專利名稱：皮寒藥中化學成分的分離純化方法
技術領域：
本發(fā)明提供了皮寒藥中化學成分的分離純化方法。
背景技術：
芒柄花素又稱刺芒柄花素，芒柄花黃素，生原禪寧B，普拉腦，大豆黃素4'-甲基醚，為黃酮類成分?，F(xiàn)代研究表明芒柄花素具有雌激素樣作用，抗氧化作用，可明顯促進非特異性免疫系統(tǒng)，抗癌細胞作用，還有降血脂，利尿等作用。芒柄花素最初來源于紅車軸草、刺芒柄花中，后期逐漸發(fā)現(xiàn)該類化合物也可以從黃芪、報春花等其他植物中分離得到。譚日紅等，以間苯ニ酚和對甲氧基苯こ酸為原料，合成得到了芒柄花素(譚日紅，等，芒柄花素的分離及合成研究，化學研究與應用，200921卷5期)。芒柄花素-7-0- ^ -D-葡萄糖苷是芒柄花素常見的糖苷衍生物之一，多見于黃芪等植物中，任欣意等，通過芒柄花素、I-溴_2，3，4，6-0-四こ?；?a -D-吡喃葡萄糖進行縮合反應得到芒柄花素-7-0- ^ -D-葡萄糖苷(任欣意，等，芒柄花素-7-0- 3 -D-葡萄糖苷的合成研究，天津化工，2006年20卷2期)。高麗槐素又稱馬卡因、朝鮮槐英、山槐素，為黃酮類成分。現(xiàn)代研究表明高麗槐素具有抗菌作用，抗腫瘤作用，對cAMP磷酸ニ酯酶具有抑制作用。目前，高麗槐素仍多是從高麗槐、廣豆根等植物中分離得到。腺苷，即9-3 -D-呋喃核糖基腺嘌呤，是ー種重要的醫(yī)藥中間體，利用腺苷可制成許多藥物如嘌呤霉素、阿糖腺苷等。目前，腺苷的制備多是以化學合成法為主，如由肌苷為起始原料進行腺苷的合成。1,2' -ニ羥基-4'-甲基-異黃酮，為異黃酮類化合物，具有一定的生物活性，異黃酮類化合物多可用于心血管疾病的治療。目前還鮮見7，2' -ニ羥基-4'-甲基-異黃酮的分離純化及合成方法。上述化合物均具有良好的應用前景，為了降低這些化合物的生產(chǎn)成本，減少對現(xiàn)有資源的過度依賴，研究人員也正在尋找更多的原料來源以及制備方法。皮寒藥為四川攀西地區(qū)安寧河流域治療感冒的民間草藥，當?shù)匕傩沼址Q其為“皮傷寒”、“雞大腿”，來源于豆科米ロ袋屬植物川滇米ロ袋Gueldenstaedtia deIavayiFranch.的干燥全草，全草入藥，四季可采；性寒，味辛苦，清熱解毒、鎮(zhèn)痛?！捌ず帯暴`詞始見于《西昌中草藥》，在該書中稱其來源于蝶形花科米ロ袋屬植物康滇米ロ袋Amblytropsisde lavayi (Fr. )C. Y. Wu的全草?？档崦抓泶?，即為《中國植物志》收載的川滇米ロ袋Gueldenstaedtia de lavayi Franch.。但是,皮寒藥與《中藥大辭典》及中醫(yī)院校中藥學教材所載的米ロ袋Gueldenstaedtia multiflora Bgun.不是同一植物。迄今，國內(nèi)外對皮寒藥的研究報道較少，文獻記載也不夠詳盡。在對皮寒藥治療感冒的研究上，何德昭總結(jié)和驗證了四川省涼山彝族自治州民間使用“皮寒藥”——即康滇米ロ袋治療感冒的經(jīng)驗，用皮寒藥加陳皮治療符合感冒診斷和感冒患者72例，觀察其臨床療效，結(jié)果痊愈46例，占63. 89%，顯效21例，占29. 17%，有效5例，占6. 94% (何德昭， 涼山州民間草藥“皮寒藥”加陳皮治療感冒72例，成都中醫(yī)藥大學學報，2004年27卷3期)。
目前，還未見皮寒藥中各化學成分的報道，也未見從皮寒藥中分離上述化合物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供從皮寒藥中分離純化多種化合物的方法。本發(fā)明提供了 1,2' -ニ羥基-4'-甲基-異黃酮的分離純化方法，它包括如下操作步驟( I)取皮寒藥，加水提取，水提液濃縮后，用こ酸こ酯萃取，取こ酸こ酯萃取層，回收溶劑后，得皮寒藥こ酸こ酯部位；(2)取皮寒藥こ酸こ酯部位，上硅膠柱，采用梯度洗脫方式，用ニ氯甲烷-甲醇 =1 0V/V洗脫除雜后，再用ニ氯甲烷-甲醇=20: 1V/V洗脫，收集洗脫液48份，每份均為1/4柱體積，即得A1-48號流分；(3)合并A1-35號流分，濃縮后，上硅膠柱，用石油醚-丙酮=6 :1V/V洗脫，收集洗脫液，再經(jīng)葡聚糖柱層析，甲醇沖洗，共收集洗脫液25份，每份均為1/85柱體積，即得B1-25號流分；(4)取B3-7號流分，回收溶劑后，以甲醇重結(jié)晶，得到7，2 ' - ニ羥基-4'-甲
基-異黃酮。進ー步地，步驟(2)所述硅膠柱為柱層析硅膠柱，其中，硅膠為200-300目；步驟(3)所述的娃膠柱為薄層娃膠G柱,葡聚糖柱為Sephadex G_25柱。更進ー步地，步驟(2)所述硅膠柱的徑高比為1:7-9，優(yōu)選為I :8。步驟(3)所述的硅膠柱的徑高比為1:13-15，優(yōu)選為I :14，葡聚糖柱的徑高比為I :28-32，優(yōu)選為 I :30-31。本發(fā)明還提供了高麗槐素的分離純化方法，它包括如下操作步驟取前述制備的B1-25號流分，合并B10-21號流分，回收溶劑后，以甲醇重結(jié)晶，得到高麗槐素。本發(fā)明還提供了芒柄花素的分離純化方法，它包括如下操作步驟取前述制備的A1-48號流分，合并A36-41號流分，濃縮后，上硅膠柱，用ニ氯甲烷-甲醇=20 1V/V洗脫除雜后，再用ニ氯甲烷-甲醇=16 :1V/V進行洗脫，收集洗脫液，回收溶劑、結(jié)晶后過濾，濾得固體物經(jīng)こ酸こ酯純化，得到芒柄花素。進ー步地，所述硅膠柱為薄層硅膠G柱，其徑高比為1:15-18，優(yōu)選為16-17。本發(fā)明還提供了芒柄花素-7-0-0 -D-葡萄糖苷的分離純化方法，它包括如下操作步驟A、取皮寒藥，加水提取，水提液濃縮后，用こ酸こ酯萃取，取こ酸こ酯萃取層，回收溶劑后，得皮寒藥こ酸こ酯部位；B、取皮寒藥こ酸こ酯部位，上硅膠柱，采用梯度洗脫方式，先用ニ氯甲烷-甲醇=1:0V/V洗脫除雜后，先用12倍柱體積的ニ氯甲烷-甲醇=20:1V/V洗脫，再用ニ氯甲烷-甲醇=15: 1V/V洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇=15:1的洗脫液62份，每份均為1/4柱體積，即得C1-62號流分；C、取C14-31號流分，濃縮后，上硅膠柱，用ニ氯甲烷-甲醇12 :1V/V洗脫除雜后，再用10 :1V/V進行洗脫，收集洗脫液，過濾，濾液經(jīng)葡聚糖柱層析，甲醇沖洗，收集甲醇洗脫液，回收溶劑后，甲醇重結(jié)晶，得到芒柄花素-7-0-0 -D-葡萄糖苷。進ー步地，步驟B所述硅膠柱為柱層析硅膠柱，徑高比為I: 7-9，其中，硅膠為200-300 目；步驟 C所述的娃膠柱為薄層娃膠G柱,徑高比為1:12-14 ;葡聚糖柱為SephadexG-25柱，徑高比為I :22-24。本發(fā)明還提供了腺苷的分離純化方法，它包括如下操作步驟①、取皮寒藥，加水提取，水提液濃縮后，用こ酸こ酯萃取，取こ酸こ酯萃取層，回收溶劑后，得皮寒藥こ酸こ酯部位；②、取皮寒藥こ酸こ酯部位，上硅膠柱，采用梯度洗脫方式，用ニ氯甲烷-甲醇=1:0V/V洗脫除雜后，先用12倍柱體積的ニ氯甲烷-甲醇=20:1V/V洗脫，再用ニ氯甲烷-甲醇=15:1V/V洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇=15:1的洗脫液62份，每份均為1/4柱體積，即得C1-62號流分；再用ニ氯甲烷-甲醇=7: 1V/V洗脫，收集洗脫液10份，每份均為1/4柱體積，即得D1-10號流分；③、合并C53-62號流分、D1-10號流分，濃縮后，上硅膠柱，用ニ氯甲烷-甲醇=10 1V/V洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，經(jīng)こ酸こ酯重結(jié)晶，得到腺苷。進ー步地，步驟②所述硅膠柱為柱層析硅膠柱，徑高比為1:7-9，其中，硅膠為200-300 目；步驟③所述硅膠柱為薄層硅膠G柱，徑高比為I :12_14。本發(fā)明首次從皮寒藥中分離出了 7，2' -ニ羥基-4'-甲基-異黃酮、高麗槐素、芒柄花素、芒柄花素-7-0-3 -D-葡萄糖苷和腺苷5種化合物，所得化合物純度均在98%以上，且本發(fā)明方法以價格低廉的皮寒藥為原料，可大幅降低原料成本，為上述5種化合物提供了新的提取來源，也為各種化合物標準品的制備提供了新方法。


圖Iこ酸こ酯部位的提取流程圖2こ酸こ酯部位的分離、純化過程
具體實施例方式實施例I皮寒藥化學成分的提取分離與結(jié)構鑒定I儀器、試劑超導高分辨核磁共振譜儀BrukerAvance 600 probe: 13C-1H DUL TE:300K高分辨質(zhì)譜儀MicromassZabspec柱層析填料硅膠H (200 300目)，青島海洋化工廠；層析硅膠版HPTLC板，青島海洋化工廠；薄層色譜(TLC)硅膠娃膠G、硅膠GF-254，青島海洋化工廠；色譜溶劑系統(tǒng)石油醚丙酮(不同比例)；氯仿丙酮(不同比例)；ニ氯甲烷甲醇(不同比例)；ニ氯甲烷こ酸こ酯(不同比例)；TLC顯色劑10%硫酸こ醇液；碘蒸氣；紫外燈(254nm、365nm)；
所用溶劑均為分析純，由成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)；2植物材料皮寒藥全草于2008年4月采自涼山州冕寧縣漫水灣鎮(zhèn)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學藥學院蔣桂華教授鑒定，為豆科米ロ袋屬植物川滇米ロ袋Gueldenstaedtia de lavayi Franch.的干燥全草。植物標本現(xiàn)存于成都中醫(yī)藥大學藥學院標本館。3水提液制備皮寒藥干燥全草12kg，切成小段，水煎3次(藥材10倍量水丨次，30min /次)，合并煎液，濃縮至30し4こ酸こ酯部位的提取水提液分次(每次2000ml)置于分液漏斗(5000ml)中，用こ酸こ酯2000ml/次萃取數(shù)次，合并こ酸こ酯萃取液，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，減壓回收溶劑至浸膏狀，轉(zhuǎn)移至已恒重的蒸發(fā)皿中，再置減壓干燥器中(50°C)烘至干粉狀，稱重得こ酸こ酯部位干粉重64. lg。干粉低溫保存，待柱層析分離使用。其提取流程見圖I。5こ酸こ酯部位的分離過程こ酸こ酯部位(64. Ig)，以硅膠柱層析初歩分離，2500g(200_300目)硅膠裝柱(直徑10cm，長度80cm)，依次用ニ氯甲烷-甲醇(I :0，20:1，15:1，10:1，7:1)梯度洗脫，收集洗脫液，共收集流分169份，其中，ニ氯甲烷-甲醇I :0為1-49份、ニ氯甲烷-甲醇20:1為50-97份、ニ氯甲烷-甲醇15:1為98-159份、ニ氯甲烷-甲醇7:1為160-169份，每份為500ml，通過TLC檢測合并相同流分，共得以下流分；(I)收集50-84號流分(18. 4g)，薄層硅膠G拌樣后，經(jīng)過反復硅膠常壓柱(直徑
2.5cm,長度35cm，薄層硅膠G)快速層析，石油醚-丙酮6 :1進行洗脫，收集洗脫液，再經(jīng)葡聚糖凝膠柱Sephadex 6-25(50 一 100目)2. 6*80cm層析，以甲醇沖洗,姆5ml收集ー份,共收集25份，合并3-7號流分，回收溶劑后，以甲醇重結(jié)晶，即得化合物IV(12mg);合并10-21號流分，回收溶劑后，以甲醇重結(jié)晶，即得化合物V (20. 4mg)；(2)收集85-90號流分(4. 9g)，薄層硅膠G拌樣后，經(jīng)過反復硅膠常壓柱(直徑I. 5cm，長度25cm，薄層硅膠G)快速層析，依次用ニ氯甲烷-甲醇20 : I、16 :1進行梯度洗脫，收集16 1洗脫液，回收溶劑、結(jié)晶后過濾，濾得固體物經(jīng)こ酸こ酯純化得到化合物珊(25mg)。(3)收集111-128號流分(6. 3g)，薄層硅膠G拌樣后，經(jīng)過硅膠常壓柱(直徑2cm，長度25cm，薄層硅膠G)快速層析，依次用ニ氯甲烷-甲醇12 :1、10 :1進行梯度洗脫，合并10 1洗脫液,過濾,濾液經(jīng)葡聚糖凝膠柱Sephadex G-25 (50 — 100目)2. 6*60cm層析，甲醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，甲醇重結(jié)晶，得到化合物IX(15mg)。(4)收集150-169號流分(6. 7g)，薄層硅膠G拌樣后，經(jīng)過硅膠常壓柱(直徑
I.5cm,長度20cm，薄層硅膠G)快速層析，ニ氯甲烷-甲醇10 :1進行洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，經(jīng)こ酸こ酯重結(jié)晶后得到化合物X (20mg)。其分離純化過程見圖2。2. 6化合物的結(jié)構鑒定 通過系統(tǒng)溶劑法及多種色譜技術的應用，從皮寒藥全草的こ酸こ酯部位分離得到5個化合物。經(jīng)理化常數(shù)測定和光譜分析，暫鑒定出5個化合物的結(jié)構。
化合物IV白色針晶(甲醇)，mpl95 197°C ； M +210° (c 0. 10，甲醇)。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應呈陽性。IH NMR: 8 :3.56(lH，m，H-3)，3.63 (3H, s, 0CH3-4/ ),3. 78(1H, t, J=IO. 26Hz, H-2a)，4. 29 (1H, dd, J=IO. 98，5. 16Hz, H_2a)，5. 62 (1H, d, J=7. 02Hz,H-4),6. 37 (1H, d, J=2. 4Hz，H_8)，6. 56 (1H, dd, J=2. 22, 8. 04Hz, H-5 ' ),6.67 (1H, d,J=2. 22Hz，H-3' ),6.86 (1H，d，J=2. 22Hz，H_8)，6. 94 (1H, dd, J=8. 10, 2. 58Hz, H-6), 7. 20(1H, d, J=8. 40Hz, H-6 ' )，7. 58 (1H, d, J=8. 40Hz, H_5)。13C NMR 8 162. 6 (C_4 ')，8 162. 4 (C-2 ' ), 8 161. 5 (C_7), 8 158. 4 (C_9), 8 133. 8 (C-5), 8 126. 3 (C-，6'),8 121. 0 (C-廣)，8 112. 9 (C-10), 8 111. 9 (C-6), 8 107. 5 (C-5 ' ), 8 105. 2 (C_8),8 98. 2 (C-3, )，8 80. 2 (C_4)，8 67. 7 (C-2), 8 41. 0 (C-3) , 8 56. 3 (C-0CH3)。通過HSQC、HHCOSY、DEPT譜對其核磁數(shù)據(jù)進行了準確歸屬，鑒定為7，2' -dihydroxy-4' -methoxy-isoflavanol (7,2' -ニ輕基-4' _甲基-異黃酮)。其結(jié)構見式I。經(jīng)測定，該化合物的純度為98. 10%。
5 0H ^OCH3式I化合物IV的結(jié)構化合物V無色針晶(甲醇、吡啶);FeC13顯色反應呈陽性，紫外燈(254nm)下為紫紅色暗斑，mpl80 181°C [23]；1H NMR: 8 7. 53 (1H, d, J=8. 82Hz, H-l), 6. 90 (1H, dd, J=8. 46, 2
16Hz, H-2)，6. 84 (1H, s, H_7) ; 8 6. 83 (1H, d, J=2. 22Hz, H_4)，6. 64 (1H, s, H-10), 5. 91 (1H, d，J=L 14Hz, -0CH20-aH) ; 5. 88 (1H, d, J=L 14Hz, -0CH20_bH)，5. 57 (1H, d, J=7. 32Hz, H-I la, 4
25 (1H, dd, J=Il. 04，4. 74Hz, H-6 ^ ), 3. 77 (1H, t, J=IO. 62Hz, H-6 a ), 3. 48 (1H, m, H_6a) 13C NMR: 8 40. 5 (C_6a)，66. 5 (C-6)，79. 0 (C_l la)，93. 7 (C-10), 101. 5 (-0CH2-0)，104. 0 (C_4)
，105. 3 (C-7) ,110.7 (C-2), 111. 8 (C-Ilb), 118. 7 (C_6b), 132. 5 (C-I), 141. 9 (C_8)，148. 3 (C-9)，154. 7 (C-IOa), 157. 3(C_4a), 160. 4 (C-3) MS: m/z 307 [M+Na], m/z :285 [M+H]。根據(jù) IHNMR和13C NMR信號推測該化合物為已知化合物，即高麗槐素(馬卡因，maackiain)。其結(jié)構見式2。經(jīng)測定，該化合物的純度為99. 95%。
的すH I 82S^a^pY°\式2化合物V的結(jié)構化合物IX白色針狀結(jié)晶(甲醇)，易溶于甲醇，mp217 219°C IH NMR: 8 8. 42(1H, s, H-2)，8. 04 (1H, d, J=8. 76Hz, H-5)，7. 52 (2H, d, J=8. 40Hz, H-2'，6' ), 7. 23 (1H, s, H_8)，7. 13 (1H, d, J=8. 82Hz, H-6)，6. 98 (2H, d, J=8. 40Hz, H_3' ,5' ), 5. 09 (1H, d, J=6. 96Hz, glcH-l" ), 3. 30 (3H, s, OCH3). S 4. 5 5. 5:糖上-OH，S 3 4 糖上-H。13C NMR : S 175. 1(C_4)，8 161. 9 (C-7), 8 159. 5 (C—4, ), 8 157. 5 (C_9), 8 154. I (C-2), 8 130. 5 (C-2' ,6'),8 127. 4 (C-5), 8 124. 5 (C_l ' )，8 123. 9 (C-3), 8 119. O (C-10), 8 116. I (C-6),8 114. I (C-3' 5' ), 8 103. 9 (C_8), 8 100. 5 (C-l"), 8 77. 7 (C_3"), 8 77. O (C_5"),8 73. 6 (C-2")，8 70. I (C_4")，8 61. I (C_6")，8 55. 6 (C-0CH3)。IH NMR 和 13C NMR數(shù)據(jù)均與4 '-甲氧基異黃酮-7-0-0 -D-葡萄糖苷，即芒柄花素-7-0-0 -D-葡萄糖苷(formononetin-7-0- ^ -D-glucoside)基本一致。其結(jié)構見式3。經(jīng)測定,該化合物的純度為 98. 92%。
權利要求
1.7，2' -ニ羥基-4'-甲基-異黃酮的分離純化方法，其特征在干它包括如下操作步驟 (1)取皮寒藥，加水提取，水提液濃縮后，用こ酸こ酯萃取，取こ酸こ酯萃取層，回收溶劑后，得皮寒藥こ酸こ酯部位； (2)取皮寒藥こ酸こ酯部位，上硅膠柱，采用梯度洗脫方式，用ニ氯甲烷-甲醇=1:OV/V洗脫除雜后，再用ニ氯甲烷-甲醇=20: 1V/V洗脫，收集洗脫液48份，每份均為1/4柱體積，即得A1-48號流分； (3)合并A1-35號流分，濃縮后，上硅膠柱，用石油醚-丙酮=6: 1V/V洗脫，收集洗脫液，再經(jīng)葡聚糖柱層析，甲醇沖洗，共收集洗脫液25份，每份均為1/85柱體積，即得B1-25號流分； (4)取B3-7號流分，回收溶劑后，以甲醇重結(jié)晶，得到7，2'-ニ羥基-4'-甲基-異黃酮。
2.根據(jù)權利要求I所述的分離純化方法，其特征在于步驟(2)所述硅膠柱為柱層析硅膠柱，其中，硅膠為200-300目； 步驟(3)所述的娃膠柱為薄層娃膠G柱,葡聚糖柱為Sephadex G_25柱。
3.根據(jù)權利要求2所述的分離純化方法，其特征在于步驟(2)所述硅膠柱的徑高比為.1:7-9； 步驟(3)所述的硅膠柱的徑高比為1:13-15，葡聚糖柱的徑高比為I :28-32。
4.高麗槐素的分離純化方法，其特征在于它包括如下操作步驟 取權利要求I制備的B1-25號流分，合并B10-21號流分，回收溶劑后，以甲醇重結(jié)晶，得到高麗槐素。
5.芒柄花素的分離純化方法，其特征在于它包括如下操作步驟 取權利要求I制備的A1-48號流分，合并A36-41號流分，濃縮后，上硅膠柱，用ニ氯甲烷-甲醇=20 1V/V洗脫除雜后，再用ニ氯甲烷-甲醇=16 1V/V進行洗脫，收集洗脫液，回收溶劑、結(jié)晶后過濾，濾得固體物經(jīng)こ酸こ酯純化，得到芒柄花素。
6.根據(jù)權利要求5所述的芒柄花素的分離純化方法，其特征在于所述硅膠柱為薄層硅膠G柱，其徑高比為1:15-18。
7.芒柄花素-7-0-P-D-葡萄糖苷的分離純化方法，其特征在于它包括如下操作步驟 A、取皮寒藥，加水提取，水提液濃縮后，用こ酸こ酯萃取，取こ酸こ酯萃取層，回收溶劑后，得皮寒藥こ酸こ酯部位； B、取皮寒藥こ酸こ酯部位，上硅膠柱，采用梯度洗脫方式，先用ニ氯甲烷-甲醇=1:OV/V洗脫除雜后，先用12倍柱體積的ニ氯甲烷-甲醇=20:1V/V洗脫，再用ニ氯甲烷-甲醇=15:1V/V洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇=15:1的洗脫液62份，每份均為1/4柱體積，即得C1-62號流分； C、取C14-31號流分，濃縮后，上硅膠柱，用ニ氯甲烷-甲醇121V/V洗脫除雜后，再用.10 :1V/V進行洗脫，收集洗脫液，過濾，濾液經(jīng)葡聚糖柱層析，甲醇沖洗，收集甲醇洗脫液，回收溶劑后，甲醇重結(jié)晶，得到芒柄花素-7-0-0 -D-葡萄糖苷。
8.根據(jù)權利要求7所述的芒柄花素-7-0-0-D-葡萄糖苷的分離純化方法，其特征在干步驟B所述硅膠柱為柱層析硅膠柱，徑高比為1:7-9，其中，硅膠為200-300目； 步驟C所述的硅膠柱為薄層硅膠G柱，徑高比為1:12-14 ;葡聚糖柱為S^hadex G-25柱，徑高比為I :22-24。
9.腺苷的分離純化方法，其特征在于它包括如下操作步驟 ①、取皮寒藥，加水提取，水提液濃縮后，用こ酸こ酯萃取，取こ酸こ酯萃取層，回收溶劑后，得皮寒藥こ酸こ酯部位； ②、取皮寒藥こ酸こ酯部位，上硅膠柱，采用梯度洗脫方式，用ニ氯甲烷-甲醇=1:0V/V洗脫除雜后，先用12倍柱體積的ニ氯甲烷-甲醇=20:1V/V洗脫，再用ニ氯甲烷-甲醇=15:1V/V洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇=15:1的洗脫液62份，每份均為1/4柱體積，即得C1-62號流分；再用ニ氯甲烷-甲醇=7: 1V/V洗脫，收集洗脫液10份，每份均為1/4柱體積，即得D1-10號流分； ③、合并C53-62號流分、D1-10號流分，濃縮后，上硅膠柱，用ニ氯甲烷-甲醇=101V/V洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，經(jīng)こ酸こ酯重結(jié)晶，得到腺苷。
10.根據(jù)權利要求9所述的腺苷的分離純化方法，其特征在于步驟②所述硅膠柱為柱層析硅膠柱，徑高比為1:7-9，其中，硅膠為200-300目； 步驟③所述硅膠柱為薄層硅膠G柱，徑高比為I :12-14。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離純化7，2′-二羥基-4′-甲基-異黃酮、芒柄花素、高麗槐素等5種化合物的方法。本發(fā)明首次從皮寒藥中分離出了7，2′-二羥基-4′-甲基-異黃酮、高麗槐素、芒柄花素、芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷和腺苷5種化合物，所得化合物純度均在98%以上，且本發(fā)明方法以價格低廉的皮寒藥為原料，可大幅降低原料成本，為上述5種化合物提供了新的提取來源，也為各種化合物標準品的制備提供了新方法。
文檔編號C07H17/07GK102643258SQ20121015090
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月16日 優(yōu)先權日2011年5月16日
發(fā)明者于忠強, 蘭群, 宋嵐, 彭騰, 楊莎, 蔣桂華, 趙芙蓉, 鄧晶晶, 陳佳妮, 陳孝雨 申請人:成都中醫(yī)藥大學