專利名稱：豬苓的發(fā)酵方法和豬苓多糖的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及豬苓的固體發(fā)酵方法和豬苓多糖的提取方法。
背景技水豬苓polyporus umbellatus(Pers)Fr.，別名 豕零(莊子)、豨苓(韓昌黎集)、地烏桃(本草圖經(jīng))，野豬食(東北藥植志)豬屎苓(四川中藥志)為多孔菌科真菌，天然狀態(tài)下與蜜環(huán)菌共生。
野生豬苓生長在樹根部，春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥，就可使用。豬苓的干燥菌核是一種常用的中藥，自古以來，豬苓就用以治療腫瘤等疾病，具有2000多年的藥用歷史。主治急性腎炎、肝炎、急性尿道感染、暑熱水瀉和小便不利等。豬苓作為一種治療腫瘤的中藥，越來越受到人們的重視。豬苓的水煎提取物為目前治療慢性病毒性肝炎及抗腫瘤的主要成分。七十年代T.Miyazaki和N.oikawa首次從豬苓菌該中提取出豬苓多糖，經(jīng)臨床證明具有免疫刺激作用，能提高人體的免疫功能。臨床上豬苓多糖用于原發(fā)性肺癌、肝癌、子宮頸癌、鼻咽癌、食道癌和白血病等放化療的輔助治療。
最近研究還表明豬苓多糖能幫助機(jī)體對應(yīng)激適應(yīng)，還能抑制癌細(xì)胞的生長和殺死艾滋病病毒。此外，它還能促使防治艾滋病病毒的主要免疫細(xì)胞CD4繁殖生長。
日本專利JP55159796和文獻(xiàn)“Duction of Antitumor Glucans byPolyporus Umbellatus Culture”Jpn.Kokai Tokyo Koho 81 76，401，1981公開了一種從豬苓中提取抗癌物質(zhì)和提取抗腫瘤葡聚糖的方法。
目前，獲取豬苓包括野生采挖。由于野生豬苓生長緩慢，因此采挖困難，資源緊缺；
人工栽培。豬苓采用半野生栽培，因豬苓與密環(huán)菌營共生生活，所以找密環(huán)菌能夠生長的林木進(jìn)行栽培，以上兩種方法都存在豬苓內(nèi)重金屬易超標(biāo)的可能，且產(chǎn)量有限，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足日益增長的國內(nèi)外市場對豬苓的需求；人工發(fā)酵生產(chǎn)。如中國藥學(xué)雜志1993(8)466-468報(bào)道的“蜜環(huán)菌發(fā)酵液在豬苓發(fā)酵過程中的應(yīng)用”中公開的技術(shù)。
然而目前常規(guī)的固體發(fā)酵多為開放式發(fā)酵，用豬苓子實(shí)體或液體深層發(fā)酵菌絲體，然后用水提醇沉提取多糖，需要高質(zhì)量的潔凈發(fā)酵室和培養(yǎng)架盤等，生產(chǎn)周期長，生產(chǎn)量小，不容易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，需要價(jià)格昂貴的發(fā)酵室和發(fā)酵設(shè)備，所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物不僅成本較高，而且重金屬含量超標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種豬苓的發(fā)酵方法和豬苓多糖的生產(chǎn)方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷。
本發(fā)明的豬苓的固體發(fā)酵方法包括如下步驟(1)將發(fā)酵料用密環(huán)菌或其它草腐類食用菌采用塑料袋密閉發(fā)酵的方法進(jìn)行預(yù)發(fā)酵；所說的密環(huán)菌的拉丁學(xué)名為Armillariella mella (Vahl.ex.Fr.)karst，保藏號SEFI 0086；所說的它草腐類食用菌選自雙孢菇Agaricus bisporus(Lange)Sing.SAGC 00037、姬松茸Agaricus blazei Murrill SAGC 00253、草菇Volvariella volvacea(Bull.ex Fr.)Sing.SAGC 00077、金針菇FIammulina velutipes(Fr.)Sing.SEFI 0178、雞腿菇Coprinuscomatus(Mull.Ex Fr.)Gray SAGC 00230、杏鮑菇Pleurotus eryngiiDC.ex Fr.)Quel.SAGC 00116、白靈菇Pleurotus ferulae var.nebradensisLenzi SAGC 00109、平菇Pleurotus ostreatus(Jacq.ex Fr.)Quel.SEFI0510或大球蓋菇Stropharia rugoso-annulata Farlow SEFI 1298中的一種。
所說的發(fā)酵料的組分包括主料、輔料和水；所說的主料為甘蔗渣或玉米芯60-90份；以麩皮、玉米粉、石灰和食糖的混合物為輔料時(shí)，輔料的重量份數(shù)為麩皮5-20份，玉米粉1-5份，蔗糖0.5-5份，石膏粉0.3-3份，加水量為干發(fā)酵料的80-150份；(2)將經(jīng)過預(yù)發(fā)酵的培養(yǎng)料，裝入塑料袋中，在2.17×10-3的Kpa壓力下高壓滅菌2.5小時(shí)或常壓滅菌12小時(shí)；(3)將豬苓種子接種于包括(2)的滅菌產(chǎn)物，最好在超凈工作臺上進(jìn)行接種；所說的豬苓菌種從中國農(nóng)業(yè)微生物保藏中心上海市分中心購買，保藏號為SEFI 0208。
(4)接種后的培養(yǎng)料放在塑料棚中發(fā)酵，發(fā)酵溫度為18～32℃，發(fā)酵時(shí)間為5～7個月，收取菌絲，曬干，獲得干燥的固體發(fā)酵菌絲體；(5)將干燥的固體發(fā)酵菌絲體，加8～12倍重量的水，并用堿性物質(zhì)將pH調(diào)整為10～13，煮沸，維持0.5～2小時(shí)，收集提取液，重復(fù)提取2～5次；所說的堿性物質(zhì)選自NaOH、KOH、Na2CO3或Ca(OH)2(6)將提取液先通過180～220萬分子量的濾膜過濾，收集濾液，再用0.8～1.2萬分子量的超濾膜，除去小分子雜質(zhì)，使提取液中1-200萬分子量的產(chǎn)物，得以濃縮，獲得濃縮液；(7)將步驟(6)所獲得的濃縮液，在70～80℃的溫度下噴霧干燥，或在55～65℃烘箱烘干，即得豬苓多糖。
以干燥的固體發(fā)酵的重量計(jì)，得率為7.5％以上。
采用苯酚硫酸法和DNS法進(jìn)行檢測，產(chǎn)物中豬苓多糖的重量含量為15％。，用原子吸收光譜檢測重金屬中鉛含量小于1.5ppm；砷小于1ppm；用測汞儀測定，汞含量小于0.3ppm。均達(dá)到國家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。
由上述公開的技術(shù)方案可見，本發(fā)明的方法，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)量大，容易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，不需要價(jià)格昂貴的發(fā)酵室和發(fā)酵設(shè)備，所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，多糖水平高，不僅生產(chǎn)成本較低，而且重金屬含量不超標(biāo)，便于工業(yè)化實(shí)施。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1發(fā)酵在普通塑料大棚中進(jìn)行，大棚建在地勢高，周邊有排水條件的地方。大棚地面最好做成水泥地面，上面最少要覆蓋一層黑色薄膜。大棚下部要有便于通風(fēng)部分，便于夏天通風(fēng)。冬天又有能保溫的覆蓋物。大棚寬度為6米，放4排，兩邊各1排，中間2排，兩邊各留過道；發(fā)酵料的組分和重量份數(shù)為甘蔗渣75份；麩皮20份，玉米粉3.5份，石灰1份，食糖0.5份；加水120份。充分拌勻，用雞腿菇菌種用塑料袋封閉式預(yù)發(fā)酵。
(2)將經(jīng)過預(yù)發(fā)酵的培養(yǎng)料適當(dāng)補(bǔ)充水份，裝入塑料袋中，在2.17*10-3的Kpa壓力下高壓滅菌2.5小時(shí)；(3)將豬苓種子接種于包括(2)的滅菌產(chǎn)物(4)接種后的培養(yǎng)料放在塑料棚中發(fā)酵，發(fā)酵溫度為20℃，發(fā)酵時(shí)間為6個月，收取菌絲，曬干，獲得干燥的固體發(fā)酵菌絲體；(5)將干燥的固體發(fā)酵菌絲體，加10倍重量的水，并用NaCO3將pH調(diào)整為11，煮沸，維持2小時(shí)，收集提取液，重復(fù)提取3次；(6)將提取液先通過200萬分子量的超濾膜，收集濾液，再用1萬分子量的超濾膜，除去小分子雜質(zhì)，使提取液中1-200萬分子量的產(chǎn)物，得以濃縮，獲得濃縮液；(7)將步驟(6)所獲得的濃縮液，在75℃的溫度下噴霧干燥，即得豬苓多糖。
以干燥固體發(fā)酵菌絲體的重量計(jì)，得率為8.5％以上。
采用苯酚硫酸法和DNS法進(jìn)行檢測，產(chǎn)物中豬苓多糖的重量含量為15％。，用原子吸收光譜檢測重金屬中鉛含量小于1.5ppm；砷小于1ppm；用測汞儀測定，汞含量小于0.3ppm。
實(shí)施例2發(fā)酵在普通塑料大棚中進(jìn)行，大棚建在地勢高，周邊有排水條件的地方。大棚地面最好做成水泥地面，上面最少要覆蓋一層黑色薄膜。大棚下部要有便于通風(fēng)部分，便于夏天通風(fēng)。冬天又有能保溫的覆蓋物。大棚寬度為8米，放6排，兩邊各2排，中間3排，兩邊各留過道；發(fā)酵料的組分和重量份數(shù)為
粗粉碎玉米芯85份；麩皮12份，玉米粉1.5份，石灰1份，食糖0.5份；將發(fā)酵料用密環(huán)菌采用塑料袋封閉式發(fā)酵的方法進(jìn)行預(yù)發(fā)酵；(2)將經(jīng)過預(yù)發(fā)酵的培養(yǎng)料，裝入塑料袋中，在常壓滅菌12小時(shí)；(3)將豬苓菌種接種于包括(2)的滅菌產(chǎn)物，(4)接種后的培養(yǎng)料放在塑料棚中發(fā)酵，發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵時(shí)間為6個月，收取菌絲，曬干，獲得干燥的固體發(fā)酵菌絲體；(5)將干燥的固體發(fā)酵菌絲體，加10倍重量的水，并用KOH將pH調(diào)整為11，煮沸，維持2小時(shí)，收集提取液，重復(fù)提取4次；(6)將提取液先通過200萬分子量的濾膜過濾，收集濾液，再用1萬分子量的超濾膜，除去小分子雜質(zhì)，使提取液中1-200萬分子量的產(chǎn)物，得以濃縮，獲得濃縮液；(7)將步驟(6)所獲得的濃縮液，在75℃的溫度下噴霧干燥，即得豬苓多糖。
以干燥固體發(fā)酵菌絲體的重量計(jì)，得率為8.5％以上。
采用苯酚硫酸法和DNS法進(jìn)行檢測，產(chǎn)物中豬苓多糖的重量含量為15.8％。，用原子吸收光譜檢測重金屬中鉛含量小于1.5ppm；砷小于1ppm；用測汞儀測定，汞含量小于0.3ppm。
權(quán)利要求
1.一種豬苓的發(fā)酵方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將發(fā)酵料用密環(huán)菌或其它草腐類食用菌采用常規(guī)的方法進(jìn)行預(yù)發(fā)酵；所說的發(fā)酵料的組分包括主料、輔料和水；所說的主料為甘蔗渣或玉米芯，輔料為麩皮或/和玉米粉或/和石灰或/和食糖；(2)將經(jīng)過預(yù)發(fā)酵的培養(yǎng)料，裝入塑料袋中滅菌；(3)將豬苓種子接種于包括(2)的滅菌產(chǎn)物；(4)接種后的培養(yǎng)料放在塑料棚中發(fā)酵，發(fā)酵溫度為18-32℃，發(fā)酵時(shí)間為5～7個月，收取菌絲，曬干，獲得干燥的固體發(fā)酵菌絲體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，將經(jīng)過預(yù)發(fā)酵的培養(yǎng)料，裝入塑料袋中，在2.17×10-3的Kpa壓力下高壓滅菌2.5小時(shí)或常壓滅菌12小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，發(fā)酵料重量份數(shù)為主料甘蔗渣或玉米芯60-90份；以麩皮、玉米粉、石灰和食糖的混合物為輔料時(shí)，輔料的重量份數(shù)為麩皮5-20份，玉米粉1-5份，蔗糖0.5-5份，石膏粉0.3-3份，加水量為干發(fā)酵料的80-150份。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所說的它草腐類食用菌選自雙孢菇Agaricus bisporus(Lange)Sing.SAGC 00037、姬松茸Agaricus blazei Murrill SAGC 00253、草菇Volvariella volvacea(Bull.ex Fr.)Sing.SAGC 00077、金針菇FIammulina velutipes(Fr.)Sing.SEFI 0178、雞腿菇Coprinus comatus(Mull.Ex Fr.)Gray SAGC00230、杏鮑菇Pleurotus eryngii(DC.ex Fr.)Quel.SAGC 00116、白靈菇Pleurotus ferulae var.nebradensis Lenzi SAGC 00109、平菇Pleurotusostreatus(Jacq.ex Fr.)Quel.SEFI 0510或大球蓋菇Strophariarugoso-annulata Farlow SEFI 1298中的一種。
5.一種豬苓多糖的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟將權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的方法獲得的干燥的固體發(fā)酵菌絲體，加8～12倍重量的水，并用堿性物質(zhì)將pH調(diào)整為10～13，煮沸，維持0.5～2小時(shí)，收集提取液，重復(fù)提取2～5次；將提取液先通過180～220萬分子量的濾膜過濾，收集濾液，再用0.8～1.2萬分子量的超濾膜，獲得濃縮液；將濃縮液，在60～80℃的溫度下噴霧干燥，或在55～65℃下烘干，即得豬苓多糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所說的堿性物質(zhì)選自NaOH、KOH、Na2CO3或Ca(OH)2。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種豬苓的發(fā)酵方法和豬苓多糖的生產(chǎn)方法。本發(fā)明的方法，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)量大，容易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，不需要價(jià)格昂貴的發(fā)酵室和發(fā)酵設(shè)備，所獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，多糖水平高，不僅生產(chǎn)成本較低，而且重金屬含量不超標(biāo)，便于工業(yè)化實(shí)施。
文檔編號C08B37/00GK1912100SQ200510028589
公開日2007年2月14日 申請日期2005年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月8日
發(fā)明者崔星明, 龔勝萍, 嚴(yán)培蘭, 戴群華, 楊志元 申請人:上海瑞豐農(nóng)業(yè)科技公司