一種用于治療腎癌的檸檬苦素類化合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從干燥的香櫞中分離得到的一種具有治療腎 癌作用的檸檬苦素類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 香橡，為蕓香科柑橘屬植物枸橡（CitrusmedicaL.)或香圓（Citruswilsonii Tanaka)的干燥成熟果實。香櫞始載于《本草圖經(jīng)》，為傳統(tǒng)中藥材。味辛、苦、溫，歸肝、脾、肺 經(jīng)，具有疏肝理氣、寬中化痰功效，主治肝胃氣滯、胸脅脹痛、脘腹痞滿、嘔吐噫氣、痰多咳 嗽。
[0003] 香櫞中含有揮發(fā)油（檸檬烯），多種脂肪酸（油酸、亞油酸、棕櫚酸等），還含有檸檬 酸、蘋果酸、維生素C、檸檬苦素、橙皮苷、辛弗林、N-甲基酪胺、果膠，鞣質(zhì)等化學(xué)成分。
[0004] 現(xiàn)代藥理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，香櫞中的醇類物質(zhì)對于止咳、化痰、理氣有特殊的功效和療 效。香櫞中含有的柚皮苷可以改善血液微循環(huán)，主要藥理是通過調(diào)節(jié)毛細(xì)血管的通暢，故可 以用于心血管的臨床上的一些輔助治療作用。香櫞深加工產(chǎn)品開發(fā)的香櫞揮發(fā)油的香型為 典型的古龍香水香型，具有名貴和高雅的特點(diǎn)。因此，香櫞油作為一種名貴的天然香料，常 應(yīng)用于各類化妝品中。此外，鑒于香櫞藥理特性和特殊的口感，還可將其果實進(jìn)行壓榨制成 保健飲料。該飲料由于屬于果實的天然提取液，故成為一些疾病患者、保健者、運(yùn)動員的最 佳飲品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從干燥的香櫞中分離得到的一種具有治療腎癌作用的 檸檬苦素類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將干燥的香櫞粉碎，用75~ 85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正 丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸乙 酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗脫12個柱體積， 減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次 用體積比為80:1、55 :1、35:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（(1)步驟 (c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純 的化合物(I)。
[0010]進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療腎癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014]所述的藥物組合物在制備治療腎癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016]該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018]圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019 ]圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較。
【具體實施方式】
[0020]下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 藥材和試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海 凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]經(jīng)鑒定香橡為蕓香科柑橘屬植物枸橡(CitrusmedicaL.)的干燥成熟果實。
[0024]制備方法：（a)干燥的香櫞（10kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提?。?5LX3次），合并 提取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯(6LX3次)和水飽和的正丁 醇(6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(355g)和正丁醇萃取物；（b)步 驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，依次用15 %乙醇(8L)和75 % (12L)乙醇洗 脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（154g);(c)步驟(b)中75%乙醇 洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個柱體積）、55:1(8個柱體積）、35:1(6個 柱體積）、10:1(8個柱體積)和1:1(5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d) 步驟(c)中組分4(46g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1(8個柱體積）、10:1(10 個柱體積)和5:1(6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2 (27g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)(35mg)。
[0025] 結(jié)構(gòu)確證：白色無定形粉末;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z655.2722，結(jié)合核磁特 征可得分子式為C33H44O12，不飽和度為12。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρηι，DMS0_d6，500MHz):H-1 (7.33，d，J=10.3)，H-2(6.09，d，J=10.3)，H-5(2.79，d，J= 7.0)，H-6(2.23，m)，H-6(2.34， dd，J=16.8,7.0)，H-9(2.86，d，J= 7.3)，H-ll(5.44，dd，J=10.4,7.3)，H-12(5.59，d，J= 10.4)，H-15(3.80，m)，H-16(2.08，m)，H-16(2.12，m)，H-17(2.87，m)，H-18(0.94，s)，H-19 (0.92，s)，H-22(6.77，s)，H-23(6.01，br，s)，H-28(0.95，s)，H-29(1.04，s)，H-30(5.14，s)， H-30(5.23，s)，7-0CH3(3.57，s)，n-0Ac(1.87，s)，H-2'（2.21，m)，H-3'（1.01，d，J= 6.0)， H-4'（0.96，d，J= 6.0);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)(ppm，DMS〇-d6，125MHz): 152·1 (CH，1-C)，125·3 (CH，2-C)，203.9(C，3-C)，45.7(C，4-C)，44.6(CH，5-C)，30.8(CH2,6-C)，173.7(C，7-C)， 135.8(C，8-C)，52.3(CH，9-C)，41.5(C，10-C)，71.1(CH，11-C)，74.2(CH，12-C)，45.6(C，13-C)，94.6(C，14-C)，78.7(CH，15-C)，30.3(CH2，16-C)，38.0(CH，17-C)，13.4(CH3，18-C)，20.9 (CH3，19-C)，134.8(C，20-C)，170.7(C，21-C)，147.3(CH，22-C)，95.8(CH，23-C)，22.4(CH3， 28-C)，22·3(CH3，29-C)，120·9(CH2，30-C)，51 ·8(CH3，7-0CH3)，169.4(C，11 -OAc)，20·5(CH3， 11-0Ac)，175.2(C，1'-C)，33.4(CH，2'-C)，18.3(CH3,3'-C)，18.6(CH3,4'-C);碳原子標(biāo)記參 見圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥基（3441CHT1)和羰基（1738(31^1)基團(tuán)。該化合物在 235nm處有紫外吸收帶，說明含有α，β-不飽和酮羰基基團(tuán)。13CNMR譜和DEPT譜顯示有33個碳 信號，其中包括八個甲基(一個甲氧基），三個亞甲基(一個烯烴亞甲基），十一個次甲基(三 個烯屬次甲基，四個含氧次甲基），以及十一個季碳(兩個烯烴季碳，五個羰基碳，一個含氧 季碳）。上述數(shù)據(jù)表明該化合物是一個B環(huán)開環(huán)的檸檬苦素類化合物。HMBC譜中，Η-1(δ !17.33，(1，1=10.3抱），]^-28(5!10.95,8)和]^-29( 5!11.04,8)與(：-3(5〇203.9)的相關(guān)性表明 C-3 為酮羰基。HMBC譜中，!1-11〇!15.44，(1(1，1=1〇.4,7.3他）與乙酰氧基0(：169.4)的相關(guān) 性，表明C-11(SC71.1)位連有一個