專利名稱：：一種超聲波提取抗輻射氧化蕨麻多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及天然多糖的制備方法，具體地說是一種超聲波提取具有抗輻射氧化作用的蕨麻多糖的方法。
背景技術(shù)：
：電離輻射對生物體的損傷既有能量傳遞的直接作用，也有通過水的輻射反應(yīng)，大量產(chǎn)生自由基的間接作用。DNA分子中堿基、核糖和磷酸鍵都可能遭受自由基的攻擊，造成堿基與核糖氧化、鏈斷裂、與蛋白質(zhì)交聯(lián)等多種類型的損傷。自由基引發(fā)的脂類過氧化作用可造成生物膜中飽和與不飽和脂肪酸的比例失調(diào)，改變膜結(jié)構(gòu)的剛?cè)崽匦?，增加膜的通透性，甚至發(fā)生崩解。MDA是脂質(zhì)過氧化的分解產(chǎn)物，其含量可反映脂質(zhì)過氧化的程度以及機(jī)體受自由基攻擊的程度。SOD和CAT是催化02'和分解H202的抗氧化酶，它們都反映機(jī)體的抗氧化能力。自由基作用于脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，氧化終產(chǎn)物丙二醛等會引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，該現(xiàn)象是衰老的一個基本因素。為了減緩氧化、衰老的過程，修復(fù)治療受傷的機(jī)體，人們通常食用一些含有天然存在的抗氧化劑的食物，如含維生素A、維生素C、維生素E、硒、鋅的水果、綠葉蔬菜、漿果等。與此同時(shí)，人們也在有目的地尋找毒性低且活性高的抗氧化物質(zhì)。專利CN1143084A公開了一種抗氧化劑接枝的多糖或抗氧化劑交聯(lián)的多糖在治療關(guān)節(jié)炎、作為藥物介質(zhì)方面的作用，降低術(shù)后粘連的發(fā)生率、促進(jìn)慢性創(chuàng)傷和潰瘍的愈合。專利CN101353382A公開了一種具有抗氧化活性蟲草多糖的提取方法，報(bào)道了一種用蟲草廢液提取抗氧化活性多糖的方法，精多糖的提取率約為7.8%。專利CN1144835A公開了一種從迷迭植物中提取抗氧化劑的方法，該方法是在提取抗氧化劑之前，先用水蒸汽或超臨界提取迷迭植物中的精油，再提取其中的抗氧化劑。專利CN101233950A公開了一種從低值海水魚及下腳料蛋白中提取抗氧化劑的技術(shù)，得到的抗氧化劑其抗氧化活性達(dá)到維生素E的57.194.4。/。；專利CN101099768A公開了一種從香椿老葉中提取抗氧化活性物質(zhì)的方法。蕨麻(薔薇科委陵菜屬鵝絨委陵菜的塊根)具有治療脾虛腹瀉、病后貧血、營養(yǎng)不良、健脾益胃、生津止渴、益氣補(bǔ)血等效果。專利CN02138522.X公開了一種含有蕨麻提取物的保健食品及其制備，采用水和/或乙醇提取蕨麻，制得蕨麻提取物，加入或不加食品添加劑制成保健食品，具有調(diào)解人體免疫功能、抗疲勞的功效。專利CN101001842A公開了蕨麻在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用，可顯著提高窒息性缺氧和急性減壓缺氧小鼠的存活率和存活時(shí)間。專利ZL200610090097.5公開了一種抗輻射蕨麻多糖的制備方法，得到了能增強(qiáng)動物抗輻射能力的多糖，純化后多糖得率為6.32%;專利CN101358222A公開了一種以蕨麻為原料微波輔助提取抗輻射多糖的方法，純化后多糖的得率為12.18%，用于治療X射線引起的輻射損傷。超聲波的優(yōu)點(diǎn)是并不能使樣品內(nèi)的分子產(chǎn)生極化，而是在溶劑和樣品之間產(chǎn)生聲波空化作用，導(dǎo)致溶液內(nèi)氣泡的形成、增長和爆破壓縮，從而使固體樣品分散，增大樣品與萃取溶劑之間的接觸面積，提高目標(biāo)物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳質(zhì)速率。專利ZL200610166326.7授權(quán)了一種米糠多糖的超聲波提取方法，超聲波功率200400W，并未考慮到提取條件對樣品純度的影響，純化后多糖的得率較低，僅為2.87%，很難應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。上述技術(shù)中，常規(guī)提取多糖方法存在耗時(shí)長、溶劑消耗量大、提取效率低及運(yùn)行成本高等問題；而微波提取會對多糖分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響，可能導(dǎo)致大分子鏈的降解。抗輻射氧化作用不同于單純的抗輻射作用，需以機(jī)體各器官的抗氧化楊酶、抗氧化系統(tǒng)綜合評價(jià)。而多糖結(jié)構(gòu)的變化會對其生物活性產(chǎn)生巨大的影響，因此，在提取過程中如何能避免上述技術(shù)問題、克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，得到目標(biāo)生物活性物質(zhì)是亟待解決的問題
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種超聲波提取抗輻射氧化蕨麻多糖的方法，它首次使用超聲波法提取蕨麻多糖，提取效率高、運(yùn)行成本低，且能最大限度地減小對多糖分子結(jié)構(gòu)及其生物活性產(chǎn)生影響。本發(fā)明的另一目的在于提供一種蕨麻多糖在制備具有修復(fù)X-射線引發(fā)的自由基氧化損傷功能的天然制品或保健食品中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的超聲波提取抗輻射氧化蕨麻多糖的方法，可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)，其步驟為1)稱取一定量蕨麻干粉，置于超聲波提取設(shè)備中，加入2050倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在超聲波功率為100180W、溫度為4(TC7(TC下提取30l20分鐘，在0.060.08MPa壓力條件下過濾，濾液在壓力為0.060.08MPa、溫度為55。C65。C的條件下減壓濃縮至原體積的1/91/3，在濃縮液中加入乙醇，所述的乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的7080%，室溫下靜置2436小時(shí)后在40005000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物，并在-60-5(TC、113Pa的條件下冷凍干燥2430小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取一定量物質(zhì)A，用69倍重量的蒸餾水溶解，后加入IO^g/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的體積比為1:100，在溫度405(TC下酶解1012小時(shí)，再用正丁醇和氯仿體積比為l:24的混合液，萃取35次，收集上層水溶液，在溫度405(TC、壓力0.060.08MPa條件下，減壓濃縮至原水溶液體積的1/101/12，放入截留分子量60008000Da的透析袋中，流水透析2024小時(shí)，再用蒸餾水透析1836小時(shí)，將透析袋內(nèi)液體在溫度4050°C、壓力0.060.08MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/101/12，加入乙醇，所述的乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的7080%，靜置1014小時(shí)，在40005000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-60-5(TC、壓力113Pa條件下冷凍干燥3036小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。純化后的蕨麻多糖經(jīng)紅外掃描，紅外光譜顯示如圖5:在2829.67cm"處有一特征峰，是分子中C-H鍵的變角振動引起的；在3423.56cm"處有一特征峰，是O-H的伸縮振動引起的；802.3cm"附近吸收峰表明了a-D-吡喃半乳糖的存在；862.67cm"處的吸收峰說明含有(3-D-吡喃甘露糖，這些均為多糖的吸收峰。本發(fā)明提供的上述超聲波提取抗輻射氧化蕨麻多糖的方法，與熱水浸提和微波萃取工藝相比，超聲波提取具有如下突出特點(diǎn)無需高溫，萃取效率高，純度高，對活性物質(zhì)破壞小，具有廣譜性，能耗較小，工藝成本低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著(見下表)。本發(fā)明是以蕨麻為原料，經(jīng)過超聲波提取、純化制備的一種可以修復(fù)由輻射引起的氧化損傷的天然產(chǎn)品，此天然產(chǎn)品無毒副作用，且抗輻射氧化效果好。對X射線輻射引起的自由基所造成的體內(nèi)氧化損傷有較好的療效。經(jīng)3.5GyX射線照射小鼠的抗氧化能力實(shí)驗(yàn)表明7天服用該制劑使輻射損傷動物的SOD活性升高66.7%;T-AOC活力54.6%,CAT活力上升105.7%，MDA含量下降63.20/0。超聲波取法與傳統(tǒng)提取法、微波法比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本發(fā)明蕨麻多糖抗輻射氧化效果動物試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用小鼠60只，隨機(jī)分成5組，每組12只，分別如下正常對照組、輻射對照組、多糖高/中/低三個劑量組(240mg/(kgb.w.);120mg/(kgb.w.);60mg/(kgb.w.))，正常對照組灌胃生理鹽水。輻射前給藥15天，輻射后12h內(nèi)給藥，以后每天給藥一次，7天后測小鼠的體內(nèi)抗氧化指標(biāo)。照射條件為X射線，小鼠單次全身照射劑量3.5Gy，劑量率1Gy/min，源皮距l(xiāng)m。除正常對照組不進(jìn)行照射外，其他組均進(jìn)行照射。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖l可知，輻射對照組與正常對照組相比，肝臟CAT活力明顯降低正常對照組的CAT的活性明顯高于輻射對照組(pO.Ol)。照射后7d，各喂藥組間CAT活性與輻射對照組相比均有所增高；其中低劑量組CAT活性恢復(fù)達(dá)到顯著水平(p<0.05)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖2可知，X射線照射過的小鼠的MDA含量明顯高于正常對照組。照射后7d，各喂藥組間MDA含量與輻射對照組相比均有所下降，其中低劑量組的MDA含量下降的最為明顯。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖3可知，正常對照組的SOD的活性明顯高于輻射對照組。照射后7d，各喂藥組間SOD活性與輻射對照組相比均有所增高。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖4可知，輻射對照組與正常對照組相比，肝臟T-AOC活力明顯降低，達(dá)到極顯著水平(pO.Ol)。照射后7d，各喂藥組間T-AOC活性與模型對照組相比均有所增高。通過上述動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明制備的蕨麻多糖可以應(yīng)用于制備具有修復(fù)X-射線引發(fā)的良由基氧化損傷功能的天然制品或保健食品中。圖1是蕨麻多糖制劑對輻射小鼠肝臟CAT活力的影響圖2是蕨麻多糖制劑對輻射小鼠肝臟MDA含量的影響圖3是蕨麻多糖制劑對輻射小鼠肝臟SOD活力的影響圖4是蕨麻多糖制劑對輻射小鼠肝臟T-AOC活力的影響圖5是對蕨麻多糖制劑的紅外掃描圖具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例及比較例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明-實(shí)施例l:1)稱取一定量蕨麻干粉，置于超聲波提取設(shè)備中，加入20倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在超聲波功率為IOOW、溫度為5(TC條件下提取60分鐘，在壓力0.07MPa的條件下過濾，濾液在壓力0.08MPa、溫度為6(TC條件下減壓濃縮至原體積的1/3，在濃縮液中加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的75%)，室溫下靜置30小時(shí)后，在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物在-55'C，在壓力1Pa的條件下冷凍干燥28小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取一定量物質(zhì)A，用6倍重量的蒸餾水溶解，后加入10pg/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的比例為1:100(v/v)，在45。C下酶解11小時(shí)，再用正丁醇和氯仿混合液(1:3，v/v)萃取4次，收集上層水溶液，在溫度45X:、壓力0.07MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/11，放入截留分子量60008000Da的透析袋中，流水透析22小時(shí)，再用蒸餾水透析24小時(shí)。將透析袋內(nèi)液體在溫度45'C、壓力0.07MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/11，加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的75%)，靜置12小時(shí)，在4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-55'C、壓力1Pa條件下冷凍干燥33小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。純化多糖的得率為9.8625%，經(jīng)苯酚-硫酸法檢測其總糖含量為93.5%。實(shí)施例2:1)稱取一定量蕨麻干粉，置于超聲波提取設(shè)備中，加入35倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在超聲波功率為180W、溫度為7(TC條件下提取30分鐘，在壓力0.06MPa的條件下過濾，濾液在壓力0.07MPa、溫度為55t:條件下減壓濃縮至原體積的1/9，在濃縮液中加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的80%)，室溫下靜置36小時(shí)后，在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物在-6(TC，13Pa的條件下冷凍干燥30小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取一定量物質(zhì)A，用9倍重量的蒸餾水溶解，后加入10ng/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的比例為1:100(v/v)，在4(TC下酶解12小時(shí)，再用正丁醇和氯仿混合液(1:2，v/v)萃取5次，收集上層水溶液，在溫度40。C、壓力0.08MPa下減壓濃縮至原水溶液體積的1/12，放入截留分子量60008000Da的透析袋中，流水透析24小時(shí)，再用蒸餾水透析18小時(shí)。將透析袋內(nèi)液體在溫度50°C、壓力0.06MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/12，加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的80。％)，靜置IO小時(shí)，在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-5(TC、壓力13Pa條件下冷凍干燥30小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。純化多糖的得率為10.5965%，經(jīng)苯酚-硫酸法檢測其總糖含量為90.3%。實(shí)施例3:1)稱取一定量蕨麻干粉，置于超聲波提取設(shè)備中，加入50倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在超聲波功率為150W、溫度為4(TC條件下提取120分鐘，在壓力0.08MPa的條件下過濾，濾液在壓力0.06MPa、溫度為65"C條件下減壓濃縮至原體積的1/6，在濃縮液中加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的70%)，室溫下靜置24小時(shí)后在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物在5(TC，在壓力8Pa的條件下冷凍干燥24小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取一定量物質(zhì)A，用8倍重量的蒸餾水溶解，后加入10pg/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的比例為1:100(v/v)，在5(TC下酶解10小時(shí)，再用正丁醇和氯仿混合液(1:4，v/v)萃取3次，收集上層水溶液，在溫度5(TC、壓力0.06MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/10，放入截留分子量60008000Da的透析袋中，流水透析20小時(shí)，再用蒸餾水透析36小時(shí)。將透析袋內(nèi)液體在溫度40'C、壓力0.08MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/10，加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的80%),靜置14小時(shí)，在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-6(TC、壓力10Pa條件下冷凍干燥36小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。純化多糖的得率為11.787%，經(jīng)苯酚-硫酸法檢測其總糖含量為92.2%。比較例l:以實(shí)施例1的方法和熱水浸提來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。兩實(shí)驗(yàn)的差別在于熱水浸提采用7(TC加熱提取180min、蕨麻干粉中加入45倍蒸餾水來代替實(shí)施例步驟1中的超聲波提取。1)稱取一定量蕨麻干粉，置于2000ml燒杯中，加入45倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在溫度為7(TC下提取180分鐘，在壓力0.07MPa的條件下過濾，濾液在壓力0.08MPa、溫度6(TC條件下減壓濃縮至原體積的1/3，在濃縮液中加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的75%)，室溫下靜置30小時(shí)后在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物在溫度-55-C、壓力lPa的條件下冷凍干燥28小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取一定量物質(zhì)A，用6倍重量的蒸餾水溶解，后加入10pg/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的比例為i:100(v/v)，在45。C下酶解U小時(shí)，再用正丁醇和氯仿混合液(1:3，v/v)萃取4次，收集上層水溶液，在溫度45'C、壓力0.07MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/11，放入截留分子量60008000Da的透析袋中，流水透析22小時(shí)，再用蒸餾水透析24小時(shí)。將透析袋內(nèi)液體在溫度45r、壓力0.07MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/11，加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的75%)，靜置12小時(shí)，在4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-55'C、壓力1Pa的條件下冷凍干燥33小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。純化多糖的得率為5.73%，經(jīng)苯酚-硫酸法檢測其總糖含量為85.6°/。。比較例2:以實(shí)施例2的方法和微波輔助提取來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。兩實(shí)驗(yàn)的差別在于微波輔助提取采用頻率915MHz，功率300W，溫度55'C加熱提取45min以及蕨麻干粉中加入40倍蒸餾水來代替實(shí)施例步驟1中的超聲波提取。1)稱取一定量蕨麻干粉，置于微波提取設(shè)備中，加入40倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在頻率915MHz、功率300W、溫度為55'C條件下提取45分鐘，在壓力0.06MPa的條件下過濾，濾液在壓力0.07MPa、溫度為55'C條件下減壓濃縮至原體積的1/9，在濃縮液中加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的80%)，室溫下靜置36小時(shí)后在5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物在溫度-6(TC、壓力13Pa的條件下冷凍干燥30小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取一定量物質(zhì)A，用9倍重量的蒸餾水溶解，后加入10pg/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的比例為1:100(v/v)，在40。C下酶解12小時(shí)，再用正丁醇和氯仿混合液(1:2，v/v)萃取5次，收集上層水溶液，在溫度40。C、壓力0.08MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/12，放入截留分子量60008000Da的透析袋中，流水透析24小時(shí)，再用蒸餾水透析18小時(shí)。將透析袋內(nèi)液體在溫度5(TC、壓力0.06MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/12，加入乙醇(乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的80%)，靜置IO小時(shí)，在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-5(TC、壓力13Pa的條件下冷凍干燥30小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。純化多糖的得率為12.18%,經(jīng)苯酚-硫酸法檢測其總糖含量為80.6%。權(quán)利要求1、一種超聲波提取抗輻射氧化蕨麻多糖的方法，其特征是該方法的步驟為1)稱取一定量蕨麻干粉，置于超聲波提取設(shè)備中，加入20～50倍(m/v)蒸餾水，攪拌、混勻；在超聲波功率為100～180W、溫度為40℃～70℃下提取30～120分鐘，在0.06～0.08MPa壓力條件下過濾，濾液在壓力0.06～0.08MPa、溫度為55℃～65℃下減壓濃縮至原體積的1/9～1/3，在濃縮液中加入乙醇，所述的乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的70～80％，室溫下靜置24～36小時(shí)后在4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集下層沉淀物，并在-60～-50℃、1～13Pa的條件下冷凍干燥24～30小時(shí)，得物質(zhì)A；2)稱取一定量物質(zhì)A，用6～9倍重量的蒸餾水溶解，后加入10μg/ml木瓜蛋白酶液，酶液與A液的體積比為1∶100，在溫度40～50℃下酶解10～12小時(shí)，再用正丁醇和氯仿體積比為1∶2～4的混合液，萃取3～5次，收集上層水溶液，在溫度40～50℃、壓力0.06～0.08MPa條件下，減壓濃縮至原水溶液體積的1/10～1/12，放入截留分子量6000～8000Da的透析袋中，流水透析20～24小時(shí)，再用蒸餾水透析18～36小時(shí)，將透析袋內(nèi)液體在溫度40～50℃、壓力0.06～0.08MPa條件下減壓濃縮至原水溶液體積的1/10～1/12，加入乙醇，所述的乙醇含量占加入乙醇后溶液總體積的70～80％，靜置10～14小時(shí)，在4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心，收集沉淀物在溫度-60～-50℃、壓力1～13Pa條件下冷凍干燥30～36小時(shí)，得純化的蕨麻多糖。2、一種蕨麻多糖在制備具有修復(fù)X-射線引發(fā)的自由基氧化損傷功能的天然制品或保健食品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種超聲波提取抗輻射氧化蕨麻多糖的方法，它以蕨麻為原料，經(jīng)超聲波提取30～120分鐘，在0.06～0.08MPa壓力條件下過濾，濾液在壓力0.06～0.08MPa、溫度55℃～65℃下減壓濃縮，乙醇沉淀、離心，收集下層沉淀物，冷凍干燥，再經(jīng)木瓜蛋白酶酶解，正丁醇和氯仿混合液萃取，減壓濃縮，透析后，得到天然蕨麻多糖，其無毒副作用，對X射線輻射引起的自由基所造成的體內(nèi)氧化損傷有較好的修復(fù)作用。經(jīng)3.5GyX射線照射小鼠的抗氧化能力實(shí)驗(yàn)表明7天服用該制劑使輻射損傷動物的SOD活性升高66.7％；T-AOC活力上升54.6％，CAT活力上升105.7％，MDA含量下降63.2％。文檔編號C08B37/00GK101619108SQ200910117419公開日2010年1月6日申請日期2009年8月8日優(yōu)先權(quán)日2009年8月8日發(fā)明者吳依茜,健姚,繼張,楊云云,梁俊玉,王俊龍,王小芳,趙保堂,趙美榮,郭紅云,馬君義申請人:西北師范大學(xué)