一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法，包括：將發(fā)酵液采用微孔過(guò)濾方式過(guò)濾，然后在反相硅膠填料上進(jìn)行吸附，得到附著了氫化可的松的填料物；所述反相硅膠填料為表面鍵合有官能團(tuán)的硅膠；所述官能團(tuán)包括烷基、苯基、氨基、或腈基；將所述附著了氫化可的松的填料物在溶劑中進(jìn)行洗脫，得到氫化可的松；所述溶劑為醇類(lèi)化合物。本發(fā)明采用固相萃取的方法從發(fā)酵液中提純氫化可的松，這種方法采用無(wú)毒和低毒材料和試劑提純氫化可的松，因此本發(fā)明提供的這種提純氫化可的松的方法對(duì)環(huán)境的污染較小。此外，本發(fā)明提供的提純氫化可的松的方法消耗的溶劑較少，材料可重復(fù)利用，總體成本較低；提純方法操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)效率高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及氫化可的松【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 氫化可的松是人工合成也是天然存在的糖皮質(zhì)激素，其為白色或幾乎白色結(jié)晶性 粉末，無(wú)臭；初無(wú)味，隨后又有持續(xù)的苦味；遇光易變質(zhì)，不溶于水。氫化可的松具有抗炎作 用、免疫抑制作用、抗毒作用、抗休克作用及一定的鹽皮質(zhì)激素活性；而且氫化可的松還有 留水、留鈉及排鉀的作用。氫化可的松可用于治療腎上腺功能不全所引起的疾病、關(guān)節(jié)炎、 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性發(fā)熱、痛風(fēng)、支氣管哮喘；過(guò)敏性皮炎、脂溢性皮炎、瘙癢癥；虹膜 睫狀體炎、角膜炎、鞏膜炎、結(jié)膜炎；神經(jīng)性皮炎、結(jié)核性腦膜炎、胸膜炎、關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎、急 慢性捩?zhèn)?、腱鞘勞損等；氫化可的松被廣泛用于臨床治療中。
[0003] 目前，多采用發(fā)酵法來(lái)生產(chǎn)氫化可的松，并通過(guò)溶劑萃取法來(lái)提純發(fā)酵液中的氫 化可的松產(chǎn)品。在萃取的過(guò)程中，所用的萃取劑一般為乙酸丁酯或乙酸異丁酯。如于文東等 采用環(huán)隙式離心萃取器通過(guò)連續(xù)逆流的方式提取發(fā)酵液中氫化可的松（于文東，段五華，李 鳳岐等.用離心萃取器連續(xù)逆流氫化可的松的研究[J].精細(xì)化工.2001，18(9) :611-613)， 這種方法制備氫化可的松的萃取率為90%，溶劑的消耗量為0. 35?0. 42倍的發(fā)酵液體積； 李國(guó)兵等采用混合澄清槽進(jìn)行連續(xù)逆流發(fā)酵液中的氫化可的松（李國(guó)兵，陳松，張穎.連續(xù) 逆流氫化可的松的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)化工學(xué)會(huì)精細(xì)化工專(zhuān)業(yè)委員會(huì)全國(guó)第93次學(xué)術(shù)會(huì)議論 文集.358-361)，這種方法制備氫化可的松的萃取率達(dá)到98. 7%，萃取劑乙酸丁酯的消耗 量為〇. 5倍的發(fā)酵液體積。而實(shí)際生產(chǎn)中萃取劑的用量常常為發(fā)酵液體積的5倍。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)提供的方法雖然能夠提純得到品質(zhì)較好的氫化可的松，但是這些方法在 提純氫化可的松的過(guò)程中采用的溶劑多為乙酸丁酯或乙酸異丁酯，這類(lèi)溶劑易燃易爆、生 產(chǎn)操作過(guò)程安全隱患大，且易對(duì)環(huán)境的造成較為嚴(yán)重的污染。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法，其操 作安全性較好，對(duì)環(huán)境的污染較小。
[0006] 本發(fā)明提供了一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法，包括：
[0007] 將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附，得到附著了氫化可的松的填料物；所述填料為表面 鍵合有官能團(tuán)的硅膠；
[0008] 所述官能團(tuán)包括燒基、苯基、氣基或臆基；
[0009] 將所述附著了氫化可的松的填料物在溶劑中進(jìn)行洗脫，得到氫化可的松；所述溶 劑為醇類(lèi)化合物。
[0010] 優(yōu)選的，所述烷基為碳原子數(shù)為4?18的烷基。
[0011] 優(yōu)選的，所述填料的粒徑為5微米?100微米。
[0012] 優(yōu)選的，將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附之前，還包括：
[0013] 將所述發(fā)酵液進(jìn)行微孔過(guò)濾，所述微孔過(guò)濾采用的微孔過(guò)濾膜的孔徑為 0. 2 u m ~ 5 u m。
[0014] 優(yōu)選的，將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附之前，還包括：
[0015] 將所述填料依次進(jìn)行活化和平衡；
[0016] 所述活化的試劑包括醇類(lèi)化合物；
[0017] 所述平衡的試劑包括水。
[0018] 優(yōu)選的,所述活化和平衡的試劑的體積和填料的質(zhì)量比為（ImL?3mL) : Ig ;
[0019] 優(yōu)選的，所述活化、平衡和洗脫的溫度為KTC?40°C。
[0020] 本發(fā)明采用固相萃取的方法從發(fā)酵液中提純氫化可的松，這種方法采用無(wú)毒填料 和低毒的提純?cè)噭┨峒儦浠傻乃?，使本發(fā)明提供的這種提純氫化可的松的方法操作安全 性較好，而且對(duì)環(huán)境的污染較小。此外，相對(duì)于傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝，所消耗的提純?nèi)軇┐蟠鬁p少， 采用的填料可重復(fù)使用，因此本發(fā)明提供的提純氫化可的松的方法總體成本較低；而且這 種提純氫化可的松的方法操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)效率高，可用于規(guī)?；a(chǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用 本發(fā)明提供的方法提純氫化可的松消耗的提純?nèi)軇┑牧繛椹? 15倍?0. 30倍的發(fā)酵液的體 積。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù) 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0022] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法的流程圖；
[0023] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1提純得到的產(chǎn)物的核磁共振譜圖；
[0024] 圖3為氫化可的松標(biāo)準(zhǔn)品的核磁共振譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例 僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范 圍。
[0026] 本發(fā)明將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附，得到附著了氫化可的松的填料物。本發(fā)明在 將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附之前，優(yōu)選還包括：將所述發(fā)酵液進(jìn)行微孔過(guò)濾，所述微孔過(guò)濾 采用的微孔過(guò)濾膜的孔徑為0. 2 y m?5 y m。本發(fā)明優(yōu)選將所述發(fā)酵液進(jìn)行微孔過(guò)濾，以 便將所述發(fā)酵液中微米級(jí)以上的雜質(zhì)去除，從而使后續(xù)進(jìn)行固相萃取時(shí)延長(zhǎng)填料的使用壽 命，進(jìn)一步降低本發(fā)明提供的提純氫化可的松方法的成本。在本發(fā)明中，所述微孔過(guò)濾膜的 孔徑優(yōu)選為0. 3 ii m?3 ii m，更優(yōu)選為0. 4 ii m?I ii m。本發(fā)明對(duì)所述微孔過(guò)濾的設(shè)備沒(méi)有 特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的微孔過(guò)濾設(shè)備即可。
[0027] 本發(fā)明在將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附之前，優(yōu)選將所述填料依次進(jìn)行活化和平 衡。在本發(fā)明中，所述活化能夠使所述填料上的作用基團(tuán)充分打開(kāi)。在本發(fā)明中，所述活化 的試劑包括醇類(lèi)化合物，優(yōu)選為碳原子數(shù)為1?5的醇類(lèi)，更優(yōu)選為甲醇、乙醇、異丙醇。所 述填料活化完成后，本發(fā)明優(yōu)選將活化后的填料平衡。在本發(fā)明中，所述平衡能夠使所述填 料處于利于氫化可的松吸附的狀態(tài)。在本發(fā)明中，所述平衡的試劑優(yōu)選為水，更優(yōu)選為去離 子水。在本發(fā)明中，所述活化和平衡的試劑的體積和填料的質(zhì)量比優(yōu)選為（ImL?3mL) :lg。 在本發(fā)明中，所述活化和平衡的溫度優(yōu)選為KTC?40°C。在本發(fā)明中，所述活化和平衡的 時(shí)間優(yōu)選為1小時(shí)?2小時(shí)。
[0028] 本發(fā)明將所述發(fā)酵液中的氫化可的松吸附在所述填料上。本發(fā)明對(duì)所述吸附的溫 度和時(shí)間沒(méi)有特殊的限制，滿足實(shí)際操作條件即可。在本發(fā)明中，所述吸附的時(shí)間優(yōu)選為4 小時(shí)?8小時(shí)。本發(fā)明對(duì)所述吸附的設(shè)備沒(méi)有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的層 析柱即可。
[0029] 在本發(fā)明中，所述發(fā)酵液中氫化可的松的質(zhì)量含量?jī)?yōu)選為0. 9g/L?I. lg/L。本發(fā) 明對(duì)所述發(fā)酵液的種類(lèi)和來(lái)源沒(méi)有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的制備氫化可的 松時(shí)采用的發(fā)酵液即可，可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備得到。
[0030] 在本發(fā)明中，所述填料用于吸附發(fā)酵液中的氫化可的松。在本發(fā)明中，所述填料為 表面鍵合有官能團(tuán)的硅膠。在本發(fā)明中，所述官能團(tuán)包括烷基、苯基、氨基或腈基，優(yōu)選為烷 基、苯基或氣基，更優(yōu)選為燒基。在本發(fā)明中，所述燒基優(yōu)選為碳原子數(shù)為4?18的燒基， 更優(yōu)選為丁燒基、半燒基或十八燒基。
[0031] 在本發(fā)明中，所述填料的粒度優(yōu)選為10微米?80微米。在本發(fā)明中，所述填料的 孔徑優(yōu)選為50A?300A。本發(fā)明對(duì)所述填料的來(lái)源沒(méi)有特殊的限制，可由市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)獲得。 在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述填料可以為Sepax Technologies公司提供的Generik RP填料。
[0032] 得到附著了發(fā)酵液的填料物后，本發(fā)明將所述附著了發(fā)酵液的填料物在溶劑中進(jìn) 行洗脫，得到氫化可的松。在本發(fā)明中，所述溶劑為醇類(lèi)化合物；優(yōu)選為碳原子數(shù)為1?5 的醇類(lèi)；更優(yōu)選為甲醇、乙醇、異丙醇。在本發(fā)明中，所述溶劑的體積和填料的質(zhì)量比優(yōu)選為 (2mL ?6mL):lg。
[0033] 所述洗脫完成后，本發(fā)明優(yōu)選將得到的洗脫液依次進(jìn)行濃縮、結(jié)晶和干燥，得到氫 化可的松。
[0034] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法的流程圖，具體過(guò) 程為：
[0035] 將發(fā)酵液進(jìn)行微孔過(guò)濾，去除其中的雜質(zhì)渣料；所述微孔過(guò)濾采用的微孔過(guò)濾膜 的孔徑為〇.2iim?5iim ;
[0036] 將過(guò)濾后的發(fā)酵液裝入濾液貯罐，通過(guò)進(jìn)樣泵將發(fā)酵液輸送至裝有填料的層析柱 中進(jìn)行吸附；
[0037] 所述吸附完成后，通過(guò)進(jìn)樣泵將所述洗脫溶劑輸送至上述層析柱中進(jìn)行洗脫，得 到洗脫液和廢液；
[0038] 將所述洗脫液依次進(jìn)行濃縮、結(jié)晶和烘干，得到氫化可的松；
[0039] 將本發(fā)明提供的方法提純得到的產(chǎn)品進(jìn)行核磁共振檢測(cè)，將檢測(cè)得到的核磁共振 譜圖與氫化可的松標(biāo)準(zhǔn)品的核磁共振譜圖進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)比對(duì)可知，本發(fā)明提供的方法能 夠提純得到氫化可的松。
[0040] 在本發(fā)明中，所述洗脫過(guò)程中使用的溶劑為提純氫化可的松的溶劑，檢測(cè)本發(fā)明 提供的方法提純氫化可的松過(guò)程中提純?nèi)軇┑挠昧浚瑱z測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明提供的方法提純 氫化可的松的過(guò)程中提純?nèi)軇┑挠昧繛?. 15倍?0. 30倍的發(fā)酵液的體積。
[0041] 本發(fā)明以下實(shí)施例所用到的氫化可的松發(fā)酵液為揚(yáng)州制藥有限公司提供。
[0042] 實(shí)施例1
[0043] 按照?qǐng)D1所述的工藝流程圖提純氫化可的松，圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的從發(fā)酵 液中提純氫化可的松的方法的流程圖，具體過(guò)程為：
[0044] 將10000L的發(fā)酵液在PE微孔機(jī)中進(jìn)行微孔過(guò)濾，去除其中的雜質(zhì)渣料；所述發(fā)酵 液中氫化可的松的質(zhì)量含量為〇. 9g/L。
[0045] 將500Kg的Sepax Technologies公司提供的Generik RP填料裝入的層析柱中； 將所述層析柱用1500L的甲醇在20°C活化1小時(shí)；將活化后的層析柱用1500L的去離子水 在20°C平衡1小時(shí)。
[0046] 將過(guò)濾后的發(fā)酵液裝入貯罐，通過(guò)進(jìn)樣泵將發(fā)酵液輸送至上述經(jīng)活化和平衡后的 層析柱中進(jìn)行吸附；所述吸附的溫度為20°C，所述吸附的時(shí)間為8小時(shí)。
[0047] 所述吸附完成后，將1500L的甲醇裝入進(jìn)樣泵中，通過(guò)進(jìn)樣泵將所述甲醇輸送至 上述吸附后的層析柱中進(jìn)行洗脫，得到洗脫液.洗脫液依次進(jìn)行濃縮、結(jié)晶和烘干，得到產(chǎn) 物。
[0048] 將本發(fā)明實(shí)施例1提純得到的產(chǎn)物按照上述技術(shù)方案所述的方法進(jìn)行核磁共振 檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，圖2為本發(fā)明實(shí)施例1提純得到的產(chǎn)物的核磁共振譜圖；圖3 為氫化可的松標(biāo)準(zhǔn)品的核磁共振譜圖，通過(guò)將圖2和圖3進(jìn)行對(duì)比可知，本發(fā)明實(shí)施例1提 供的方法能夠提純得到氫化可的松。
[0049] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例1提供的方法提純氫化可的松 過(guò)程中提純?nèi)軇┑挠昧?，檢測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明實(shí)施例1提供的方法制備氫化可的松的過(guò)程 中提純?nèi)軇┑挠昧繛椹? 15倍的發(fā)酵液的體積。
[0050] 實(shí)施例2
[0051] 按照?qǐng)D1所述的工藝流程圖從發(fā)酵液中提純氫化可的松，具體過(guò)程為：
[0052] 將1000L的發(fā)酵液在PE微孔過(guò)濾機(jī)中進(jìn)行微孔過(guò)濾，去除其中的雜質(zhì)渣料；所述 發(fā)酵液中氫化可的松的質(zhì)量含量為I. lg/L。
[0053] 將50Kg的Sepax Technologies公司提供的Generik RP填料裝入100L的層析柱 中；將所述層析柱用150L的乙醇在40°C活化2小時(shí)；將活化后的層析柱用150L的去離子 水在40°C平衡2小時(shí)。
[0054] 將過(guò)濾后的發(fā)酵液裝入儲(chǔ)罐，通過(guò)進(jìn)樣泵將發(fā)酵液輸送至上述經(jīng)活化和平衡后的 層析柱中進(jìn)行吸附；所述吸附的溫度為40°C，所述吸附的時(shí)間為6小時(shí)。
[0055] 所述吸附完成后，將300L的乙醇通過(guò)輸液泵輸送至上述吸附后的層析柱中進(jìn)行 洗脫，得到洗脫液。洗脫液依次進(jìn)行濃縮、結(jié)晶和烘干，得到產(chǎn)物。
[0056] 將本發(fā)明實(shí)施例2提純得到的產(chǎn)物按照實(shí)施例1所述的方法進(jìn)行核磁共振檢測(cè)， 檢測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明實(shí)施例2提供的方法能夠提純得到氫化可的松。
[0057] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例2提供的方法提純氫化可的松 過(guò)程中提純?nèi)軇┑挠昧?，檢測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明實(shí)施例2提供的方法提純氫化可的松的過(guò)程 中提純?nèi)軇┑挠昧繛?. 30倍的發(fā)酵液的體積。
[0058] 實(shí)施例3
[0059] 按照?qǐng)D1所述的工藝流程圖從發(fā)酵液中提純氫化可的松，具體過(guò)程為：
[0060] 將100L的發(fā)酵液在PE微孔機(jī)中進(jìn)行微孔過(guò)濾，去除其中的雜質(zhì)渣料；所述發(fā)酵液 中氫化可的松的質(zhì)量含量為I. 〇g/L。
[0061] 將5Kg的Sepax Technologies公司提供的Generik RP填料裝入IOL的層析柱中； 將所述層析柱用IOL的異丙醇在20°C活化1. 5小時(shí)；將活化后的層析柱用IOL的去離子水 在30°C平衡1.5小時(shí)。
[0062] 將過(guò)濾后的發(fā)酵液通過(guò)進(jìn)樣泵輸送至上述經(jīng)活化和平衡后的層析柱中進(jìn)行吸附； 所述吸附的溫度為25°C，所述吸附的時(shí)間為4小時(shí)。
[0063] 所述吸附完成后，將20L的異丙醇通過(guò)輸液泵輸送至上述吸附后的層析柱中進(jìn)行 洗脫，得到洗脫液。洗脫液依次進(jìn)行濃縮、結(jié)晶和烘干，得到產(chǎn)物。
[0064] 將本發(fā)明實(shí)施例3制備得到的產(chǎn)物按照實(shí)施例1所述的方法進(jìn)行核磁共振檢測(cè)， 檢測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明實(shí)施例3提供的方法能夠提純得到氫化可的松。
[0065] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例3提供的方法提純氫化可的松 過(guò)程中提純?nèi)軇┑挠昧浚瑱z測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明實(shí)施例3提供的方法提純氫化可的松的過(guò)程 中提純?nèi)軇┑挠昧繛椹? 20倍的發(fā)酵液的體積。
【權(quán)利要求】
1. 一種從發(fā)酵液中提純氫化可的松的方法，包括： 將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附，得到附著了氫化可的松的填料物；所述填料為表面鍵合 有官能團(tuán)的硅膠； 所述官能團(tuán)包括烷基、苯基、氨基或腈基； 將所述附著了氫化可的松的填料物在溶劑中進(jìn)行洗脫，得到氫化可的松；所述溶劑為 醇類(lèi)化合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述烷基為碳原子數(shù)為4?18的烷基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述填料的粒度為5微米?100微米。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附之前，還包 括： 將所述發(fā)酵液進(jìn)行微孔過(guò)濾，所述微孔過(guò)濾采用的微孔過(guò)濾膜的孔徑為〇. 2 y m? 5 u m〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將發(fā)酵液在填料中進(jìn)行吸附之前，還包 括： 將所述填料依次進(jìn)行活化和平衡； 所述活化的試劑包括醇類(lèi)化合物； 所述平衡的試劑包括水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述活化和平衡的試劑的體積和填料的 質(zhì)量比為（lmL?3mL) : lg。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述活化、平衡的溫度為10°C?40°C。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶劑的體積和填料的質(zhì)量比為 (2mL ?6mL):lg。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脫的溫度為10°C?40°C。
【文檔編號(hào)】C07J5/00GK104356189SQ201410624375
【公開(kāi)日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月7日
【發(fā)明者】丁忠, 黃學(xué)英 申請(qǐng)人:蘇州賽分科技有限公司