬脂酸鎂、0.05-0.07重量份的精糖鈉和1-1.5重量份的檸檬酸進行混合。將所獲得的片狀物質(zhì)進行均勻混合，并通過直接干壓成型(如，在Korsch-XL 400壓片機中)進行壓片，從而形成150-500mg、優(yōu)選250mg的圓丸。壓片后，獲得250mg的丸劑，所述丸劑用活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體和活性強化形式的抗嗎啡抗體的復(fù)合物的水-醇溶液飽和(3.0-6.0mg/丸)。用于浸潰載體的復(fù)合物各組分均處于C12、C30和C50百倍順勢療法稀釋液的混合物的形式、或C12、C30和C200百倍順勢療法稀釋液的混合物的形式。在另一變型中，為制備固體口服劑型，將乳糖的100-300 Pm顆粒用活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體以及活性強化形式的抗嗎啡抗體的水溶液或水-醇溶液、以Ikg抗 體溶液對5kg或IOkg乳糖(1:5至1:10)的比例進行浸潰。為有效浸潰，使乳糖顆粒在沸騰床設(shè)備(如，HUttlin GmbH的“Hiittlin PilotlabO中的流化床中接受飽和灌洗，隨后經(jīng)由加熱的空氣流在低于40°C的溫度下進行干燥。將用活性強化形式抗體飽和的估計量的干燥顆粒(10-34重量份)置于混合器內(nèi)，并與25-45重量份的“非飽和”純?nèi)樘?用于在不降低治療功效的情況下，降低成本、簡化和加速工藝方法的目的)、以及0.1-1重量份的硬脂酸鎂和3-10重量份的微晶纖維素一起進行混合。將所獲得的片狀物質(zhì)進行均勻混合，并通過直接干壓成型(如，在Korsch-XL 400壓片機中)進行壓片，從而形成150-500mg、優(yōu)選300mg的圓丸。壓片后，獲得300mg的丸劑，所述丸劑用活性強化形式的抗緩激肽抗體、活性強化形式的抗組胺抗體以及活性強化形式的抗嗎啡抗體的復(fù)合物的水-醇溶液飽和(3.0-6.0mg/丸)。用于浸潰載體的復(fù)合物各組分均處于C12、C30和C50百倍順勢療法稀釋液的混合物的形式，或C12、C30和C200百倍順勢療法稀釋液的混合物的形式。盡管本發(fā)明并不受任何具體理論限制，但是認為，本文所述的活性強化形式抗體并不包含足夠具有歸因于此類分子形式的生物活性的量的分子形式抗體。本發(fā)明復(fù)合藥物(復(fù)合藥物組合物)的生物活性在所附的實施例中得以充分說明。在一個實施方式中，本發(fā)明提供了通過給予復(fù)合藥物組合物對患有呼吸道紊亂或病癥的患者進行治療的方法，其中，所述組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。在優(yōu)選的實施方式中，所述呼吸道紊亂或病癥為病毒性呼吸道感染。在另一優(yōu)選的實施方式中，所述呼吸道紊亂或病癥為急性上呼吸道紊亂。在優(yōu)選的實施方式中，所述呼吸道紊亂或病癥為慢性上呼吸道紊亂。在另一實施方式中，本發(fā)明提供了通過給予復(fù)合藥物組合物對患有上呼吸道紊亂或病癥的癥狀的患者進行治療的方法，其中，所述組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的 抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。在優(yōu)選的實施方式中，所述呼吸道紊亂或病癥的癥狀為咳嗽。為了治療目的，本發(fā)明復(fù)合物優(yōu)選每日給藥1-4次，優(yōu)選每日給藥2次，每次給藥包括1-2單位復(fù)合劑型。參考所附的非限制性實施例對本發(fā)明進行進一步的說明。實施例實施例1將30只重350_400g的雄性豚鼠用于實驗。通過使用霧化器在5分鐘內(nèi)吸入30 μ M的辣椒素來誘發(fā)咳嗽。在15分鐘內(nèi)對咳嗽發(fā)作次數(shù)進行計數(shù)。誘發(fā)兩次咳嗽:一次在給予藥物前(基線)，第二次在給藥后。向?qū)φ战M給予蒸餾水(120yL/豚鼠)。向第二組給予極低劑量的抗嗎啡抗體(40 μ L/豚鼠)。向第三組給予極低劑量的抗緩激肽抗體(ULDB)、極低劑量的抗組胺肽抗體(ULDH)以及極低劑量的抗嗎啡抗體(ULDM)的復(fù)合物(120 μ L/豚鼠)。以120分鐘的間隔經(jīng)口(口服滴劑)給藥3次，最后一次是在辣椒素誘發(fā)咳嗽前15分鐘。該研究表明，復(fù)方復(fù)合藥物ULDB+ULDH+ULDM比起單獨的ULDM表現(xiàn)出更顯著的鎮(zhèn)咳作用。所述藥物分別使咳嗽抑制了 55.2%和21.5% (ρ〈0.05)(參見表I)。表1:研究藥物對咳嗽發(fā)作次數(shù)的作用，M±m(xù)
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗緩激肽抗體具有 SEQ ID NO:1。
3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗緩激肽抗體處于浸潰至固態(tài)載體上的C12、C30及C50順勢療法稀釋液的混合物形式，并且所述活性強化形式的抗組胺抗體和所述活性強化形式的抗嗎啡抗體處于浸潰至所述固態(tài)載體上的C12、C30及C50順勢療法稀釋液的混合物形式。
4.如權(quán)利要求3所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述載體用所述稀釋液的混合物進行浸潰。
5.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗緩激肽抗體為單克隆抗體、多克隆抗體或天然抗體。
6.如權(quán)利要求5所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗緩激肽抗體為多克隆抗體。
7.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗組胺抗體為單克隆抗體、多克隆抗體或天然抗體。
8.如權(quán)利要求7所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗組胺抗體為多克隆抗體。
9.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗嗎啡抗體為單克隆抗體、多克隆抗體或天然抗體。
10.如權(quán)利要求9所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式的抗嗎啡抗體為多克隆抗體。
11.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合藥物組合物，其中，所述活性強化形式抗體通過連續(xù)的百倍稀釋、且每次稀釋時均伴以振蕩而制備。
12.—種對呼吸系統(tǒng)疾病或病癥進行治療的方法，所述方法包括向有需要的患者基本上同時給予:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述活性強化形式的抗體以復(fù)合藥物組合物的形式進行給予。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述呼吸系統(tǒng)疾病或病癥為急性疾病或病癥。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述呼吸系統(tǒng)疾病或病癥為慢性疾病或病癥。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述呼吸系統(tǒng)疾病或病癥為呼吸系統(tǒng)感染。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述呼吸系統(tǒng)感染為病毒性呼吸系統(tǒng)感染。
18.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述復(fù)合藥物組合物以1-2單位劑型進行給予，各劑型每天給予1-4次。
19.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述復(fù)合藥物組合物以1-2單位劑型進行給予，各劑型每天給予2次。
20.一種對患有上呼吸道紊亂或病癥的癥狀的患者進行治療的方法，所述方法包括向有需要的患者給予包含如下物質(zhì)的復(fù)合藥物組合物:a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及C)活性強化形式的抗嗎啡抗體。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述呼吸道紊亂或病癥的癥狀為咳嗽。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中，通過咳嗽強度量表進行測量，咳嗽減輕。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述復(fù)合藥物組合物以1-2單位劑型進行給予，各劑型每天給予1-4次。
24.如權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述復(fù)合藥物組合物以1-2單位劑型進行給予，各劑型每天給予2次。
25.一種用于對患有呼吸系統(tǒng)疾病或病癥的患者進行治療的藥物組合物，所述組合物通過如下步驟獲得:提供a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體，各抗體根據(jù)順勢療法技術(shù)通過對每次獲得的溶液進行連續(xù)重復(fù)稀釋和多次振蕩而制備；然后通過混合將強化后的溶液進行復(fù)合，或者用所述復(fù)合后的溶液或用各 強化后的溶液單獨浸潰載體物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及復(fù)合藥物組合物，所述復(fù)合藥物組合物包含a)活性強化形式的抗緩激肽抗體、b)活性強化形式的抗組胺抗體、以及c)活性強化形式的抗嗎啡抗體；還涉及通過給予所述復(fù)合組合物對上呼吸道病癥或紊亂及其相關(guān)癥狀進行治療和預(yù)防的方法。
文檔編號C07K16/44GK103200964SQ201180045571
公開日2013年7月10日 申請日期2011年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月21日
發(fā)明者奧列格·伊里奇·愛潑斯坦 申請人:奧列格·伊里奇·愛潑斯坦