專利名稱：隱色孔雀石綠半抗原、人工抗原及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及抗原的制備，具體地涉及一種隱色孔雀石綠半抗原、人工抗原及制備方法。
背景技術(shù)：
孔雀石綠(Malachite Green, MG),別名中國綠、苯胺綠、堿性孔雀石綠、品綠、鹽基塊綠等，是一種有毒的三苯甲烷類化合物，過去常作為外用驅(qū)蟲劑、殺真菌劑、殺菌劑等用于治理魚類或魚卵的寄生蟲、真菌或細(xì)菌感染。但是孔雀石綠也是潛在的致癌劑、致突變劑、致畸變劑，目前世界上許多國家都已經(jīng)將孔雀石綠列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物。隱色孔雀石綠(Leucomalachite Green, LMG)是孔雀石綠的無發(fā)色團(tuán)還原產(chǎn)物,是孔雀石綠在魚體及其他生物體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物和存在形式，其不溶于水，在體內(nèi)殘留時(shí)間更長，危害亦比孔雀 石綠更大?？兹甘G和隱色孔雀石綠具有如式(I )所示的結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.一種隱色孔雀石綠半抗原，其特征在于，所述隱色孔雀石綠半抗原為在隱色孔雀石綠未被取代的苯環(huán)的對位或間位引入可與蛋白質(zhì)反應(yīng)的基團(tuán)。
2.如權(quán)利要求1所述的隱色孔雀石綠半抗原，其特征在于，所述可與蛋白質(zhì)反應(yīng)的基團(tuán)為氨基或羧基； 優(yōu)選地，所述隱色孔雀石綠半抗原的結(jié)構(gòu)如式(I)、式(II)、式(III)或式(IV)所示
3.如權(quán)利要求2所述的隱色孔雀石綠半抗原，其特征在于，所述R1為取代或未取代的Cl-ClO直鏈烷基、取代或未取代的Cl-ClO支鏈烷基，進(jìn)一步優(yōu)選為未取代的C1-C6直鏈烷基或未取代的C1-C6支鏈烷基，特別優(yōu)選為未取代的C1-C4直鏈烷基； 優(yōu)選地，所述R1為含有至少I個(gè)苯基的C2-C20不飽和烴基，進(jìn)一步優(yōu)選為含有2個(gè)苯基的C2-C20不飽和烴基，更優(yōu)選為含有2個(gè)對位取代的苯基的C2-C15不飽和烴基，特別優(yōu)選為式(V)所示結(jié)構(gòu)
4.一種如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述隱色孔雀石綠半抗原的制備方法，包括以下步驟 (1)對甲?；郊姿峄蜷g甲?；郊姿崤cN，N-二甲基苯胺反應(yīng)，得到式(X)所示化合物；
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(I)所述反應(yīng)在酸體系中進(jìn)行，特別優(yōu)選在濃鹽酸體系中進(jìn)行； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)以ZnCl2為催化劑，特別優(yōu)選，步驟(I)所述反應(yīng)在乙醇體系中以ZnCl2為催化劑進(jìn)行反應(yīng)； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)以Amberlystl5樹脂為催化劑，特別優(yōu)選，步驟(I)所述反應(yīng)在甲苯體系中以Amberlystl5樹脂為催化劑進(jìn)行反應(yīng)； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)溫度為7(TllO°C，特別優(yōu)選為8(Tl00°C ； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)時(shí)間為至少16小時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為2(T48小時(shí)，特別優(yōu)選為·24小時(shí)； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)中對甲?；郊姿峄蜷g甲?；郊姿?、N，N-二甲基苯胺和催化劑的物質(zhì)的量比為I (1. 8 2. 2) : (0. 06 I)，進(jìn)一步優(yōu)選為1: (1. 9 2.1) : (0. 08 0. 5)，特別優(yōu)選為1:2:0.1。
6.一種如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述隱色孔雀石綠半抗原的制備方法，包括以下步驟 (I)式(XI)化合物與N，N- 二甲基苯胺反應(yīng)，然后還原，得到式(XII)所示化合物；
7.如權(quán)利要求6所述方法，其特征在于，步驟(I)所述反應(yīng)在酸體系中進(jìn)行，特別優(yōu)選在濃鹽酸體系中進(jìn)行； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)以ZnCl2為催化劑，特別優(yōu)選，步驟(I)所述反應(yīng)在乙醇體系中以ZnCl2為催化劑進(jìn)行反應(yīng)； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)以Amberlystl5樹脂為催化劑，特別優(yōu)選，步驟(I)所述反應(yīng)在甲苯體系中以Amberlystl5樹脂為催化劑進(jìn)行反應(yīng)； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)溫度為7(TllO°C，特別優(yōu)選為8(Tl00°C ；優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)時(shí)間為至少16小時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為2(Γ48小時(shí)，特別優(yōu)選為24小時(shí)； 優(yōu)選地，步驟(I)所述反應(yīng)中對甲?；郊姿峄蜷g甲酰基苯甲酸、N，N-二甲基苯胺和催化劑的物質(zhì)的量比為1: (1. 8 2. 2) : (0. 06 I)，進(jìn)一步優(yōu)選為1: (1. 9 2.1) : (0. 08 0. 5)，特別優(yōu)選為1:2:0.1。
8.一種隱色孔雀石綠人工抗原的制備方法，包括采用如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述隱色孔雀石綠半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，得到隱色孔雀石綠人工抗原。
9.一種隱色孔雀石綠人工抗原，其特征在于，所述隱色孔雀石綠人工抗原由權(quán)利要求8所述方法制備。
10.一種如權(quán)利要求9所述隱色孔雀石綠人工抗原的用途，其特征在于，所述隱色孔雀石綠人工抗原用于檢測食品、農(nóng)產(chǎn)品或者環(huán)境樣品中隱色孔雀石綠的殘留量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種孔雀石綠半抗原、人工抗原及其制備方法，保留孔雀石綠的特征結(jié)構(gòu)，在孔雀石綠結(jié)構(gòu)的不同化學(xué)位點(diǎn)衍生出具有不同電子云密度、不同碳鏈長度以及適合與大分子載體偶聯(lián)的活性手臂。所述的活性手臂為帶有末端為氨基或羧基的酰胺鍵。由隱色孔雀石綠半抗原制備得到孔雀石綠人工抗原，應(yīng)用于檢測隱色孔雀石綠和孔雀石綠的殘留量時(shí)具有很高的特異性和靈敏度，準(zhǔn)確度高，回收率高，同時(shí)方法簡單，成本低廉，建立出快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)、高效的孔雀石綠免疫檢測方法。
文檔編號C07C237/34GK103012193SQ20121054622
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者卞禹卜, 葉幫偉, 高君, 金晶, 劉春梅, 沈智勇, 楊曉慧, 李林 申請人:無錫中德伯爾生物技術(shù)有限公司