一種提取蜀葵子多糖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種提取蜀葵子多糖的方法。該方法包括：1）蜀葵子脫脂；2）脫脂后用水提?。?）水提取液經(jīng)過除蛋白后醇沉，即得到蜀葵子多糖。采用本發(fā)明方法能從蜀葵子中提取出多糖。該方法操作方便，所得多糖純度高，提取率高。
【專利說明】一種提取蜀葵子多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明植物藥物提供領(lǐng)域，具體涉及一種提取蜀葵子多糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]維藥蜀葵子是維吾爾醫(yī)藥處方祖卡木顆粒的主要組成藥物之一，為錦葵科植物蜀葵(Althaea rosea)的種子。蜀葵別名一丈紅、熟季花、戎葵、吳葵、衛(wèi)足葵、胡葵等,維吾爾名稱為阿克來里。蜀葵是多年生草本。莖直立而高。葉互生，心臟形?；ǔ士偁罨ㄐ蝽斏鷨伟昊蛏?，有紫、粉、紅、白等色。花期6月至8月。蒴果，種子扁圓，腎臟形。喜陽光充足，耐半陰，但忌澇。原產(chǎn)中國(guó)四川，現(xiàn)在中國(guó)分布很廣，華東、華中、華北均有，國(guó)外分布于歐洲、印度、前蘇聯(lián)等地。其藥用部位為花、根和種子。維藥蜀葵子首載于默罕默德?艾克巴爾.艾爾扎尼所著《艾克巴爾醫(yī)書》中。蜀葵子作為一個(gè)傳統(tǒng)的維吾爾藥用植物在新疆有多種用途，包括生濕生寒，成熟異常膽液質(zhì)，清熱止咳，消炎止痛，清腸除瘍，利尿排石等。用于干熱引起的咳嗽，腸道潰瘍，膀胱及腎結(jié)石。[0003]多糖(polysaccharide)是由糖苷鍵結(jié)合的糖鏈，至少要超過10個(gè)以上的單糖組成的聚合糖高分子碳水化合物，多糖是存在于自然界中資源較為豐富的糖類，廣泛存在于植物、動(dòng)物和微生物等有機(jī)體中。多糖是高分子化合物，其純品微觀上是不均一的，通常所說的多糖純品實(shí)質(zhì)上是一定分子量范圍的均一組分。其廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜和植物、微生物的細(xì)胞壁中，而因此生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、動(dòng)物多糖三大類。多糖作為一種幾乎無毒副作用的天然高分子提取物，在許多疾病的預(yù)防和治療方面，特別是一些頑固病、疑難病，如腫瘤、免疫力低下、高血糖、衰老、病毒性疾病等方面，有其自身獨(dú)特的功效，因此，如何從蜀葵子中提取出多糖成分，讓更多的多糖類化合物為人類造福，已經(jīng)是一個(gè)值得研究的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種提取蜀葵子多糖的方法。
[0005]本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案如下:
一種提取蜀葵子多糖的方法，包括:
1)蜀葵子脫脂；
2)脫脂后用水提?。?br> 3)水提取液經(jīng)過除蛋白后醇沉，即得到蜀葵子多糖。
[0006]進(jìn)一步，所述脫脂采用溶劑脫脂法，即用C3-C10烷烴、C1-C3的鹵代烷烴等浸取蜀葵子。
[0007]如用石油醚浸取蜀葵子。
[0008]更進(jìn)一步，石油醚浸取蜀葵子時(shí)，溫度為40~80°C。
[0009]脫脂時(shí)，依照少量多次的原則用石油醚多次浸取蜀葵子，直至石油醚層無色為止。
[0010]進(jìn)一步，水提取時(shí)，進(jìn)行加熱回流。[0011]進(jìn)一步,所述除蛋白可采用蛋白酶解法或Sevage法,其中，Sevage法具體是將三氯甲烷和正丁醇的混合液與水提取液接觸，振蕩，分離。蛋白質(zhì)與三氯甲烷
所述三氯甲烷與正丁醇的體積比為(3~5):1。
[0012]進(jìn)一步，醇沉?xí)r，控制水提取液中醇的體積濃度為50%~95%。
[0013]進(jìn)一步，所述醇為乙醇。
[0014]更進(jìn)一步，水提取具體過程為:料液比為1:41，再于100°C下回流提取113分鐘，回流提取3次；醇沉?xí)r，控制水提取液中醇的體積濃度為60%。在該條件下，多糖提取率可達(dá) 62.84mg/g0
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0016]本發(fā)明中所述的料液比是指質(zhì)量(料)與體積(浸提液)之比，單位g/mL。
[0017]實(shí)施例1
a、將蜀葵子粉碎至通過60目的篩子；
b、脫脂:按1:3的料液比，用石油醚浸取蜀葵子粉末，于60°C脫脂，持續(xù)半個(gè)小時(shí)，倒掉上清液(石油醚)，再次加石油醚重復(fù)上次步驟直至上清液為無色；
C、水提取:將經(jīng)步驟b處理后的蜀葵子粉末放入圓底燒瓶中，加水，料液比為1:50，再于100°C下回流提取90分鐘，回流提取2次；
d、過濾:用布氏漏斗和I層濾紙`過濾，分離殘?jiān)退崛∫海?br> e、濃縮:將水提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
[0018]f、除蛋白:向步驟e所得濃縮液中加入等體積的Sevage試劑(三氯甲燒:正丁醇=4:1, V/V),振蕩30分鐘后倒入分液漏斗靜置20分鐘，棄去Sevage試劑層；
g、醇沉:邊攪拌邊向經(jīng)步驟f除蛋白后的濃縮液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積濃度為60%,過夜,進(jìn)行醇沉；
K分離多糖:經(jīng)步驟g醇沉后，離心，棄去醇液；
1、干燥:將h步驟得到的離心物放入60°C干燥箱中揮干溶劑，即得到蜀葵子多糖，多糖提取率 40.68mg/g。
[0019]實(shí)施例2
a、將蜀葵子粉碎至通過60目的篩子；
b、脫脂:按1:3的料液比，用石油醚浸取蜀葵子粉末，于60°C脫脂，持續(xù)半個(gè)小時(shí)，倒掉上清液(石油醚)，再次加石油醚重復(fù)上次步驟直至上清液為無色；
C、水提取:將經(jīng)步驟b處理后的蜀葵子粉末放入圓底燒瓶中，加水，料液比為1:40，再于100°C下回流提取30分鐘，回流提取3次；
d、過濾:用布氏漏斗和I層濾紙過濾，分離殘?jiān)退崛∫海?br> e、濃縮:將水提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
[0020]f、除蛋白:向步驟e所得濃縮液中加入等體積的Sevage試劑(三氯甲燒:正丁醇=4:1, V/V),振蕩30分鐘后倒入分液漏斗靜置20分鐘，棄去Sevage試劑層；
g、醇沉:邊攪拌邊向經(jīng)步驟f除蛋白后的濃縮液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積濃度為90%,過夜,進(jìn)行醇沉；K分離多糖:經(jīng)步驟g醇沉后，離心，棄去醇液；
1、干燥:將h步驟得到的離心物放入60°C干燥箱中揮干溶劑，即得到蜀葵子多糖，多糖提取率 32.76mg/g。
[0021]實(shí)施例3 a、將蜀葵子粉碎至通過60目的篩子；
b、脫脂:按1:3的料液比，用石油醚浸取蜀葵子粉末，于60°C脫脂，持續(xù)半個(gè)小時(shí)，倒掉上清液(石油醚)，再次加石油醚重復(fù)上次步驟直至上清液為無色；
C、水提取:將經(jīng)步驟b處理后的蜀葵子粉末放入圓底燒瓶中，加水，料液比為1:40，再于100°C下回流提取90分鐘，回流提取I次；
d、過濾:用布氏漏斗和I層濾紙過濾，分離殘?jiān)退崛∫海?br> e、濃縮:將水提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
[0022]f、除蛋白:向步驟e所得濃縮液中加入等體積的Sevage試劑(三氯甲燒:正丁醇=4:1, V/V),振蕩30分鐘后倒入分液漏斗靜置20分鐘，棄去Sevage試劑層；
g、醇沉:邊攪拌邊向經(jīng)步驟f除蛋白后的濃縮液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積濃度為80%,過夜,進(jìn)行醇沉；
K分離多糖:經(jīng)步驟g醇沉后，離心，棄去醇液；
1、干燥:將h步驟得到的離心物放入60°C干燥箱中揮干溶劑，即得到蜀葵子多糖，多糖提取率 37.80mg/g。
[0023]實(shí)施例4
a、將蜀葵子粉碎至通過60目的篩子；
b、脫脂:按1:3的料液比，用石油醚浸取蜀葵子粉末，于60°C脫脂，持續(xù)半個(gè)小時(shí)，倒掉上清液(石油醚)，再次加石油醚重復(fù)上次步驟直至上清液為無色；
C、水提取:將經(jīng)步驟b處理后的蜀葵子粉末放入圓底燒瓶中，加水，料液比為1:20，再于100°C下回流提取90分鐘，回流提取3次；
d、過濾:用布氏漏斗和I層濾紙過濾，分離殘?jiān)退崛∫海?br> e、濃縮:將水提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
[0024]f、除蛋白:向步驟e所得濃縮液中加入等體積的Sevage試劑(三氯甲燒:正丁醇=4:1, V/V),振蕩30分鐘后倒入分液漏斗靜置20分鐘，棄去Sevage試劑層；
g、醇沉:邊攪拌邊向經(jīng)步驟f除蛋白后的濃縮液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積濃度為70%,過夜,進(jìn)行醇沉；
K分離多糖:經(jīng)步驟g醇沉后，離心，棄去醇液；
1、干燥:將h步驟得到的離心物放入60°C干燥箱中揮干溶劑，即得到蜀葵子多糖，多糖提取率 33.66mg/g。
[0025]實(shí)施例5
a、將蜀葵子粉碎至通過60目的篩子；
b、脫脂:按1:3的料液比，用石油醚浸取蜀葵子粉末，于60°C脫脂，持續(xù)半個(gè)小時(shí)，倒掉上清液(石油醚)，再次加石油醚重復(fù)上次步驟直至上清液為無色；
C、水提取:將經(jīng)步驟b處理后的蜀葵子粉末放入圓底燒瓶中，加水，料液比為1:41，再于100°C下回流提取113分鐘，回流提取3次；d、過濾:用布氏漏斗和I層濾紙過濾，分離殘?jiān)退崛∫海?br> e、濃縮:將水提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
[0026]f、除蛋白:向步驟e所得濃縮液中加入等體積的Sevage試劑(三氯甲烷:正丁醇=4:1, V/V),振蕩30分鐘后倒入分液漏斗靜置20分鐘，棄去Sevage試劑層；
g、醇沉:邊攪拌邊向經(jīng)步驟f除蛋白后的濃縮液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積濃度為60%,過夜,進(jìn)行醇沉；
K分離多糖:經(jīng)步驟g醇沉后，離心，棄去醇液；
1、干燥:將h步驟得到的離心物放入60°C干燥箱中揮干溶劑，即得到蜀葵子多糖，多糖提取率 62.84mg/g。
[0027]在本發(fā)明中，多糖采用硫酸-蒽酮法測(cè)定，具體步驟如下:
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:精密稱取葡糖糖0.1000 g置100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，得葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密吸取0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL，分別置于IOmL容量瓶中，用蒸懼水定容至刻度；再分別取ImL置于試管中,各加硫酸-蒽酮溶液4mL,搖勻后放置IOmin,置沸水中加熱lOmin，取出冷卻至室溫(15min)，于582nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得葡萄糖溶液濃度(c)與吸光度(A)的曲線。
[0028]2、將得到的蜀葵子多糖用蒸餾水定容至200mL，取5mL稀釋至IOmL,即樣品溶液；吸取ImL的樣品溶液置于試管中,加硫酸-蒽酮溶液4mL,搖勻后放置IOmin,置沸水中加熱IOmin,取出冷卻至室溫(15min ),于582nm處測(cè)定吸光度。帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，得到樣品溶液中多糖的濃度，進(jìn)而計(jì)算其含量。`
【權(quán)利要求】
1.一種提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，包括: 1)蜀葵子脫脂； 2)脫脂后的蜀葵子再用水提取，得到水提取液； 3)水提取液經(jīng)過除蛋白后醇沉，即得到蜀葵子多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，所述脫脂是用石油醚浸取蜀葵子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，石油醚浸取蜀葵子時(shí)，溫度為40~80°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，水提取時(shí)，進(jìn)行加熱回流。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，所述除蛋白是將三氯甲烷和正丁醇的混合液與水提取液接觸，振蕩，分離。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，所述三氯甲烷與正丁醇的體積比為(3~5):1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，醇沉?xí)r，控制水提取液中醇的體積濃度為50%~95%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，所述醇為乙醇。
9.根據(jù)權(quán) 利要求8所述提取蜀葵子多糖的方法，其特征在于，水提取具體過程為:料液比為1:41，再于100°C下回流提取113分鐘，回流提取3次；醇沉?xí)r，控制水提取液中乙醇的體積濃度為60%。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103739732SQ201310735013
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】田樹革, 劉楓, 季志紅, 陳金成, 哈木拉提·吾甫爾 申請(qǐng)人:新疆奇康哈博維藥有限公司