專利名稱：一種委陵菜多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其是涉及一種多糖的制備方法，具體是涉及一種采用大孔樹脂純化委陵菜多糖的方法。
背景技術(shù)：
多糖(Polysaccharide)是由單糖之間脫水形成糖苷鍵，并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的鏈狀聚合物。多糖種類繁多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、具有特殊生物學(xué)活性，生物體內(nèi)多糖的研究可追溯到上世紀30年代。到目前已有300多種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中提取分離出來，從中藥中提取的水溶性多糖具有無細胞毒性，分子量通過化學(xué)手段易控制等特點，加之實驗證明多糖與感染、腫瘤、炎癥及一些自身免疫性疾病的治療有關(guān)，已成為新藥開發(fā)研究的發(fā)展方向之一。委陵菜多糖(Potentilla AnserinePolysaccharide，PAP)是由薔薇科委陵菜屬鵝 i^mm^Potentilla Anserine L.)中提取分離得到的。委陵菜中含有糅質(zhì)、糖類、蛋白質(zhì)、脂肪酸及委陵菜苷等。現(xiàn)代藥理研究表明，其水提物具有提高機體免疫力、抗疲勞、耐缺氧和止瀉抑菌的作用。委陵菜在青海、甘肅、西藏等高海拔地區(qū)廣泛分布，有“人參果”的美譽。此外，劉素君等研究表明委陵菜多糖具有抗腫瘤作用，且其抗腫瘤作用和其免疫調(diào)節(jié)作用有明顯的相關(guān)性，由此推斷委陵菜多糖的抗腫瘤作用可能與激活體內(nèi)免疫系統(tǒng)有關(guān)。委陵菜多糖是鵝絨委陵菜的主要活性成分之一，從該植物中提取分離多糖成分的技術(shù)已有陸續(xù)報道。多是采用有機溶劑萃取等方法制備，后續(xù)處理麻煩，且存在毒性有機溶劑殘留問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種委陵菜多糖的制備方法，該方法操作簡單，提取率高，產(chǎn)品含量高，品質(zhì)好，活性強。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)
一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于以委陵菜全草為原料，加入蒸餾水攪拌，保溫浸泡12-24h后，補加水至料液比為1:10-1:20，再進行微波多次提取，得到提取液，提取液濃縮至小體積，加酸調(diào)PH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶進行酶解反應(yīng)，酶解液經(jīng)過大孔樹脂除雜，過柱液再采用醇沉或透析法純化，最后沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，干燥得到高純度委陵菜多糖。所述的淀粉酶和蛋白酶，酶的加入量為濃縮液量的2-5%。，酶解條件為時間 5-10h，溫度 40-45 0C ο所述的大孔樹脂為非極性大孔樹脂，可選用D101、HZ802、XAD-16等型號中的一種。所述的醇沉操作為，向過柱液中緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達45% 60%，冷藏過夜，離心收集沉淀。
所述的透析純化步驟為，過柱液經(jīng)過截留分子量2000的超濾膜截留多糖，再采用 5-20倍量6(Γ85%乙醇液透析廣3次，收集截留液，濃縮干燥得沉淀物。所述的干燥步驟可采用冷凍干燥或噴霧干燥。本發(fā)明的優(yōu)勢在于采用微波提取結(jié)合酶水解法純化委陵菜多糖，與傳統(tǒng)水提法相比，不需要高溫、縮短了操作時間，提高了生產(chǎn)效率，且節(jié)約了能耗，脫蛋白效率高；采用大孔樹脂吸附非極性雜質(zhì)，減少有毒有機溶劑應(yīng)用，所得產(chǎn)品質(zhì)量好，活性高。下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1
將鵝絨委陵菜破碎，稱取Ikg置于提取器中，加2L蒸餾水充分攪勻，保溫浸泡12小時， 補加水至料液比為1 15，微波提取1小時，反復(fù)提取4次，過濾，合并提取液，濃縮至500ml， 加酸調(diào)PH至5，按淀粉酶蛋白酶=5 1的重量配比配制成酶制劑，加入lg，在45°C溫度下反應(yīng)6小時，將酶解液通過HZ802大孔吸附樹脂柱，透過液緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達 60%，冷藏過夜，離心15分鐘，收集沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，噴霧干燥得到高純度委陵菜多糖得到25. 6g。實施例2:
將鵝絨委陵菜破碎，稱取Ikg置于提取器中，加5L蒸餾水充分攪勻，保溫浸泡18小時， 補加水至料液比為1:20，微波提取1.5小時，反復(fù)提取2次，過濾，合并提取液，將提取液濃縮至500ml，加酸調(diào)pH至6，按淀粉酶蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制劑，加入2. 5g， 在40°C溫度下反應(yīng)5小時，將酶解液通過DlOl大孔吸附樹脂柱，透過液緩緩加入95%乙醇， 使醇濃度達45%，冷藏過夜，離心15分鐘，收集沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，噴霧干燥得到高純度委陵菜多糖得到21. 9g。實施例3:
將鵝絨委陵菜破碎，稱取2kg置于提取器中，加4. 5L蒸餾水充分攪勻，浸泡16小時，補加水至料液比為1:15，微波提取1小時，反復(fù)提取5次，過濾，合并提取液，將提取液濃縮至 2L，加酸調(diào)pH至5，按淀粉酶蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制劑，加入5. 0g，在43°C溫度下反應(yīng)6小時，將酶解液通過XAD-16大孔吸附樹脂柱，透過液過截留分子量2000的超濾膜截留多糖，再采用5倍量60%乙醇液透析3次，收集截留液，濃縮干燥得沉淀物，沉淀物用 95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，噴霧干燥得到高純度委陵菜多糖得到 35. 9g。實施例4:
將鵝絨委陵菜破碎，稱取5kg置于提取器中，加40L蒸餾水充分攪勻，浸泡20小時，補加水至料液比為1:18，微波提取1. 5小時，反復(fù)提取5次，過濾，合并提取液，將提取液濃縮至5L，加酸調(diào)pH至5. 5，按淀粉酶蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制劑，加入17. 5g，在 42°C溫度下反應(yīng)8小時，將酶解液通過DlOl大孔吸附樹脂柱，透過液過截留分子量2000的超濾膜截留多糖，再采用20倍量85%乙醇液透析1次，收集截留液，濃縮干燥得沉淀物，沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，冷凍干燥得到高純度委陵菜多糖得到89. 5g。
實施例5:
將鵝絨委陵菜破碎，稱取IOkg置于提取器中，加30L蒸餾水充分攪勻，浸泡M小時，補加水至料液比為1:15，微波提取2小時，反復(fù)提取3次，過濾，合并提取液，將提取液濃縮至 10L，加酸調(diào)pH至6，按淀粉酶蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制劑，加入45g，在40°C溫度下反應(yīng)10小時，將酶解液通過XAD-16大孔吸附樹脂柱，透過液緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達55%，冷藏過夜，離心15分鐘，收集沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，噴霧干燥得到高純度委陵菜多糖得到192. 5g。
權(quán)利要求
1.一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于以委陵菜全草為原料，加入蒸餾水攪拌， 保溫浸泡12-24h后，補加水至料液比為1:10-1:20，再進行微波多次提取，得到提取液，提取液濃縮至小體積，加酸調(diào)PH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶進行酶解反應(yīng)，酶解液經(jīng)過大孔樹脂除雜，過柱液再采用醇沉或透析法純化，最后沉淀物用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，揮去乙醚，干燥得到高純度委陵菜多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于所述的淀粉酶和蛋白酶，加入量為濃縮液量的2-5%。，酶解條件為時間5-10h，溫度40-45°C。
3.如權(quán)利要求1所述的一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂為非極性大孔樹脂，可選用D101、HZ802、XAD-16等型號中的一種。
4.如權(quán)利要求1所述的一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于所述的醇沉操作為， 向過柱液中緩緩加入95%乙醇，使醇濃度達45% 60%，冷藏過夜，離心收集沉淀。
5.如權(quán)利要求1所述的一種委陵菜多糖的制備方法，其特征在于所述的透析純化步驟為，過柱液經(jīng)過截留分子量2000的超濾膜截留多糖，再采用5-20倍量6(Γ85%乙醇液透析 Γ3次，收集截留液，濃縮干燥得沉淀物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種委陵菜多糖的制備方法，包括如下步驟以委陵菜全草為原料，加入蒸餾水攪拌，保溫浸泡12-24h后，補加水至料液比為1:10-1:20，再進行微波提取，得到提取液，將提取液濃縮，加酸調(diào)至適當pH，加入淀粉酶和蛋白酶進行酶解反應(yīng)，酶解液經(jīng)過大孔樹脂除雜，透過液再采用醇沉或透析法純化，最后洗滌干燥得到高純度委陵菜多糖。該方法生產(chǎn)委陵菜多糖，收率高，過程簡單，能源消耗少，產(chǎn)量大，純度高。
文檔編號C08B37/00GK102268100SQ20111022594
公開日2011年12月7日 申請日期2011年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月9日
發(fā)明者劉東鋒, 吳艷波 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司