一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法，首先將含有IgA抗原20mg的血清0.1ml，無菌PBS1.9ml，弗氏佐劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑；然后羊免疫第一針，在羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點，皮下注射，足底部2個注射點平均注射，然后間隔二十天注射第二針，再每次間隔10天注射3、4、5針，間隔五天對免疫的羊動脈采血，血液放入水箱中1小時溫度40℃，待血清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，本發(fā)明將IgA抗原經(jīng)皮下注入羊腹股溝外并進行多次加強免疫，使其產(chǎn)生高效羊抗IgA抗體可達1∶32以上。為生物試劑廠提供原料、為醫(yī)療診斷提供方便，使羊產(chǎn)生了高的效益。
【專利說明】一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種羊抗人血清生產(chǎn)方法，具體涉及一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]免疫球蛋白(immunoglobulin, ig)是一組具有抗體活性的蛋白質(zhì),ig由楽;細(xì)胞產(chǎn)生，主要存在于生物體血液和其他體液(包括組織液和外分泌液)中，約占血漿蛋白總量的20%;還可分布在b細(xì)胞表面。人血漿內(nèi)的免疫球蛋白大多數(shù)存在于丙種球蛋白(Y-球蛋白)中；IgA，在體液免疫中發(fā)揮作是生物試劑的重要原料，現(xiàn)有的生產(chǎn)方法采用傳統(tǒng)的免疫方式，產(chǎn)量與效價較低，已無法滿足日益增長的使用需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種可提高產(chǎn)量與效價的利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法。
[0004]技術(shù)方案:為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的一種可提高產(chǎn)量與效價的利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法，包括以下步驟:
[0005]I)免疫原乳劑的制備，將含有IgA抗原20mg的血清0.1ml，無菌PBS1.9ml，弗氏佐劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑；
[0006]2)羊免疫第一針，在羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點，皮下注射，足底部2個注射點平均注射；
[0007]3)與步驟2)間隔二十天注射第二針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射占.
[0008]4)與步驟3)間隔十天注射第三針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射占.
[0009]5)與步驟4)間隔十天注射第四針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射占.
[0010]6)與步驟5)間隔十天注射第五針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射占.
[0011]7)與步驟6)間隔五天對免疫的羊動脈采血，血液放入水箱中I小時溫度40°C，待血清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，放進冰箱保存溫度在4°C一8°C之間；
[0012]8)對步驟7)所得抗血清進行效價測定。
[0013]作為優(yōu)選，所述步驟I)所述抗原量是指每二頭羊的免疫抗原量。
[0014]所述步驟2)中注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。
[0015]作為優(yōu)選，所述步驟3)、4)、5)、6)中注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。
[0016]作為優(yōu)選，所述步驟7)的效價測定采用的方法為瓊擴方法。
[0017]有益效果:本發(fā)明將IgA抗原經(jīng)皮下注入羊腹股溝外并進行多次加強免疫，使其產(chǎn)生高效羊抗IgA抗體可達1:32以上。為生物試劑廠提供原料、為醫(yī)療診斷提供方便，使湖羊產(chǎn)生了高的效益。

【具體實施方式】
[0018]實施例:實驗動物選用湖羊公羊25只，體重35公斤左右健康羊，免疫前全部打上耳標(biāo)，羊群采用圈養(yǎng)，結(jié)合放養(yǎng)，保持正常體況，避免羊只過肥，提高免疫力，自動飲水器，每天牧草供給，適量添加精料、醋糟、麩皮和維生素等。
[0019]人的IgA接種0.1ml (合抗原50mg) 1.9ml無菌PBS完全弗氏(或不完全)佐劑2ml制成免疫原乳劑備用。
[0020]湖羊免疫第一針，前后腹股溝，每腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點，皮下下注射，頸部兩側(cè)2個注射點平均注射。
[0021]第二針，間隔二十天，前后腹股溝分2個點注射，總共12個注射點，后腹股溝淋巴結(jié)左右2個點。
[0022]第三針，間隔十天，前后腹股溝分2個點注射，總共12個注射點，后腹股溝淋巴結(jié)左右2個點。
[0023]第四針，間隔十天，前后腹股溝分2個點注射，總共12個注射點，后腹股溝淋巴結(jié)左右2個點。
[0024]第五針，間隔十天，前后腹股溝分2個點注射，總共12個注射點，后腹股溝淋巴結(jié)左右2個點。
[0025]其中第一針即第一次免疫注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。
[0026]其余免疫中即第二、三、四、五針注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。
[0027]五天后對免疫的湖羊動脈采血，血液放入水箱中I小時溫度40°C，待血清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，放進冰箱保存溫度在4°C~8°C之間；
[0028]采用瓊擴方法對所得抗血清進行效價測定
[0029]1.配制瓊脂:稱取1.2g瓊脂粉，加入10ml生理鹽水中，水浴加熱溶解后，以115°C滅菌10分鐘；
[0030]滅菌結(jié)束后，取出瓊脂溶液，冷卻至70°C左右，用吸管吸取瓊脂液，加入干凈的平皿中，每塊平皿16ml，待冷卻后收起平皿，放于2~8°C冰箱中保存，可保存2周；
[0031]用前在平皿上用梅花打孔器打孔，中間孔加入抗原，外周孔加稀釋后的待檢血清。
[0032]2.樣品血清稀釋:取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或血凝板，在每孔中加入25 μ I生理鹽水或 PBS ；
[0033]在每行的第I列孔中加入25 μ I樣品血清，從第I孔向后倍比稀釋至第10孔。
[0034]3.加樣檢測:取出打好梅花孔的瓊脂平皿，在外周孔中按順序加入倍比稀釋的樣品血清，每孔約加20 μ 1，以孔加滿為宜；
[0035]在梅花孔的中央孔中加入上述分離出的抗血清；
[0036]將加好樣的瓊脂平皿放入濕盒中，置37°C過夜；
[0037]4.血清效價評定:
[0038]觀察外周孔與中央孔沉淀線出現(xiàn)位置，計算樣品血清的效價。測得第5孔有沉淀線(凝集反應(yīng))說明測定此批次抗血清的效價為1:32。
【權(quán)利要求】
1.一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)免疫原乳劑的制備:將含有IgA抗原20mg的血清0.1ml，無菌PBS1.9ml，弗氏佐劑2ml混合并乳化，得到免疫原乳劑； 2)羊免疫第一針，在羊的前后腹股溝，每腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點，皮下注射，足底部2個注射點平均注射； 3)與步驟2)間隔二十天注射第二針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點； 4)與步驟3)間隔十天注射第三針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點； 5)與步驟4)間隔十天注射第四針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點； 6)與步驟5)間隔十天注射第五針，前后腹股溝分2個區(qū)域注射，總共12個注射點； 7)與步驟6)間隔五天對免疫的羊動脈采血，血液放入水箱中I小時溫度40°C，待血清充分析出，經(jīng)離心沉淀分離出抗血清，放進冰箱保存溫度在4°C一8°C之間； 8)對步驟7)所得抗血清進行效價測定。
2.如權(quán)利要求1所述的一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法，其特征在于，步驟I)所述抗原量是指每二頭羊的免疫抗原量。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法，其特征在于，所述步驟2)中注射的免疫原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑，所述步驟3)、4)、5)、6)中注射的免疫 原乳劑乳化時采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。
4.如權(quán)利要求1或2所述的一種利用多免疫途徑生產(chǎn)羊抗IgA多抗血清的方法，其特征在于，所述步驟8)的效價測定采用的方法為瓊擴方法。
【文檔編號】C07K16/06GK104177498SQ201410413762
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月20日
【發(fā)明者】徐志偉, 劉偉忠, 劉照亭, 魯群 申請人:鎮(zhèn)江萬山紅遍農(nóng)業(yè)園