一種木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷制備方法及用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷制備方法及用途，屬于中藥有效成分提取和應(yīng)用領(lǐng)域。包括提取、水沉、純化步驟，本發(fā)明的方法簡單、方便，制備的木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷純度高，對于治療腦中風(fēng)后遺癥有較好的療效。
【專利說明】-種木犀草素-7-0-P -D-葡萄糖醛酸苷制備方法及用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及從苦碟子中提取黃酮苷類的方法及用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 苦碟子味辛、苦，微寒，具有清熱解毒，消癰排膿，祛瘀止痛的功效。苦碟子主要成 分為黃酮類、酚酸類、倍半萜內(nèi)酯類、三萜類物質(zhì)，藥理作用較為廣泛：（1)心、腦血管保護(hù) 作用；具有增加冠脈流量，降低氧代謝，提高耐缺氧能力，對實驗性心肌梗死的治療作用，增 加腦血流量，改善微循環(huán)，收縮血管作用。（2)對血液系統(tǒng)的作用；具有抗血小板聚集，增強(qiáng) 纖維蛋白酶活性，降血脂、活血化瘀、抗動脈粥樣硬化作用。（3)鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用；(4)抗氧 化和清除自由基作用；（5)抗腫瘤作用；(6)抗呼吸道病毒作用；(7)肝臟保護(hù)作用；(8) 其他作用。
[0003] 為了分析苦碟子中各成分的藥理作用，需要對苦碟子進(jìn)行提取，進(jìn)一步研 究各成分單獨的藥理作用，以便在臨床上更精準(zhǔn)的應(yīng)用，目前，還沒有發(fā)現(xiàn)木犀草 素-7-0-3-D-葡萄糖醛酸苷的提取方法以及在治療腦中風(fēng)后遺癥方面的文獻(xiàn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種簡單、方便、純度高的制備木犀草素-7-0-0 -D-葡萄糖醛 酸苷的方法以及木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷的用途。
[0005] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是： 木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷制備方法，包括以下步驟： A、 提?。悍Q取苦碟子，向苦碟子中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小時，回流提取兩 次，每次2小時，合并提取液，在40-60°C條件下減壓濃縮得到生藥濃度為0. 8-1. 2g/ml的濃 縮液I ; B、 水沉：向濃縮液I中加入3-6倍量去離子水，4-10°C冷藏，過濾，濾液備用； C、 純化：將B步驟中所得濾液依次經(jīng)過大孔吸附樹脂I純化得到濃縮液II、聚酰胺純 化得到濃縮液III、大孔吸附樹脂II純化得到濃縮液IV、高壓制備色譜或中壓制備色譜純化 兩次，然后按照色譜峰收集目標(biāo)化合物，然后減壓濃縮、冷凍干燥即得。
[0006] 所述大孔吸附樹脂I為HZ820大孔吸附樹脂；大孔吸附樹脂II為XAD7HP大孔吸附 樹脂。
[0007] 作為優(yōu)選方式所述大孔吸附樹脂I純化步驟如下：按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為 1:1. 5稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH3. 5-4. 0條件下，將濾液上樣，上樣流速 為2-4BV/h，上樣后飽和1小時；再用PH3. 5-4. 0的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為4-6BV/ h，洗脫用量為4-6BV ;再用60%乙醇洗脫，洗脫流速6-8BV/h，洗脫用量為6-8BV，收集洗脫 液，在40-60°C條件下減壓濃縮得到濃度為0. 2-0. 5g/ml濃縮液II。
[0008] 作為優(yōu)選方式：所述聚酰胺純化中，聚酰胺為30-60目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為 1:6,將濃縮液II上樣，上樣流速為2-4BV/h，上樣后飽和lh，先用14-16BV水以流速4-6BV/ h洗脫，再用10-12BV 20%乙醇以流速4-6BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用14-16BV的70%乙 醇以流速6-8BV/h洗脫，收集洗脫液，在40-60°C條件下減壓濃縮得到濃度為0. 9-1. lg/ml 濃縮液III。
[0009] 作為優(yōu)選方式所述大孔吸附樹脂II純化步驟如下：按照樹脂與生藥質(zhì)量比為 2. 03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液III調(diào)PH8. 5-9. 0上樣，上樣流速為 l-2BV/h，上樣后飽和30分鐘，再用4-5BV的10%乙醇以流速6-8BV/h洗脫，收集洗脫液，在 40-60°C條件下減壓濃縮得到濃度為12-15g/ml濃縮液IV。
[0010] 作為優(yōu)選方式：所述高壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:3,純化兩次，按 照色譜峰收集木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木 犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0011] 作為優(yōu)選方式：所述中壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:6,純化兩次，按 照色譜峰收集木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木 犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0012] 木犀草素-7- 0-0 -D-葡萄糖醛酸苷制備方法，包括以下步驟： A、 提?。悍Q取苦碟子，向苦碟子中加10倍量40%乙醇浸泡1-3小時，回流提取兩次，每 次2小時，合并提取液，在60°C條件下減壓濃縮得到生藥濃度為I. 2g/ml的濃縮液I ; B、 水沉：向濃縮液I中加入6倍量去離子水，4°C冷藏，過濾，濾液備用； C、 將B步驟中所得濾液經(jīng)過大孔吸附樹脂I純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1. 5 稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH3. 5-4. 0條件下，將濾液上樣，上樣流速為2BV/ h，上樣后飽和1小時；再用PH3. 5的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為4BV/h，洗脫用量為6BV ; 再用60%乙醇洗脫，洗脫流速6BV/h，洗脫用量為8BV，收集洗脫液，在60°C條件下減壓濃縮 得到濃度為〇. 2g/ml濃縮液II。
[0013] D、將步驟C中所得濃縮液II通過聚酰胺純化，聚酰胺為30目，聚酰胺與生藥質(zhì)量 比為1:6,將濃縮液II上樣，上樣流速為2BV/h，上樣后飽和lh，先用16BV水以流速4BV/h 洗脫，再用12BV 20%乙醇以流速4BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用16BV的70%乙醇以流速 8BV/h洗脫，收集洗脫液，在60°C條件下減壓濃縮得到濃度為0. 9g/ml濃縮液III。
[0014] E、將步驟D中所得濃縮液III通過大孔吸附樹脂II，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為 2. 03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液III調(diào)PH8. 5上樣，上樣流速為lBV/h， 上樣后飽和30分鐘，再用4BV的10%乙醇以流速6BV/h洗脫，收集洗脫液，在60°C條件下減 壓濃縮得到濃度為15g/ml濃縮液IV。
[0015] F、將步驟E中所得濃縮液IV通過高壓制備色譜純化，高壓制備色譜的C18填料與 生藥質(zhì)量比為1:3,純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然 后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0016] 或木犀草素-7- 〇-P-D-葡萄糖醛酸苷制備方法，包括以下步驟:A、提?。悍Q取苦 碟子，向苦碟子中加12倍量40-70%乙醇浸泡2小時，回流提取兩次，每次2小時，合并提取 液，在50°C條件下減壓濃縮得到生藥濃度為I. Og/ml的濃縮液I ; B、 水沉：向濃縮液I中加入4倍量去離子水，6°C冷藏，過濾，濾液備用； C、 將B步驟中所得濾液經(jīng)過大孔吸附樹脂I純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1. 5 稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH4. O條件下，將濾液上樣，上樣流速為3BV/h，上 樣后飽和1小時；再用PH4. O的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為5BV/h，洗脫用量為5BV ;再 用60%乙醇洗脫，洗脫流速7BV/h，洗脫用量為7BV，收集洗脫液，在50°C條件下減壓濃縮得 到濃度為〇. 3g/ml濃縮液II。
[0017] D、將步驟C中所得濃縮液II通過聚酰胺純化，聚酰胺為50目，聚酰胺與生藥質(zhì)量 比為1:6,將濃縮液II上樣，上樣流速為3BV/h，上樣后飽和lh，先用15BV水以流速5BV/h 洗脫，再用IlBV 20%乙醇以流速5BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用15BV的70%乙醇以流速 7BV/h洗脫，收集洗脫液，在50°C條件下減壓濃縮得到濃度為I. Og/ml濃縮液III。
[0018] E、將步驟D中所得濃縮液III通過大孔吸附樹脂II，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為 2. 03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液III調(diào)PH9. 0上樣，上樣流速為2BV/h， 上樣后飽和30分鐘，再用5BV的10%乙醇以流速7BV/h洗脫，收集洗脫液，在50°C條件下減 壓濃縮得到濃度為13g/ml濃縮液IV。
[0019] F、將步驟E中所得濃縮液IV通過中壓制備色譜純化，中壓制備色譜的C18填料與 生藥質(zhì)量比為1:6,純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然 后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0020] 通常將樹脂裝于圓筒形的樹脂柱中，溶液連續(xù)地通過，樹脂柱內(nèi)裝載樹脂的體積 稱為床容積（bed volume)，簡寫為BV，這是樹脂柱的基本單位，它工作時的各種物料量都以 BV為單位。例如溶液通過樹脂柱的流量速度為2?4BV/h，即每小時通過溶液的體積為樹 脂床容積的2?4倍，樹脂的處理能力亦常以BV為單位計算。所得的各濃縮液的濃度皆是 生藥的濃度。
[0021] 作為優(yōu)選方式：在制備治療腦中風(fēng)后遺癥藥物中的應(yīng)用。
[0022] 由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明取得的技術(shù)進(jìn)步是： 本發(fā)明采用的制備方法，操作簡單，得到的目標(biāo)物純度高在90%以上，用于治療腦中風(fēng) 后遺癥，效果好。在用本發(fā)明的方法之前，目標(biāo)物的純度不到90%。
[0023] 為了證明木犀草素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷對于腦中風(fēng)后遺癥的作用，做了如 下實驗： 實驗?zāi)康?采用三氯化鐵制備局灶性腦缺血大鼠模型，尾靜脈注射不同劑量的木犀草 素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷，測算大鼠腦梗塞范圍，觀察其對腦缺血的保護(hù)作用。
[0024] 實驗材料 I. 1供試品 I. I. 1名稱：木犀草素-7-0-0 -D-葡萄糖醛酸苷，供試品號：TN-1210。
[0025] I. 1. 2理化性質(zhì)：黃色粉末。
[0026] I. 1. 3擬臨床適應(yīng)癥：擬開發(fā)對腦中風(fēng)后遺癥的治療作用。
[0027] I. 1. 4擬臨床用量：暫無臨床推薦用量。
[0028] I. 1. 5含量及規(guī)格：本品為苦碟子提取的單體化合物，純度為98. 07%。
[0029] I. 1. 6來源和批號：石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號：20121022。
[0030] I. 1. 7供試品保管：低溫冷藏。
[0031] 陽性藥及工具藥 尼莫地平注射液，山東方明藥業(yè)股份有限公司，批號=1202002。
[0032] 精氨酸，上海協(xié)和氨基酸有限公司，批號：09021156。
[0033] 鹽酸，石家莊市華迪化工工貿(mào)有限公司，批號：20100123。
[0034] 三氯化鐵，天津市永大化學(xué)試劑有限公司，批號：20100131。
[0035] 水合氯醛，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號：20090228。
[0036] 紅四氮唑（TTC)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20120210。
[0037] 甲醛，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號：20101109。
[0038] 生理鹽水，石家莊四藥有限公司，批號：120421405。
[0039] 實驗系統(tǒng) 1. 3. 1動物種系：SD大鼠。
[0040] 1. 3. 2 動物級別：SPF 級。
[0041] 1. 3. 3動物性別和數(shù)量：75只，雄性。
[0042] 1. 3. 4動物年齡：約4-6周齡。
[0043] L 3. 5 動物體重：180-200g。
[0044] 1. 3. 6動物來源：購于中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所。
[0045] 1. 3. 7動物合格證號及發(fā)證單位、接收日期：合格證編號0295390,許可證號SCXK (京）2009-0017,發(fā)證單位是中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所，接收日期2012 年11月23日。
[0046] 1. 3. 8飼養(yǎng)條件：大鼠籠養(yǎng)，飼養(yǎng)在河北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)藥研究院新藥評價中心， 光照12小時/天，溫度20-25°C，相對濕度40-70%。
[0047] 1. 3. 9檢疫過程：新到的動物檢疫期5天，在檢疫期間觀察動物飲水、攝食和健康 狀況，以及是否存在疾病和死亡征兆。
[0048] 1. 3. 10飼料：實驗動物全價顆粒飼料，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，生 產(chǎn)許可證：SCXK (軍）2007-005。
[0049] 1. 3. 11飲水：瓶裝普通飲用水，動物自由飲用。每日沖洗水瓶并換水一次。
[0050] 1. 3. 12墊料：購自河北省實驗動物中心，隔日更換。
[0051] 1. 3. 13標(biāo)識：動物識別采用5%苦味酸標(biāo)記。
[0052] 實驗方法 2. 1實驗設(shè)計依據(jù) 2. I. 1采用標(biāo)準(zhǔn)：國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《藥品注冊管理辦法》，附件1-中 藥、天然藥物注冊分類及申報資料要求。
[0053] 2. 1. 2實驗系統(tǒng)選擇說明：實驗性腦缺血的動物模型有多種，主要分兩大類，即局 灶性腦缺血和全腦缺血。但臨床上局灶性腦缺血的發(fā)生率遠(yuǎn)高于全腦缺血，單支動脈阻斷， 尤其是大腦中動脈阻斷造成的腦梗塞與人類缺血性卒中最為類似。因此引起局灶性腦梗 塞的方法，以大腦中動脈阻斷尤為常見。FeCl 3局部浸潤動脈可使血管內(nèi)膜剝脫，內(nèi)膜下組 織暴露，通過Fe3+促發(fā)羥自由基的產(chǎn)生，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，損傷血管內(nèi)皮，促使血小板粘附 聚集并發(fā)生釋放反應(yīng)，激發(fā)凝血過程，導(dǎo)致血管內(nèi)血栓形成，阻塞血管，引起腦組織缺血、缺 氧，形成局灶性缺血性梗塞灶。本模型成功率高，栓塞位置固定，梗死范圍穩(wěn)定，重復(fù)性好， 適合藥物的藥效學(xué)評價。
[0054] 2. 1. 3委托單位提供資料：木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷，黃色粉末，為苦碟 子提取的單體化合物，純度為98. 07%，低溫冷藏，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，批 號：20121022。
[0055] 劑量與分組 木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷劑量設(shè)置參考其對心肌缺血的改善作用（2、10、 50mg/kg)，本次實驗?zāi)鞠菟?7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷設(shè)置低、中、高三個劑量，分別為 2. 5、5、10 mg/kg，尼莫地平劑量為0. 5mg/kg，另設(shè)模型對照組，根據(jù)以上劑量設(shè)置情況，將 75只大鼠按體重隨機(jī)分為下列5組，每組15只，具體分組和劑量見附表1。
[0056] 給藥方法 經(jīng)尾靜脈注射給藥。
[0057] 供試品配制和保存 根據(jù)尾靜脈注射體積為lml/100g，木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷純度為98. 07%， 計算高、中、低劑量組的配制濃度，分別是l.〇2、0. 51、0. 225mg/ml，臨用前生理鹽水稀釋至 所需濃度，〇. 22 y m濾膜過濾除菌，每日現(xiàn)用現(xiàn)配。
[0058] 尼莫地平注射液于尾靜脈注射前用生理鹽水稀釋至0. 05mg/ml，每日現(xiàn)用現(xiàn)配。
[0059] 供試品的給予 用一次性注射器抽取藥液進(jìn)行尾靜脈注射，體積為lml/lOOg體重，模型組尾靜脈給予 同體積的生理鹽水，均于大腦中動脈栓塞后IOmin開始給藥，連續(xù)給藥3天。
[0060] 模型制備 實驗動物檢疫期結(jié)束后開始模型制備，以10%水合氯醛腹腔麻醉，側(cè)臥固定，在眼眥和 外耳道中線處剪一小口，暴露顳肌，用止血鉗將顳肌夾開，向兩側(cè)分開，注意不要損傷面神 經(jīng)。暴露鱗狀骨大部分，然后在顴弓和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2_鉆孔，在手術(shù)顯微下， 用小號直紋鉗開約2mm直徑小顱窗，顯露大腦中動脈。將吸有50%三氯化鐵溶液（lmol/L鹽 酸溶液配制，濃鹽酸百分濃度36-38%，物質(zhì)的量濃度為12mol/L，取8. 3-8. 5ml鹽酸，加水稀 釋到100ml，即為lmol/L) 10 iU滴在小片濾紙上，敷在該段大腦中動脈處，放置30分鐘后 中動脈變黑去掉濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合后回籠飼養(yǎng)，室溫控制在25°C左 右。
[0061] 觀測的指標(biāo)、時間和內(nèi)容 末次給藥后3h，麻醉動物，斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干后，在冰箱中速凍 15min，取出后行冠狀切4刀分為5片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處，第二刀在視交 叉部位，第三刀在漏斗柄部位，第四刀在漏斗柄與葉尾極之間。迅速將腦片置于TTC染液中 (5ml染液中含4%TTC 1.5ml，IM K2HPO4O. lml，其余加蒸餾水至刻度)，37°C避光溫孵20min， 取出后置于4%甲醛液中避光保存24h。正常組織經(jīng)染色后呈玫瑰紅色，梗塞組織呈白色。 將每個腦平面投射到密度均一的鋁鉬上，小心挖下白色組織并稱重，以梗塞組織重量占全 腦重量及手術(shù)側(cè)半腦重量的百分比作為梗塞范圍（％)，并以手術(shù)側(cè)半腦梗塞范圍計算各藥 物治療組的抑制率（％)抑制率計算公式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種木犀草素-7- ο-β-D-葡萄糖醛酸苷制備方法，其特征在于包括以下步驟： A、 提?。悍Q取苦碟子，向苦碟子中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小時，回流提取兩 次，每次2小時，合并提取液，在40-60°C條件下減壓濃縮得到生藥濃度為0. 8-1. 2g/ml的濃 縮液I ; B、 水沉：向濃縮液I中加入3-6倍量去離子水，4-10°C冷藏，過濾，濾液備用； C、 純化：將B步驟中所得濾液依次經(jīng)過大孔吸附樹脂I純化得到濃縮液II、聚酰胺純 化得到濃縮液III、大孔吸附樹脂II純化得到濃縮液IV、高壓制備色譜或中壓制備色譜純化 兩次，然后按照色譜峰收集目標(biāo)化合物，然后減壓濃縮、冷凍干燥即得。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述大孔吸附樹脂I為HZ820大孔 吸附樹脂；所述聚酰胺為30-60目；大孔吸附樹脂II為XAD7HP大孔吸附樹脂。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂I純化步 驟如下：按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1. 5稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在 PH3. 5-4. 0條件下，將濾液上樣，上樣流速為2-4BV/h，上樣后飽和1小時；再用PH3. 5-4. 0 的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為4-6BV/h，洗脫用量為4-6BV ;再用60%乙醇洗脫，洗脫 流速6-8BV/h，洗脫用量為6-8BV，收集洗脫液，在40-60°C條件下減壓濃縮得到濃度為 0· 2-0. 5g/ml 濃縮液 II。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述聚酰胺純化步驟如下：聚酰 胺為30-60目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為1:6,將濃縮液II上樣，上樣流速為2-4BV/h，上樣后 飽和lh，先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脫，再用10-12BV 20%乙醇以流速4-6BV/h洗 脫，除去雜質(zhì)，然后再用14-16BV的70%乙醇以流速6-8BV/h洗脫，收集洗脫液，在40-60°C 條件下減壓濃縮得到濃度為〇. 9-1. lg/ml濃縮液III。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹脂II純化步驟 如下：按照樹脂與生藥質(zhì)量比為2. 03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液III調(diào) PH8. 5-9. 0上樣，上樣流速為l-2BV/h，上樣后飽和30分鐘，再用4-5BV的10%乙醇以流速 6-8BV/h洗脫，收集洗脫液，在40-60°C條件下減壓濃縮得到濃度為12-15g/ml濃縮液IV。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述高壓制備色譜純化步驟 如下：高壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:3,純化兩次，按照色譜峰收集木犀草 素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡 萄糖醛酸苷。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述中壓制備色譜純化步驟 如下：中壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:6,純化兩次，按照色譜峰收集木犀草 素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡 萄糖醛酸苷。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟： Α、提?。悍Q取苦碟子，向苦碟子中加10倍量40%乙醇浸泡1-3小時，回流提取兩次，每 次2小時，合并提取液，在60°C條件下減壓濃縮得到生藥濃度為1. 2g/ml的濃縮液I ; B、 水沉：向濃縮液I中加入6倍量去離子水，4°C冷藏，過濾，濾液備用； C、 將B步驟中所得濾液經(jīng)過大孔吸附樹脂I純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1. 5 稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH3. 5-4. 0條件下，將濾液上樣，上樣流速為2BV/ h，上樣后飽和1小時；再用PH3. 5的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為4BV/h，洗脫用量為6BV ; 再用60%乙醇洗脫，洗脫流速6BV/h，洗脫用量為8BV，收集洗脫液，在60°C條件下減壓濃縮 得到濃度為〇. 2g/ml濃縮液II ; D、 將步驟C中所得濃縮液II通過聚酰胺純化，聚酰胺為30目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為 1:6,將濃縮液II上樣，上樣流速為2BV/h，上樣后飽和lh，先用16BV水以流速4BV/h洗脫， 再用12BV 20%乙醇以流速4BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用16BV的70%乙醇以流速8BV/h 洗脫，收集洗脫液，在60°C條件下減壓濃縮得到濃度為0. 9g/ml濃縮液III ; E、 將步驟D中所得濃縮液III通過大孔吸附樹脂II，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為2. 03:1稱 取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液III調(diào)PH8. 5上樣，上樣流速為lBV/h，上樣后飽和 30分鐘，再用4BV的10%乙醇以流速6BV/h洗脫，收集洗脫液，在60°C條件下減壓濃縮得到 濃度為15g/ml濃縮液IV ; F、 將步驟E中所得濃縮液IV通過高壓制備色譜純化，高壓制備色譜的C18填料與生藥 質(zhì)量比為1:3,純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減 壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟： Α、提?。悍Q取苦碟子，向苦碟子中加12倍量40-70%乙醇浸泡2小時，回流提取兩次，每 次2小時，合并提取液，在50°C條件下減壓濃縮得到生藥濃度為1. Og/ml的濃縮液I ; B、 水沉：向濃縮液I中加入4倍量去離子水，6°C冷藏，過濾，濾液備用； C、 將B步驟中所得濾液經(jīng)過大孔吸附樹脂I純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1. 5 稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH4. 0條件下，將濾液上樣，上樣流速為3BV/h，上 樣后飽和1小時；再用PH4. 0的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為5BV/h，洗脫用量為5BV ;再 用60%乙醇洗脫，洗脫流速7BV/h，洗脫用量為7BV，收集洗脫液，在50°C條件下減壓濃縮得 到濃度為〇. 3g/ml濃縮液II ; D、 將步驟C中所得濃縮液II通過聚酰胺純化，聚酰胺為50目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為 1:6,將濃縮液II上樣，上樣流速為3BV/h，上樣后飽和lh，先用15BV水以流速5BV/h洗脫， 再用11BV 20%乙醇以流速5BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用15BV的70%乙醇以流速7BV/h 洗脫，收集洗脫液，在50°C條件下減壓濃縮得到濃度為1. Og/ml濃縮液III ; E、 將步驟D中所得濃縮液III通過大孔吸附樹脂II，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為2. 03:1稱 取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液III調(diào)PH9. 0上樣，上樣流速為2BV/h，上樣后飽和 30分鐘，再用5BV的10%乙醇以流速7BV/h洗脫，收集洗脫液，在50°C條件下減壓濃縮得到 濃度為13g/ml濃縮液IV ; F、 將步驟E中所得濃縮液IV通過中壓制備色譜純化，中壓制備色譜的C18填料與生藥 質(zhì)量比為1:6,純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減 壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所制備的木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的用途，其特征 在于在制備治療腦中風(fēng)后遺癥藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07H1/08GK104277083SQ201310279934
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月4日
【發(fā)明者】姜新剛, 趙韶華, 張秋艷, 賈繼明, 宋劍 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司