雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽，其制備，抗腫瘤作用和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽，式中的RCO為1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?，β-咔啉-3-甲酰基，1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?，異喹啉-3-甲酰基，1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?，1-甲基-β-咔啉-3-甲?；?，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲?；_(kāi)了它們的制備方法，公開(kāi)了它們體外抗腫瘤細(xì)胞增殖活性，進(jìn)一步公開(kāi)了它們抑制S180瘤小鼠體內(nèi)瘤體增重的活性，闡明了它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。RCO-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr--?I。
【專(zhuān)利說(shuō)明】雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽，其制備，抗腫瘤作用和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽(式中的RCO為1，2，3，4_四氫-β-咔啉-3-甲酰基，β-咔啉-3-甲酰基，1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?，異喹啉-3-甲?；?-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?-甲基-β-咔啉-3-甲?；?，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲?；?，涉及它們的制備方法，涉及它們的體外抗腫瘤細(xì)胞增殖活性，進(jìn)一步涉及它們抑制S180瘤小鼠體內(nèi)瘤體增重的活性，闡明了它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
[0002]RCO-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr I
【背景技術(shù)】
[0003]惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)病，人類(lèi)因惡性腫瘤而引起的死亡率在所有疾病死亡率中居第二位，僅次于心腦血管疾病。腫瘤的治療方法有手術(shù)治療、放射治療和藥物治療(化學(xué)治療)。目前，化學(xué)治療仍然是臨床治療腫瘤的主要手段。針對(duì)臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物療效不理想和毒性大的缺陷，許多研究興趣都轉(zhuǎn)向了尋找療效好毒性低的抗腫瘤新藥。最近，抗腫瘤藥物的丌發(fā)已經(jīng)從常規(guī)的細(xì)胞毒性化療劑轉(zhuǎn)至更基于機(jī)理的靶向阻止腫瘤生長(zhǎng)。把血栓形成和腫瘤發(fā)生相聯(lián)系是其中的目標(biāo)之一。
[0004]在長(zhǎng)期的雜環(huán)藥物研究中，發(fā)明人認(rèn)識(shí)到有一類(lèi)雜環(huán)羧酸，例如1，2，3，4_四氫-β-咔啉-3-羧酸，1，2，3，4_四氫-異喹啉-3-羧酸，4，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4,5-C]吡啶-6-羧酸，β -咔啉-3-羧酸，異喹啉-3-羧酸和1-甲基-β -咔啉-3-羧酸，不僅能夠把抑制血栓形成和抑制腫瘤發(fā)生兩種活性集中于一體。發(fā)明人了解,腫瘤患者大都并發(fā)血栓性疾病。集抑制血栓形成和抑制腫瘤發(fā)生于一體的雜環(huán)羧酸是臨床治療期待的化合物。胸腺五肽具有雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能，能夠?qū)π叵?、集體免疫功能低下和自身免疫病具有良好的調(diào)節(jié)作用。發(fā)明人了解 ，提高腫瘤患者的免疫功能是近年來(lái)廣泛應(yīng)用于腫瘤治療的輔助手段。用集抑制血栓形成和抑制腫瘤發(fā)生于一體的雜環(huán)羧酸修飾胸腺五肽，可以獲得優(yōu)秀的抗腫瘤劑。根據(jù)這些認(rèn)識(shí)，提出了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的第一個(gè)內(nèi)容是提供通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽，式中的RCO為1，2，3，4_四氫-β-咔啉-3-甲酰基，β-咔啉-3-甲?；琁，2，3，4-四氫異喹啉_3_甲?；愢?3-甲?；?，1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?-甲基-β-咔啉-3-甲酰基和4，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲酰基。
[0006]RCO-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr I
[0007]本發(fā)明的第二個(gè)內(nèi)容是提供制備通式I的雜環(huán)羧酸修飾的抗腫瘤寡肽的方法，該方法包括:
[0008](I)將L-色氨酸在稀硫酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合，得到3S_1，
2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸；[0009](2)將3S-1，2，3，4_四氫-β-咔啉-3-羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到2-Boc-l, 2, 3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸；
[0010](3)將3S-1, 2,3,4-四氫昨琳-3-竣酸在二氣亞諷和甲醇中反應(yīng)得到I，2,
3.4-四氫-β-咔啉羧酸甲酯；
[0011](4)將3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉羧酸甲酯在冰浴下丙酮作溶劑，用KMnO4氧化得到咔啉羧酸甲酯；
[0012](5)將β -咔啉羧酸甲酯在2Ν NaOH水溶液中脫去甲酯保護(hù)基，得到β -咔啉羧酸；
[0013](6)將L-苯丙氨酸在濃鹽酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合，得到3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸；
[0014](7)將3S-1，2，3，4-四氫異喹啉_3_羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉_3_羧酸；
[0015](8)將3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸在二氯亞砜和甲醇中反應(yīng)得到3S-1，2，
3.4-四氫異喹啉-3-羧酸甲酯；
[0016](9)將3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸甲酯在冰浴下DMF作溶劑，用KMnO4氧化得到異喹啉-3-羧酸甲酯；
[0017](10)將異喹啉-3-羧酸甲酯在2N NaOH水溶液中脫去甲酯保護(hù)基，得到異喹啉-3-羧酸；
[0018](11)將L-色氨酸在稀硫酸催化下與乙醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合，得到(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β_咔啉-3-羧酸；
[0019](12)將(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到(IS, 3S) -2-Boc-l-甲基-1,2,3,4-四氫昨琳-3-竣酸；
[0020](13)將(1S，3S)-1-甲基_1，2，3，4_四氫-β -咔啉_3_羧酸在二氯亞砜和甲醇中反應(yīng)得到(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯；
[0021](14)將(1S，3S)-1_甲基_1，2，3，4_四氫-β -咔啉_3_羧酸甲酯在冰浴下丙酮作溶劑，用KMnO4氧化得到(1S，3S)-1-甲基-β -咔啉_3_羧酸甲酯；
[0022](15)將(1S，3S)-1_甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯在2Ν NaOH水溶液中脫去甲酯保護(hù)基，得到1-甲基-β -咔啉-3-羧酸；
[0023](16)將L-組氨酸在稀硫酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合，得到6S-4，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4，5-C]吡啶-6-羧酸；
[0024](17)將6S-4，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4，5_C]吡啶_6_羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-羧酸；
[0025](18)以保護(hù)的Asp, Val和Tyr為原料,通過(guò)液相多肽合成從N端向C端逐步接肽，得到 Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0026](19)將 Boc-Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在冰浴下用 4N HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到 Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0027](20)以保護(hù)的Arg和Lys為原料，通過(guò)液相多肽合成從N端向C端逐步接肽，得到Boc-Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0028](21)將 Boc-Arg-Lys (Z) -OBzl 在冰浴下用 4N HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0029](22)將 3S-Boc_l，2，3，4-四氫-β -咔啉 _3_ 羧酸與 Arg-Lys(Z)-OBzl 縮合得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0030](23)將 3S-2-Boc-l，2，3，4_ 四氫-β -咔啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl 在2Ν NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)；
[0031](24)3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫-β-咔啉 _3_ 甲酰基-Arg-Lys(Z)與Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0032](25)將 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl在冰浴下用4Ν HC1/EA脫除Boc保護(hù)基，得到3S_1，2，3，4_四氫-β -咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
[0033](26)將 3S-1，2，3，4_ 四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氧解和脫除保護(hù)基，得到化合物3S-1, 2, 3,4-四氧-β -咔琳-3-甲酉先基-Ar g-Lys-Asp- Val-Tyr ；
[0034](27)將β -咔啉-3-羧酸與Arg-Lys (Z) -OBzl縮合得到β -咔啉_3_甲酰-Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0035](28)將β -咔啉-3-甲酰-Arg-Lys (Z) -OBzl在2Ν NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基得到β -咔啉-3-甲酰-Arg-Lys (Z)；
[0036](29)將 β -咔啉-3-`甲酰-Arg-Lys (Z)與 Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合得到β -咔啉-3-甲酸-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
[0037](30) β -咔琳 _3_ 甲酸-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在 Pd/C 催化下氧解和脫除保護(hù)基，得到β -咔啉-3-甲酰-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ；
[0038](31)將 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫異喹啉 _3_ 羧酸與 Arg-Lys (Z)-OBzl 縮合得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0039](32)將 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-0Bzl在2N NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉_3_甲?；?Arg-Lys (Z)；
[0040](33)3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫異喹啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys(Z)與Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0041](34)將 3S-2-Boc-l，2，3,4-四氫異喹啉_3_ 甲?；?Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl在冰浴下用4N HC1/EA脫除Boc保護(hù)基，得到3S_1，2，3，4_四氫異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0042](35)3S-1，2，3，4-四氫異喹啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ；
[0043](36)異喹啉-3-羧酸與Arg-Lys(Z)-OBzl縮合得到異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0044](37)異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl在2N NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)；
[0045](31)異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)與 Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到異喹啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
[0046](32)異喧琳-3-甲酸基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl 在 Pd/C 催化下氧解和脫除保護(hù)基，得到異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ；
[0047](33) (1S，3S)-2-Boc-l-甲基 _1，2，3，4_ 四氫-β-咔啉 _3_ 羧酸與Arg-Lys(Z)-OBzl 縮合得到(1S,3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0048](34) (1S，3S)-2-Boc-l-甲基 _1，2，3，4_ 四氫-β-咔啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl在2NNa0H水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到(1S，3S) -2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)；
[0049](35) (1S，3S)-2-Boc-l-甲基 _1，2，3，4_ 四氫-β-咔啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys (Z)與 Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl 縮合，得到(1S，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
[0050](36)將(lS，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在冰浴下用 4N HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到(1S，3S)-1-甲基-1，2, 3,4_ 四氧-β -咔琳 _3_ 甲酸基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0051](37) (1S，3S)-1_ 甲基 _1，2，3，4_ 四氫 _β_ 咔啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys (Z)-Asp (0Βzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到(1S，3S)_1_甲基_1，2，3，4_四氧-β -咔琳-3-甲酸基-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ；
[0052](38) 1-甲基-β-咔啉-3-羧酸與Arg-Lys(Z)-OBzl縮合得到1_甲基-β-咔琳 _3_ 甲酸基-Arg-Lys (Z) -OBzl ；
[0053](39)1-甲基-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl在2Ν NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到1-甲基-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)；
[0054](40) 1-甲基-β -咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys(Z)與 Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 1_ 甲基-β _ 咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
[0055](41) 1-甲基-β -咔琳-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在 Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到1-甲基- β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ；
[0056](42)6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5_C]吡啶 6-羧酸與Arg-Lys(Z) -OBzl 縮合得到 6S-3，5-2Boc_4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4,5-C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ；
[0057](43)6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5_C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl在2NNa0H水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到6S-3，5-2Boc_4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z)；
[0058](44)65-3，5-280。-4，5，6，7-四氫-3!1-咪唑[4，5_C]吡啶 _6_ 甲?；?Arg-Lys (Z)與 Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 6S-3，5-2Boc_4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡P定-6-甲酸基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
[0059](46)將 6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4,5-C]吡啶-6-甲酰基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在冰浴下用 4N HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到 6S-4，5,6,7-四氫-3H-咪唑[4,5-C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
[0060](47)將 6S-4, 5，6，7_ 四氫 _3H_ 咪唑[4，5-C]吡啶 _6_ 甲?；?Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到6S-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4,5-C]批P定-6-甲酸基-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr。
[0061]本發(fā)明的第三個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽的體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
[0062]本發(fā)明的第四個(gè)內(nèi)容是評(píng)價(jià)通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽抑制荷S180腫瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)增作用。
[0063]本發(fā)明的第五個(gè)內(nèi)容是闡述通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽在制備抗腫瘤藥物中的用途。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0064]圖1 3S-1, 2, 3,4_ 四氧-β -咔琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOa)的合成路線(xiàn)圖.1)HCH0(甲醛VH2SO4(硫酸)；ii) (Boc)20( 二碳酸二叔丁酯)，DMF(二甲基甲酰胺)，TEA (三乙胺)；i i i) HOBt (N-羥基苯并三氮唑)/DCC (二環(huán)己基羰二亞胺)，NMM (N-甲基嗎啉);iv)2NNa0H;V)Pd/C(鈀碳)/H2;Vi)4N HCl/EtOAc (4N 鹽酸乙酸乙酯).[0065]圖2 3S-1, 2, 3,4_ 四氧-異喧琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOb)的合成路線(xiàn)圖.i)HCH0/H2S04 ；ii) (Boc)20，DMF，TEA ;iii)HOBt/DCC，NMM(N-甲基嗎啉)；iv) 2NNaOH ；v)Pd/C/H2 ；vi)4N HCl/EtOAc.[0066]圖3 (1S，3S)_1_ 甲基 _1，2，3，4_ 四氣—β —昨琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOc)的合成路線(xiàn)圖.i)HCH0/H2S04 ；ii) (Boc)20,DMF,TEA ；iii)H0Bt/DCC, NMM (N-甲基嗎啉)；iv) 2N NaOH ；v)Pd/C/H2 ；vi)4N HCl/EtOAc.[0067]圖4 β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys-Asp-Va`l-Tyr-OBzl (IOd)的合成路線(xiàn)圖.1)HCH0/H2S04 ；ii) CH3OH, SOCl2 ( 二氯亞砜);iii) acetone (丙酮)，KMnO4 (高錳酸鉀);iv) 4NNaOH ；v)HOBt/DCC, NMM ；vi)2N NaOH ；vii)Pd/C.[0068]圖5 異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOe)的合成路線(xiàn)圖.i)HCH0/H2SO4 ；ii) CH3OH, SOCl2 ( 二氯亞砜)；iii) acetone (丙酮)，KMnO4(高錳酸鉀)；iv) 4N NaOH ；V)HOBt/DCC, NMM ；vi)2N NaOH ；vii)Pd/C.[0069]圖6 1-甲基- β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOf)的合成路線(xiàn)圖.[0070]i)HCH0/H2S04 ；ii) CH3OH, SOCl2 (二氯亞砜);iii) acetone (丙酮)，KMnO4 (高錳酸鉀)；iv) 4N NaOH ；v) HOBt/DCC, NMM ；vi)2N NaOH ；vii)Pd/C.[0071]圖7 4，5，6，7-四氫 _3H_ 咪唑[4，5_C]吡啶 6_ 羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOg)的合成路線(xiàn)圖.i)HCH0/H2S04 ；ii) (Boc)20,DMF,TEA ；iii) HOBt/DCC, NMM (N-甲基嗎啉)；iv) 2N NaOH ；v)Pd/C/H2 ；vi)4N HCl/EtOAc.【具體實(shí)施方式】
[0072]為了進(jìn)-步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。[0073]實(shí)施例1 制備 Boc-Val-Tyr-OBzl (I)
[0074]將0.434g(2.0mmol) Boc-Val溶解在15mL無(wú)水THF中，并于冰浴下加入0.27g(2.0mmol) N-羥基苯并三唑(HOBt)和 0.45g(2.2mmol) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。攪拌5分鐘后加入0.886g(2.0mmoDTos.Tyr-OBzl的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用N-甲基嗎啉(NMM)調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌8小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的二環(huán)己基脲(DCT)。濾液減壓濃縮，殘留物溶于乙酸乙酯中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液、飽和5% KHSO4水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。乙酸乙酯層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 100: I)，得至Ij0.874g(90% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0075]實(shí)施例2 制備 HCl.Val-Tyr-OBzl (2)
[0076]將0.874g(l.79mmol)⑴溶解在IOmL氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末，直接用于下一步反應(yīng)。
[0077]實(shí)施例3 制備 Boc-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (3)
[0078]將0.578g(l.79mmol)Boc-Asp (OBzl)溶解在 15mL 無(wú)水 THF 中，冰浴下加入
0.240g(l.78mmol)H0Bt 和 0.401g(l.95mmol)DCC。攪拌 5 分鐘后加入 0.758g(l.79mmol)HCl.Val-Tyr-OBzl (2)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8-9,冰浴攪拌8小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于乙酸乙酯中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液、5 % KHSO4水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。乙酸乙酯層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4,濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 100: I )，得到1.004g(82% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0079]實(shí)施例4 制備 HCl-Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (4)
[0080]將1.004g (1.474mmo1) Boc-Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (3)溶解在 IOmL 氯化氫-乙酸乙酯(6mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末，直接用于下一步反應(yīng)。
[0081]實(shí)施例5 制備 Boc-Arg-Lys (Z)-OBzl (5)
[0082]將0.552g (3.0mmol) Boc-Arg溶解在20mL無(wú)水THF中，冰浴下加入
0.405g (3.0mmol) HOBt 和 0.675g (3.6mmol) DCC。攪拌 5 分鐘后加入 1.629g (3.0mmol)Tos -Lys(Z)-OBzl的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8_9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲燒層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: 1)，得到1.428g無(wú)色固體(73.8% ) ο
[0083]實(shí)施例6 制備 HCl.Arg-Lys (Z) -OBzl (6)
[0084]將1.29g (2.0mmol) Boc-Arg-Lys (Z)-OBzl (5)溶解在 15mL 氯化氫-乙酸乙酯(4mo I/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末，直接用于下一步反應(yīng)。[0085]實(shí)施例7 制備 3S-Boc_l，2，3，4-四氫-β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7a)
[0086]將0.695g(2.2mmol) 3S-Boc_l，2，3，4_ 四氫-β -咔啉 _3_ 羧酸溶解在 20mL 無(wú)水 THF 中，冰浴下加入 0.270g(2.0mmoDHOBt 和 0.490g(2.4mmol)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 1.116g(2.0mmoDHCl.Arg-Lys(Z) -OBzI (6)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用 NMM 調(diào)節(jié)PH 9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DOT。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到1.029g(62% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0087]實(shí)施例8 制備35-80(:-1，2，3，4-四氫-3-咔啉-3-羧酸4找-1^8(2)(8&)
[0088]將1.029g(l.25mmol) 3S-Boc-l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) -OBzl (7a)溶解在IOmL甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)pH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)化合物加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓蒸去全部甲醇，殘留物水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到0.914g(99% )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。
[0089]實(shí)施例9 制備 3S-Boc_l, 2, 3,4_ 四氫-β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl(9a)
[0090]將0.724g (1.0mmol) 3S-Boc_l, 2,3,4-四氫-β -咔琳-3-竣酸-Arg-Lys (Z) (8a)溶解在 20mL 無(wú)水 THF 中，冰浴下加入 0.135g(l.0mmol)HOBt 和 0.244g(l.2mmol)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 0.610g(l.0mmoDHCl.Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的ECU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.875g(68 % )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ES1-MS(m/e) 1293[M+H]+.1H-NmrGOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 10.878 (d,J = 5.3Hz, 1H) ,9.302 (s, 1H) ,8.470(m,2H) ,8.328 (s, 1H) ,8.043(m,2H) ,7.532 (d, J =2.8Hz, 1H), 7.207 (m，17H) ,7.107(m，4H)，6.664 (d，J = 2.8Hz，2H)，5.058 (m, 6H), 4.790 (m，1H) ,4.681 (m, 1H)，4.533 (m, 2H)，4.252 (m, 2H)，3.273 (m, 2H)，3.027 (m, 3H)，2.886 (m, 6H)，2.661 (m，lH) ,1.458-1.092 (m，19H)，0.729 (dd, J = 7.5Hz, J = 3.lHz,6H).[0091]實(shí)施例10 制備 3S-1, 2, 3,4_ 四氧-β -咔琳-3-竣酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl(IOa)
[0092]將0.100g (0.077mm01)3S-Boc-l，2，3，4-四氫-β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-AsP (OBzl) -Val-Tyr-OBzI (9a)溶解在20mL甲醇中，加入20mg Pd/C和2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C，減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水，調(diào)pH至7,經(jīng)Sephadex-GlO分離并冷凍干燥。得到0.042g(63% )標(biāo)題化合物,為無(wú)色固體。Mp 121-122V.[a]g = -20.00 (c = 0.01，甲醇).ES1-MS (m/e) 878 [M+H]+.lH-NMR(300MHz，DMS0-d6) δ /ppm = 10.820 (s, I H)，8.602 (m, I H) ,8.251 (m, 2H)，8.034 (m, 2H) ,7.710 (m,2H)，7.328 (m, 4H)，6.974 (m, 2H)，6.632 (m, 2H)，4.442 (m, I H)，4.223 (m, 2H)，4.029 (m, 2H)，3.664 (m, I H)，3.536 (m, I H)，3.087 (m, 4H)，2.760 (m, 4H)，1.658-1.082 (m, I OH)，0.767 (m,6H).[0093]實(shí)施例11 制備 3S-Boc-l，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7b)
[0094]將0.389g(2.2mm01) 3S-Boc_l，2，3，4_ 四氫-異喹啉_3_羧酸溶解在 20mL無(wú)水 THF中，冰浴下加入 0.270g(2.0mmOl) HOBt 和 0.490g(2.4mm01)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 1.116g (2.0mmOl) HCl ?Arg-Lys (Z) -OBzl (6)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH,20: 1)，得到1.026g(65% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0095]實(shí)施例12 制備 3S-1，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) (8b)
[0096]將1.026g(l.35mm01) 3S-Boc-l，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) -OBzl (7b)溶解在IOmL甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)pH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓濃縮除去全部甲醇，殘留水溶液繼 續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到
0.938g(98% )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。
[0097]實(shí)施例13 制備 3S-Boc_l, 2, 3,4_ 四氫-異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl(9b)
[0098]將0.695g (LOmmOl) 3S-1，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) (8b)溶解在20mL無(wú)水 THF 中，冰浴下加入 0.135g(l.0mmOl)HOBt 和 0.244g(l.2mm01)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 0.610g (1.0mmoDHCl *Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的ECU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.775g (61 % )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ES1-MS (m/e): 1254[M+H]+.1H-NmrGOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 9.309 (s, 1H), 8.470 (m, 2H), 8.120 (m,1H)，7.907 (m, 1H)，7.773 (m, 1H)，7.576 (m, 2H) ,7.315 (m, 12H)，7.196 (m, 7H)，6.960 (d, J =
2.8Hz,2H)，6.640 (d, J = 2.8Hz,2H)，5.056 (m, 6H)，4.698 (m, 1H)，4.562 (m, 1H)，4.253 (m,3H)，3.153(m，9H)，2.662 (m，1Η)，1.585-1.092 (m，19H)，0.729 (dd, J = 7.5Hz, J = 3.1Hz，6H).[0099]實(shí)施例14 制備 3S-1, 2, 3,4_ 四氧-異喧琳-3-竣酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzI(IOb)
[0100]將0.1OOg (0.080mmol) 3S-Boc_l, 2, 3,4-四氧-異喧琳-3-竣酸-Arg-Lys (Z) -Asp(OBzl) -Val-Tyr-OBzl (9b)溶解在20mL甲醇中，加入20mg Pd/C和2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C，減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水，調(diào)pH至7,經(jīng)Sephadex-GlO分離開(kāi)冷凍干燥。得到0.048g(72% )標(biāo)題化合物,為無(wú)色固體。Mp 124-125 0C.[ag = -47.78 (c = 0.01，甲醇).ES1-MS (m/e) 840 [M+H]+.1H-NMR(300MHz,DMS0-d6) δ /ppm = 8.295 (s, I H)，7.905-7.201 (m, 4H)，7.040 (m, 4H)，6.739 (m, 2H)，
4.936 (m, 6H)，3.952 (m, I H) ,3.179 (m, 1H)，2.998 (m, 4H)，2.943 (m, I H)，2.920 (m, 2H)，
2.878 (m, 1H)，2.744 (m, 1H)，2.256 (s, 1H)，1.867-1.091 (m, I OH)，0.746 (dd, J = 7.5Hz, J =
3.1Ηζ,6Η).[0101]實(shí)施例15 制備(IS, 3S) -2-Boc-l-甲基-1, 2, 3,4_ 四氧-β _ 昨琳 _3-竣酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7c)
[0102]將0.506g(2.2mmol) (1S，3S)-2-Boc-l-甲基 _1，2，3，4_ 四氫-β-咔啉 _3_ 羧酸溶解在 20mL 無(wú)水 THF 中，冰浴下加入 0.270g (2.0mmol) HOBt 和 0.490g (2.4mmol) DCC。攪拌30分鐘后加入1.116g(2.0mmoDHCl.Arg-Lys(Z)-OBzI (6)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的ECU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到1.18g(70% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0103]實(shí)施例16 制備(IS, 3S) -2-Boc-l-甲基-1, 2, 3,4_ 四氧-β _ 昨琳 _3-竣酸-Arg-Lys(Z)(8c)
[0104]將1.178g (1.4ImmoI) (IS, 3S) —2—Boc-1-甲基 _1，2，3，4- 四氣 _ β _ 昨琳—3—竣酸-Arg-Lys (Z) -OBzl (7c)溶解在IOmL甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)PH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓蒸餾除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次， 無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到
1.046g(99% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0105]實(shí)施例17 制備(lS，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸-Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9c)
[0106]將0.773g(l.0mmol) (lS，3S)-2-Boc-卜甲基 _1，2，3，4_ 四氫-β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) (8c)溶解在2OmL無(wú)水THF中，冰浴下加入0.135g (1.0mmol)HOBt 和 0.244g(l.2mmol)DCC。 攪拌 30 分鐘后加入 0.610g (1.0mmol)HCl.Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzI (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用 NMM 調(diào)節(jié) pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到 0.824g (68 % )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ES1-MS (m/e) 1307 [M+H]+.1H-NmrGOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 9.309 (s, 1H), 8.470 (m, 2H), 8.120 (m,I H)，7.907 (m, 1H)，7.773 (m, I H)，7.576 (m, 2H)，7.342 (m, 15H) ,7.161 (m, 4H)，6.960 (d,J = 2.8Hz,2H) ,6.638 (d, J = 2.8Hz，2H)，5.056 (m，6H)，4.698 (m，1H)，4.438 (m，1H)，
4.260 (m, 3H)，3.184 (m, I Η)，3.168 (m, I Η)，2.949 (m, 2Η)，2.839 (m, 5Η)，2.662 (m, I H)，
1.585-1.092 (m，19Η)，0.729 (dd, J = 7.5Hz, J = 3.1Ηζ，6Η).[0107]實(shí)施例18制備(1S，3S)-1_ 甲基-1，2，3，4_ 四氫-β-咔啉-3-羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl(IOc)
[0108]將0.1OOg(0.077mmol) (1S，3S)-2-Boc-l-甲基 _1，2，3，4_ 四氫咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9c)溶解在 2OmL 甲醇中，加入 20mg Pd/C 和 2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C.減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水，調(diào)PH至7，經(jīng)S-hadex-GlO分離并冷凍干燥。得到0.056g(63% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。Mp 123-124 0C.[α￡ = -89.0 (c = 0.01,甲醇).ES1-MS (m/e) 893 [M+H] +.1H-NMR (300MHz，DMS0-d6) δ /ppm = 8.929 (m, 1H) ,8.500 (m, 1H) ,8.442，(m,1H)，8.128 (m，1Η)，8.110 (m, 1Η)，7.642 (m，2Η)，7.340 (m，4Η)，6.950 (m，2Η)，6.588 (m, 2Η)，4.326 (m, 2Η)，4.028 (m, 3Η)，3.536 (m, 2Η) ,3.170 (m, 3Η)，3.206 (m, 2Η)，2.898 (m, 4Η)，
2.734 (m, 3Η)，1.853 (m, 3Η)，1.689-1.090 (m, 10Η)，0.852 (m, 6Η)。
[0109]實(shí)施例19 制備 β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) -OBzl (7d)
[0110]將0.424g (2.2mmol) β -咔啉_3_羧酸溶解在20mL無(wú)水THF中，冰浴下加入
0.270g(2.0mmoDHOBt 和 0.490g(2.4mmol)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 1.116g(2.0mmol)HCl.Arg-Lys (Z) -OBzl (6)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8_9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I),得到0.838g(58% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0111]實(shí)施例20 制備 β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z) (8d)
[0112]將0.838g(l.1 Bmmol) β -咔琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7d)溶解在 IOmL 甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)pH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓蒸餾除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到0.728g(98% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0113]實(shí)施例21 制備 β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9d)
[0114]將0.720g(l.0mmol) β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z) (8d)溶解在 20mL 無(wú)水 THF中，冰浴下加入0.135g (1.0mmol) HOBt和0.244g (1.2mmol) DCC。攪拌30分鐘后加入
0.610g(l.0mmoDHCl.Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用 NMM調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4,濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.671g(57% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI_MS(m/e) 1188 [M+H] +.1H-NMR(300MHz，DMS0_d6) δ /ppm = 8.689 (s, 1H) ,8.462 (m, 2H)，8.335 (m,I Η) 7.824 (m, 2Η)，7.579 (m, 1Η)，7.759 (m, 2Η)，7.340 (m, 19Η)，6.983 (m, 2Η)，6.647 (m, 2Η)，
5.074 (m, 6Η)，4.699 (m, 2Η) ,4.419 (m, I H) ,4.241 (m, 2Η)，3.642 (m, I H)，3.542 (m, I H)，
3.416 (m，1Η)，3.371 (m, 1Η)，3.160(m，2H)，2.893(m，6H)，1.656-1.068 (m，10Η)，0.726 (m，6Η)。[0115]實(shí)施例22 制備 β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOd)
[0116]將0.1OOg (0.084mmo1) β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzI (9d)溶解在20mL甲醇中，加入20mg Pd/C和2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C，減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水,調(diào)pH至7,經(jīng)Sephadex-GlO分離并冷凍干燥。得到0.046g(53%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。Mp 143-1440C.[ag =-21.3(c = 0.1，甲醇).ES1-MS (m/e) 875 [M+H]+.1H-NMR(300MHz，DMS0_d6) δ /ppm = 10.916 (s，1Η)，10.155 (m, I H) , 8.969 (m, 1Η), 8.699 (m, I H), 8.489 (s, 2Η) , 8.065 (m, 1Η)，7.663 (m,I H)，7.364 (m, 3Η)，7.642 (m, 4Η)，6.950 (m, 2Η)，6.588 (m, 2Η)，4.546 (m, 1Η) ,4.201 (m, 1Η)，4.006 (m, 3Η), 3.762 (m, 3Η) , 3.136 (m, 3Η) ,2.915 (m, 3Η) , 2.697 (m, 1Η), 1.714-1.237 (m,10Η) ,0.728 (m, 6Η)。
[0117]實(shí)施例23 制備異喹啉-3-羧酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7e)
[0118]將0.346g(2.2mmol)異喹啉_3_羧酸溶解在20mL無(wú)水THF中，O °C下加入
0.270g(2.0mmoDN-羥基苯并三唑(HOBt)和 0.490g(2.4mmol) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。攪拌30分鐘后加入1.116g(2.0mmoDHCl -Arg-Lys (Z)-OBzl (6)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用N-甲基嗎啉(NMM)調(diào)節(jié)pH 8-9，0°C攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的二環(huán)己基脲(DCU)。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液和飽和NaCl水溶液洗。二氯甲燒層用無(wú)水NaS04干燥2小時(shí)。濾除NaS04,濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.822g(60% )目標(biāo)化合物。
[0119]實(shí)施例24制備異喹啉-3-羧酸Arg-Lys (Z) (8e)
[0120]將0.822g (1.21mmol)異喧琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7e)溶解在 10mT,甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)pH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓濃縮除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到0.702g(98% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0121]實(shí)施例25 制備異喧琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9e)
[0122]將0.591g(l.0mmol)制備異喹啉 _3_ 羧酸 Arg-Lys (Z) (8e)溶解在 20mL 無(wú)水THF 中，冰浴下加入 0.135g(l.0mmoDHOBt 和 0.244g(l.2mmol)DCC。攪拌 30 分鐘后加入
0.610g(l.0mmoDHCl.Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用 NMM調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4,濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.639g(56% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ES1-MS (m/e) 1150 [M+H]+.1H-NmrGOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 9.400 (s，1H)，9.232 (m，1H)，8.912 (m，1H)，8.579 (s，1Η)8.527 (m，1H)，8.451 (m, 1H)，8.271 (m, 1Η)，8.147 (m，1Η)，7.890 (m, 2Η)，
7.654 (m, I H)，7.498-7.009 (m, 19Η)，6.987 (m, 2Η)，6.630 (m, 2Η)，5.070 (m, 6Η) ,4.714 (m,2Η)，4.424 (m, I H)，4.226 (m, 2Η)，3.577 (m, I H)，2.954 (m, 2Η)，2.874-2.605 (m, 5Η)，2.630 (m，1H)，1.886-1.096 (m，10H) ,0.726 (dd, J = 7.5Hz, J = 3.lHz，6H).[0123]實(shí)施例26 制備異喧琳-3-竣酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOe)
[0124]將0.1OOg (0.086mmol)異喹啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9e)溶解在20mL甲醇中，加入20mg Pd/C和2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C，減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水，調(diào)pH至7,經(jīng)Sephadex-GlO分離并冷凍干燥。得到0.042g(50% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。Mp:146-147°C.[ag --47.8 (c = 0.1，甲醇).ES1-MS (m/e) 835 [M+H]+.1H-NMR(300MHz，DMS0_d6) δ /ppm = 9.411 (s，1H)，9.248 (m, 1H)，8.578 (s, 2H) 8.495 (m, 1H) ,8.181 (m, 3H)，7.829 (m, 4H)，7.342-7.219 (m,4H)，7.024 (m，1H)，6.649 (m，2H)，4.710 (m，1H)，4.497 (m，1H)，4.210(m，3H)，3.589 (m, 2H)，
3.139 (m, 3H)，2.944 (m, 4H)，2.600 (m, 1H)，1.857-1.111 (m，I OH) ,0.781 (m, 6H)。.[0125]實(shí)施例27 制備 1-甲基- β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys(Z)-OBzl (7f)
[0126]將0.497g (2.2mmol) 1-甲基-β -咔啉-3-羧酸溶解在20m無(wú)水THF中，冰浴下加入 0.270g(2.0mmoDHOBt 和 0.490g(2.4mmol)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 1.116g(2.0mmol)HCl.Arg-Lys (Z) -OBzl (6)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8_9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I),得到0.775g(53% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0127]實(shí)施例28制備1-甲基- β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys(Z) (8f)
[0128]將0.775g(1.05mmol)l-甲基-β -`咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-OBzl (7f)溶解在IOmL甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)pH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓蒸餾除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到0.674(98% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0129]實(shí)施例29 制備 1-甲基-β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9f)
[0130]將0.644g (1.0mmol) 1-甲基-β -咔琳 _3_ 竣酸-Arg-Lys (Z) (8f)溶解在 20m 無(wú)水THF中，冰浴下加入0.135g (1.0mmol) HOBt和0.244g (1.2mmol) DCC。攪拌30分鐘后加入
0.610g(l.0mmoDHCl.Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用 NMM調(diào)節(jié)PH8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4,濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.707g(59% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ES1-MS (m/e) 1202 [M+H]+.1H-NmrGOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 9.500 (s，1H)，8.931 (m，1H)，8.509 (m，2H) 8.141 (m, 1H) ,8.031 (m, 1H)，7.853 (m, I Η)，7.660 (m, I Η)，7.573 (m, I H) 7.345-7.107 (m,19Η)，6.987 (m, 2Η)，6.630 (m, 2Η)，5.066-4.972 (m, 6Η)，4.672 (m, I H)，4.412 (m，1Η)，4.063(m,3H) ,3.555 (m, 1H) ,3.141-2.732(m,9H) ,2.627 (m, 1H)，1.911-1.092 (m, 10H)，
0.726 (m, 6H)。
[0131]實(shí)施例30 制備 1-甲基- β -咔啉-3-羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl (IOf)
[0132]將0.1OOg (0.083mmol) 1-甲基-β -咔啉 _3_ 羧酸-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl(9f)
[0133]溶解在20mL甲醇中，加入20mg Pd/C和2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C，減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水，調(diào)PH至7,經(jīng)Sephadex-GlO分離并冷凍干燥。得到0.044g(49 % )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。Mp 141-143 0C.[ag = -47.7 (c = 0.1，甲醇).ES1-MS (m/e) 888 [M+H]+.1H-NMR(300MHz,DMS0-d6) δ /ppm = 8.929 (m, I H)，8.500 (m, 2H)，7.642-7.128 (m, 6H)，6.986 (m, I H)，
6.650 (m, 2H)，4.326 (m, 2H)，4.226 (m, I H)，4.195 (m, 2H)，3.748-3.476 (m, 4H)，3.204 (m,2H)，2.958 (m, 1H)，2.898 (m, 3H)，2.734 (m, 2H)，1.734-1.227 (m, I OH)，0.759 (m, 6H)。
[0134]實(shí)施例31 制備65-3，5-280。-4，5，6，7-四氫-3!1-咪唑[4,5-C]吡啶 _6_ 羧酸(Boc) -Arg-Lys(Z)-OBzl(7g) [0135]將0.734g(2.2mmol) 6S-3，5-2Boc_4，5，6，7_ 四氫 _3H_ 咪唑[4,5-C]吡啶 _6_ 羧酸溶解在 20mL 無(wú)水 THF 中，冰浴下加入 0.270g (2.0mmol) HOBt 和 0.490g (2.4mmol) DCC。攪拌30分鐘后加入1.116g(2.0mmoDHCl.Arg-Lys(Z)-OBzI (6)的無(wú)水THF溶液。反應(yīng)混合物用NMM調(diào)節(jié)pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的ECU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到0.843g(48% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0136]實(shí)施例32 制備65-3，5-280。-4，5，6，7-四氫-3!1-咪唑[4,5-C]吡啶 _6_ 羧酸(Boc) -Arg-Lys (Z) (8g)
[0137]將0.843g(0.96mmol)6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4,5-C]吡啶 _6_羧酸(Boc)-Arg-Lys(Z)-OBzl (7g)溶解在IOmL甲醇中，冰浴下加入NaOH水溶液(1.5mol/L)，調(diào)節(jié)PH值到12，攪拌反應(yīng)lh，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束。加飽和KHSO4調(diào)節(jié)pH值到7，濾液減壓蒸餾除去全部甲醇，殘留水溶液繼續(xù)用KHSO4調(diào)節(jié)pH值到2，用乙酸乙酯萃取6次，乙酸乙酯層合并，用飽和NaCl萃洗三次，無(wú)水NaSO4干燥3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到0.764g(99% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
[0138]實(shí)施例33 制備65-3，5-280。-4，5，6，7-四氫-3!1-咪唑[4,5-C]吡啶 _6_ 羧酸(Boc)-Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl(9g)
[0139]將0.785g(l.0mmol)6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5_C]吡啶-6-羧酸(Boc)-Arg-Lys(Z) (8g)溶解在20mL無(wú)水THF中，冰浴下加入
0.135g(l.0mmoDHOBt 和 0.244g(l.2mmol)DCC。攪拌 30 分鐘后加入 0.610g(l.0mmol)HCl.Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzI (4)的無(wú)水 THF 溶液。反應(yīng)混合物用 NMM 調(diào)節(jié) pH 8-9，冰浴攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)，過(guò)濾除去沉淀出的DCU。濾液減壓濃縮，殘留物溶于二氯甲烷中，得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液翠洗。二氯甲烷層用無(wú)水NaSO4干燥2小時(shí)。濾除NaSO4，濾液減壓濃縮除去二氯甲烷。殘留物用柱層析分離(CH2Cl2: CH3OH, 20: I)，得到 0.432g (32 % )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ES1-MS (m/e) 1344 [M+H]+.1H-NmrGOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 9.213 (s，1H)，8.445 (m，2H)，7.696 (m，2H)，7.696 (m, 1H)，7.345 (m, 2H)，7.338-7.023 (m, 16H)，6.985 (m, 2H)，6.636 (m, 2H)，
5.032-4.992 (m, 6H), 4.563 (m, I Η), 4.415 (m, 1Η), 4.259 (m, 3Η), 3.795 (m, 2Η) ,3.421 (m,3Η)，3.047 (m, 2Η)，2.994-2.641 (m, 7Η)，1.673-1.093 (m, 28Η)，0.753 (m, 6Η)。
[0140]實(shí)施例34 制備 6S-4，5，6，7-四氫 _3H_ 咪唑[4，5_C]吡啶 6_ 羧酸-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OBzl(IOg)
[0141]將0.10g(0.080臟01)65-3，5-280。-4，5，6，7-四氫-3!1-咪唑[4，5-(:]吡啶_6_羧酸(Boc)-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl (9g)溶解在 20mL 甲醇中，加入 20mg Pd/C和2滴甲酸，在氫氣環(huán)境下反應(yīng)24小時(shí)，過(guò)濾Pd/C，減壓旋干溶劑。隨后加入氯化氫-乙酸乙酯(4mol/L)溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC檢測(cè)原料點(diǎn)消失，減壓抽去乙酸乙酯，反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓抽氣以除去產(chǎn)品中的酸氣。最后加少量乙醚將產(chǎn)品研磨成固體粉末。將所得化合物溶于少量水，調(diào)pH至7,經(jīng)Sephadex-GlO分離并冷凍干燥。得到0.034g(41% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。Mp 127-128 0C.[a￡ =-35.8 (c = 0.1，甲醇).ES1-MS(m/e) 829 [M+H] +.1H-NMR (300MHz，DMS0-d6) δ /ppm = 8.657 (m，1H)，8.484 (m，1H)，8.346 (m，1Η) ,8.156 (m, 1Η)，7.560-7.260 (m, 5Η)，6.989 (m, 2Η)，6.636 (m, 2Η)，4.643 (m, 2Η)，
4.379 (m，1H)，4.265 (m，4H)，3.775 (m，2H)，3.169-3.115(m，3H)，2.969-2.611 (m，6H)，
1.697-1.237 (m, I OH), 0.757 (m, 6H)。
[0142]實(shí)驗(yàn)例I 10a-g抗腫瘤細(xì)胞增殖活性
[0143]將生長(zhǎng)狀態(tài)良好、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549、HL_60、HT_29、K562細(xì)胞分別按照5X IO4 個(gè) /mL、3X104f/mL、5X104f/mL、3X104 個(gè) /mL 的密度接種于 96 孔板，每孔100 μ L。在37°C和5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，按預(yù)設(shè)的濃度梯度150 μ M、125 μ M、100 μ M、75 μ M和50 μ M加入經(jīng)滅菌處理的本發(fā)明的化合物，對(duì)照組加入等體積溶解樣品的溶媒。繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加25 μ L濃度為5mg/mL的MTT溶液，置于37°C孵育4小時(shí)，小心除去上清液(懸浮細(xì)胞經(jīng)離心后除去上清液)后每孔加入100 μ LDMSO (二甲基亞砜)，振蕩約15min溶解沉淀。立即于酶標(biāo)儀上570nm波長(zhǎng)下測(cè)定0.D.(吸光度)值。
[0144]按照公式“抑制率=(Dw-D#|?)/(Dw-Dse) X 100%”計(jì)算抑瘤率及IC5(I。
[0145]實(shí)驗(yàn)平行重復(fù)3次，以抑制率對(duì)化合物濃度作圖，計(jì)算本發(fā)明化合物(10a-g)的IC5tl (半數(shù)有效抑制濃度)值。結(jié)果列入表I。結(jié)果表明本發(fā)明的化合物對(duì)H印G2細(xì)胞沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒作用。[0146]表I 10a-g抑制腫瘤細(xì)胞增殖的IC5tl(UM)
[0147]
【權(quán)利要求】
1.通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽，式中的RCO為I,2, 3,4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?咔啉-3-甲?；?，I，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?，異喹啉-3-甲?；?-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?，1-甲基-β-咔啉-3-甲?；?，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲酰基。
RCO-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr I
2.權(quán)利要求1的通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽(式中的RCO為1，2，3，4_四氫-β-咔啉-3-甲?；?，β-咔啉-3-甲?；?，1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?，異喹啉-3-甲?；?，1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?-甲基-β-咔啉-3-甲?；?，5，6，7-四氫-3Η-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲?；?的制備方法，該方法包括: (1)將L-色氨酸在稀硫酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合，得到3S_1，2，3，4-四氫-β_咔啉-3-羧酸； (2)將3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到2-Boc_l，2.3.4-四氫-β-咔啉-3-羧酸； (3)將3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸在二氯亞砜和甲醇中反應(yīng)得到I，2，3，4-四氫-β-咔啉羧酸甲酯； (4)將3S-1，2，3，4-四氫-β-咔啉羧酸甲酯在冰浴下丙酮作溶劑，用KMnO4氧化得到β-咔啉羧酸甲酯； (5)將β-咔啉羧酸甲酯在2Ν NaOH水溶液中脫去甲酯保護(hù)基，得到β -咔啉羧酸； (6)將L-苯丙氨酸在濃鹽酸催化下與甲醒進(jìn)行Pictet-Spengler縮合,得到3S_1,2,`3.4-四氫異喹啉-3-羧酸； (7)將3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到3S-2-Boc-l，2.3.4-四氫異喹啉-3-羧酸； (8)將3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸在二氯亞砜和甲醇中反應(yīng)得到3S_1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸甲酯； (9)將3S-1，2，3,4-四氫異喹啉-3-羧酸甲酯在冰浴下DMF作溶劑，用KMnO4氧化得到異喹啉-3-羧酸甲酯； (10)將異喹啉-3-羧酸甲酯在2NNaOH水溶液中脫去甲酯保護(hù)基，得到異喹啉-3-羧酸； (11)將L-色氨酸在稀硫酸催化下與乙醒進(jìn)行Pictet-Spengler縮合，得到(1S,3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸； (12)將(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4_四氫-β-咔啉-3-羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到(lS，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉_3_羧酸； (13)將(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-羧酸在二氯亞砜和甲醇中反應(yīng)得到(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯； (14)將(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉_3_羧酸甲酯在冰浴下丙酮作溶齊[J，用KMnO4氧化得到(1S，3S)-1-甲基-β -咔啉_3_羧酸甲酯； (15)將(1S，3S)-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯在2NNaOH水溶液中脫去甲酯保護(hù)基，得到1-甲基咔啉-3-羧酸； (16)將L-組氨酸在稀硫酸催化下與甲醒進(jìn)行Pictet-Spengler縮合,得到6S-4,5,6,7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-羧酸； (17)將6S-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-羧酸在堿性條件下進(jìn)行Boc保護(hù)得到 6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-羧酸； (18)以保護(hù)的Asp,Val和Tyr為原料,通過(guò)液相多肽合成從N端向C端逐步接肽,得到 Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl ； (19)將Boc-Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在冰浴下用 4N HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ； (20)以保護(hù)的Arg和Lys為原料,通過(guò)液相多肽合成從N端向C端逐步接肽,得到Boc-Arg-Lys (Z)-OBzl ； (21)將Boc-Arg-Lys(Z)-OBzl在冰浴下用4NHC1/EA脫除Boc保護(hù)基，得到Arg-Lys (Z)-OBzl ； (22)將3S-Boc-l， 2，3，4-四氫-β -咔啉 _3_ 羧酸與 Arg-Lys (Z)-OBzl 縮合得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ； (23)將3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲酰基-Arg-Lys(Z)-OBzl 在2Ν NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到3S-2-Boc-l，23，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)； (24)3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)與Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫 _3_ 咔啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
(25)將3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲酰基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl在冰浴下用4Ν HC1/EA脫除Boc保護(hù)基，得到3S-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ； (26)將3S-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到化合物3S-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ； (27)將β-咔啉-3-羧酸與Arg-Lys(Z)-OBzl縮合得到β -咔啉_3_甲酰-Arg-Lys (Z)-OBzl ； (28)將β-咔啉-3-甲酰-Arg-Lys (Z) -OBzl在2Ν NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基得到 β -咔啉-3-甲酰-Arg-Lys (Z)； (29)將β -咔啉-3-甲酰-Arg-Lys (Z)與 Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合得到 β -咔啉-3-甲酸-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
(30)β -咔琳 _3_ 甲酸-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在 Pd/C 催化下氧解和脫除保護(hù)基，得到β -咔啉-3-甲酰-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ； (31)將3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉_3_羧酸與Arg-Lys(Z)-OBzl縮合得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys (Z)-OBzl ； (32)將3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl 在 2N NaOH 水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys(Z)； (33)3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉_3_ 甲?；?Arg-Lys(Z)與Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 3S-2-Boc_l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ；
(34)將3S-2-Boc-l，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl在冰浴下用4N HC1/EA脫除Boc保護(hù)基，得到3S-1，2，3,4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ； (35)3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys(Z)-Asp(OBzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到3S-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ； (36)異喹啉-3-羧酸與Arg-Lys(Z)-OBzl縮合得到異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ； (37)異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys(Z)-OBzl在2N NaOH水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到異喹啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)； (38)異喹啉-3-甲酸基-Arg-Lys(Z)與 Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl 縮合，得到異喹啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
(39)異喧琳-3-甲酸基-Arg-Lys(Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在 Pd/C 催化下氧解和脫除保護(hù)基，得到異喹啉-3-甲酰基-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ；
(40)(IS, 3S) -2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β -咔啉_3_羧酸與 Arg-Lys (Z) -OBzl 縮合得到(lS，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl ； (41)(1S,3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉 _3_ 甲?；?Arg-Lys (Z)-OBzl在2NNa0H水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到(1S，3S) -2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)； (42)(1S，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)與Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到(1S，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β -咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ； (43)將(1S，3S)-2-Boc-l-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)-AsP (OBzl)-Val-Tyr-OBzl 在冰浴下用 4Ν HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到(1S，3S)-1_ 甲基-1，2,3,4-四氧-β -咔琳 _3_ 甲酸基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ； (44)(1S，3S)-1-甲基-1，2，3，4-四氫-β-咔啉-3-甲酰基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到(1S，3S)_1_甲基_1，2，3，4_四氧-β -咔琳-3-甲酸基-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ； (45)1-甲基-β -咔啉-3-羧酸與Arg-Lys (Z) -OBzl縮合得到1-甲基-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl ； (46)1-甲基-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl在2NNa0H水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到1-甲基-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)； (47)1-甲基-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z)與 Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 1-甲基-β -咔啉-3-甲酸基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ；
(48)1-甲基-β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在 Pd/C 催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到1-甲基_β -咔啉-3-甲?；?Arg-Lys-Asp-Val-Tyr ； (49)6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5_C]吡啶6-羧酸與Arg-Lys (Z) -OBzl 縮合得到 6S-3，5-2Boc_4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲酰基-Arg-Lys (Z)-OBzl ； (50)6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5_C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z) -OBzl在2NNa0H水溶液中脫去芐酯保護(hù)基，得到6S-3，5-2Boc_4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z)； (51)6S-3, 5-2Boc-4, 5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲?；?Arg-Lys (Z)與Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 縮合，得到 6S-3，5-2Boc_4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡P定-6-甲酸基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl ； (52)將6S-3，5-2Boc-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5_C]批啶 _6_ 甲酰基-Arg-Lys (Z)-Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl 在冰浴下用 4N HC1/EA 脫除 Boc 保護(hù)基，得到 6S-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4,5-C]吡啶-6-甲酰基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl) -Val-Tyr-OBzl ； (53)將6S-4, 5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]吡啶-6-甲酰基-Arg-Lys (Z) -Asp (OBzl)-Val-Tyr-OBzl在Pd/C催化下氫解和脫除保護(hù)基，得到6S-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑[4，5-C]批P定-6-甲酸基-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr。
3.權(quán)利要求1的通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽的體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
4.權(quán)利要求1的通式I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽抑制荷S180腫瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)增作用。
5.權(quán)利要求1的通式 I代表的雜環(huán)羧酸修飾的胸腺五肽在制備抗腫瘤藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】C07K7/06GK103450338SQ201210173661
【公開(kāi)日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2012年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月29日
【發(fā)明者】趙明, 彭師奇, 吳建輝, 王玉記, 胡西 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)