專利名稱：一種檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物工程技術領域，涉及一種檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列。
背景技術：
白血病是一種發(fā)生在造血系統(tǒng)的惡性疾病。由于造血干細胞發(fā)生突變，人體內產生大量喪失正常功能的白細胞，除了聚集在骨髓、淋巴結和脾臟外，還侵入其它器官和組織,產生各種臨床癥狀,如繼發(fā)性感染、高熱、出血、貧血及全身衰竭等。 白血病發(fā)病率約占整個惡性腫瘤發(fā)病率的5%左右，多見于兒童和青年人。根據病程和白血病細胞的分化程度，分為急性和慢性兩類。根據受累細胞種類又分為淋巴細胞白血病和非淋巴細胞白血病。目前，白血病的致病原因和機制尚未完全 闡明。但大量研究資料顯示，遺傳因素、病毒感染、放射線輻射及接觸大量有毒化學物質(如苯類化合物等)與疾病發(fā)生有密切關系。白血病的臨床治療方法有多種，其中化學藥物療法(簡稱為化療)常常是治療首選方案。特別是急性白血病經化療后，緩解率平均達60%左右，5年存活率為2(Γ40%。急性白血病未治療時，體內血癌細胞總數可高達IO13個。然而經化療后，仍有相當數量的血癌細胞殘留，估計在IO8-1O9個之間。這些殘留血癌細胞的存在與其產生的化療藥物耐受性有關，是導致白血病的復發(fā)和病情惡化的主要原因。因此，發(fā)明一種有效治療方法、徹底清除殘留血癌細胞，是達到完全控制或根治白血病的終極目標。利用父母雙親外周血白細胞與富含耐藥蛋白抑制因子血漿的混合輸入用以清除殘留血癌細胞是一種有效的治療方法，但如何檢測供血者耐藥蛋白抑制因子是需要進一步解決的問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是公開一種檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列。本發(fā)明提供一種檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列，其表達方式為
RKSffLQYFSIPRYGNLTTIASffLSffDH 純度 >95%，ρΗ>7. O?？s寫SYJ-2。本發(fā)明氨基酸序列主要是根據計算機模擬預測的耐藥蛋白抑制因子人類白細胞抗原II (human leukocyte antigen II,簡稱HLA II)的抗原表位設計合成并已通過分子生物學實驗驗證其高效的抗原性。本發(fā)明氨基酸序列可通過氨基酸多肽合成儀純化合成。通過該氨基酸序列對耐藥蛋白抑制因子的檢測
參照已專利的方法檢測血漿免疫球蛋白(專利號2011103881341，主分類號G01N33/543)。簡言之，用磷酸鹽緩沖液稀釋人工合成的SYJ-2片段至10-20微克/毫升(10-2(^g/ml)，用96孔酶標板包被，每孔加100微升(100 μ )。對照孔加ΙΟΟμΙ山羊28肽。酶標板設定SYJ-2孔、對照肽孔和試劑空白孔，每種設定應采用至少2重樣、取中間光密度(Optical Density，0D)值。來自獻血者血漿樣品經分析液稀釋100倍，每個SYJ-2檢測孔和對照肽孔各加ΙΟΟμΙ血漿樣品，試劑空白孔加100 μ 分析液。
根據特異性結合指數(specific binding index, SBI)判斷血衆(zhòng)耐藥蛋白抑制因子水平，即SBI=[耐藥蛋白OD值-試劑空白OD值]/ [對照肽OD值-試劑空白OD值]的比值。利用SBI作為篩選獻血者的參數。凡是SBI大于2且與患者ABO血型完全匹配的健康人血漿，可用于體內誘導細胞毒效應，清除具有耐藥性的殘留白血病細胞。父母雙親外周血白細胞處理與輸入
在遺傳學上，父母雙親與子女之間有50%的遺傳信息完全一致。因此，已接受化療的患病子女在輸入父母雙親外周血白細胞后不會產生強烈的免疫排斥反應。如同臨床輸血一樣，只要血型匹配，可以不考慮人類白細胞表面抗原(Human leukocyte antigen,HLA)與受血者的組織相容性。在患者接受2-3個療程的化療后，抽取100-200毫升父親或母親的外周血，約含5-10億具有吞噬功能的白細胞。用物理離心方法分離母親的外周血中白細胞，無菌生理鹽水洗2-3次后混合原本及富含耐藥蛋白抑制因子的血漿中靜脈輸入患病子女體內。本發(fā)明的優(yōu)點及有益效果
(I)本發(fā)明應用檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸抗原多肽可檢測到富含耐藥蛋白抑制因子血清及血漿。本發(fā)明氨基酸序列主要是根據計算機模擬預測的耐藥蛋白抑制因子多個人類HLA II的抗原表位設計合成并已通過分子生物學實驗驗證其具有高效的抗原性、特異性和靈敏性。(2)應用本發(fā)明檢測的富含耐藥蛋白抑制因子血清及血漿可結合父母雙親外周血白細胞清除白血病患病子女體內耐藥殘留的癌細胞。
具體實施例方式檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列見Tab.權利要求
1.一種檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列，其表達方式為 RKSffLQYFSIPRYGNLTTIASffLSffDH 純度 >95%，pH>7. O。
全文摘要
一種檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸序列，屬于生物工程技術領域，其表達方式為RKSWLQYFSIPRYGNLTTIASWLSWDH 純度>95%，pH>7.0。本發(fā)明應用檢測耐藥蛋白抑制因子的氨基酸抗原多肽可檢測到富含耐藥蛋白抑制因子血清及血漿。本發(fā)明氨基酸序列通過分子生物學實驗驗證其具有高效的抗原性、特異性和靈敏性。應用本發(fā)明檢測的富含耐藥蛋白抑制因子血清及血漿可結合父母雙親外周血白細胞清除白血病患病子女體內耐藥殘留的癌細胞。
文檔編號C07K14/00GK103012567SQ20121057005
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月25日 優(yōu)先權日2012年12月25日
發(fā)明者尉軍, 孫世龍 申請人:尉軍, 深圳市英吉生物科技開發(fā)有限公司