專利名稱：一種結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程和新型甜味劑領(lǐng)域，特別涉及一種提高甜菊糖總甙含量的方法。
背景技術(shù)：
甜菊糖是從菊科草本植物甜葉菊中精提的新型天然甜味劑。它具有高甜度、低熱能的特點，其甜度是蔗糖的200— 350倍，熱值僅為蔗糖的I / 300。是繼甘蔗、甜菜之外第三種最具有開價值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被譽為“世界第三糖源”。甜菊糖在一般著色性，安全無毒，被廣泛應用于食品、釀酒、醫(yī)藥、日用化工等行業(yè)。甜菊糖的九種甜味成分中，甜菊甙、萊鮑迪甙A(RA)和萊鮑迪甙C(RC)的相對含量較高，共占90%以上，是決定甜菊糖味質(zhì)的主要成分。RA甜度最高，相當于蔗糖的450倍，甜 味特性也與蔗糖相接近；甜菊甙甜味相當于蔗糖的300倍，具有一定的苦味和不愉快的后味，影響了甜菊糖的味質(zhì)，限制了其更為廣泛的應用。現(xiàn)有技術(shù)中并無一種簡單易行的方法既能提高甜菊糖總甙含量又能提高萊鮑迪甙A含量的工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種能提高甜菊糖總甙含量的工藝。本發(fā)明提供一種利用下述工藝提高甜菊糖總甙含量的方法，工藝流程為將甜菊糖原料溶于有機溶劑中，保持溫度為30_50°C，保持3-10小時進行結(jié)晶；結(jié)晶過程中進行攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為20_150rpm ;上述結(jié)晶溶液進行固液分離，固體物質(zhì)用溶劑洗滌除去母液雜質(zhì)，烘干獲得精制甜菊糖；結(jié)晶溶液的固液分離選擇抽濾或離心分離；所述甜菊糖原料的質(zhì)量與溶劑的質(zhì)量體積比為I: I. 5-8 ;所述甜菊糖原料的質(zhì)量與溶劑的質(zhì)量體積比優(yōu)選為1:1.5-6;上述甜菊糖原料總甙含量不得低于85% ；所述有機溶劑為甲醇與丙醇的混合溶劑；所述甲醇或丙醇純度為95-100% ;所述甲醇或丙醇純度優(yōu)選為98-100% ；所述甲醇與丙醇的比例為1:2-10 ;所述甲醇與丙醇的比例優(yōu)選1:3-8 ；所述結(jié)晶溫度優(yōu)選35_45°C，結(jié)晶時間優(yōu)選3-8小時；所述結(jié)晶過程的攪拌轉(zhuǎn)速優(yōu)選20-100rpm ；所述固液分離的離心機轉(zhuǎn)速為2000-5000rpm ;上述結(jié)晶分離后的固體洗晶時固體濕重與溶劑的體積比為1:1. 5-8，洗晶時間為15_50min ；上述精制樣品的烘干溫度為45-85°C。有益效果本發(fā)明可將甜菊糖原料的總甙由85%_90%提高至95%以上；本發(fā)明可提聞甜菊糖精制樣品中RA的比例，進而改善甜菊糖的整體品質(zhì)；本發(fā)明生產(chǎn)時攪拌與控溫的能耗較低，操作簡單，易于規(guī)?；?、連續(xù)化生產(chǎn)；本發(fā)明中精制后樣品的收率為30%_80%，母液可濃縮后回收，溶劑可蒸餾 后循環(huán)利用，實現(xiàn)了較好的經(jīng)濟效益和較低的環(huán)境污染。
具體實施例方式下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明方法。另外，實施方案應理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對這些實施方案中的結(jié)晶條件進行的各種改變或改動也屬于本發(fā)明的保護范圍。甜菊糖總甙的測定法法如下HPLC定量測定方法(JECFA 2010會議標準)檢測步驟按照以下液相色譜條件檢測每種糖甙的含量。試劑乙腈，在210nm下檢測透光度>95%.標準品規(guī)格甜菊甙標準品干重純度>99%萊鮑迪式A標準品干重純度>99%含有9種甜菊糖甙的基準溶液鮑含甜菊甙、萊鮑迪甙A、萊鮑迪甙B、萊鮑迪甙C、萊鮑迪甙D、萊鮑迪甙F、杜爾克甙A、懸鉤子甙和甜菊雙糖甙。用7:3的水乙腈溶液將含有9種甜菊糖甙的標準溶液進行稀釋，以便用來確定各個糖甙的出峰時間。標準品可在日本W(wǎng)ako公司和美國ChromaDex公司買到。標準品溶液的配制精確稱取50毫克甜菊甙標準品和50毫克萊鮑迪甙A標準品，分別放入50毫升的容量瓶中，然后加入7:3的水乙腈溶液進行溶解至50毫升刻度。樣品溶液的配制精確稱取50 - 100毫克甜菊甙樣品，放入50毫升的容量瓶中，然后加入7:3的水乙腈溶液進行溶解至50毫升刻度。檢測步驟在以下條件下注入5 U I的樣品溶液。色譜柱Shiseido公司的 Capcell pak C18 MG II 型色譜柱或者 Phenomenex 公司的Luna5ii C18 (2) 100A型色譜柱或者相當規(guī)格的色譜柱(長度250毫米；內(nèi)徑4. 6毫米，填料粒度5 ii m)。；流動相比例為32:68的乙腈和磷酸鈉緩沖液(規(guī)格10mmol/L，pH值2. 6)的混合液。磷酸鈉緩沖液的配置方法將2. 76克磷酸二氫鈉溶解到2升水中，加入磷酸將pH值調(diào)整到2. 6流速I毫升/每分鐘。
檢測器210nm紫外檢測。色譜柱溫度40°C記錄大約30分鐘的檢測結(jié)果。峰值識別和計算將樣品溶液的出峰與含有9種甜菊糖甙的基準溶液的出峰時間相對比，確定樣品溶液中各個出峰對應的糖甙。算出樣品溶液中9種糖甙對應的峰面積，算出甜菊甙標準品溶液和萊鮑迪甙A標準品溶液的峰面積。按照以下公式，計算樣品中萊鮑迪甙A之外的8種糖甙中每一種糖甙的百分比%X= [ffs/ff] X [fxAx/As] xlOO
按照以下公式，計算樣品中萊鮑迪甙A的百分比% 萊鮑迪甙 A= [WR/ff] X [Ax/AR] xlOO公式中X代表每種糖甙Ws是甜菊甙標準品溶液中甜菊甙的干重(mg)WR是萊鮑迪甙A標準品溶液中萊鮑迪甙A的干重(mg)W是樣品溶液中樣品的干重(mg)As是甜菊甙標準品溶液的峰面積
AR是萊鮑迪甙A標準品溶液的峰面積Ax是樣品溶液每種糖甙的峰面積fx是每種糖甙的分子量與甜菊甙分子量的比值1. 00(甜菊甙)，I. 20 (萊鮑迪甙A), 1.00(萊鮑迪甙B)，I. 18 (萊鮑迪甙C)，1.40(萊鮑迪甙D)，I. 16(萊鮑迪甙F)，0. 98(杜爾克甙A) ,0.80(懸鉤子甙),0.80(甜菊雙糖甙)。計算甜菊糖甙總量的百分比(將9種糖甙的百分比相加)實施例I取甜菊糖原料IOOg (60。。烘I小時)，加入150ml溶劑(甲醇:丙醇=1:5)，充分溶解后置于三口燒瓶中，水浴控制溫度40°C，攪拌速度為60rpm，時間為8小時，將結(jié)晶混合液用布氏漏斗進行抽濾，所得晶體用溶劑洗滌30min，上述結(jié)晶分離后的固體洗晶時固體濕重與溶劑的體積比為1:1.5 ;溶劑中甲醇丙醇=1:5，551過夜烘干，得干樣79.88。液相測
定結(jié)果為
—名RA —— ST TlF................................. RC RS RB DA 總成—
擬料44. 1232.42 —^L27^ 8. 16 今檢8°"97
_____________AI MI--II _____
,, AQ —An Qn — 7~Z J1 ,, 未檢未ft 未檢 96.87ImifJ1J/ mi 49,35 40,90 1,21 5.41 ,,, ., ,.,
___I__ Hi HS HI _該實驗主要的有益效果為總甙的提升，而且產(chǎn)品收率較高。實施例2取甜菊糖原料IOOg (60°C烘I小時)，加入300ml溶劑(甲醇丙醇=1:2)，充分溶解后置于三口燒瓶中，水浴控制溫度30°C，攪拌速度為20rpm，時間為10小時，將結(jié)晶混合液用布氏漏斗進行抽濾，所得晶體用溶劑洗滌50min，上述結(jié)晶分離后的固體洗晶時固體濕重與溶劑的體積比為1:8，65°C過夜烘干，得干樣44.3g。液相測定結(jié)果為
權(quán)利要求
1.結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，包括如下步驟 將甜菊糖原料溶于有機溶劑中，保持溫度為30-50°C，保持3-10小時進行結(jié)晶；結(jié)晶過程中進行攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為20-150rpm;上述結(jié)晶溶液進行固液分離，固體物質(zhì)用溶劑洗滌除去母液雜質(zhì)，烘干獲得精制甜菊糖；所述甜菊糖原料的質(zhì)量與溶劑的質(zhì)量體積比為1:1. 5-8 ;所述有機溶劑為甲醇與丙醇的混合溶劑，所述甲醇與丙醇的比例為1:2-10。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述結(jié)晶溶液的固液分離選擇抽濾或離心分離。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述甜菊糖原料的質(zhì)量與溶劑的質(zhì)量體積比優(yōu)選為1:1. 5-6。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述甲醇或丙醇純度為95-100%。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述所述甲醇或丙醇純度為98-100%。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述結(jié)晶溫度優(yōu)選35-45°C，結(jié)晶時間3-8小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述結(jié)晶分離后的固體洗晶時固體濕重與溶劑的體積比為1:1. 5-8，洗晶時間為15-50min。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述結(jié)晶法提高甜菊糖總甙含量的方法，其特征在于所述精制烘干溫度為45-85°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提高甜菊糖總甙的新方法，本發(fā)明屬于生物工程和新型甜味劑領(lǐng)域，特別涉及甜菊糖總甙含量的方法。一種提高甜菊糖總甙的新方法，步驟如下將甜菊糖原料溶于有機溶劑中，保持溫度為25-45℃，保持2-8小時進行結(jié)晶；結(jié)晶過程中進行攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為30-100rpm；上述結(jié)晶溶液進行固液分離，烘干獲得精制甜菊糖，所述甜菊糖原料的質(zhì)量與溶劑的體積比為1:2-10，所述有機溶劑為乙醇和丙酮的混合溶劑。本發(fā)明可將甜菊糖原料的總甙由80%提高至95%以上。
文檔編號C07H1/08GK102766176SQ20121018332
公開日2012年11月7日 申請日期2012年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月6日
發(fā)明者喬長晟, 李利寧, 樓鵬, 王彥飛, 鐘海蛟 申請人:天津北洋百川生物技術(shù)有限公司