一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條，共分6個區(qū)，第一區(qū)加樣墊，第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體，第三區(qū)檢測區(qū)T，為包被抗體噴涂區(qū)帶，T區(qū)固相化與第二區(qū)抗體相對應(yīng)的特異性抗體，第四區(qū)對照區(qū)C，C區(qū)固相化非特異性抗體，第五區(qū)吸水區(qū)，所述的吸水區(qū)為紙纖維片，第六區(qū)硝基纖維層析膜，T區(qū)的顏色深淺與待測抗原含量成正比，用檢測定量儀可以測出待測抗原濃度范圍。本發(fā)明中的檢測條具有如下技術(shù)效果：特異性高；靈敏性高；試驗區(qū)(T)顏色深淺與腫瘤抗原濃度呈線性關(guān)系；能夠一步快速檢測。
【專利說明】一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條，屬于生物診斷【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]根據(jù)流行病統(tǒng)計，每70名婦女中有一人患卵巢腫瘤?；颊叽婊盥蕿?0%。乳房腫瘤每年有數(shù)十萬以上患者。而腸胃道腫瘤患者比例更高。目前，篩檢測方法如下；卵巢腫瘤CA-125酶聯(lián)法，乳房腫瘤CA-15-3酶聯(lián)法，腸胃道腫瘤CA-199酶聯(lián)法。篩檢陽性者再以昂貴的方法做CT或MRI確診。腫瘤指標(biāo)的提升顯示腫瘤發(fā)生或擴大；腫瘤指標(biāo)的下降提示治療的成功。
[0003]CA-125、CA-15-3, CA-199酶聯(lián)法分別作為卵巢腫瘤、乳房腫瘤和腸胃道腫瘤的診斷和監(jiān)控在美國和一些國家作為經(jīng)典立法已經(jīng)有若干年。但是尚沒有一步法快速診斷和監(jiān)控的報道?，F(xiàn)有的酶聯(lián)法具有如下不足之處:1)檢測時間長，酶聯(lián)法需要3小時出結(jié)果；2)保存時間短，保存要求高。需冰箱保存，而且只有6個月-12個月有效期。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條。
[0005]本發(fā)明是通過檢測血液中與腫瘤相關(guān)的指標(biāo)進行一步快速和監(jiān)控腫瘤，與腫瘤相關(guān)的指標(biāo)包括卵巢腫瘤CA-125、乳房腫瘤CA-15-3和腸胃道腫瘤CA-199。
[0006]本發(fā)明的免疫檢測條共分6個區(qū)，第一區(qū)加樣墊，第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體，第三區(qū)檢測區(qū)T，為包被抗體噴涂區(qū)帶，T區(qū)固相化與第二區(qū)抗體相對應(yīng)的特異性抗體，第四區(qū)對照區(qū)C，C區(qū)固相化非特異性抗體，第五區(qū)吸水區(qū)，所述的吸水區(qū)為紙纖維片，第六區(qū)硝基纖維層析膜。T區(qū)的顏色深淺與待測抗原含量成正比，用檢測定量儀掃描或照相T區(qū)顏色，再以軟件可以測出待測抗原濃度范圍。所述的待測物質(zhì)為與腫瘤相關(guān)的抗原，包括用于檢測卵巢腫瘤的CA-125、用于檢測乳房腫瘤的CA-15-3或用于檢測腸胃道腫瘤的CA-199。
[0007]所述的固相化標(biāo)記抗體區(qū)的標(biāo)記為可見顆粒標(biāo)記抗體,如金標(biāo)、硒標(biāo)或碳標(biāo)。
[0008]所述的對照區(qū)C區(qū)為硝基纖維素膜上包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG。
[0009]當(dāng)檢測條用于檢測卵巢腫瘤的CA-125時，所述的第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體為固相化標(biāo)記抗CA-125單克隆抗體，所述的檢測區(qū)T區(qū)固相化特異性抗體為包被抗體，與標(biāo)記抗體相配對的抗CA-125單克隆抗體。
[0010]當(dāng)檢測條用于檢測卵巢腫瘤的CA-15-3時，所述的第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體為固相化標(biāo)記抗CA-15-3單克隆抗體，所述的檢測區(qū)T區(qū)固相化特異性抗體為包被抗體，與標(biāo)記抗體相配對的抗CA-15-3單克隆抗體。
[0011]當(dāng)檢測條用于檢測卵巢腫瘤的CA-199時，所述的第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體為固相化標(biāo)記抗CA-199單克隆抗體，所述的檢測區(qū)T區(qū)固相化特異性抗體為包被抗體，與標(biāo)記抗體相配對的抗CA-199單克隆抗體。[0012]本發(fā)明的工作原理如下:待測樣滴加于第一區(qū)加樣墊，借或不借助展開劑上行至第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體區(qū)，血樣中如存在抗原CA-125或CA-15-3或CA-199，則與標(biāo)記抗體形成“抗原-標(biāo)記抗體”復(fù)合物。該復(fù)合物按毛細(xì)管原理在檢測條的第6區(qū)上上行，行至第3區(qū)檢測區(qū)，與T區(qū)一條固相包被線的另一特異抗體形成“標(biāo)記抗體-抗原-固相包被抗體”復(fù)合沉淀線。該沉淀線的色帶深淺與抗原血樣中濃度有線性關(guān)系。上行至第4區(qū)對照區(qū)上，與C區(qū)的固相包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG相遇，因為單克隆抗體都屬于小鼠單克隆抗體，因此不管抗原存在與否，C區(qū)總會有一條沉淀線出現(xiàn)，此條色帶一般作為質(zhì)量控制，如果C區(qū)色帶不出現(xiàn)，則說明檢測條失活。
[0013]在檢測時間15分鐘，將層析檢測盒放置于QKTECH4000金標(biāo)定量分析儀中讀取結(jié)
果O
[0014]檢測條的制備方法:
[0015]1、標(biāo)記抗體的制備:將所需抗體加入所需量膠體金溶液,攪拌10分鐘后，加入1/10體積的1%小牛血清蛋白液作穩(wěn)定劑，高速離心，取得玫瑰紅色沉淀物，即標(biāo)記抗體。
[0016]2、將上述沉淀物溶解于緩沖劑(JAJInternationalInc, SanDiego, CA, USA 產(chǎn)品)。中，鋪于玻璃紙上，真空抽干；
[0017]3、包被抗體制備:將與標(biāo)記抗體相對應(yīng)的另一抗體溶液用噴霧方法劃線于硝基纖維膜上，于37攝氏度烘干20分鐘；
[0018]4、裝配:將上述各組分貼在有膠面的塑料薄板上，上下兩端再貼上吸水紙。切割成條，再裝入塑殼之中。
[0019]免疫檢測條的腫瘤抗原配對抗體
[0020]經(jīng)研發(fā)和制作，并用定量分析儀分析，本發(fā)明的腫瘤抗原配對抗體一步法研制結(jié)果匯總于表1。
[0021]表1腫瘤抗原配對抗體一步法研制結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條，其特征在于，所述的免疫檢測條共分6個區(qū)，第一區(qū)加樣墊，第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體，第三區(qū)檢測區(qū)T，為包被抗體噴涂區(qū)帶，T區(qū)固相化與第二區(qū)抗體相對應(yīng)的特異性抗體，第四區(qū)對照區(qū)C，C區(qū)固相化非特異性抗體，第五區(qū)吸水區(qū)，所述的吸水區(qū)為紙纖維片，第六區(qū)硝基纖維層析膜，T區(qū)的顏色深淺與待測抗原含量成正比，用檢測定量儀可以測出待測抗原濃度范圍，所述的待測物質(zhì)為與腫瘤相關(guān)的抗原，包括用于檢測卵巢腫瘤的CA-125、用于檢測乳房腫瘤的CA-15-3或用于檢測腸胃道腫瘤的CA-199。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條，其特征在于，所述的第二區(qū)固相化標(biāo)記抗體區(qū)的標(biāo)記為可見顆粒標(biāo)記抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條，其特征在于，所述的可見顆粒標(biāo)記為金標(biāo)、硒標(biāo)或碳標(biāo)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步快速和監(jiān)控腫瘤的免疫檢測條，其特征在于，可置予一種外殼，以利于檢測程序。
【文檔編號】G01N33/577GK103604925SQ201310606257
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】惟釗·盧, 詹姆斯·儆翊·盧, 胡成龍 申請人:盧氏實驗室公司, 南京路始生物科技有限公司