一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝。以磷脂為原料，經(jīng)過乙酰化除雜和無機(jī)鹽沉淀工序，得到磷脂酰膽堿粗品；然后再利用離子液體進(jìn)行精制，得到高純度的磷脂酰膽堿。本發(fā)明采用將腦磷脂乙?；姆椒ǎ?zhèn)鹘y(tǒng)的溶劑提純法，同時配合無機(jī)鹽復(fù)合沉淀，可制備純度較高的磷脂酰膽堿粗品，同時采用離子液體萃取精制提純，減少了有機(jī)溶劑的用量，降低成本，減少污染，且得到的磷脂酰膽堿純度高，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
【專利說明】一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及磷脂酰膽堿的提純工藝，尤其涉及一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝。

【背景技術(shù)】
[0002]磷脂是含磷酸根的類脂化合物，由磷脂酰膽堿(PC)、腦磷脂(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PD以及溶血性磷脂酰膽堿(LPC)等組成，普遍存在于動植物細(xì)胞的原生質(zhì)和生物膜中，是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)。其中，PC是磷脂中的主要有效成分，它無毒，無刺激，具有乳化、滲透、潤濕和抗氧化等獨(dú)特功能，在食品、保健品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。
[0003]磷脂酰膽堿中既有親水性基團(tuán)，又有親油性基團(tuán)，是性能穩(wěn)定、安全的天然乳化齊U。供注射用的高純度磷脂酰膽堿是制備和生產(chǎn)靜脈脂肪乳、注射用脂質(zhì)體等藥物制劑的關(guān)鍵輔料，也是磷脂中最具高附加值的產(chǎn)品形態(tài)。
[0004]目前，磷脂酰膽堿的精制方法主要有溶劑萃取法、柱層析法和超臨界流體萃取法。中國專利ZL02144835.3公開了一種以磷脂為原料，乙醇、丙酮為萃取劑，制備磷脂酰膽堿的方法，磷脂酰膽堿含量只有50%。中國專利ZL02121550.2、ZL02149601.3公開了一種采用乙腈和一元低碳醇的混合溶劑對大豆粉末磷脂進(jìn)行多級逆流萃取制備磷脂酰膽堿的方法，磷脂酰膽堿含量為80%。中國專利ZL201010105688.1公開了一種制備注射用大豆卵磷脂的工藝，經(jīng)丙酮脫油、膜分離、吸附脫色等獲得粗卵磷脂，然后將粗卵磷脂采用柱色譜分離、過濾除菌、減壓濃縮及真空干燥即得注射用大豆卵磷脂。中國專利ZL200710067279.5公開了一種將乙醇萃取和超臨界C02萃取結(jié)合的方法，磷脂酰膽堿純度為70%。傳統(tǒng)的溶劑萃取法得到的磷脂酰膽堿純度低，且有機(jī)溶劑耗用量大，產(chǎn)品純度不高；柱層析法利用不同物質(zhì)在特定吸附劑上吸附能力的差異，可以很好地分離各組分磷脂，但溶劑用量較大，處理規(guī)模小；超臨界流體萃取法中常用的超臨界CO2具有較好的脫油效果，但CO2溶解磷脂的能力較弱，不適用于大批量磷脂的提純，且設(shè)備費(fèi)用較昂貴。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是為了改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝，具體步驟如下:
[0007]A.乙?；s:磷脂與酰基化試劑進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用丙酮洗滌，除去磷脂中的膽固醇與酰化腦磷脂；
[0008]B.無機(jī)鹽沉淀:向步驟A得到的樣品中乙醇溶解再加入無機(jī)鹽溶液，與磷脂酰膽堿形成絡(luò)合沉淀物，過濾后得到的固體用有機(jī)溶劑溶解，加水去除無機(jī)鹽，有機(jī)相旋蒸后除去有機(jī)溶劑，得粗磷脂產(chǎn)品，真空干燥；
[0009]C.離子液體精制:將步驟B得到的粗磷脂產(chǎn)品溶于極性溶劑，配成磷脂溶液，再向磷脂溶液中加入離子液體進(jìn)行精制，得到磷脂溶液與離子液體混合物；采用非極性溶劑進(jìn)行萃取，萃取后得到離子液體相和磷脂酰膽堿相，離子液體相處理后循環(huán)使用；磷脂酰膽堿相進(jìn)行旋蒸分離，去除非極性溶劑后的產(chǎn)物經(jīng)真空干燥后，得到高純度的磷脂酰膽堿。
[0010]優(yōu)選步驟A中?；噭榇佐⒁宜嵋阴?、乙酰氯或醋酸中的一種。優(yōu)選步驟A中磷脂與?；噭┵|(zhì)量體積比為1: (0.5?5)g/ml ;酰化反應(yīng)溫度為20?80°C。
[0011]優(yōu)選步驟B中的無機(jī)鹽為金屬Zn、Fe、Mg或Ca的氯化鹽中的一種。步驟B中無機(jī)鹽溶液中鹽的質(zhì)量濃度為10%?90%;步驟A得到的樣品與無機(jī)鹽溶液的質(zhì)量體積比為1: (I?10)g/ml。優(yōu)選步驟B中有機(jī)溶劑為碳原子數(shù)為5-10的脂肪烷烴、碳原子數(shù)為I?5的取代烷烴、乙醚、石油醚或乙酸乙酯中的一種。優(yōu)選步驟B中無機(jī)鹽磷脂絡(luò)合沉淀物與有機(jī)溶劑質(zhì)量體積比為1: (I?10)g/ml。
[0012]優(yōu)選步驟C中離子液體1-羧基丙基-3-甲基咪唑三氟甲烷磺酰亞胺、1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽、氯代乙氧基乙醇甲基咪唑、1-丁基-3甲基咪唑二氰胺、氯代四丁基鱗、四丁基鱗乙酸鹽或1- 丁基-3-甲基咪唑三氟甲基磺酰亞胺中的一種。優(yōu)選步驟C中所用極性溶劑為甲醇、乙醇或異丙醇中的一種；非極性溶劑為正庚烷、乙醚或石油醚中的一種。
[0013]優(yōu)選步驟C中磷脂溶液中粗磷脂與極性溶劑的質(zhì)量體積比為1: (2?10) g/ml ;步驟C中磷脂溶液與離子液體的體積比為1: (I?5);步驟C中磷脂溶液與離子液體混合物的總體積與非極性溶劑的體積比為1: (0.5?5)。
[0014]本發(fā)明所優(yōu)選上述乙?；s-無機(jī)鹽提純-離子液體精制復(fù)合工藝具有很高的萃取選擇性，同時結(jié)合優(yōu)選的萃取溫度、優(yōu)選的料液比及優(yōu)選的反萃劑與萃取劑之比，使分離效果達(dá)到最佳，純度大于87%。
[0015]有益效果:
[0016]與現(xiàn)有的分離方法相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0017](I)本發(fā)明提出的工藝將乙?；?、無機(jī)鹽沉淀與離子液體提純技術(shù)相結(jié)合，使產(chǎn)品純度得到大幅提高，較傳統(tǒng)溶劑工藝，大大減少了有機(jī)溶劑的用量。
[0018](2)本發(fā)明中所用離子液體是一種綠色溶劑，便于回收再利用，具有很好的環(huán)境友好性。

【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0020]實(shí)施例1
[0021]取磷脂20.0g，在45°C下，加入10ml乙酸乙酯進(jìn)行乙酰化反應(yīng)，再用丙酮洗滌3次，干燥得到6.4g固體，加入乙醇溶解，緩慢滴加60%的ZnCl2水溶液64ml，得到白色沉淀9.2g，分離沉淀，溶于9.2ml三氯甲烷，再用水萃取去除ZnCl2,有機(jī)相旋蒸，得到純度較高的磷脂酰膽堿2.1go加入21ml甲醇，配成磷脂溶液，加入21ml1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽，室溫攪拌，靜置6h，加入21ml正庚烷，取磷脂酰膽堿相于40°C下旋蒸，真空干燥得到精制磷脂酰膽堿，經(jīng)HPLC分析，所得產(chǎn)品中磷脂酰膽堿含量為87.7%。
[0022]實(shí)施例2
[0023]取磷脂30.0g，在20°C下，加入60ml乙酰氯進(jìn)行乙?；磻?yīng)，再用丙酮洗滌3次，干燥得到9.6g固體，加入乙醇溶解，緩慢滴加90%的FeCl3水溶液9.6ml，得到白色沉淀11.4g，分離沉淀，溶于30ml正己烷，再用水萃取去除FeCl3,有機(jī)相旋蒸，得到純度較高的磷脂酰膽堿7.5g。加入15ml異丙醇，配成磷脂溶液，加入15ml氯代乙氧基乙醇甲基咪唑，室溫攪拌，靜置4h，加入30ml乙醚，取磷脂酰膽堿相于45°C下旋蒸，真空干燥得到精制磷脂酰膽堿，經(jīng)HPLC分析，所得產(chǎn)品中磷脂酰膽堿含量為90.7%。
[0024]實(shí)施例3
[0025]取磷脂10.0g,在80°C下，加入5ml醋酐進(jìn)行乙?；磻?yīng)，再用丙酮洗滌4次，干燥得到2.9g固體，加入乙醇溶解，緩慢滴加30%的CaCl2水溶液2.9ml，得到白色沉淀4.1g,分離沉淀，溶于41ml乙醚，再用水萃取去除CaCl2,有機(jī)相旋蒸，得到純度較高的磷脂酰膽堿1.9g。加入5ml甲醇，配成磷脂溶液，加入25ml氯代四丁基鱗，室溫攪拌，靜置6h，加入150ml石油醚，取上層有機(jī)相于50°C下旋蒸，真空干燥得到精制磷脂酰膽堿，經(jīng)HPLC分析，所得產(chǎn)品中磷脂酰膽堿含量為89.7%。
[0026]實(shí)施例4
[0027]取磷脂20.0g，在45°C下，加入45ml醋酸進(jìn)行乙酰化反應(yīng)，再用丙酮洗滌3次，干燥得到5.9g固體，加入乙醇溶解，緩慢滴加10%的MgCl2水溶液24.5ml，得到白色沉淀7.lg，分離沉淀，溶于45ml石油醚，再用水萃取去除MgCl2，有機(jī)相旋蒸，得到純度較高的磷脂酰膽堿4.Sg。加入15ml乙醇，配成磷脂溶液，加入20ml 1-丁基-3-甲基咪唑三氟甲基磺酰亞胺，室溫攪拌，靜置4h，加入40ml正庚烷，取上層有機(jī)相于40°C下旋蒸，真空干燥得到精制磷脂酰膽堿，經(jīng)HPLC分析，所得產(chǎn)品中磷脂酰膽堿含量為91.2%。
【權(quán)利要求】
1.一種高純度磷脂酰膽堿的制備工藝，具體步驟如下: A.乙酰化除雜:磷脂與?；噭┻M(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用丙酮洗滌，除去磷脂中的膽固醇與酰化腦磷脂； B.無機(jī)鹽沉淀:向步驟A得到的樣品中乙醇溶解再加入無機(jī)鹽溶液，與磷脂酰膽堿形成絡(luò)合沉淀物，過濾后得到的固體用有機(jī)溶劑溶解，加水去除無機(jī)鹽，有機(jī)相旋蒸后除去有機(jī)溶劑，得粗磷脂產(chǎn)品，真空干燥； C.離子液體精制:將步驟B得到的粗磷脂產(chǎn)品溶于極性溶劑，配成磷脂溶液，再向磷脂溶液中加入離子液體進(jìn)行精制，得到磷脂溶液與離子液體混合物；采用非極性溶劑進(jìn)行萃取，萃取后得到離子液體相和磷脂酰膽堿相，離子液體相處理后循環(huán)使用；磷脂酰膽堿相進(jìn)行旋蒸分離，去除非極性溶劑后的產(chǎn)物經(jīng)真空干燥后，得到高純度的磷脂酰膽堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟A中酰基化試劑為醋酐、乙酸乙酯、乙酰氯或醋酸中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟A中磷脂與?；噭┵|(zhì)量體積比為1: (0.5?5) g/ml ;酰化反應(yīng)溫度為20?80°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟B中的無機(jī)鹽為金屬Zn、Fe、Mg或Ca的氯化鹽中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟B中無機(jī)鹽溶液中鹽的質(zhì)量濃度為10%?90% ;步驟A得到的樣品與無機(jī)鹽溶液的質(zhì)量體積比為1:(1?10)g/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟B中有機(jī)溶劑為碳原子數(shù)為5-10的脂肪烷烴、碳原子數(shù)為I?5的取代烷烴、乙醚、石油醚或乙酸乙酯中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟B中無機(jī)鹽磷脂絡(luò)合沉淀物與有機(jī)溶劑質(zhì)量體積比為1: (I?10) g/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟C中離子液體1-羧基丙基-3-甲基咪唑三氟甲烷磺酰亞胺、1-乙基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽、氯代乙氧基乙醇甲基咪唑、1- 丁基-3甲基咪唑二氰胺、氯代四丁基鱗、四丁基鱗乙酸鹽或1- 丁基-3-甲基咪唑三氟甲基磺酰亞胺中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟C中所用極性溶劑為甲醇、乙醇或異丙醇中的一種；非極性溶劑為正庚烷、乙醚或石油醚中的一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其特征在于步驟C中磷脂溶液中粗磷脂與極性溶劑的質(zhì)量體積比為1: (2?10) g/ml ;步驟C中磷脂溶液與離子液體的體積比為1: (I?5);步驟C中磷脂溶液與離子液體混合物的總體積與非極性溶劑的體積比為1: (0.5?5)。
【文檔編號】C07F9/10GK104262388SQ201410554603
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】管國鋒, 萬輝, 翟崇銘 申請人:南京工業(yè)大學(xué)