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      一種制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法

      文檔序號:3668269閱讀:288來源:國知局
      專利名稱:一種制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法
      技術領域
      本發(fā)明涉及從水蘇屬植物根狀莖中提取相關成分的技術領域,具體涉及一種制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法。
      背景技術
      銀條(Stachys Floridana Schuttl. exBenth.)是唇形科水蘇屬一年生草本植物, 別名銀白條、銀苗、地靈、一串紫等,是原產于中國的傳統蔬菜,栽培歷史悠久,零星種植遍及全國,其中以洛陽偃師最為有名,十九世紀曾傳入日本,后又引至歐美。其根狀莖潔白脆嫩、肉質多汁,炒食、煮食、醬漬或制成蜜餞等,風味獨特,營養(yǎng)豐富,具有消腥除膩、解酒、清神、增進食欲、幫助消化之功能。銀條含有多種礦物質、維生素、粗蛋白、氨基酸、有機酸、糖類、酚類,還含有水蘇糖(其含量比國際上通用的大豆原料的含量高2-3倍)、水蘇堿、膽堿、 胡盧巴堿等生理活性物質,具有潤肺、補血、益腎之功效,可治療氣喘、肺虛咳嗽、腎虛腰痛、 淋巴結核、咯血等病癥,有軟化血管、降低血液濃度、改善血液循環(huán)的獨特作用。大量藥理及臨床研究證實,植物多糖有抗癌、抗肥胖、控制血糖、降膽固醇、降血脂和增強免疫功能等生理功能。但是迄今為止,國內外對銀條多糖的研究鮮見于報道。

      發(fā)明內容
      本發(fā)明目的旨在提供一種高效、環(huán)保的制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的方法,實現本發(fā)明的具體方案如下(1)取新鮮銀條洗凈,55°C烘干,粉碎,過60目篩,得顆粒均勻的粉碎物;(2)將步驟(1)制得的粉碎物,用85%乙醇80°C水浴脫脂兩次,每次2h,5000rpm、 15min離心,去掉上清液,所得殘留物自然晾干;(3)將步驟( 所得殘留物按液料比5_25mL/g,加去離子水進行熱水浸提,提取溫度75-100°C,時間l_5h,提取次數1-4次,得提取液;(4)將步驟(3)所得提取液離心分離(離心分離條件5000rpm,15min),取上清液;(5)將步驟(4)所得提取液在50°C條件下,減壓濃縮至合適的體積,得濃縮液,在濃縮液中加3倍無水乙醇,4°C沉淀過夜,離心取沉淀,離心分離條件5000rpm,15min ;(6)將步驟( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗滌2次,55°C烘干至恒重,即為銀條多糖。(7)將步驟(6)所得多糖用DMEM培養(yǎng)基分別配制成一系列濃度溶液,MTT法測定其對人胃癌BGC-823細胞體外增殖的抑制能力。制備的銀條多糖為淺褐色粉末,其中多糖含量68. 86%,多糖對胃癌BGC-823細胞增殖的抑制作用呈現劑量和時間依賴關系,當多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時,最大抑制率為78. 35%。2、根據專利要求1所述的一種熱水提取具有抗胃癌活性的銀條多糖的方法,其特征在于所述步驟O)的液料比19mL/g,提取溫度94°C,提取時間4h,提取次數3次。制備的銀條多糖為淺褐色粉末,其中多糖含量68. 86%,多糖對胃癌BGC-823細胞增殖的抑制作用呈現劑量和時間依賴關系,當多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時,最大抑制率為78. 35%。


      圖1提取溫度(V )和液料比(mL/g)對多糖提取率的影響圖2銀條多糖對人胃癌細胞BGC-823的抑制作用(72h)
      具體實施例方式下面通過實施例,對本發(fā)明作進一步描述。實施例1 (1)取新鮮銀條洗凈,55°C烘干,粉碎,過60目篩,得顆粒均勻的粉碎物;(2)將步驟(1)制得的粉碎物,用85%乙醇80°C水浴脫脂兩次,每次2h,5000rpm、 15min離心,去掉上清液,所得殘留物自然晾干;(3)將步驟( 所得殘留物按液料比5_25mL/g,加去離子水進行熱水浸提,提取溫度75-100°C,時間l_5h,提取次數1-4次,得提取液;(4)將步驟(3)所得提取液離心分離(離心分離條件5000rpm,15min),取上清液;(5)將步驟(4)所得提取液在50°C條件下,減壓濃縮至合適的體積,得濃縮液,在濃縮液中加3倍無水乙醇,4°C沉淀過夜,離心取沉淀,離心分離條件5000rpm,15min ;(6)將步驟( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗滌2次,55°C烘干至恒重,即為銀條多糖。(7)將步驟(6)所得多糖用DMEM培養(yǎng)基分別配制成一系列濃度溶液,MTT法測定其對人胃癌BGC-823細胞體外增殖的抑制能力。制備的銀條多糖為淺褐色粉末,其中多糖含量68. 86%,多糖對胃癌BGC-823細胞增殖的抑制作用呈現劑量和時間依賴關系,當多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時,最大抑制率為78. 35%。采用苯酚-硫酸法測定銀條提取物中多糖的含量,多糖提取率按下面公式計算多糖提取率(% )=[多糖提取物中多糖質量(g)/脫脂殘渣質量(g)]X100%。腫瘤抑制率(% ) = (1-測定孔吸光度/空白孔吸光度)X 100%實施例2 制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的提取條件優(yōu)化實驗(1)制備具有抗腫瘤活性銀條多糖的提取條件優(yōu)化的單因素實驗①提取溫度對銀條多糖提取率的影響提取溫度設置75、80、85、90、95和100°C六個梯度,提取時間、液料比和提取次數分別為4h、15ml/g和1次。不同提取溫度的多糖提取率見表1 :
      權利要求
      1.一種熱水浸提制備具有抗腫瘤活性的銀條多糖的方法,其特征在于包括以下操作步驟(1)取新鮮銀條洗凈,55°c烘干,粉碎,過60目篩,得顆粒均勻的粉碎物;(2)將步驟(1)制得的粉碎物,用85%乙醇80°C水浴脫脂兩次,每次ai,5000rpm、 15min離心,去掉上清液,所得殘留物自然晾干;(3)將步驟(2)所得殘留物按液料比5-25mL/g,加去離子水進行熱水浸提,提取溫度 75-100°C,時間l_5h,提取次數1-4次,得提取液;(4)將步驟(3)所得提取液離心分離(離心分離條件5000rpm,15min),取上清液;(5)將步驟(4)所得提取液在50°C條件下,減壓濃縮至合適的體積,得濃縮液,在濃縮液中加3倍無水乙醇,4°C沉淀過夜,離心取沉淀,離心分離條件5000rpm,15min ;(6)將步驟( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗滌2次,55°C烘干至恒重,即為銀條多糖。(7)將步驟(6)所得多糖用DMEM培養(yǎng)基分別配制成一系列濃度溶液,MTT法測定其對人胃癌BGC-823細胞體外增殖的抑制能力。制備的銀條多糖為淺褐色粉末,其中多糖含量68. 86%,多糖對胃癌BGC-823細胞增殖的抑制作用呈現劑量和時間依賴關系,當多糖濃度為800 μ g/mL與作用7 時,最大抑制率為 78. 35%。
      2.根據專利要求1所述的一種熱水提取具有抗胃癌活性的銀條多糖的方法,其特征在于所述步驟O)的液料比19mL/g,提取溫度94°C,提取時間4h,提取次數3次。
      全文摘要
      本發(fā)明涉及一種熱水浸提制備具有抗腫瘤活性的銀條多糖的方法。該方法包括銀條烘干、粉碎→乙醇脫脂→熱水浸提→離心取上清液→堿壓濃縮→乙醇沉淀→離心取沉淀乙醇和丙酮依次洗滌→烘干至恒重,即為銀條多糖。MTT法分析銀條多糖的抗腫瘤活性,發(fā)現其對胃癌BGC-823細胞增殖具有顯著的抑制能力。本發(fā)明的工藝方法具有提取條件溫和、不破壞多糖結構、成本低、對環(huán)境友好等優(yōu)點,制備的銀條多糖具有顯著的抗腫瘤活性,因此具有廣闊的應用前景。
      文檔編號C08B37/00GK102174117SQ201110007318
      公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權日2011年1月14日
      發(fā)明者張佳, 徐希妍, 曾曉雄, 韓文慶, 馬麗蘋 申請人:南京農業(yè)大學
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