專(zhuān)利名稱(chēng)：一種大葉吊蘭苷a的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種大葉吊蘭苷A的提純方法。
背景技術(shù)：
大葉吊蘭苷A (Chloromaloside A)分子式為C5tlH8tlO23，分子量為1049. 17，為白色晶體，mp. 278-280°C。主要存在于百合科植物大葉吊蘭及衫" malayense Ridley根莖中，亦在鷺鷥草major Hemsl.根中分離得到。藥理研究發(fā)現(xiàn)，大葉吊蘭苷可體外抑制人精子活力。目前對(duì)大葉吊蘭研究較少，尚未檢索到關(guān)于制備大葉吊蘭苷A的方法報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種大葉吊蘭苷A的提純方法，可有效制備高純度大葉吊蘭苷A。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種大葉吊蘭苷A的提純方法，其特征在于包括以下步驟
(I)將大葉吊蘭根莖粉碎，水提取3次，每次加水量為藥材量的4-6倍，第一次提取2h，第二次、第三次各lh，將提取液濃縮至藥材重的3-4倍；(2)將濃縮液調(diào)pH至3. 3-3. 7，加入酶溶液浸泡，并充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾，濾液即為上柱液；(3)將上柱液進(jìn)大孔吸附樹(shù)脂柱，用10%-90%乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用留體皂苷專(zhuān)用顯色劑顯色，收集合并含有留體皂苷的部位；(4)將留體皂苷部位用反相色譜柱進(jìn)行高效液相制備，以體積40-60:60-40的甲醇水或25-50:75-50的乙腈水為流動(dòng)相，同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A。所述步驟(2)中加入的酶為纖維素酶、果膠酶、半纖維素酶或淀粉酶，加入量為藥材重量的O. 02-0. 05%。。所述步驟(3)中的大孔樹(shù)脂為弱極性或非極性大孔樹(shù)脂。在步驟(4)后將大葉吊蘭苷A用乙醇或乙酸乙酯重結(jié)晶，得到大葉吊蘭苷白色晶體。本發(fā)明采用酶解除去了大量雜質(zhì)，降低大量泡沫物質(zhì)的影響，解決了過(guò)濾難的問(wèn)題，純化了大孔吸附樹(shù)脂的進(jìn)料液，延長(zhǎng)了大孔樹(shù)脂的使用壽命。使用本發(fā)明方法制備大葉吊蘭苷A，藥材提取完全，產(chǎn)率高，可達(dá)到含量測(cè)定用中藥化學(xué)對(duì)照品的要求。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
將大葉吊蘭根莖2kg粉碎后投入提取罐，用水加熱提取3次，每次加水8kg，提取時(shí)間分別為2h、lh、lh，將三次提取液合并后濃縮至藥材量的3倍，即6L，將濃縮液冷卻至40°C，加檸檬酸調(diào)pH至3. 6，再加入藥材量O. 025%的纖維素酶溶液，酶解lh，升溫滅酶，抽濾，所得濾液即為上柱液。將上柱液進(jìn)已經(jīng)預(yù)處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用留體皂苷專(zhuān)用顯色劑顯色，收集合并含有留體皂苷的部位；將留體皂苷的部位用微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)行高效液相制備分離，色譜柱C18反相色譜柱；色譜條件流動(dòng)相為甲醇水=43:57 ;流速25ml/min，同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A收集液，將大葉吊蘭苷A收集液濃縮揮干溶劑，加乙醇溶解，重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到白色大葉吊蘭苷A晶體，純度為98. 7%。實(shí)施例2:
將大葉吊蘭根莖2kg粉碎后投入提取罐，用水加熱提取3次，每次加水10kg，提取時(shí)間分別為2h、lh、lh，將三次提取液合并后濃縮至藥材量的4倍，即8L，將濃縮液冷卻至40°C，加枸櫞酸調(diào)pH至3. 3，再加入藥材量O. 034%的果膠酶溶液，酶解lh，升溫滅酶，抽濾，所得濾液即為上柱液。將上柱液進(jìn)已經(jīng)預(yù)處理好的DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用留體皂苷專(zhuān)用顯色劑顯色，收集合并含有留體皂苷的部位；將留體皂苷的部位用微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)行高效液相制備分離，色譜柱C18反相色譜柱；色譜條件流動(dòng)相為乙腈水=37:63 ;流速40ml/min,同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A收集液，將大葉吊蘭苷A收集液濃縮揮干溶劑，加乙醇溶解，重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到白色大葉吊蘭苷A晶體，純度為98. 2%。實(shí)施例3:
將大葉吊蘭根莖2kg粉碎后投入提取罐，用水加熱提取3次，每次加水12kg，提取時(shí)間分別為2h、lh、lh，將三次提取液合并后濃縮至藥材量的3. 5倍，即7L，將濃縮液冷卻至400C，加檸檬酸調(diào)pH至3. 7，再加入藥材量O. 03%的半纖維素酶溶液，酶解lh，升溫滅酶，抽濾，所得濾液即為上柱液。將上柱液進(jìn)已經(jīng)預(yù)處理好的HPD100大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用留體皂苷專(zhuān)用顯色劑顯色，收集合并含有留體皂苷的部位；將留體皂苷的部位用微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)行高效液相制備分離，色譜柱C18反相色譜柱；色譜條件流動(dòng)相為甲醇7jC =55:45 ;流速30ml/min，同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A收集液，將大葉吊蘭苷A收集液濃縮揮干溶劑，加乙酸乙酯溶解，重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到白色大葉吊蘭苷A晶體，純度為98. 4%。實(shí)施例4:
將大葉吊蘭根莖2kg粉碎后投入提取罐，用水加熱提取3次，每次加水8kg，提取時(shí)間分別為2h、lh、lh，將三次提取液合并后濃縮至藥材量的4倍，即8L，將濃縮液冷卻至40°C，力口枸櫞酸調(diào)pH至3. 4，再加入藥材量O. 05%的淀粉酶溶液，酶解lh，升溫滅酶，抽濾，所得濾液即為上柱液。將上柱液進(jìn)已經(jīng)預(yù)處理好的DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用10%-90%乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用留體皂苷專(zhuān)用顯色劑顯色，收集合并含有留體皂苷的部位；將留體皂苷的部位用微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)行高效液相制備分離，色譜柱C18反相色譜柱；色譜條件流動(dòng)相為乙腈冰=31:69 ;流速20ml/min,同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A收集液，將大 葉吊蘭苷A收集液濃縮揮干溶劑，加こ酸こ酯溶解，重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到白色大葉吊蘭苷A晶體，純度為98. 8%。
權(quán)利要求
1.一種大葉吊蘭苷A的提純方法，其特征在于包括以下步驟(1)將大葉吊蘭根莖粉碎，水提取3次，每次加水量為藥材量的4-6倍，第一次提取2h，第二次、第三次各lh，將提取液濃縮至藥材重的3-4倍；(2)將濃縮液調(diào)pH至3. 3-3. 7，加入酶溶液浸泡，并充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾，濾液即為上柱液；(3)將上柱液進(jìn)大孔吸附樹(shù)脂柱，用10%-90%乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用留體皂苷專(zhuān)用顯色劑顯色，收集合并含有留體皂苷的部位；(4)將留體皂苷部位用反相色譜柱進(jìn)行高效液相制備，以體積40-60:60-40的甲醇水或25-50:75-50的乙腈水為流動(dòng)相，同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A。
2.如權(quán)利要求I所述的一種大葉吊蘭苷A的提純方法，其特征在于所述步驟(2)中加入的酶為纖維素酶、果膠酶、半纖維素酶或淀粉酶，加入量為藥材重量的O. 02-0. 05%。
3.如權(quán)利要求I所述的一種大葉吊蘭苷A的提純方法，其特征在于所述步驟(3)中的大孔樹(shù)脂為弱極性或非極性大孔樹(shù)脂。
4.如權(quán)利要求I所述的一種大葉吊蘭苷A的提純方法，其特征在于是將大葉吊蘭苷A用乙醇或乙酸乙酯重結(jié)晶，得到大葉吊蘭苷白色晶體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種大葉吊蘭苷A的提純方法，本發(fā)明的大葉吊蘭苷A的提取方法首先采用水提、酶解，再用大孔樹(shù)脂吸附，然后用反相色譜柱進(jìn)行高效液相制備，以甲醇∶水或乙腈水為流動(dòng)相，同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到大葉吊蘭苷A。本發(fā)明方法制備大葉吊蘭苷A，藥材提取完全，產(chǎn)率高。
文檔編號(hào)C07J71/00GK102659907SQ20121012085
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月24日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司