一種檸檬苦素的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檸檬苦素的提取方法，包括以下步驟：步驟一、原料浸提或榨汁：將原料用水直接浸泡或者采用壓榨機(jī)直接將原料榨汁，得到提取液；步驟二、加鹽及調(diào)pH：向上述提取液中，加入硫酸鹽固體物質(zhì)或硫酸鹽飽和溶液；調(diào)節(jié)pH為3-7；步驟三、加熱保溫：加熱至溫度20-100℃，保溫時(shí)間10-110min；步驟四、離心：在轉(zhuǎn)速為2500×g的條件下離心10min，制得檸檬苦素沉淀。采用本發(fā)明后，與傳統(tǒng)方法相比，原料不需要干燥就可直接用浸提液或榨汁液，采用沉淀法回收水中的大部分檸檬苦素，不需要復(fù)雜的設(shè)備，操作簡(jiǎn)便，工藝成本低。
【專利說(shuō)明】一種朽3檬苦素的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檸檬苦素的提取方法，尤其涉及一種通過(guò)沉淀方式提取檸檬苦素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]檸檬苦素類似物是一類高度氧化的四環(huán)三萜類化合物，主要存在于蕓香科和楝科植物中。自從Bemay (1841)首次分離得到檸檬苦素后，人們陸續(xù)分離得到不同的檸檬苦素類似物，目前已從柑橘屬植物及其雜交植物中分離得到300多種檸檬苦素類似物。
[0003]近幾十年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)柑橘果實(shí)中的檸檬苦素類似物具有許多生物學(xué)功能:具有抗瘧、抑菌、消炎、鎮(zhèn)痛、殺蟲功能，可有效防止病原菌對(duì)動(dòng)物機(jī)體的侵害，能夠驅(qū)除動(dòng)物體內(nèi)的寄生蟲；能夠激發(fā)體內(nèi)的主要解毒酶一谷胱苷肽轉(zhuǎn)移酶的活性，具有很強(qiáng)的抗癌活性；利用類檸檬苦素配成的一定濃度的殺蟲劑是一種天然無(wú)毒害、殺蟲效果好的理想的生物農(nóng)藥；類檸檬苦素經(jīng)過(guò)包埋處理用做功能性食品添加劑其用途十分廣泛，日本已出現(xiàn)利用檸檬苦素類似物制作功能食品的專利。檸檬苦素類似物還具有抗氧化、抗腫瘤、興奮神經(jīng)中樞系統(tǒng)等活性，對(duì)人類的醫(yī)學(xué)、食品、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等行業(yè)具有重要的意義，是一類開發(fā)價(jià)值很高的生物活性物質(zhì)。
[0004]檸檬苦素的分子式為C26H3tlO8,是一種呈電中性的三萜系二內(nèi)酯化合物，具有疏水性結(jié)構(gòu)，易于溶酯性有機(jī)溶劑，難溶于水。傳統(tǒng)提取檸檬苦素的方法是將原材料干燥后有機(jī)溶劑進(jìn)行脫脂、萃取。常用的萃取方法一般利用檸檬苦素在萃取液中的溶解性來(lái)提取檸檬苦素，主要用到的溶劑有二氯甲烷、己烷、甲醇、丙酮、異丙醇等。脫脂溶劑目前被廣泛采用的有石油醚、乙醚、乙醇和甲醇。采用傳統(tǒng)方法此類方法成本高、耗時(shí)長(zhǎng)，不利于實(shí)現(xiàn)制備檸檬苦素的工業(yè)化生產(chǎn)，且部分檸檬苦素以檸檬苦素A環(huán)內(nèi)酯的可溶形式存在水溶液中，從而難以分離。有研究者利用樹脂吸附水溶液中的檸檬苦素，再利用有機(jī)溶劑將吸附的檸檬苦素洗脫下來(lái)，該法同樣需要使用大量的有機(jī)溶解，需要回收有機(jī)溶劑，工藝成本高。
[0005]有鑒于此，本發(fā)明人研究和設(shè)計(jì)了一種檸檬苦素的提取方法，本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種檸檬苦素的提取方法，通過(guò)采用硫酸鹽沉淀的方法，達(dá)到快速、高效、低成本提取檸檬苦素的目的。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是:
一種檸檬苦素的提取方法，包括以下步驟:
步驟一、原料浸提或榨汁:將原料用水直接浸泡或者采用壓榨機(jī)直接將原料榨汁，得到提取液；
步驟二、加鹽及調(diào)pH:向上述提取液中，加入硫酸鹽固體物質(zhì)或硫酸鹽飽和溶液；調(diào)節(jié)PH 為 3-7 ；
步驟三、加熱保溫:加熱溫度20-100°C，保溫時(shí)間10-110 min ；步驟四、離心:在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min，制得檸檬苦素沉淀。
[0008]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟二中，所述的硫酸鹽為硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉或硫酸鉀。
[0009]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟二中，調(diào)節(jié)pH為4-6。
[0010]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟三中，加熱溫度60_80°C。
[0011]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟三中，加熱時(shí)間lOmin。
[0012]本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，即用水直接提取原料或壓榨取原料汁液，加入一定量的硫酸鹽固體或硫酸鹽飽和溶液，調(diào)整pH和溫度，使檸檬苦素沉淀出來(lái)，離心就得到高濃度的檸檬苦素沉淀；與傳統(tǒng)方法相比，原料不需要干燥就可直接用浸提液或榨汁液，采用沉淀法回收水中的大部分檸檬苦素，不需要復(fù)雜的設(shè)備，操作簡(jiǎn)便，工藝成本低。
【具體實(shí)施方式】
[0013]本發(fā)明的實(shí)施例中以柚子果實(shí)中檸檬苦素的提取說(shuō)明本發(fā)明的工藝，但本發(fā)明不僅限用于柚子等柑橘類果實(shí)中檸檬苦素的提取，也適用于用提取苦楝、非洲紅木等其他富含檸檬苦素植物材料。因而本發(fā)明實(shí)施例中的方法是從含有檸檬苦素的植物中提取檸檬苦素的通用方法。
[0014]本發(fā)明中米用Waters e2695 高效液相色譜儀(Waters e2695 SeparationsModule、Waters 2489 UV/Visible Detector、Empower 2 軟件)及 Symmetry 反相 C18 柱(3.0X250 mm, 5.0 μ m)測(cè)定檸檬苦素的含量，具體色譜檢測(cè)條件為:(1)在波長(zhǎng)λ =210 nm檢測(cè)檸檬苦素；(2)流速為0.5ml/min，柱溫35°C，進(jìn)樣體積20 μ L ; (3)梯度洗脫條件為(A為超純水，B 為乙腈):0-4 min 95% A ;4_14 min 95-60% A ; 14-16 min 60% A ;16_4 min 60-30%A ；24-28 min 30-95% A ;28_32 min 95% A。以保留時(shí)間為依據(jù)進(jìn)行定性分析，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量分析。檸檬苦素提取率如下式計(jì)算:
檸檬苦素提取率(％) =A2/A1*100
式中:A1——柚子提取液中檸檬苦素總含量(μ g/mL)；
A2——離心后收集沉淀中的檸檬苦素含量(μ g/mL)ο
[0015]實(shí)施例1:
步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為84.21 μ g/mL。
[0016]步驟二、配制80%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 80%飽和濃度的硫酸銨溶液與4HiL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為0.85 mol/L, pH值為4.17的柚子提取液。
[0017]步驟三、在50 °C保溫90 min后，再100°C加熱20 min。
[0018]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0019]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為6.29 μ g/mL。計(jì)算總檸檬苦素提取率為7.47%。
[0020]實(shí)施例2:
步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為85.87 μ g/mL。
[0021 ] 步驟二、配制100%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 100%飽和濃度的硫酸銨溶液與4 mL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為1.07mol/L，pH值為4.14的柚子提取液。
[0022]步驟三、在50 °C保溫90 min后，再100°C加熱20 min。[0023]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0024]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為22.92 μ g/mL,計(jì)算得檸檬苦素提取率為26.69%。
[0025]實(shí)例I與實(shí)例2說(shuō)明檸檬苦素的提取率與果汁中硫酸銨的濃度成正比。
[0026]實(shí)施例3:
步驟一、用自來(lái)水直接浸泡柚子，得提取液，用磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)柚子提取液的PH為4，測(cè)定提取液中，朽1檬苦素含量為60.11 μ g/mL。
[0027]步驟二、配制100%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 100%飽和濃度的硫酸銨溶液與4 mL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為1.07 mol/L，pH值為3.98的柚子提取液。
[0028]步驟三、在100 °C加熱20 min。
[0029]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0030]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為17.25 μ g/mL,計(jì)算得檸檬苦素提取率為28.70%。
[0031]實(shí)施例4:
步驟一、用自來(lái)水直接浸泡柚子，得提取液，用磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)柚子提取液的PH為6，測(cè)定提取液中，朽1檬苦素含量為60.11 μ g/mL。
[0032]步驟二、配制100%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 100%飽和濃度的硫酸銨溶液與4 mL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為1.07 mol/L，pH值為5.97的柚子提取液。
[0033]步驟三、在100 °C加熱20 min。
[0034]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0035]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為38.89 μ g/mL,計(jì)算得檸檬苦素提取率為26.49%。
[0036]實(shí)施例5:
步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為87.44 μ g/mL。
[0037]步驟二、配制100%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 100%飽和濃度的硫酸銨溶液與4 mL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為1.07 mol/L, pH值為4.14柚子提取液。
[0038]步驟三、在100 °C加熱20 min。
[0039]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0040]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為36.37 μ g/mL,計(jì)算得檸檬苦素提取率為41.60%ο
[0041]實(shí)施例6:
步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為91.07 μ g/mL。
[0042]步驟二、配制100%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 100%飽和濃度的硫酸銨溶液與4 mL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為1.07 mol/L, pH值為4.15柚子提取液。
[0043]步驟三、在100°C下加熱30 min。
[0044]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0045]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為39.06 μ g/mL。計(jì)算得檸檬苦素提取率為42.90%。
[0046]實(shí)施例7:步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為57.28 μ g/mL。
[0047]步驟二、配制100%飽和濃度的硫酸銨溶液；將I mL 100%飽和濃度的硫酸銨溶液與
4mL柚子提取液混合均勻，得到硫酸根離子濃度為1.07 mol/L, pH值為4.14柚子提取液。
[0048]步驟三、在60°C下加熱15 min。
[0049]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0050]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為36.48 μ g/mL。計(jì)算得朽1檬苦素提取率為63.68%ο
[0051]實(shí)施例8:
步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為80.11 μ g/mL。
[0052]步驟二、在4 mL柚子提取液加入硫酸銨固體，使其硫酸銨濃度為5.35mol/L,獲得pH值為3.99柚子提取液。
[0053]步驟三、在70°C下加熱20 min。
[0054]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0055]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)定其檸檬苦素含量為57.82 μ g/mL,計(jì)算得檸檬苦素提取率為72.18%。
[0056]實(shí)施例9:
步驟一、柚子壓榨獲得提取液，測(cè)定提取液中，檸檬苦素含量為80.50 μ g/mL。
[0057]步驟二、在4 mL柚子提取液加入硫酸銨固體，使其硫酸銨濃度為5.35 mol/L,獲得pH值為3.13柚子提取液。
[0058]步驟三、在80°C下加熱20 min。
[0059]步驟四、在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min。
[0060]取沉淀用4 mL 60%乙腈重新溶解，測(cè)得其檸檬苦素含量為55.50 μ g/mL,計(jì)算得檸檬苦素提取率為68.94%。
[0061]本發(fā)明采用上述方法后，與傳統(tǒng)方法相比，原料不需要干燥就可直接用浸提液或榨汁液，采用沉淀法回收水中的大部分檸檬苦素，不需要復(fù)雜的設(shè)備，操作簡(jiǎn)便，工藝成本低。
[0062]以上所述，僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例而已，故不能依次限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說(shuō)明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種檸檬苦素的提取方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟一、原料浸提或榨汁:將原料用水直接浸泡或者采用壓榨機(jī)直接將原料榨汁，得到提取液； 步驟二、加鹽及調(diào)pH:向上述提取液中，加入硫酸鹽固體物質(zhì)或硫酸鹽飽和溶液；調(diào)節(jié)PH 為 3-7 ； 步驟三、加熱保溫:加熱至溫度20-100°C，保溫時(shí)間10-110 min ； 步驟四、離心:在轉(zhuǎn)速為2500 Xg的條件下離心10 min，制得檸檬苦素沉淀。
2.如權(quán)利要求1所述的一種檸檬苦素的提取方法，其特征在于:所述步驟二中，所述的硫酸鹽為硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉或硫酸鉀。
3.如權(quán)利要求1所述的一種檸檬苦素的提取方法，其特征在于:所述步驟二中，調(diào)節(jié)pH為 4-6。
4.如權(quán)利要求1所述的一種檸檬苦素的提取方法，其特征在于:所述步驟三中，加熱溫度 60-80。。。
5.如權(quán)利要求1所述的一種檸檬苦素的提取方法，其特征在于:所述步驟三中，加熱時(shí)間 IOmin。
【文檔編號(hào)】C07J73/00GK104004051SQ201410259115
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年6月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月12日
【發(fā)明者】倪輝, 蔡慧農(nóng), 楊遠(yuǎn)帆, 高秋芬, 陳 峰, 杜希萍, 黃高凌, 伍菱, 肖安風(fēng) 申請(qǐng)人:集美大學(xué)