專利名稱：一種組氨瑞林的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組氨瑞林的合成方法，特別涉及到固液相合成組氨瑞林的方法
背景技術(shù)：
組氨瑞林又稱 LHRH-Hydrogel implant, RL 0903,結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種組氨瑞林的合成方法，包括以下步驟 a.以2-氯三苯甲基氯樹脂為起始原料，在堿性條件下與芴甲氧羰基保護脯氨酸的羧基相連，得到芴甲氧羰基保護脯氨酸_2氯三苯甲基氯樹脂； b.其余8個氨基酸按照組氨瑞林依次合成； c.全保護切肽用全保護切割試劑裂解得全保護9肽片段； d.用こ胺與全保護9肽片段在I-羥基苯并三唑的作用下獲得全保護組氨瑞林片段； e.裂解全保護組氨瑞林片段獲得組氨瑞林粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的合成方法，其特征在于步驟a具體內(nèi)容如下 取2-氯三苯甲基氯樹脂用ニ氯甲烷浸泡，使樹脂充分溶脹，吹干，然后加入接肽試劑溶解的芴甲氧羰基保護脯氨酸反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌吹干，獲得芴甲氧羰基保護脯氨酸2-氯三苯甲基氯樹脂；所用的接肽試劑N，N-ニ異丙基こ胺N，N- ニ甲基甲酰胺體積比=1:15，2-氯三苯甲基氯樹脂的體積濃度為5-20ml/g，芴甲氧羰基保護脯氨酸摩爾數(shù)為2-氯ニ苯甲基氯樹脂的I. 5-2倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的合成方法，其特征在于步驟b具體內(nèi)容如下 a.制備 Fmoc-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂 在芴甲氧羰基保護脯氨酸_2氯三苯甲基氯樹脂中加入脫保護試劑，反應，吹干，分別用N，N-ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的芴甲氧羰基保護精氨酸、0-(苯并三唑-I-氧)-N，N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和I-羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Fmoc-Arg (pbf) -Pro-CTC樹月旨，所用的脫保護試劑哌啶N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4;所用的接肽試劑N，N-ニ異丙基こ胺N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:15 ;混合物中芴甲氧羰基保護脯氨酸-2氯三苯甲基氯樹脂的體積濃度為5-20ml/g，芴甲氧羰基保護精氨酸的摩爾數(shù)為芴甲氧羰基保護脯氨酸_2氯三苯甲基氯樹脂的2-3倍，芴甲氧羰基保護脯氨酸_2氯三苯甲基氯樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑；b.制備Fmoc-Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂 在Fmoc-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂中加入脫保護試劑，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Leu-OH、0_(苯并三唑-I-氧)-N，N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和I-羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Fmoc-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂，所用的脫保護試劑哌啶N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4;所用的接肽試劑N，N-ニ異丙基こ胺N，N- ニ甲基甲酰胺體積比=1:15 ;混合物中Fmoc-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂的體積濃度為 5_20ml/g, Fmoc-Leu-OH 的摩爾數(shù)為 Fmoc-Arg(pbf)-Pro-CTC 樹脂的 2-3 倍，F(xiàn)moc-Arg(pbf) -Pro-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑； c.制備Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 樹脂 在Fmoc-Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂中加入脫保護試劑,反應,吹干,分別用N，N-ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Fmoc-D-His (Bzl)-0H、0_(苯并三唑-I-氧)-N, N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和I-羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Fmoc-D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂；所用的脫保護試劑哌啶N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4;所用的接肽試劑N，N-ニ異丙基こ胺N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:15 ;混合物中Fmoc-Leu_Arg(pbf)-Pro-CTC樹脂的體積濃度為 5_20ml/g, Fmoc-D-His (Bzl) -OH 的摩爾數(shù)為 Fmoc-Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂的2-3倍，F(xiàn)moc-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑；d.制備Fmoc-Tyr (tbu)-D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂 在Fmoc-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf) -Pro-CTC樹脂中加入脫保護試劑，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Tyr (tbu)) -0H、0_(苯并三唑-I-氧)-N，N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和I-羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Fmoc-Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC樹脂；所用的脫保護試劑哌唳N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4 ;所用的接肽試劑N，N- ニ異丙基こ胺N，N- ニ甲基甲酰胺體積比=1:15 ;混合物中FmoC-D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂的體積濃度為 5_20ml/g, Fmoc-Tyr (tbu) -OH 的摩爾 數(shù)為 Fmoc-D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂的 2-3 倍，F(xiàn)moc-D-His (Bzl) -Leu-Arg(Pbf)-Pro-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑；e.制備Fmoc-Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂 在 Fmoc-Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂中加入脫保護試齊U，反應，吹干，分別用N，N-ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Ser (tbu))-0H, 0_(苯并三唑-I-氧)-N，N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和1_羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Fmoc-Ser (tbu)-Tyr (tbu)-D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂；所用的脫保護試劑哌唳:N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4 ;所用的接肽試劑N，N-ニ異丙基こ胺N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:15 ;混合物中 Fmoc-Tyr (tbu)-D-His (Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 樹脂的體積濃度為 5_20ml/g,Fmoc-Ser (tbu) -OH 的摩爾數(shù)為 Fmoc-Tyr (tbu) -D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂的 2-3 倍，F(xiàn)moc-Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑；f.制備Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 樹脂 在 Fmoc-Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂中加入脫保護試劑，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Trp (Boc) -OH,0-(苯并三唑_1_氧)-N, N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和1_羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N-ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Fmoc-Trp (Boc) -Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂；所用的脫保護試劑哌啶N，N- ニ甲基甲酰胺體積比=1:4 ;所用的接肽試劑N，N- ニ異丙基こ胺N，N- ニ甲基甲酸胺體積比=1:15 ;混合物中 Fmoc-Ser (tbu)-Tyr (tbu)-D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂的體積濃度為 5_20ml/g, Fmoc-Trp oc)-OH 的摩爾數(shù)為 Fmoc-Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂的 2-3 倍，F(xiàn)moc-Ser (tbu)-Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑； g.制備Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC樹脂 在 Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 樹脂中加入脫保護試劑，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Fmoc-His (Trt)-0H、0-(苯并三唑-I-氧)-N，N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和I-羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得 Fmoc-His (Trt) -Trp (Boc) -Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC樹脂；所用的脫保護試劑哌啶N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4;所用的接肽試劑N, N- ニ異丙基こ胺N，N- ニ甲基甲酰胺體積比=1:15 ;混合物中Fmoc-Trp (Boc)-Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂的體積濃度為 5_20ml/g, Fmoc-His (Trt) -OH 的摩爾數(shù)為 Fmoc-Trp (Boc) -Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂的 2-3 倍，F(xiàn)moc-Trp (Boc)-Ser (tbu)-Tyr (tbu)-D-His (Bzl)-LeU-Arg(pbf)-Pix)-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑；h.制備Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC樹脂 在 Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂中加入脫保護試劑，反應，吹干，分別用N，N- ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干；加入用接肽試劑溶解的Pyr、0-(苯并三唑-I-氧)-N, N，N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽和I-羥基苯并三唑的混合物，反應，吹干，分別用N，N-ニ甲基甲酰胺和甲醇洗滌，吹干，獲得Pyr-His (Trt) -Trp (Boc) -Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg (pbf) -Pro-CTC 樹脂；所用的脫保護試劑哌啶N，N-ニ甲基甲酰胺體積比=1:4;所用的接肽試劑N，N-ニ異丙基こ胺N，N-ニ甲基甲酸胺體積比=1:15 ;混合物中 Fmoc-His (Trt)-Trp (Boc)-Ser (tbu)-Tyr (tbu)-D-His (Bzl)-Leu-Arg (pbf)-Pro-CTC 樹脂的體積濃度為 5_20ml/g, Pyr 的摩爾數(shù)為 Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC 樹月旨的 2-3 倍， Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pix)-CTC樹脂的重量與脫保護試劑的的加入量的比例為每克樹脂加入5-20ml脫保護試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的合成方法，其特征在于所述的步驟a-h中，脫保護反應溫度為室溫，反應時間5-15分鐘，接肽反應溫度為室溫，反應時間為1-1. 5小吋。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的合成方法，其特征在于，所述的全保護切肽步驟如下將 Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro-CTC樹脂加入體積比為1:99的三氟こ酸和ニ氯甲烷中反應1-3小時，過濾，收集濾液，將濾液減壓蒸懼，獲得全保護的 Pyr-His (Trt) -Trp (Boc) -Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg(pbf) -Pro 片段。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的合成方法，其特征在于，所述的步驟d具體內(nèi)容如下 將 1_ 輕基苯并三唑加入全保護的 Pyr-His (Trt) -Trp (Boc) -Ser (tbu) -Tyr (tbu) -D-His (Bzl) -Leu-Arg(pbf) -Pro片段中，再加入ニ異丙基碳ニ亞胺室溫下反應24小時后減壓蒸餾，獲得全保護的組氨瑞林片段。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的合成方法，其特征在于，所述的步驟e具體內(nèi)容如下將全保護氨瑞林片段加入預冷至0-10°C的切肽試劑中，反應2-3小時，加入こ醚沉淀，收集沉淀物，用こ醚淋洗3次，真空干燥，獲得組氨瑞林粗品；所述的切肽試劑為下述混合物三氟こ酸三異丙基硅烷水體積比為95:2. 5:2. 5。
全文摘要
本發(fā)明涉及組氨瑞林的一種合成方法，主要解決現(xiàn)有的組胺瑞林合成方法接肽收率低，三廢污染多的技術(shù)問題。本發(fā)明的技術(shù)方案一種組氨瑞林的合成方法，包括如下步驟a.以CTC樹脂為起始原料，在堿性條件下與Fmoc-Pro-OH的羧基相連，得到Fmoc-Pro-CTC樹脂；b.其余8個氨基酸按照組氨瑞林依次合成；c.全保護切肽用全保護切割試劑裂解得yr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-D-His(Bzl)-Leu-Arg(pbf)-Pro9肽片段；d.用乙胺與全保護9肽片段在HOBT的作用下獲得全保護組氨瑞林片段；e.裂解全保護組氨瑞林片段獲得組氨瑞林粗品。
文檔編號C07K1/04GK102850437SQ201210334868
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者徐紅巖, 張旭光 申請人:上海吉爾多肽有限公司, 吉爾生化(上海)有限公司, 濱海吉爾多肽有限公司