專利名稱：一種海洋芽孢桿菌及其產(chǎn)生的具有抗腫瘤活性的多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋微生物領(lǐng)域，具體地涉及一種生產(chǎn)抗腫瘤活性多肽的海洋芽孢桿菌及其產(chǎn)生的具有抗腫瘤活性的多肽。
背景技術(shù)：
當(dāng)今社會(huì)，惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康，是人類社會(huì)的第一殺手。臨床上惡性腫瘤治療手段多是采用綜合療法，以手術(shù)切除、放療、化療和免疫治療相結(jié)合。目前已使用的抗腫瘤藥物雖對(duì)大多數(shù)腫瘤有一定療效，但仍存在著治療有效率低、選擇性差、毒副作用明顯、易產(chǎn)生細(xì)胞耐藥等問題。因此，尋找高效、低毒、作用靶點(diǎn)明確的抗腫瘤藥物仍是生物、醫(yī)學(xué)科研領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。由于海洋獨(dú)特的地理、氣候及環(huán)境特點(diǎn)，海洋生物具有的新穎性與多樣性，在科學(xué)研究、應(yīng)用開發(fā)等方面都具有重要價(jià)值。海洋因此被認(rèn)為是個(gè)潛在、重要的生物資源庫，可能是產(chǎn)生新型生物活性物質(zhì)和先導(dǎo)化合物的潛在種源地，將會(huì)給新型天然藥物的篩選與發(fā)現(xiàn)帶來新的機(jī)遇與突破。海洋微生物蘊(yùn)含豐富的結(jié)構(gòu)新穎的抗腫瘤代謝產(chǎn)物，它們多為生物堿類、萜類、大環(huán)內(nèi)酯類化合物，主要來源于海洋放線菌和海洋真菌。但是來源于海洋細(xì)菌的抗腫瘤先導(dǎo)化合物研究的相對(duì)較少，有待于在這方面做深入的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要解決的技術(shù)問題是提供一種產(chǎn)抗腫瘤活性物質(zhì)的海洋芽孢桿菌N16(Bacillus sp.N16);該菌株能夠產(chǎn)生具有抗腫瘤活性的多肽。一種海洋芽孢桿菌，是從海水中培養(yǎng)分離得到產(chǎn)新型抗腫瘤物質(zhì)的海洋芽孢桿菌，命名為海洋芽孢桿菌N16(Bacillus sp.N16)，該海洋芽孢桿菌N16于2013年3月4日保藏于中國(guó)武漢典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC M 2013063。本發(fā)明還提供一種具有抗腫瘤活性的海洋芽孢桿菌N16多肽，該多肽分子量為1015Da,由 9 個(gè)氛基酸組成，氛基酸序列為 Arg-Cys-Phe-Ser-1le-Met-Ser-Asp-Arg。本發(fā)明還提供一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其步驟為:(I)發(fā)酵培養(yǎng)將海洋芽孢桿菌N16發(fā)酵，發(fā)酵條件:發(fā)酵液中各成分的終濃度為牛肉膏4_6g/L、蛋白胨 8-12g/L、氯化鈉 4-7g/L、ρΗ7.0-7.6，滅菌 1.05kg/cm2，20_35min，150_250r/min、25°C的條件下在旋轉(zhuǎn)搖床中培養(yǎng)20-33h ；(2)超濾分離 將海洋芽孢桿菌N16的發(fā)酵液，分批次離心，8000-10000g，5-10min,收集上清液，用分子量為0.3kDa、5kDa和50kDa的超濾膜超濾，獲得分子量0.3_5kDa和5_50kDa的不同組分，檢測(cè)各組分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明分子量0.3-5kDa組分的抗腫瘤活性最佳；(3) 二 乙氨乙基(DEAE) FF陰離子交換層析將超濾獲得的具有最佳抗腫瘤活性的組分，過DEAE FF陰離子交換層析預(yù)裝柱，上樣緩沖液為3-6mmol/L pH8.0-9.5三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)緩沖液，每次上樣量為 5-20ml，洗脫液為含 0.5-2mol/L NaCl 的 3_6mmol/L pH8.0-9.5 Tris-HCl，洗脫液以0-100% (v/v)的濃度進(jìn)行梯度洗脫,流速為3-6mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm,收集各峰,檢測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，將具有較好抗腫瘤活性峰的組分脫鹽后真空冷凍干燥保存；(4) Superdex30 凝膠過濾層析取DEAE收集的具有較好抗腫瘤活性峰的組分,過Superdex30凝膠過濾預(yù)裝柱,每次上樣量為1-lOml，流動(dòng)相為超純水，流速為l_5ml/min，收集各峰，檢測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，將具有較好抗腫瘤活性峰的組分脫鹽后真空冷凍干燥保存，即為海洋芽孢桿菌N16多肽。進(jìn)一步，所述的抗腫瘤活性的檢測(cè)方法為以肝癌細(xì)胞BEL-7402為靶細(xì)胞，采用MTT法追蹤抗腫瘤活性組分。進(jìn)一步，所述的MTT法:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌細(xì)胞BEL-7402，用胰酶消化后，以
4X 104個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，每孔180 μ L，在37°C，培養(yǎng)24h，然后加樣，樣品溶液應(yīng)先經(jīng)過微孔濾膜過濾除菌，用培養(yǎng)液將樣品稀釋成5個(gè)濃度梯度，每孔加入20 μ L，4個(gè)平行孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h，然后，加入5mg/mL MTT 20 μ L，置CO2培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)4h ;棄除孔中培養(yǎng)液，然后每孔加入DMSO 150μ L，37°C恒溫振蕩30min以充分溶解甲瓚結(jié)晶，酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔在570nm波長(zhǎng)處吸光度值，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次；細(xì)胞抑制率=[(A對(duì)照-A樣品)/A對(duì)照]X 100%，其中A為吸光度值；采用Excel分析軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度 IC50。進(jìn)一步， 上述步驟(3)中的洗脫液中NaCl的濃度優(yōu)選為lmol/L。進(jìn)一步,上述步驟(3)中的洗脫液的流速優(yōu)選為5.0mL/min。進(jìn)一步，上述步驟(3)中每次上樣量?jī)?yōu)選為10mL。進(jìn)一步，上述步驟(4)中每次上樣量?jī)?yōu)選為5mL。進(jìn)一步,上述步驟(4)中流動(dòng)相為超純水,流速優(yōu)選為2.6mL/min。本發(fā)明還提供一種抗腫瘤藥物，該藥物包含海洋芽孢桿菌N16多肽。本發(fā)明還提供一種海洋芽孢桿菌N16多肽在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果:該菌株能夠穩(wěn)定的表達(dá)抗腫瘤活性的多肽，該多肽具有較好的酸堿和熱穩(wěn)定性，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，對(duì)人正常細(xì)胞的細(xì)胞毒相對(duì)較小，具有較好的研究和應(yīng)用價(jià)值。


圖1菌株N16的掃描電子顯微鏡照片圖2粗提物的DEAE FF陰離子層析圖譜圖3離子交換活性組分的superdex30凝膠過濾層析圖譜圖4MALD1-TOF-TOF測(cè)定海洋芽孢桿菌多肽的氨基酸序列圖5海洋芽孢桿菌N16多肽的對(duì)人不同腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的細(xì)胞毒海洋芽孢桿菌N16，拉丁文名稱為Bacillus sp.N16，于2013年3月4日保藏于武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)中國(guó)武漢典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC M2013063。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí)施例任何形式的限制。并不限于下列實(shí)施例:實(shí)施例1海洋芽孢桿菌N16的篩選分離過程( I)活性初篩分別采用海水基礎(chǔ)培養(yǎng)基2216E和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基NRG等不同培養(yǎng)基對(duì)海水樣品進(jìn)行選擇性的分離培養(yǎng)，共獲得47株單菌。對(duì)這47株微生物發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗腫瘤活性初步篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)肝癌細(xì)胞BEL-7402的抑制率達(dá)到60%以上的有I株；抑制率達(dá)到50-60%以上的共有I株。(2)菌株復(fù)篩測(cè)定上述2種活性菌株發(fā)酵液對(duì)其他腫瘤細(xì)胞，包括人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251和人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549的增值抑制作用。結(jié)果表明，其中有一菌株N16的發(fā)酵液對(duì)以上腫瘤細(xì)胞均·具有較好的細(xì)胞增殖抑制作用，其中對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251和人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549人的抑制率分別為68.1%、59.8%,63.1%。實(shí)施例2海洋芽孢桿菌N16形態(tài)特征與生理生化特征(I)形態(tài)特征對(duì)菌株進(jìn)行革蘭氏染色，為革蘭氏陽性菌。菌株N16具有桿菌形態(tài)和產(chǎn)芽孢能力這兩種芽孢桿菌屬的重要特征桿菌，采用平皿插片法培養(yǎng)，用掃描電鏡觀察菌株N16的菌體形態(tài)，0.8-2.Ομπι長(zhǎng)，0.2-0.6μπι寬(圖1)。25°C下，在海水基礎(chǔ)培養(yǎng)基2216Ε上培養(yǎng)24h后，菌落橢圓形、全緣、扁平，直徑0.5至1.5mm，光滑無光澤，粘液狀外觀，乳白色。該菌為好氧菌，在pH值為7.5，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)基中NaC16% (w/v)時(shí)生長(zhǎng)良好。(2)生理生化反應(yīng)特征主要根據(jù)《普通細(xì)菌學(xué)方法手冊(cè)》和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》的方法，測(cè)定部分生理生化特征，陰性:氧化酶試驗(yàn)、精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧、脲酶、明膠酶、色氨酸脫氫酶、吲哚實(shí)驗(yàn)，陽性:硝酸還原、VP實(shí)驗(yàn)、半乳糖式酶、β -半乳糖苷酶、檸檬酸利用、H2S產(chǎn)生；發(fā)酵利用:陰性結(jié)果，甘露醇、蔗糖、蜜二糖、肌醇、山梨醇，陽性結(jié)果，葡萄糖、阿拉伯糖；同化實(shí)驗(yàn)為陰性:甘露糖、甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麥芽糖、葡萄糖酸鹽、蘋果酸、朽1檬酸。實(shí)施例3制備小量的細(xì)菌基因組DNA，通過PCR擴(kuò)增16S rDNA，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物為單一條帶后直接送上海生工測(cè)序。測(cè)兩個(gè)反應(yīng)，測(cè)通。序列全長(zhǎng)為1542bp，16SrDNA序列見序列表。將該16SrDNA序列在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行BLAST比對(duì)，進(jìn)行同源序列檢索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌為芽孢桿菌屬(Bacillus)，命名為海洋芽孢桿菌N16 (Bacillus sp.N16)。該海洋芽孢桿菌N16于2013年3月4日保藏于中國(guó)武漢典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC M2013063。16S rDNA基因序列在某些位點(diǎn)發(fā)生突變的幾率有所不同，但在種、屬水平上表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)和功能的保守性，有“細(xì)菌化石”之譽(yù)，是生物進(jìn)化史的計(jì)時(shí)器。采用16S rDNA作為分子指標(biāo)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物進(jìn)行快速、準(zhǔn)確、微量、簡(jiǎn)便的分類鑒定。實(shí)施例4具有抗腫瘤活性的海洋芽孢桿菌N16多肽的制備(I)發(fā)酵培養(yǎng)取斜面保存的海洋芽孢桿菌N16菌株一環(huán)接種于種子發(fā)酵液，25°C，200r/min培養(yǎng)24h，發(fā)酵液4000r/min離心20min，所得上清液即為含抗腫瘤多肽的粗液。發(fā)酵液中各成分的終濃度為:牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L, NaC15g/L, pH 7.5。(2)超濾分離將菌株發(fā)酵液，分批次離心，8000g，7min，共收集約5000mL上清液，用分子量為
0.3kDa、5kDa和50kDa的超濾膜超濾，獲得分子量0.3_5kDa和5_50kDa的不同組分，檢測(cè)各組分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明分子量0.3-5kDa的組分抗腫瘤活性最佳。(3) 二乙氨乙基(DEAE) FF陰離子交換層析將超濾獲得的具有最佳抗腫瘤活性組分，過DEAE FF陰離子交換層析預(yù)裝柱，上樣緩沖液為4mmol/L pH8.5 Tris-HCl緩沖液，每次上樣量為10mL，洗脫液為含lmol/LNaCl 的 4mmol/L pH8.5 Tris-HCl,洗脫液先依次以 3%(v/v) >6%(v/v) >9%(v/v)、12%(v/v)、24%(v/v)、100%(v/v)的濃度進(jìn)行梯度洗脫,流速為5mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm,層析圖譜(圖2)，收集各峰，檢 測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明峰2組分具有最佳抗腫瘤活性，把峰2組分脫鹽后真空冷凍干燥保存。(4) Superdex30 凝膠過濾層析取上述步驟的最佳抗腫瘤活性組分,過Superdex30凝膠過濾預(yù)裝柱,每次上樣量為5mL，流動(dòng)相為超純水，流速為2.6mL/min，收集各峰，層析圖譜(圖3)，檢測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明峰8組分具有抗腫瘤活性，把峰8組分脫鹽后真空冷凍干燥保存，即為海洋芽孢桿菌N16多肽。所述的各峰組分抗腫瘤活性分析為以肝癌細(xì)胞BEL-7402為靶細(xì)胞，采用MTT法追蹤抗腫瘤活性組分。MTT法:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌細(xì)胞BEL-7402，用胰酶消化后，以4X104個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，每孔180μ L，在37°C，培養(yǎng)24h。然后加樣，樣品溶液應(yīng)先經(jīng)過微孔濾膜過濾除菌，用培養(yǎng)液將樣品稀釋成5個(gè)濃度梯度，每孔加入20 μ L，4個(gè)平行孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h。然后，加入MTT (5mg/mL)20yL，置CO2培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)4h。棄除孔中培養(yǎng)液，然后每孔加入DMSO 1501^，371:恒溫振蕩301^11以充分溶解甲瓚結(jié)晶。酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔在570nm波長(zhǎng)處吸光度(A)值，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。細(xì)胞抑制率=[(A對(duì)照-A樣品)/A對(duì)照]X 100%。采用Excel分析軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。實(shí)施例5海洋芽孢桿菌N16多肽分子量測(cè)定及氨基酸分析:將通過以上流程制備的圖3中的峰8抗腫瘤活性組分進(jìn)行高壓液相分析，結(jié)果為單一峰。用串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(Proteomics Analyzer, T0F/T0F TM)進(jìn)行質(zhì)譜分析,采用正離子模式和自動(dòng)獲取數(shù)據(jù)模式采集數(shù)據(jù)。進(jìn)行質(zhì)譜(Mass Specrometry, MS)分析,檢測(cè)到活性組分的分子量約為lOlOTa，由9個(gè)氨基酸組成。進(jìn)一步經(jīng)MS/MS分析，De NovoExplorer從頭測(cè)序,測(cè)序結(jié)果見圖4,得到海洋芽孢桿菌N16多肽的氨基酸序列為Arg-Cys-Phe-Ser-1le-Met-Ser-Asp-Arg。在NCBI 網(wǎng)站進(jìn)行protein to protein BLAST 比對(duì)，沒有檢測(cè)到與其相匹配的活性肽；由此說明，海洋芽孢桿菌N16產(chǎn)生的該多肽為一種新的抗腫瘤活性多肽，命名為海洋芽孢桿菌N16多肽。實(shí)施例6海洋芽孢桿菌N16多肽對(duì)不同腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的細(xì)胞毒。分別以人肝癌細(xì)胞BEL-7402、人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549和人乳腺癌細(xì)胞MCF-7等腫瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞，采用MTT法，檢測(cè)海洋芽孢桿菌N16多肽對(duì)各種腫瘤細(xì)胞具有增殖抑制作用，其中，對(duì)BEL-7402的IC5tl值為5.96 μ mol/L，對(duì)人肺成纖維細(xì)胞HFLl的細(xì)胞毒性相對(duì)較小，如圖5所示。因此，本發(fā)明的海洋芽孢桿菌N16多肽可以在治療人肝癌、膠質(zhì)瘤、 肺癌、乳腺癌的藥物中進(jìn)行應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種海洋芽孢桿菌，其特征在于它是從海水中培養(yǎng)分離得到，能產(chǎn)新型抗腫瘤物質(zhì)，該菌株命名為海洋芽孢桿菌N16 (Bacillus sp.N16)，該海洋芽孢桿菌N16于2013年3月4日保藏于中國(guó)武漢典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC M 2013063。
2.本發(fā)明還提供一種具有抗腫瘤活性的海洋芽孢桿菌N16多肽，該多肽分子量為1015Da,由 9 個(gè)氛基酸組成，氛基酸序列為 Arg-Cys-Phe-Ser-1le-Met-Ser-Asp-Arg。
3.本發(fā)明還提供一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其步驟為: (1)發(fā)酵培養(yǎng) 將海洋芽孢桿菌N16發(fā)酵，發(fā)酵條件:發(fā)酵液中各成分的終濃度為牛肉膏4-6g/L、蛋白胨 8-12g/L、氯化鈉 4-7g/L、ρΗ7.0-7.6，滅菌 1.05kg/cm2，20_35min，150_250r/min、25°C 的條件下在旋轉(zhuǎn)搖床中培養(yǎng)20-33h ； (2)超濾分離 將海洋芽孢桿菌N16的發(fā)酵液，分批次離心，8000-10000g，5-10min,收集上清液，用分子量為0.3kDa、5kDa和50kDa的超濾膜超濾，獲得分子量0.3_5kDa和5_50kDa的不同組分，檢測(cè)各組分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明分子量0.3-5kDa組分的抗腫瘤活性最佳； (3)二乙氨乙基，簡(jiǎn)稱DEAE，F(xiàn)F陰離子交換層析 將超濾獲得的具有最佳抗腫瘤活性的組分，過DEAE FF陰離子交換層析預(yù)裝柱，上樣緩沖液為3-6mmol/L pH8.0-9.5三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液，每次上樣量為5_20ml，洗脫液為含 0.5-2mol/L NaCl 的 3_6mmol/L ρΗ8.0-9.5 Tris-HCl，洗脫液以 0_100%(ν/ν)的濃度進(jìn)行梯度洗脫，流速為3-6mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，收集各峰，檢測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，將具有較好抗腫瘤活性峰的組分脫鹽后真空冷凍干燥保存； (4)Superdex30凝膠過濾`層析 取DEAE收集的具有較好抗腫瘤活性峰的組分,過Superdex30凝膠過濾預(yù)裝柱,每次上樣量為1-1Oml,流動(dòng)相為超純水,流速為l-5ml/min,收集各峰,檢測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，將具有較好抗腫瘤活性峰的組分脫鹽后真空冷凍干燥保存，即為海洋芽孢桿菌N16多肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其特征在于所述的抗腫瘤活性的檢測(cè)方法為以肝癌細(xì)胞BEL-7402為靶細(xì)胞，采用MTT法追蹤抗腫瘤活性組分。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其特征在于所述的MTT法:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌細(xì)胞BEL-7402，用胰酶消化后，以4X 104個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，每孔180 μ L，在37°C，培養(yǎng)24h，然后加樣，樣品溶液應(yīng)先經(jīng)過微孔濾膜過濾除菌，用培養(yǎng)液將樣品稀釋成5個(gè)濃度梯度，每孔加入20 μ L，4個(gè)平行孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h，然后，加入5mg/mL MTT 20 μ L，置CO2培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)4h ;棄除孔中培養(yǎng)液，然后每孔加入DMSO 15(^匕371:恒溫振蕩301^11以充分溶解甲瓚結(jié)晶，酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔在570nm波長(zhǎng)處吸光度值，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次；細(xì)胞抑制率=[(A對(duì)照-A樣品)/A對(duì)照]X 100%，其中A為吸光度值；采用Excel分析軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其特征在于上述步驟(3)中的洗脫液中NaCl的濃度為lmol/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其特征在于上述步驟(3)中的洗脫液的流速為5.0mL/min，每次上樣量為10mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種海洋芽孢桿菌N16多肽的篩選方法，其特征在于上述步驟(4)中每次上樣量為5mL，流動(dòng)相為超純水，流速為2.6mL/min。
9.本發(fā)明還提供一種抗腫瘤藥物,該藥物包含海洋芽孢桿菌N16多肽。
10.本發(fā)明 還提供一種海洋芽孢桿菌N16多肽在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及海洋芽孢桿菌及其產(chǎn)生的具有抗腫瘤活性的多肽，該菌株保藏在中國(guó)武漢典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC M 2013063，從該菌株發(fā)酵產(chǎn)物中獲得一種新型的具有抗腫瘤活性的海洋芽孢桿菌多肽；通過MTT法，發(fā)現(xiàn)該多肽對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549等腫瘤細(xì)胞均具有顯著增殖抑制作用，對(duì)人成纖維細(xì)胞HFL1細(xì)胞毒相對(duì)較小，可以在治療人肝癌、膠質(zhì)瘤、肺癌、乳腺癌的藥物中進(jìn)行應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07K1/16GK103224898SQ20131012815
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2013年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月5日
發(fā)明者鄭蘭紅, 孫謐, 鄭媛, 王偉, 盛軍, 紀(jì)曉峰, 郝建華 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所