用于治療腫瘤的組合物和方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了治療方法，其特征在于嵌合的人/小鼠抗體用于治療腫瘤的用途。
【專利說明】用于治療腫瘤的組合物和方法
[0001]交叉引用相關(guān)申請
本申請要求2010年9月27日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?1/386，764的利益，該申請的完整內(nèi)容通過引用并入本文。
[0002]發(fā)明背景
單克隆抗體(mAb) 4C5是鼠抗體，其特異性識別熱休克蛋白90 (HSP90)的α同種型，并且在較小程度上特異性識別β同種型。最近，HSP90已經(jīng)變?yōu)橛糜诎┌Y治療的非常有吸引力的藥物靶點(diǎn)，因?yàn)槠浯蟛糠挚蛻舻鞍?client proteins)被認(rèn)為是獲得惡性表型中的關(guān)鍵分子。此外，新出現(xiàn)的數(shù)據(jù)表明在癌細(xì)胞表面存在這種分子伴侶，提示在癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中牽涉范圍廣泛的細(xì)胞外陪伴(extracellular chaperoning)現(xiàn)象。
[0003]最初顯示mAb 4C5通過影響肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重排和形成遷移結(jié)構(gòu)如片狀偽足而在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中體外抑制細(xì)胞遷移過程。mAb 4C5選擇性結(jié)合HSP90的表面池，并且顯著降低黑色素瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，顯示mAb 4C5在MDAMB453乳腺癌細(xì)胞中抑制HSP90和生長因子受體HER-2之間的細(xì)胞外相互作用，導(dǎo)致下游信號傳遞受損和癌細(xì)胞遷移和侵襲降低。最后，顯示mAb 4C5抑制分泌的HSP90和MMP2酶原和MMP9酶原之間的功能相互作用，所述功能相互作用對于這些酶的活化是必需的，而這些酶的活化對于ECM降解和癌細(xì)胞侵襲和外滲是必要的。
[0004]這些組合的數(shù)據(jù)提示，mAb 4C5特異性抑制HSP90的細(xì)胞外池而不影響該分子伴侶的范圍廣泛的重要的細(xì)胞內(nèi)作用的能力可以在人惡性腫瘤的治療中具有臨床益處。然而，鼠mAb不構(gòu)成理想治療劑。鼠mAb在人臨床試驗(yàn)中使用的一個(gè)顯而易見的問題是產(chǎn)生人抗小鼠抗體應(yīng)答的可能性。在人治療劑中使用鼠來源的mAb的最初嘗試受到阻礙，因?yàn)槭罂贵w由人抗鼠抗體免疫應(yīng)答(HAMA)所識別，并且患者的免疫系統(tǒng)縮短了治療窗口。重組DNA技術(shù)的出現(xiàn)已經(jīng)克服了這些障礙，這已經(jīng)導(dǎo)致了嵌合抗體或人源化抗體的開發(fā)。
[0005]發(fā)明概述
如下所述，本發(fā)明提供了用于治療腫瘤的治療組合物和方法。在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于在腫瘤治療中使用的嵌合的人/小鼠抗體。因?yàn)檫@樣的抗體主要是人組成，所以相對于常規(guī)鼠抗體，它們具有降低的在人受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
[0006]在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的嵌合抗體，其包含鼠K L鏈且缺乏重鏈，其中鼠免疫球蛋白K輕鏈恒定區(qū)(Ck)被對應(yīng)的人Ck結(jié)構(gòu)域或其片段所替代，其中所述抗體特異性結(jié)合HSP90且能夠降低腫瘤細(xì)胞的生長和/或侵襲性。在一個(gè)實(shí)施方案中，鼠K L鏈與SEQ ID N0:2具有至少75%、85%、90%或95%同一性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鼠κ L鏈含有SEQ ID Ν0:2。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鼠K L鏈含有一個(gè)或多個(gè)鼠互補(bǔ)性決定區(qū)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鼠互補(bǔ)性決定區(qū)與SEQ ID Ν0:5、6、或7具有至少75%同一性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鼠輕鏈含有是SEQ ID Ν0:5、6、和/或7的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鼠輕鏈含有互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR) SEQ ID Ν0:5、6、和7。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體與SEQ ID Ν0:4具有至少75%、85%、95%或更高的氨基酸序列同一性。
[0007]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于含有SEQ ID Ν0:4或基本上由SEQ ID Ν0:4組成的分離的嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是人源化抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是從原核或真核細(xì)胞的培養(yǎng)物分離的。
[0008]在上述方面的各個(gè)實(shí)施方案中，相對于常規(guī)鼠抗體，嵌合抗體具有降低的在人受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
[0009]在上述方面的還有其他實(shí)施方案中，分別使用癌細(xì)胞集落形成測定(clonogenicassay)和傷口愈合測定(wound healing assay),通過檢測肌動(dòng)蛋白重排、通過檢測片狀偽足發(fā)生或通過檢測侵襲的另一種形態(tài)標(biāo)記而測定抗體或其片段降低生長和侵襲的能力。
[0010]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于含有SEQ ID N0:4的序列的分離的多肽。
[0011]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于編碼任何前述方面的嵌合抗體的分離的多核苷酸。
[0012]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于編碼前述方面的嵌合抗體或前述方面的分離的多肽的分離的多核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，多核苷酸具有SEQ ID N0:3的序列。
[0013]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于含有被定位用于在細(xì)胞中表達(dá)的任何前述方面的多核苷酸的表達(dá)載體。
[0014]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于含有該表達(dá)載體的細(xì)胞(例如，原核或真核細(xì)胞)。
[0015]在另一個(gè)方面,本發(fā)明的特征在于用于產(chǎn)生本發(fā)明的嵌合抗體的方法，該方法包括在適于表達(dá)嵌合抗體的條件下培養(yǎng)含有本發(fā)明的表達(dá)載體的細(xì)胞，和從培養(yǎng)的細(xì)胞中分離嵌合抗體。
[0016]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于降低腫瘤細(xì)胞的生長和/或侵襲的方法，該方法涉及將腫瘤細(xì)胞與任何前述方面的或本文以其他方式描述的嵌合抗體接觸，從而降低腫瘤細(xì)胞的生長和/或侵襲。
[0017]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于治療具有腫瘤的受試者的方法，該方法涉及將治療有效量的任何前述方面的或本文以其他方式描述的嵌合抗體施用于受試者，從而治療該受試者。
[0018]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于在具有腫瘤的受試者中治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移的方法，該方法涉及將治療有效量的任何前述方面的或本文以其他方式描述的嵌合抗體施用于受試者，從而在該受試者中治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。在一個(gè)實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞或存在于腫瘤中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥是乳腺癌、黑色素瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌或淋巴瘤。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嵌合抗體全身或局部施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嵌合抗體與功能部分共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方案中，功能部分是放射性的，或者是化療劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步涉及將治療有效量的一種或多種化療劑施用于受試者。在上述方面的各種實(shí)施方案中，一種或多種化療劑選自下列中的任何一種或多種:乙酸阿比特龍、六甲蜜胺、脫水長春堿、奧里斯汀(auristatin)、貝沙羅汀、比卡魯胺、BMS 184476,2, 3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、博萊霉素、N, N- 二甲基-L-纈氨酰-L-纈氨酰-N-甲基-L-纈氨酰-L-丙-1-基脯氨酸-叔丁酰胺、惡病質(zhì)素、西馬多丁、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、酒石酸長春瑞濱(3’，4’ -didehydro-4’ -deoxy-8’ -norvin-caleukoblastine)、多烯紫杉醇(docetaxol)、多西他賽(doxetaxel)、環(huán)憐酸胺、卡鉬、卡莫司汀(BCNU)、順鉬、念珠藻素、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺(DTIC)、更生霉素、柔紅霉素、地西他濱、多拉司他汀、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羥基脲和羥基脲紫杉醇、異環(huán)磷酰胺、利阿唑、氯尼達(dá)明、洛莫司汀(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥)、美法侖、輕乙基磺酸米伏布爾(mivobulin isethionate)、根瘤菌素、sertenef、鏈脲霉素、絲裂霉素、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、尼魯米特、奧那司酮、紫杉醇、潑尼氮芥、甲基芐肼、RPR109881、磷酸雌氮芥、他莫昔芬、他索納明、紫杉醇、維甲酸、長春花堿、長春新堿、硫酸長春地辛、和長春氟寧。
[0019]在上述方面的各個(gè)實(shí)施方案中，相對于常規(guī)鼠抗體，嵌合抗體具有降低的在人受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
[0020]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于治療腫瘤的藥物組合物，其包含治療有效量的任何前述方面的或本文以其他方式描述的嵌合抗體。
[0021]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于治療腫瘤的藥物組合物，其包含治療有效量的分離的多肽，所述分離的多肽包含SEQ ID N0:4。
[0022]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于治療腫瘤的藥物組合物，其包含治療有效量的分離的多肽，所述分離的 多肽包含選自SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6、和SEQ ID N0:7的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)。
[0023]在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于治療腫瘤的試劑盒，所述試劑盒包含治療有效量的任何前述方面的或本文以其他方式描述的嵌合抗體或包含選自SEQ ID SEQ IDNO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID N0:6、和SEQ ID NO:7的序列的分離的多肽和用于在任何前述方面的方法中使用試劑盒的說明。
[0024]附圖概述
圖1A和IB顯示，mAb 4C5是缺乏重鏈的K L鏈二聚體。圖1A是在還原性和非還原性條件下運(yùn)行且用對于小鼠K鏈、小鼠Fab和Fe Y特異性抗體探測的mAb 4C5的免疫印跡。從雜交瘤培養(yǎng)物分離的純化的mAb 4C5進(jìn)行在還原性和非還原性條件下的SDS-PAGE電泳和隨后用抗小鼠K鏈、抗小鼠Fab和抗Fe Y抗體western印跡。在還原性電泳和隨后用抗Fab抗體免疫印跡下,觀察到單一的25 kDa免疫反應(yīng)條帶,其與用抗小鼠κ鏈抗體的western印跡所顯示的對應(yīng)于K L鏈的條帶是相同的。在非還原性SDS-PAGE電泳和隨后用抗κ和抗Fab抗體western印跡后，顯不mAb 4C5以約50 kDa而非如常規(guī)IgGl分子以150 kDa遷移。在還原性和非還原性條件下電泳和隨后用抗Fe Y抗體western印跡后,沒有檢測到mAb 4C5免疫反應(yīng)性。圖1B是用重鏈探針雜交的4C5雜交瘤細(xì)胞RNA的Northern印跡。4C5雜交瘤衍生的RNA用重鏈放射標(biāo)記的探針Northern印跡分析后沒有檢測到放射活性。2D10-和NSO-衍生的RNA分別充當(dāng)陽性和陰性對照。
[0025]圖2顯示mAb 4C5的核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列。互補(bǔ)性決定區(qū)(OTR)加下劃線。
[0026]圖3A和3B顯示，小鼠-人嵌合4C5和重組小鼠4C5都表現(xiàn)出與親本mAb 4C5類似的電泳遷移性。圖3A是純化的抗體在還原性條件下的Coomasie染色的SDS-PAGE。純化的抗體在還原性條件下SDS-PAGE電泳和隨后的Coomasie亮藍(lán)-R染色顯示在所有情況下對應(yīng)于L鏈的約25 kDa條帶。圖3B是純化的抗體在非還原性條件下的Coomasie染色的SDS-PAGE。在非還原性條件下，顯示抗體作為L鏈二聚體遷移。rec 4C5:重組4C5，ch4C5:嵌合 4C5。
[0027]圖4A、4B和4C顯示，重組和嵌合4C5特異性識別HSP90。圖4A是MDAMB453裂解物用商業(yè)上獲得的多克隆抗HSP90 α抗體、mAb 4C5、重組和嵌合4C5探測的western印跡。在所有情況下，觀察到對應(yīng)于HSP90的單一 90 kDa免疫反應(yīng)條帶。圖4B是MDAMB453裂解物的抗HSP90免疫沉淀物用mAb 4C5、重組4C5、和嵌合4C5探測的免疫印跡。MDAMB453細(xì)胞裂解物用抗HSP90免疫沉淀且用mAb 4C5、重組4C5、和嵌合4C5免疫印跡。在所有情況下，觀察到單一的免疫反應(yīng)條帶。圖4C是MDAMB453裂解物的mAb 4C5、重組4C5、和嵌合4C5免疫沉淀物用抗HSP90a探測的免疫印跡。MDAMB453細(xì)胞裂解物的反向免疫沉淀實(shí)驗(yàn)用mAb 4C5、rec 4C5和ch 4C5進(jìn)行,且隨后用抗HSP90 a進(jìn)行Western印跡。在所有情況下，都觀察到單一的免疫反應(yīng)條帶，表明重組和嵌合4C5都保留mAb 4C5特異性且識別HSP90。
[0028]圖5A、5B、5C、和顯示，重組和嵌合4C5結(jié)合到細(xì)胞表面且沒有被MDAMB453細(xì)胞內(nèi)化。圖5A是MDAMB453細(xì)胞使用重組和嵌合4C5的免疫熒光染色的顯微照片。標(biāo)點(diǎn)免疫標(biāo)記表明HSP90的表面池。使用mAb 4C5和抗HSP90 a獲得了類似結(jié)果。使用針對細(xì)胞內(nèi)蛋白β微管蛋白的抗體進(jìn)行陰性對照。(未顯示)比例尺:20μπι。圖5Β是與細(xì)胞內(nèi)HSP9結(jié)合的重組和嵌合4C5的顯微照片。與鼠抗體類似，在細(xì)胞通透后，重組和嵌合4C5也識別HSP90的細(xì)胞內(nèi)池。在用4 %多聚甲醛的固定條件和用0.1% Triton X-100的通透下進(jìn)行MDAMB453細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)HSP90的免疫熒光法檢測。比例尺:20pm。圖5C是檢測抗體內(nèi)化的顯微照片。將細(xì)胞在37°C下與抗體孵育不同的時(shí)間間隔，固定，且通透。使用熒光綴合的抗體顯現(xiàn)抗體的結(jié)合。沒有觀察到mAb 4C5、重組4C5、和嵌合4C5抗體的內(nèi)化-甚至在孵育24后。相比之下，在孵育8小時(shí)后在細(xì)胞內(nèi)檢測到抗HSP90 a抗體。比例尺:20Mm。圖是用mAb 4C5、重組4C5、或嵌合4C5處理的源自MDAMB453細(xì)胞的細(xì)胞裂解物用針對ErbB2、Akt、cRaf、和HSP90的抗體探測的western印跡。肌動(dòng)蛋白充當(dāng)上樣對照。與對照相比，用三種4C5抗體處理沒有影響測試的細(xì)胞內(nèi)激酶的水平。
[0029]圖6A、6B、6C、6D、6E、6F和6G顯示重組和嵌合4C5都保留mAb 4C5的功能阻斷特性且抑制MDAMB453乳腺癌和B16F10黑色素瘤細(xì)胞侵襲。圖6A是體外傷口愈合測定結(jié)果的顯微照片的子圖。照片代表在刮擦形成后O時(shí)(左圖)和48小時(shí)(右圖)時(shí)獲得的相差圖，顯示在對照培養(yǎng)物或包括`抗HSP90 α、mAb 4C5、重組4C5、或嵌合4C5的培養(yǎng)物中的MDAMB453細(xì)胞遷移。比例尺:200 pm。圖6B是傷口愈合測定結(jié)果的圖示。與被認(rèn)為導(dǎo)致100%的傷口閉合的對照培養(yǎng)物相比，在培養(yǎng)基中添加200 yg/ml抗HSP90a和mAb 4C5分別導(dǎo)致48.57%和55.3 %的傷口閉合抑制。在培養(yǎng)基中添加200 μ g/ml重組4C5或嵌合4C5分別導(dǎo)致46.51 %和51.19 %的傷口閉合抑制。條代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值土 SEM。在單次實(shí)驗(yàn)中，一式三份測試每種條件。通過Student’s T檢驗(yàn)測試差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。抗HSP90 a、mAb 4C5、重組4C5和嵌合4C5的存在對傷口閉合具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性影響(分別為P < O, OUp < O, 01、p〈0，01和p〈 O, 01)。圖6C是在刮擦形成后O時(shí)(左圖)和24小時(shí)(右圖)時(shí)獲得的相差圖的顯微照片，顯示在傷口愈合測定中在200 Pg/ml嵌合4C5存在的情況下B16 FlO黑素瘤細(xì)胞侵襲。比例尺:200 Mm。圖6D是嵌合4C5的濃度增加對傷口閉合的影響的圖示。與被認(rèn)為導(dǎo)致100%的傷口閉合的對照培養(yǎng)物相比，50 μδ/πι1嵌合4C5的存在導(dǎo)致16%的侵襲抑制，而添加100 μδ/πι1和200 μδ/πι1嵌合4C5分別導(dǎo)致27，9 %和52，3 %的遷移抑制。圖6Ε是使用臺盼藍(lán)染料顯現(xiàn)的死細(xì)胞的顯微照片。對照、mAb 4C5、抗HSP90 a、和嵌合4C5處理的細(xì)胞與臺盼藍(lán)孵育以觀察在每種情況下的細(xì)胞死亡率。比例尺，30 Mm。圖6F是在固定、通透和用熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色后，對照和嵌合4C5處理的細(xì)胞的顯微照片。比例尺40 Mm。圖6G是顯示鬼筆環(huán)肽染色(F-肌動(dòng)蛋白)的更高放大倍數(shù)。嵌合4C5有效地阻斷片狀偽足的擴(kuò)散。比例尺:16 Mm。
[0030]圖7A和7B顯示在集落形成測定中嵌合4C5顯著降低由MDAMB231人乳腺癌細(xì)胞形成的每個(gè)個(gè)體集落中的細(xì)胞數(shù)量。圖7A是集落形成測定結(jié)果的顯微照片，其顯示在對照或嵌合4C5處理的培養(yǎng)物中MDAMB231細(xì)胞的Giemsa染色的集落。圖7B是嵌合4C5對每個(gè)集落中細(xì)胞數(shù)的影響的圖示。當(dāng)與對照培養(yǎng)物相比，觀察到47.3%降低(P〈0.001)。
[0031]發(fā)明詳述 定義
“mAb 4C5”是指與SEQ ID NO:2具有至少75%、85%、90%、95%或者甚至99%氨基酸序列同一性的多肽，或其片段，其具有抗腫瘤活性和/或具有HSP90特異性結(jié)合活性。mAb4C5是鼠抗體，其特異性識別人熱休克蛋白90(HSP90)的α同種型，并且在較小程度上特異性識別β同種型。
[0032]下面提供了 SEQ ID NO:2的序列:
【權(quán)利要求】
1.分離的嵌合抗體，包含鼠KL鏈且缺乏重鏈，其中所述鼠免疫球蛋白K輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域(Ck)被對應(yīng)的人C K結(jié)構(gòu)域或其片段所替代，其中所述抗體特異性結(jié)合HSP90且能夠降低腫瘤細(xì)胞的生長和/或侵襲性。
2.權(quán)利要求1的嵌合抗體，其中所述鼠KL鏈與SEQ ID NO: 2具有至少85%同一性。
3.權(quán)利要求1的嵌合抗體，其中鼠KL鏈包含SEQ ID N0:2。
4.權(quán)利要求1的嵌合抗體，其中所述鼠KL鏈包含一個(gè)或多個(gè)鼠互補(bǔ)性決定區(qū)。
5.權(quán)利要求4的嵌合抗體，其中所述鼠互補(bǔ)性決定區(qū)與SEQID N0:5、6、或7具有至少75%同一性。
6.權(quán)利要求5的嵌合抗體，其中所述鼠輕鏈包含一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)，所述互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)選自SEQ ID N0:5、6、或7。
7.權(quán)利要求5的嵌合抗體，其中所述鼠輕鏈包含互補(bǔ)性決定區(qū)(OTR)SEQ ID N0:5、6、和7。
8.權(quán)利要求1的嵌合抗體，其中所述抗體與SEQID N0:4具有至少75%、85%或95%的氨基酸序列同一性。
9.分離的嵌合抗體，包含SEQID N0:4或基本上由SEQ ID N0:4組成。
10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的嵌合抗體，其中所述抗體是人源化抗體。
11.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的嵌合抗體，其中所述抗體是從原核或真核細(xì)胞的培養(yǎng)物分離的。
12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合抗體，其中相對于常規(guī)鼠抗體，所述嵌合抗體具有降低的在人受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
13.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合抗體，其中分別使用癌細(xì)胞集落形成測定和傷口愈合測定，通過檢測肌動(dòng)蛋白重排，通過檢測片狀偽足發(fā)展，或通過檢測侵襲性的另一種形態(tài)標(biāo)記而測定所述抗體或其片段降低生長和侵襲性的能力。
14.分離的多肽，包含SEQID N0:4的序列。
15.分離的多核苷酸,編碼權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的嵌合抗體。
16.分離的多核苷酸，編碼權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的嵌合抗體或權(quán)利要求14的分離的多肽。
17.權(quán)利要求15的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸具有SEQID NO:3的序列。
18.表達(dá)載體,包含定位用于在細(xì)胞中表達(dá)的權(quán)利要求15- 17中任一項(xiàng)的多核苷酸。
19.細(xì)胞，包含權(quán)利要求18的表達(dá)載體。
20.權(quán)利要求19的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是原核或真核細(xì)胞。
21.用于產(chǎn)生權(quán)利要求1的嵌合抗體的方法，所述方法包括在適于表達(dá)所述嵌合抗體的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求18的細(xì)胞，和從所述培養(yǎng)的細(xì)胞中分離所述嵌合抗體。
22.降低腫瘤細(xì)胞的生長和/或侵襲性的方法，所述方法包括將腫瘤細(xì)胞與權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的嵌合抗體接觸，從而降低所述腫瘤細(xì)胞的生長和/或侵襲性。
23.治療具有腫瘤的受試者的方法，所述方法包括將治療有效量的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合抗體施用于受試者，從而治療所述受試者。
24.在具有腫瘤的受試者中治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括將治療有效量的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合抗體施用于受試者，從而在所述受試者中治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述腫瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞或存在于腫瘤中。
26.權(quán)利要求24或25的方法，其中所述癌癥選自乳腺癌、黑色素瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌和淋巴瘤。
27.權(quán)利要求24或25的方法,其中所述嵌合抗體全身或局部施用。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述嵌合抗體與功能部分共價(jià)連接。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述功能部分是放射性的。
30.權(quán)利要求27的方法，其中所述功能部分是化療劑。
31.權(quán)利要求24或25的方法，進(jìn)一步包括將治療有效量的一種或多種化療劑施用于受試者。
32.權(quán)利要求23或24的方法，其中所述一種或多種化療劑選自乙酸阿比特龍、六甲蜜胺、脫水長春堿、奧里斯汀、貝沙羅汀、比卡魯胺、BMS 184476,2, 3，4，5，6-五氟-N_(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、博萊霉素、N, N- 二甲基-L-纈氨酰-L-纈氨酰-N-甲基-L-纈氨酰-L-丙-1-基脯氨酸-叔丁酰胺、惡病質(zhì)素、西馬多丁、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、酒石酸長春瑞濱、多烯紫杉醇、多西他賽、環(huán)磷酰胺、卡鉬、卡莫司汀(BCNU)、順鉬、念珠藻素、環(huán)磷酰 胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺(DTIC)、更生霉素、柔紅霉素、地西他濱、多拉司他汀、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧唆、非那雄胺、氟他胺、羥基脲和羥基脲紫杉醇、異環(huán)磷酰胺、利阿唑、氯尼達(dá)明、洛莫司汀(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥)、美法侖、羥乙基磺酸米伏布爾、根瘤菌素、sertenef、鏈脲霉素、絲裂霉素、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、尼魯米特、奧那司酮、紫杉醇、潑尼氮芥、甲基芐肼、RPR109881、磷酸雌氮芥、他莫昔芬、他索納明、紫杉醇、維甲酸、長春花堿、長春新堿、硫酸長春地辛、和長春氟寧。
33.權(quán)利要求23或24的方法，其中相對于常規(guī)鼠抗體，所述嵌合抗體具有降低的在人受試者中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
34.用于治療腫瘤的藥物組合物，包含治療有效量的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合抗體。
35.用于治療腫瘤的藥物組合物，包含治療有效量的分離的多肽，所述分離的多肽包含SEQ ID NO:4。
36.用于治療腫瘤的藥物組合物，包含治療有效量的分離的多肽，所述分離的多肽包含選自SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6 JPSEQ ID NO:7的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)。
37.用于治療腫瘤的試劑盒，所述試劑盒包含治療有效量的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合抗體，或包含選自SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6、和SEQ ID NO:7的序列的分離的多肽；和用于在權(quán)利要求22-33中任一項(xiàng)的方法中使用所述試劑盒的說明。
【文檔編號】C07K16/18GK103459420SQ201180056980
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2011年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2010年9月27日
【發(fā)明者】K.賽德拉, A.馬馬拉基, E.帕察烏迪 申請人:澤斯塔根股份有限公司