專利名稱：從中藥秦皮中分離純化單體化合物的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于化工領域，具體是涉及一種從中藥秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的 方法。
背景技術：
秦皮為木犀科植物苦櫪白臘樹Fraxinus rhynchophylla Hance、白臘樹Fraxinus chinensis Roxb.、尖葉白臘積 Fraxinus szaboana Lingelsh.或宿柱白臘申對Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮,性味苦、寒,具有清熱燥濕、清肝明目、平喘止咳功效。用于熱毒瀉痢、目赤腫痛、目生翳障。秦皮中的主要有效成分為香豆素類成分，主要有秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素。現(xiàn)已有文獻報道從秦皮中提取、制備香豆素成分的方法?！肚仄は愣顾靥崛》椒ā?中國專利，申請?zhí)?00610137703.4)將秦皮水提醇沉后，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，濃縮液吸附到大孔樹脂吸附法上、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得秦皮香豆素的方法。所得物為秦皮總香豆素混合物?！兑环N秦皮提取物的制備方法和用途》(中國專利，申請?zhí)?00510098808. 9)采用水煎煮提取，大孔樹脂分離純化制備秦皮香豆素組合物。該秦皮香豆素組合物是由一定比例的秦皮甲素(aesculin)、秦皮乙素(aesculetin)、秦皮苷(fraxin)、秦皮亭(fraxetin)等組成的總香豆素混合物?！陡呒兌惹仄ぜ姿丶捌渲苽浞椒ā?中國專利，申請?zhí)?00510030722. 2)提供了一種秦皮甲素的制備方法，包括提取、柱層析、濃縮和結晶步驟，可得到秦皮甲素單體成分。王晶[秦皮中秦皮乙素分離純化的工藝研究，中成藥，2009年02期]利用柱層析，建立了從秦皮中純化秦皮乙素的方法，可得到秦皮乙素單體成分。上述方法或主要是進行秦皮混合香豆素的提取，或是進行單一成分的純化，不能得到多種高純度秦皮香豆素成分。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種操作簡便、綠色環(huán)保、分離量大、綜合成本低、生產周期短的快速從中藥秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，以滿足對秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的需要。本發(fā)明的方案如下
從秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，步驟為
(1)秦皮提取物的制備取粉碎好的秦皮藥材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液經回收溶劑得到提取物；
(2)柱層析純化將秦皮提取物用甲醇溶解，上SupeiOse12柱進行層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時1-10倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，得到高純度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的單體化合物。
前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)回流提取時介質溫度為50_90°C，液固比為3-20，回流提取時間O. 5-3小時，回流提取次數(shù)1-6次。更加優(yōu)選的是，介質溫度為60-800C (優(yōu)選75°C)，液固比為5-10 (優(yōu)選7)，回流提取時間O. 5-2小時(優(yōu)選I小時)，回流提取次數(shù)2-5 (優(yōu)選3次)。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)提取時所用乙醇或甲醇的質量濃度為50%-100% (優(yōu)選 70%-95%，更優(yōu)選 85%)。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)洗脫液為10%_80%的甲醇-水洗脫液(優(yōu)選 20%-60%，更優(yōu)選 30%)。 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)用洗脫液進行洗脫時，洗脫液流速為每小時1-6倍柱體積(優(yōu)選每小時3倍柱體積)。本發(fā)明從秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，所得提取物目標化合物含量高，雜質低，這一優(yōu)點從提取物HPLC圖(圖I)可清楚看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢
(I)提取物經過一步分離純化就可以同時得到秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素等多種高純度單體化合物。不像已有技術一樣只能得到混合香豆素或經過多個步驟才能得到一種單體成分。本發(fā)明只需要一個分離步驟即可得到多種高純度化合物，方法操作簡單，效率高,工藝周期短,節(jié)省試劑，降低了生產成本。(2)純化過程中不使用對環(huán)境危害大的氯仿等有機溶劑，綠色環(huán)保。(3)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液組成)，使純度和效率都大為提高。


圖I是秦皮提取物的高效液相色譜圖。圖2是實施例3層析色譜圖。
具體實施例方式下面結合實施例和附圖詳細說明本發(fā)明的技術方案，但保護范圍不被此限制。實施例中所用設備或原料皆可從市場獲得。所用SupeiOse 12購自通用電氣(中國)醫(yī)療集團，所用試劑均購自天津試劑四廠，所用水為去離子水。實施例秦皮藥材經粉碎后，裝入回流裝置系統(tǒng)，以85%乙醇為提取溶劑，液固比為7，介質溫度為75°C，每次回流提取時間為I小時，回流次數(shù)3次。提取液經回收溶劑后得到秦皮藥材提取物。將秦皮藥材提取物粗粉用30%甲醇溶解，上Suppose 12層析，用甲醇-水為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時3倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇，采用不同洗脫方式，優(yōu)選出了實現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有關實驗結果如下
表一柱層析條件
權利要求
1.從中藥秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，其特征是，步驟為(1)秦皮提取物的制備取粉碎好的秦皮藥材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液經回收溶劑得到提取物；(2)柱層析純化將秦皮提取物用甲醇溶解，上SupeiOse12柱進行層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時1-10倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，得到高純度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素單體化合物。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征是，步驟(I)回流提取時介質溫度為50-90°C，液固比為3-20，回流提取時間O. 5-3小時，回流提取次數(shù)1-6次。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征是，介質溫度為60-80°C，液固比為5-10，回流提取時間O. 5-2小時，回流提取次數(shù)2-5次。
4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征是，介質溫度為75°C，液固比為7，回流提取時間I小時，回流提取次數(shù)3次。
5.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征是，步驟(I)提取時所用乙醇或甲醇的質量濃度為 50%-100% (優(yōu)選 70%-95%，更優(yōu)選 85%)。
6.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征是，步驟(2)洗脫液為10%-80%的甲醇-水洗脫液(優(yōu)選20%-60%，更優(yōu)選30%)。
7.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征是，步驟(2)用洗脫液進行洗脫時，洗脫液流速為每小時1-6倍柱體積(優(yōu)選每小時3倍柱體積)。
全文摘要
本發(fā)明涉及從秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，是以秦皮為原料，經過下述步驟(1)秦皮提取物的制備取粉碎好的秦皮藥材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液經回收溶劑后得到提取物粗粉；(2)柱層析純化以Superose12為分離介質層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液，得到高純度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的單體化合物。工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害。
文檔編號C07D311/16GK102924416SQ201210434068
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月5日 優(yōu)先權日2012年11月5日
發(fā)明者白風沙, 柳仁民, 孫愛玲 申請人:聊城大學