專(zhuān)利名稱(chēng)：一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于枸杞深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種采用超細(xì)粉碎技術(shù)輔助制備高抗氧化活性枸杞多糖的方法。
背景技術(shù)：
枸杞(Lycium chinense Mill)屬爺科,是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食兼用的名貴中藥材，其味甘、性平，具有補(bǔ)肝腎、益精血和明目的功能。枸杞的藥理和保健作用與其中的生物活性物質(zhì)多糖有很大關(guān)系?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，枸杞多糖具有調(diào)節(jié)免疫、清除自由基、抑制腫瘤、延緩衰老、降血脂、降血糖和抗疲勞等作用，具有廣闊的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。多糖的結(jié)構(gòu)是影響其生物學(xué)活性的重要因素，此外其理化性質(zhì)如黏度、溶解度等
也在一定程度上決定著多糖活性。多糖溶于水是其發(fā)揮生物學(xué)活性的首要條件，有研究表明，通過(guò)降低分子質(zhì)量、引入支鏈或?qū)χф溸M(jìn)行適當(dāng)修飾，均可提高多糖溶解度，從而增強(qiáng)其活性。多糖分子質(zhì)量越大，分子體積越大，不利于多糖跨越多重細(xì)胞膜障礙進(jìn)入生物體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)活性，但也并不是多糖分子質(zhì)量越低越好，因?yàn)榉肿淤|(zhì)量過(guò)低，無(wú)法形成產(chǎn)生活性的聚合結(jié)構(gòu)，Alban等人研究了分子質(zhì)量與硫酸化凝結(jié)多糖抗凝血活性的關(guān)系，認(rèn)為抗凝血活性與相對(duì)分子質(zhì)量呈啞鈴型曲線關(guān)系；不同的多糖產(chǎn)生生物學(xué)活性的最佳相對(duì)分子質(zhì)量的范圍不同，Gao等人報(bào)道，硫酸化凝結(jié)多糖在相對(duì)分子質(zhì)量為(7 11) X IO3內(nèi)，隨著相對(duì)分子質(zhì)量升高，其抗凝血活性有增強(qiáng)的趨勢(shì)，從細(xì)菌中分離的某種果聚多糖Levans，相對(duì)分子質(zhì)量達(dá)到2. IXlO5時(shí)抑制腫瘤生長(zhǎng)的活性最強(qiáng)。研究表明，多糖抗氧化活性與多糖的分子量、單糖組成、糖醛酸含量、糖苷鍵類(lèi)型、鏈構(gòu)象等分子結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系。而分子量大小是影響抗氧化活性強(qiáng)弱的一個(gè)重要結(jié)構(gòu)特征參數(shù)，且在一定范圍內(nèi)，分子量越低，則抗氧化活性越強(qiáng)。例如，周村山等人采用超聲波技術(shù)提取條形斑紫菜多糖，其分子量降低，多糖抗氧化性相應(yīng)提高；曾偉才等采用微波輔助法提取的木耳多糖，分子量為2. 77X IO4Da,實(shí)驗(yàn)表明其抗氧化能力較顯著?，F(xiàn)代加工技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用使多糖原料的前處理更加精細(xì)化，比如，超細(xì)粉碎和納米粉碎技術(shù)的應(yīng)用可以極大的破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，甚至打破細(xì)胞壁，使存在于細(xì)胞壁內(nèi)部的多糖暴露出來(lái)，提高多糖的提取得率。通過(guò)加工技術(shù)的應(yīng)用改變了多糖提取得率的同時(shí)，也就改變了多糖提取物中的分子組成、平均分量、糖苷鍵比例、支化度等結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，進(jìn)而改變了多糖提取物的水溶性、流變學(xué)特性、熱學(xué)特性、膠體特性等加工特性及其生物活性。超細(xì)粉碎技術(shù)是近年來(lái)國(guó)際上迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)高新技術(shù)。超細(xì)粉碎是指利用機(jī)械或流體動(dòng)力的方法將物料顆粒粉碎至lnm-100 μ m的過(guò)程。物料經(jīng)超細(xì)粉碎后由于存在表面效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)、量子效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)，具備一般顆粒所不擁有的一些特殊的理化性質(zhì)，如良好的溶解性、分散性、吸附性等。Li等人利用高頻振動(dòng)式超微粉碎制得了微細(xì)化的魔芋葡甘聚糖，發(fā)現(xiàn)微細(xì)化的魔芋葡甘聚糖晶體結(jié)構(gòu)和溶脹特性都發(fā)生了改變，而球磨的樣品顯著地降低了肥胖小鼠的體重，并且血液中甘油三酸酯、葡萄糖和高密度脂蛋白的含量也均有顯著降低，說(shuō)明微細(xì)化魔芋葡甘聚糖可以用于減肥產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。梅光明等利用超微粉碎技術(shù)對(duì)茯苓多糖和茯苓粉進(jìn)行微細(xì)化處理，比較處理前后其理化性質(zhì)的變化，經(jīng)紅外掃描圖譜鑒定，超微粉碎后的茯苓多糖紅外吸收?qǐng)D譜發(fā)生變化，多糖溶出率增力口，這有利于提聞獲茶在食品中的加工性能。由于多糖所具有的多種優(yōu)良理化特性和生物學(xué)活性，因而可以作為增稠劑、穩(wěn)定齊U、功能因子、代脂肪、成膜劑等被廣泛應(yīng)用于食品加工。而生產(chǎn)多糖所采用的各種高新技術(shù)對(duì)于多糖的分子結(jié)構(gòu)和生物活性又有顯著影響，進(jìn)而影響到多糖在食品加工中的應(yīng)用特性。因此，有必要深入開(kāi)展加工技術(shù)對(duì)于枸杞多糖結(jié)構(gòu)和生物活性的影響，開(kāi)發(fā)出高抗氧化性枸杞多糖的生產(chǎn)技術(shù)，從而指導(dǎo)枸杞多糖的生產(chǎn)和在食品中的應(yīng)用。通過(guò)檢索，發(fā)現(xiàn)兩篇與本發(fā)明相關(guān)的專(zhuān)利文獻(xiàn)。
I、一種枸杞多糖提取方法及枸杞多糖減肥制品(CN1670036)，主要包括以下步驟枸杞子用乙醇溶液預(yù)處理；經(jīng)過(guò)預(yù)處理的枸杞子用蒸餾水提??；將提取液用聚酰胺、DEAE-ceIlulose (0H-)和SephadexG_25凝膠色譜柱進(jìn)行處理。枸杞多糖減肥制品是以枸杞多糖為功能成分，配以相應(yīng)的輔料，按照常規(guī)技術(shù)制成。該方法不僅能夠提高枸杞多糖的純度，而且可以利用該多糖制成減肥制品。另外，由于本發(fā)明提供的枸杞多糖減肥制品是由純天然物質(zhì)制成，因而患者服用后無(wú)副作用，而且減肥效果明顯。2、一種以枸杞酒渣為原料制備高免疫調(diào)節(jié)活性枸杞多糖的酶解工藝(CN101069562)，其工藝特征為用水提醇沉法提取枸杞酒渣中的初多糖；加入濃度為
O.004 O. 01 %的糖化酶液，于30 50°C水解15 40min ;將水解液煮沸l(wèi)Omin，再加入95%乙醇沉淀(醇沉濃度為80% )，靜置10 18小時(shí)；3000r/min離心15min，取沉淀物，真空干燥即得棕色高免疫調(diào)節(jié)活性酶解枸杞多糖(重均分子量I 3萬(wàn))。本發(fā)明以枸杞酒渣為原料，提高了資源利用率，與現(xiàn)有技術(shù)相比，利用了枸杞多糖的生理活性與其分子量關(guān)系密切，通過(guò)酶解技術(shù)改變其分子量，將枸杞初多糖酶解為高免疫調(diào)節(jié)活性的枸杞多糖，本工藝簡(jiǎn)單，操作方便，枸杞多糖得率高，免疫調(diào)節(jié)活性強(qiáng)。通過(guò)對(duì)比，本發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)與上述兩篇專(zhuān)利公開(kāi)文獻(xiàn)存在本質(zhì)的不同。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種工藝簡(jiǎn)單，操作方便，所制得的枸杞多糖得率高、抗氧化活性強(qiáng)，采用超細(xì)粉碎前處理的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，在制備過(guò)程中枸杞子經(jīng)超細(xì)粉碎前處理。而且，所述枸杞子經(jīng)超細(xì)粉碎前處理后，90-99%的枸杞子顆粒小于700nm。而且，所述超細(xì)粉碎前處理具體步驟為枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45 °C下低溫烘干3_5h，高能納米沖擊磨粉碎5-7h。而且，具體步驟如下⑴超細(xì)粉碎前處理枸杞子經(jīng)粗粉碎，低溫烘干，高能納米沖擊磨粉碎，粉碎后使90%以上的枸杞子顆粒小于700nm ；
⑵乙醇前處理向經(jīng)超細(xì)粉碎處理的枸杞加入體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水溶液，料液比例g:mL為I :2-4，回流提取，棄去上清液，下層不溶物重復(fù)上述操作，得到前處理后的枸杞子；⑶水提取水與經(jīng)過(guò)前處理的枸杞子按照比例mL:g為4飛1混合后，水浴浸提后，過(guò)濾，收集濾液，不溶物重復(fù)上述操作2次，合并濾液；⑷真空濃縮真空度〈O. IMPa，45飛5°C下將步驟⑶中濾液濃縮到可溶性固形物含量大于10%,得濃縮液；(5)乙醇沉淀于攪拌條件下向濃縮液中緩慢加入乙醇，使乙醇的終體積濃度大于80%，靜置6小時(shí)以上，分離后，收集固體物質(zhì)，揮發(fā)去除乙醇得枸杞粗多糖；(6)蛋白質(zhì)脫除采用聚酰胺色譜柱法或Sevag法脫除蛋白質(zhì)，濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%以上，真空冷凍干燥，得枸杞多糖；
(7)乙醇分級(jí)沉淀將枸杞多糖配成質(zhì)量濃度為2. 5%的枸杞多糖溶液，邊攪拌邊加入體積濃度為95%以上的乙醇，使乙醇體積濃度達(dá)到60%，靜置6小時(shí)以上，分離，收集上清液，繼續(xù)加入濃度為95% (v/v)以上的乙醇，至乙醇濃度達(dá)到80% (v/v)，靜置6小時(shí)以上，分離，收集沉淀，揮發(fā)去除乙醇，冷凍干燥后得枸杞多糖。而且，所述步驟中⑴中枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45°C下低溫烘干4h，高能納米沖擊磨粉碎6h。而且，所述步驟中⑵中料液比例g :mL為I :3，于80°C水浴回流提取O. 5h，棄去上
清液，下層不溶物重復(fù)上次操作4次。而且，所述步驟中⑶水浴浸提的條件為95°C水浴浸提95min。而且，所述步驟中(5)或(7)中分離為3400r/min離心10分鐘以上，或過(guò)濾處理。而且，所述步驟中(6)中聚酰胺色譜柱法除蛋白的具體步驟為將枸杞粗多糖溶解至質(zhì)量濃度為1%_2%，將其加入聚酰胺色譜柱，上樣量為柱容量的15%-20%，以水洗脫，收集洗脫液，濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%以上。而且，所述步驟中(6)中Sevag法除蛋白的具體步驟為取枸杞粗多糖，加水完全溶解，依次加入氯仿和正丁醇，多糖溶液氯仿正丁醇的體積比為25 5 :1，劇烈振搖20min靜置分層，傾出上清液，棄去下層有機(jī)溶液和中間變性蛋白質(zhì)層，上清液重復(fù)操作數(shù)次，直至無(wú)變性蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止，收集上清液，真空濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%以上。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是I、本發(fā)明制備方法以枸杞為原料，采用超細(xì)粉碎技術(shù)降低多糖分子量，制備高抗氧化性枸杞多糖的工藝簡(jiǎn)單，操作方便。2、本制備方法所采用的乙醇分級(jí)沉淀方法具有得率高、低成本的優(yōu)勢(shì)，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用。3、本發(fā)明制備方法所制備得到的枸杞多糖得率高，抗氧化活性強(qiáng)，與未經(jīng)超細(xì)粉碎前處理的枸杞多糖比較，本方法所獲得的枸杞多糖對(duì)DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)降低60%以上，對(duì)ABTS自由基的IC5tl值降低70%以上。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明實(shí)施例中所使用的試劑如無(wú)特殊說(shuō)明，均為市售產(chǎn)品；所使用的試驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明均為常規(guī)方法；所使用的儀器如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)儀器。實(shí)施例I :一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，具體步驟如下⑴超細(xì)粉碎前處理枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45°C下低溫烘干3h，高能納米沖擊磨粉碎5h，粉碎后使90%以上的枸杞子顆粒小于700nm。⑵乙醇前處理稱(chēng)取200g經(jīng)上述加工處理的枸杞，加入80% (V/V)的乙醇水溶液，料液比例g:mL為I :2 (g枸杞超細(xì)粉v乙醇溶液)，于80°C水浴回流提取O. 5h，棄去上清液，下層不溶物重復(fù)上次操作4次，得到前處理的枸杞子；⑶水提取經(jīng)乙醇處理的枸杞子，揮發(fā)去除乙醇，加入蒸餾水，料/液比為(4飛)1CmL蒸餾水g枸杞子)，于95°C水浴浸提95min，過(guò)濾，收集濾液，不溶物重復(fù)上述操作2次，合并收集濾液；⑷真空濃縮在真空度〈O. lMPa，45飛5°C下濃縮，使提取液的可溶性固形物達(dá)到10%以上，得濃縮液；(5)乙醇沉淀于攪拌條件下緩慢加入乙醇到濃縮液中，使乙醇濃度大于80%，4°C靜置12h，過(guò)濾，收集固體物質(zhì)，揮發(fā)去除乙醇，即得枸杞粗多糖；(6)蛋白質(zhì)脫除將得到的枸杞粗多糖，加蒸餾水完全溶解，得枸杞粗多糖溶液，加入Sevag試劑(枸杞粗多糖溶液氯仿正丁醇的體積比為25 5 :1，)，劇烈振搖20min靜置，于轉(zhuǎn)速3400r/min下離心15min,傾出上清液,棄去下層有機(jī)溶液和中間蛋白變性層，上清液重復(fù)操作數(shù)次，直至無(wú)變性蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止，收集上清液，濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%以上，經(jīng)冷凍干燥，得枸杞多糖；(7)乙醇分級(jí)沉淀將枸杞多糖配制成2. 5%的水溶液，攪拌下加95% (V/V)乙醇至乙醇濃度達(dá)到60% (v/v)，4°C靜置6h，過(guò)濾，收集上清液，上清液中繼續(xù)加入乙醇至其濃度達(dá)到80% (v/v)，4°C靜置6h，過(guò)濾，收集沉淀，揮發(fā)去除乙醇，冷凍干燥，得高抗氧化活性枸杞多糖。通過(guò)檢測(cè)所制備得到的高抗氧化活性枸杞多糖的得率為I. 5-1. 8g/100g原料；其數(shù)均平均分子量為54萬(wàn),分子中的糖醒含量為41. 2%,中性糖含量為28. 8%,蛋白質(zhì)含量為I. 6%,由巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖組成。以上述方法獲得的枸杞多糖對(duì)DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)降低60%以上(由9. Omg/mL降低至3. 5mg/mL以下),對(duì)ABTS自由基的IC5tl值降低70%以上(由3. 2mg/mL降低至O. 9mg/mL以下)。實(shí)施例2 一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，步驟是⑴超細(xì)粉碎前處理枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45°C下低溫烘干4h，高能納米沖擊磨粉碎6h。粉碎后使90-99%的枸杞子顆粒小于700nm之間。⑵乙醇前處理經(jīng)超細(xì)粉碎處理的枸杞加入80% (V/V)的乙醇水溶液，料液比例為I 3g/v,于80°C水浴回流提取O. 5h，棄去上清液，下層不溶物重復(fù)上次操作4次，得到前處理的枸杞子；
⑶水提取水與經(jīng)過(guò)前處理的枸杞多子的比例為(4飛)1 (mL:g)，于95°C水浴浸提95min，過(guò)濾，收集濾液，不溶物重復(fù)上述操作2次，合并收集濾液；⑷真空濃縮真空度〈O. IMPa,45 55°C下將提取液濃縮到10%以上；(5)乙醇沉淀于攪拌條件下緩慢加入乙醇到濃縮液中，使乙醇濃度大于80%，4°C靜置12h，3400r/min離心，收集固體物質(zhì)，揮發(fā)去除乙醇，得枸杞粗多糖。(6)蛋白質(zhì)脫除取一定量的粗多糖,加蒸懼水完全溶解,加入Sevag試劑(溶液氯仿正丁醇=25 5 :1),劇烈振搖20min靜置,于轉(zhuǎn)速3400r/min下離心15min,收集上清液，上清液重復(fù)操作數(shù)次，直至無(wú)變性蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止。收集上清液，真空濃縮冷凍干燥，得枸杞多糖； (7)乙醇分級(jí)沉淀精確稱(chēng)取Ig精制枸杞多糖，加入40mL蒸餾水溶解，攪拌下加95% (V/V)乙醇調(diào)醇體積分?jǐn)?shù)為60%，4°C靜置6h，3400r/min離心15min，收集上清液，上清液中繼續(xù)加入乙醇，使其濃度達(dá)到80%(v/v)，4°C靜置6h，離心，收集沉淀，揮發(fā)除去乙醇，冷凍干燥，得高抗氧化活性枸杞多糖。通過(guò)檢測(cè)所制備得到的高抗氧化活性枸杞多糖的得率為I. 5-1. 8g/100g原料；其數(shù)均平均分子量為54萬(wàn),分子中的糖醒含量為41. 2%,中性糖含量為28. 8%,蛋白質(zhì)含量為I. 6%,由巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖組成。以上述方法獲得的枸杞多糖對(duì)DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)降低60%以上(由9. Omg/mL降低至3. 5mg/mL以下),對(duì)ABTS自由基的IC5tl值降低70%以上(由3. 2mg/mL降低至O. 9mg/mL以下)。實(shí)施例3 一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，具體步驟如下⑴超細(xì)粉碎前處理枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45°C下低溫烘干7h，高能納米沖擊磨粉碎6h，粉碎后使90%以上的枸杞子顆粒小于700nm。⑵乙醇前處理稱(chēng)取200g經(jīng)上述加工處理的枸杞，加入80% (V/V)的乙醇水溶液，料液比例g:mL為I :4 (g枸杞超細(xì)粉v乙醇溶液)，于80°C水浴回流提取O. 5h，棄去上清液，下層不溶物重復(fù)上次操作4次，得到前處理的枸杞子；⑶水提取經(jīng)乙醇處理的枸杞子，揮發(fā)去除乙醇，加入蒸餾水，料/液比為(4飛)1CmL蒸餾水g枸杞子)，于95°C水浴浸提95min，過(guò)濾，收集濾液，不溶物重復(fù)上述操作2次，合并收集濾液；⑷真空濃縮在真空度〈O. lMPa，45飛5°C下濃縮，使提取液的可溶性固形物達(dá)到10%以上，得濃縮液；(5)乙醇沉淀于攪拌條件下緩慢加入乙醇到濃縮液中，使乙醇濃度大于80%，4°C靜置12h，過(guò)濾，收集固體物質(zhì)，揮發(fā)去除乙醇，即得枸杞粗多糖；(6)蛋白質(zhì)脫除將得到的枸杞粗多糖，加蒸餾水完全溶解，至質(zhì)量濃度為1%_2%，得枸杞粗多糖溶液，將其加入聚酰胺色譜柱，上樣量為柱容量的15%-20%，以水洗脫，洗脫流速為4h-5h —個(gè)柱體積，以硫酸苯酚法檢測(cè)，當(dāng)有糖隨流動(dòng)相流出時(shí)開(kāi)始收集洗脫液，至不再有糖被洗脫時(shí)為止，將所收集的洗脫液真空濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%以上，經(jīng)冷凍干燥，得枸杞多糖；(7)乙醇分級(jí)沉淀將枸杞多糖配制成2. 5%的水溶液，攪拌下加95% (V/V)乙醇至乙醇濃度達(dá)到60% (v/v)，4°C靜置6h，過(guò)濾，收集上清液，上清液中繼續(xù)加入乙醇至其濃度達(dá)到80% (v/v)，4°C靜置6h，過(guò)濾，收集沉淀，揮發(fā)去除乙醇，冷凍干燥，得高抗氧化活性枸杞多糖。通過(guò)檢測(cè)所制備得到的高抗氧化活性枸杞多糖的得率為I. 5-1. 8g/100g原料；其數(shù)均平均分子量為54萬(wàn),分子中的糖醒含量為41. 2%,中性糖含量為28. 8%,蛋白質(zhì)含量為I. 6%,由巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖組成。以上述方法獲得的枸杞多糖對(duì)DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)降低60%以上(由9. Omg/mL降低至3. 5mg/mL以下),對(duì)ABTS自由基的IC5tl值降低70%以上(由3. 2mg/mL降低至O. 9mg/mL以下)。
權(quán)利要求
1.一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于在制備過(guò)程中枸杞子經(jīng)超細(xì)粉碎前處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述枸杞子經(jīng)超細(xì)粉碎前處理后，90-99%的枸杞子顆粒小于700nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述超細(xì)粉碎前處理具體步驟為枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45°C下低溫烘干3-5h，高能納米沖擊磨粉碎5-7h。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于具體步驟如下 ⑴超細(xì)粉碎前處理枸杞子經(jīng)粗粉碎，低溫烘干，高能納米沖擊磨粉碎，粉碎后使90-99%的枸杞子顆粒小于700nm ； ⑵乙醇前處理向經(jīng)超細(xì)粉碎處理的枸杞加入體積分?jǐn)?shù)為70-90%的乙醇水溶液，料液比例g :mL為I :2-4，回流提取，棄去上清液，下層不溶物重復(fù)上述操作，得到前處理后的枸杞子; ⑶水提取水與經(jīng)過(guò)前處理的枸杞子按照比例ml:g為4飛1混合后，水浴浸提后，過(guò)濾，收集濾液，不溶物重復(fù)上述操作2次，合并濾液； ⑷真空濃縮真空度〈O. IMPa，45飛5°C下將步驟⑶中濾液濃縮到可溶性固形物含量大于10%，得濃縮液； (5)乙醇沉淀于攪拌條件下向濃縮液中緩慢加入乙醇，使乙醇的終體積濃度大于80%，靜置6小時(shí)以上，分離后，收集固體物質(zhì)，揮發(fā)去除乙醇得枸杞粗多糖； (6)蛋白質(zhì)脫除采用聚酰胺色譜柱法或Sevag法脫除蛋白質(zhì)，濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%以上，真空冷凍干燥，得枸杞多糖； ⑴乙醇分級(jí)沉淀將枸杞多糖配成質(zhì)量濃度為2. 5%的枸杞多糖溶液，邊攪拌邊加入體積濃度為95%以上的乙醇，使乙醇體積濃度達(dá)到60%，靜置6小時(shí)以上，分離，收集上清液，繼續(xù)加入體積濃度95%以上的乙醇，至乙醇濃度達(dá)到體積濃度80%，靜置6小時(shí)以上，分離，收集沉淀，揮發(fā)去除乙醇，冷凍干燥后得枸杞多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述步驟中⑴中枸杞子經(jīng)粗粉碎，在45°C下低溫烘干4h，高能納米沖擊磨粉碎6h。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述步驟中⑵中料液比例g :mL為I :3，于80°C水浴回流提取O. 5h，棄去上清液，下層不溶物重復(fù)上次操作4次。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述步驟中⑶水浴浸提的條件為90-100°C水浴浸提90-100min。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述步驟中(5)或(7)中分離為3400r/min離心10_50min,或過(guò)濾處理。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述步驟中(6)中聚酰胺色譜柱法除蛋白的具體步驟為將枸杞粗多糖溶解至質(zhì)量濃度為1%_2%，將其加入聚酰胺色譜柱，上樣量為柱容量的15%-20%，以水洗脫，收集洗脫液，濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 5-20%ο
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，其特征在于所述步驟中(6)中Sevag法除蛋白的具體步驟為取枸杞粗多糖，加水完全溶解，依次加入氯仿和正丁醇，多糖溶液氯仿正丁醇的體積比為25 5 :1，劇烈振搖20min靜置分層，傾出上清液，棄去下層有機(jī)溶液和中間變性蛋白質(zhì)層，上清液重復(fù)操作數(shù)次，直至無(wú)變性蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止，收集上清液，真空濃縮到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-20%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高抗氧化活性枸杞多糖的制備方法，在制備過(guò)程中枸杞子經(jīng)超細(xì)粉碎前處理、乙醇前處理、水提取、真空濃縮、乙醇沉淀、蛋白質(zhì)脫除、乙醇分級(jí)沉淀處理制備得到高抗氧化活性枸杞多糖。本發(fā)明制備方法以枸杞為原料，采用超細(xì)粉碎技術(shù)降低多糖分子量，制備高抗氧化性枸杞多糖的工藝簡(jiǎn)單，操作方便；本制備方法所采用的乙醇分級(jí)沉淀方法具有得率高、低成本的優(yōu)勢(shì)，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102936292SQ20121047695
公開(kāi)日2013年2月20日 申請(qǐng)日期2012年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月22日
發(fā)明者張民, 王芳 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)