本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含金剛烷基的萘醌類衍生物，其制備方法、藥物組合物、其作為Sortase A抑制劑在制備抗菌藥物、及其細(xì)胞毒活性在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1，4-萘醌結(jié)構(gòu)片段廣泛存在于多種結(jié)構(gòu)和生物活性各異的天然產(chǎn)物中，其衍生物被報道具有包括抗菌、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)在內(nèi)的多種多樣的生物活性。金剛烷結(jié)構(gòu)段因其獨特的剛性籠狀多環(huán)結(jié)構(gòu)、高度親脂性等特點，在優(yōu)化先導(dǎo)物理化性質(zhì)及成藥性方面也有重要應(yīng)用。
Sortase A是一種介導(dǎo)革蘭陽性細(xì)菌細(xì)胞壁與表面蛋白共價結(jié)合的蛋白酶，主要存在于革蘭陽性病原菌中。革蘭陽性病原菌的表面蛋白在其致病過程中起著多種關(guān)鍵作用，研究這些蛋白對于認(rèn)識細(xì)菌感染過程和篩選新的治療靶標(biāo)有著重要意義。因此，Sortase A被認(rèn)為是治療細(xì)菌感染的一類新的、理想的靶點。另一方面，盡管分子靶向藥物近年來飛速發(fā)展，細(xì)胞毒類藥物目前仍是抗腫瘤治療中一類非常重要治療手段。
綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新型的針對Sortase A靶點的藥物。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種Sortase A靶點抑制劑。
本發(fā)明的第一方面，提供了一種如下式(I)所示的含金剛烷基的萘醌類衍生物：
其中，
R1，R2，R3，R4，R5各自獨立地選自下組：氫、鹵素原子、硝基、腈基、羥基、氨基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C1-C6烷氧基-羰基、C1-C6酰胺基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的五元或六元雜芳基；
較佳地，R1，R2，R3，R4，R5各自獨立地選自下組：H、鹵素原子、硝基、腈基、羥基、氨基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6酰胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6烷基-胺基；
A為選自下組的取代或未取代的金剛烷基：
其中，R6、R7、R8、R12、R13、R14各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6酰胺基、取代或未取代的C1-C10烷基，取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的五元或六元雜芳基；
較佳地，R6、R7、R8、R12、R13、R14各自獨立地選自下組：H、羥基、羧基、氨基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6酰胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基，或C1-C6烷基-胺基；
R9、R10、R11各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C2-C6烷氧基羰基(ROC＝O-)、C2-C6烯基羰基(RC＝O-)、C2-C6烷基羰基(RC＝O-)、取代或未取代的C1-C6酰氧基(RC＝OO-)、取代或未取代的C1-C6胺酰氧基(RNC＝OO-)、C1-C6氨?；?RNC＝O-)、C1-C6酰胺基(RC＝ON-)、取代或未取代的C1-C10烷基，取代或未取代的C6-C10芳基，或取代或未取代的五元或六元雜芳基；
較佳地，R9、R10、R11各自獨立地選自下組：H、C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6酰氧基(RC＝OO-)、取代或未取代的C1-C6胺酰氧基(RNC＝OO-)、羥基、羧基、氨基、C1-C6烷氧基羰基(ROC＝O-)、C1-C6氨?；?RNC＝O-)、C1-C6酰胺基(RC＝ON-)、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6烷基-胺基；
-L-為選自下組的二價連接基團(tuán)：
其中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28各自獨立地選自下組：氫、未取代或鹵代的C1-C6烷基、鹵素、氰基、硝基、C2-C10炔基、C2-C10烯基、C6-C10芳基、羥基、C1-C6烷氧基、C1-C6胺基；或者，R16和R17或R18、R23和R20或R21與相連的碳原子或氮原子共同形成取代或未取代的五元或六元雜環(huán)；
較佳地，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28各自獨立地選自下組：氫，C1-C6烷基、C6-C10芳基、羥基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基；或者，R16和R17或R18、R23和R20或R21與相連的碳原子或氮原子共同形成取代或未取代的五元或六元環(huán)；
n為1，2，3，4，5，6或7；
其中，所述的取代指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、芐基、C1-C6烷氧基羰基、氨基、C1-C6酰胺基、硝基、氰基、未取代或鹵代的C1-C6烷基、C2-C10烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C6-C10芳基、五元或六元雜芳基，優(yōu)選為鹵素、C1-C6烷氧基羰基、未取代或鹵代的C1-C6烷基。
在另一優(yōu)選例中，R1，R2，R3，R4，R5各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的五元或六元雜芳基；
R6、R7、R8、R12、R13、R14各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C6-C10芳基或五元或六元雜芳基，優(yōu)選為H、羥基、羧基、氨基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基，或C1-C6烷基-胺基；其中，所述的指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、硝基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；優(yōu)選為鹵素、C1-C6烷基。
在另一優(yōu)選例中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28各自獨立地選自下組：氫、C1-C6烷基；
或者，R16和R17或R18、R23和R20或R21與相連的碳原子或氮原子共同形成取代或未取代的五元或六元雜環(huán)，優(yōu)選地為五元雜環(huán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28中任一個分別為本發(fā)明實施例中所述具體化合物中所對應(yīng)的基團(tuán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的含金剛烷基的萘醌類衍生物是選自下組的化合物：
本發(fā)明的第二方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的式(I)衍生物的制備方法，所述方法包括步驟(b)：
(b)在惰性溶劑中，用式II化合物進(jìn)行氧化反應(yīng)，得到式I化合物；其中，各基團(tuán)的定義如本發(fā)明第一方面中所述。
在另一優(yōu)選例中，所述的氧化反應(yīng)在硝酸鈰銨存在下進(jìn)行。
在另一優(yōu)選例中，所述的式II化合物是通過以下步驟(a1)或(a2)制備的：
(a1)在惰性溶劑中，用式III化合物與A-NH2或A-CH(R)NH2反應(yīng)，得到式II化合物；
其中，為L；
(a2)在惰性溶劑中，用式III′化合物與A-COOH反應(yīng)，得到式II化合物；
其中，為L；
其余各基團(tuán)的定義如本發(fā)明第一方面中所述。
在另一優(yōu)選例中，所述的步驟(a1)或(a2)在有機堿存在下進(jìn)行，較佳地，所述的有機堿選自下組：N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)和/或三乙胺。
在另一優(yōu)選例中，所述的步驟(a1)或(a2)在縮合劑存在下進(jìn)行；較佳地，實審的縮合劑選自下組：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)。
本發(fā)明第三方面，提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物包括：治療有效量的如本發(fā)明第一方面所述的含金剛烷基的萘醌類衍生物，其光學(xué)異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽、或其前藥；以及藥學(xué)上可接受的載體。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于(i)治療或預(yù)防與Sortase A酶活性相關(guān)的疾病；(ii)殺滅細(xì)菌，優(yōu)選為選自下組的細(xì)菌：Sa.Newman、Sa.RN4220、Sa.8325-4、Se.1457、Bs.681，和/或Ec.DH5α；(iii)治療或預(yù)防癌癥，較佳地，所述的癌癥選自下組：肺癌、結(jié)腸癌、口腔上皮癌、胃癌、白血病。
在另一優(yōu)選例中，所述的與Sortase A酶活性相關(guān)的疾病是與Sortase A酶表達(dá)量升高，或Sortase A酶活性增強相關(guān)的疾病。
本發(fā)明的第四方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的含金剛烷基的萘醌類衍生物的用途，用于(a)用于制備治療或預(yù)防與Sortase A酶活性相關(guān)的疾病的藥物組合物；(ii)用于體外非治療性地殺滅細(xì)菌，優(yōu)選為選自下組的細(xì)菌：Sa.Newman、Sa.RN4220、Sa.8325-4、Se.1457、Bs.681，和/或Ec.DH5α；(iii)用于制備治療或預(yù)防癌癥的藥物組合物，優(yōu)選地，所述的癌癥選自下組：肺癌、結(jié)腸癌、口腔上皮癌、胃癌、白血病；(iv)用于體外非治療性地抑制Sortase A酶活性。
本發(fā)明的第五方面，提供了一種殺菌方法，包括：對于待殺菌的對象施用殺菌有效量的如本發(fā)明第一方面所述的含金剛烷基的萘醌類衍生物。
應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具體實施方式
本發(fā)明人在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，設(shè)計并合成了一類新的同時具有萘醌及金剛烷兩類優(yōu)勢結(jié)構(gòu)片段的衍生物，經(jīng)體外對Sortase A蛋白及多種細(xì)菌進(jìn)行活性篩選，結(jié)果表明其具有不同程度的Sortase A抑制活性及抑菌、殺菌活性；經(jīng)體外對多種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果表明其具有不同程度的抗腫瘤活性。
術(shù)語
如本文所用，術(shù)語“鹵素”指是F、Cl、Br或I。
術(shù)語“C1-C10烷基”指主鏈上具有1至10個碳原子的直鏈或支鏈烷基，術(shù)語“C1-C6烷基”具有類似的含義，代表性的例子例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、已基等。
術(shù)語“C1-C10烷氧基”指主鏈上具有1至10個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，術(shù)語“C1-C6烷氧基”具有類似的含義，代表性的例子例如甲氧基、乙氧基、丙氧 基、異丙氧基、丁氧基等。
術(shù)語“鹵代的C1-C10烷基”指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被鹵素原子取代的C1-C10烷基，術(shù)語“鹵代C1-C6烷基”具有類似的含義，代表性的例子例如三氟甲基等。
術(shù)語“C3-C10環(huán)烷基”指具有3至10個碳原子的脂肪碳環(huán)基，包括單環(huán)、并環(huán)、橋環(huán)、螺環(huán)等，代表性的例子例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，金剛烷基等。
術(shù)語“C2-C6烷氧基羰基”指具有2至6個碳原子的烷氧基羰基，代表性的例子例如甲氧基羰基，乙氧基羰基等。
術(shù)語“C2-C6烷羰基氧基”指具有2至6個碳原子的烷羰基氧基，代表性的例子例如乙酰氧基等。
術(shù)語“C2-C6酰胺基”指具有2至6個碳原子的羰基氨基，代表性的例子例如乙酰胺基，丙酰胺基，丁酰胺基等。
術(shù)語“C6-C10芳基”指環(huán)上具有6至10個碳原子的芳香性碳環(huán)基，代表性的例子例如苯基、萘基等。
所述五元或六元環(huán)指的是在環(huán)上具有5個或6個原子，其中包括碳原子或選自N、O和S的雜原子(優(yōu)選為1-4個)的碳環(huán)或雜環(huán)，例如環(huán)丙烷，環(huán)丁烷，環(huán)戊烷，環(huán)己烷等脂肪環(huán)，或四氫吡咯，嗎啉，哌嗪，哌啶等氧雜或氮雜脂肪環(huán)。
所述五元或六元雜芳基指的是在環(huán)上具有至少一個(優(yōu)選為1-4個)選自N、O和S的雜原子的五元或六元芳香性環(huán)基，例如噻吩基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。
所述的酰氧基為具有RC＝OO-結(jié)構(gòu)的基團(tuán)；所述的胺酰氧基為具有RNC＝OO-結(jié)構(gòu)的基團(tuán)；所述的烷氧基羰基為具有ROC＝O-結(jié)構(gòu)的基團(tuán)；所述的氨?；鶠榫哂蠷NC＝O-結(jié)構(gòu)的基團(tuán)；所述的酰胺基為具有RC＝ON-結(jié)構(gòu)的基團(tuán)；上述各基團(tuán)中，各個R各自獨立地為氫，具有1-10個碳原子的脂肪族烷基、具有1-10個碳原子的脂肪族不飽和基團(tuán)、或具有1-10個碳原子的芳香基；特別地，所述胺酰氧基(RNC＝OO-)、氨酰基(RNC＝O-)中的R，還可以與N共同構(gòu)成環(huán)狀胺，如哌嗪，哌啶，嗎啉，四氫吡咯等。
在本發(fā)明中，術(shù)語“前藥”指式I化合物、其光學(xué)異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽的衍生物，它們本身可能只有較弱的活性或沒有活性，但在給藥后在生理 條件下可以被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的生物活性形式。
含金剛烷基的萘醌類衍生物
本發(fā)明的一個方面是提供一種含金剛烷基的萘醌類衍生物，其為通式(I)所示的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽及其前藥，
其中，
R1，R2，R3，R4，R5各自獨立地選自下組：氫、鹵素原子、硝基、腈基、羥基、氨基、羧基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C1-C6烷氧基-羰基、C1-C6酰胺基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的五元或六元雜芳基；
較佳地，R1，R2，R3，R4，R5各自獨立地選自下組：H、鹵素原子、硝基、腈基、羥基、氨基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6酰胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6烷基-胺基；
A為選自下組的取代或未取代的金剛烷基：
其中，R6、R7、R8、R12、R13、R14各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6酰胺基、取代或未取代的C1-C10烷基，取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的五元或六元雜芳基；
較佳地，R6、R7、R8、R12、R13、R14各自獨立地選自下組：H、羥基、羧基、氨基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6酰胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基，或C1-C6烷基-胺基；其中，取代基選自鹵素原子、羥基、羧基、硝基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、優(yōu)選為鹵素原子、C1-C6烷基。
R9、R10、R11各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、 氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C2-C6烷氧基羰基(ROC＝O-)、C2-C6烯基羰基(RC＝O-)、C2-C6烷基羰基(RC＝O-)、取代或未取代的C1-C6酰氧基(RC＝OO-)、取代或未取代的C1-C6胺酰氧基(RNC＝OO-)、C1-C6氨?；?RNC＝O-)、C1-C6酰胺基(RC＝ON-)、取代或未取代的C1-C10烷基，取代或未取代的C6-C10芳基，或取代或未取代的五元或六元雜芳基；
較佳地，R9、R10、R11各自獨立地選自下組：H、C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6酰氧基(RC＝OO-)、取代或未取代的C1-C6胺酰氧基(RNC＝OO-)、羥基、羧基、氨基、C1-C6烷氧基羰基(ROC＝O-)、C1-C6氨酰基(RNC＝O-)、C1-C6酰胺基(RC＝ON-)、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6烷基-胺基；其中，取代基選自鹵素原子、羥基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、氨基、C1-C6酰胺基、硝基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C6-C10芳基或五元或六元雜芳基，優(yōu)選為鹵素原子、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或苯基。
-L-為選自下組的二價連接基團(tuán)：
其中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28各自獨立地選自下組：氫、未取代或鹵代的C1-C6烷基、鹵素、氰基、硝基、C2-C10炔基、C2-C10烯基、C6-C10芳基、羥基、C1-C6烷氧基、C1-C6胺基；或者，R16和R17或R18、R23和R20或R21與相連的碳原子或氮原子共同形成取代或未取代的五元或六元雜環(huán)；
較佳地，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28各自獨立地選自下組：氫，C1-C6烷基、C6-C10芳基、羥基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基；或者，R16和R17或R18、R23和R20或R21與相連的碳原子或氮原子共同形成取代或未取代的五元或六元環(huán)；
n為1，2，3，4，5，6或7；
其中，所述的取代指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、芐基、C1-C6烷氧基羰基、氨基、C1-C6酰胺基、硝基、 氰基、未取代或鹵代的C1-C6烷基、C2-C10烯基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-胺基、C6-C10芳基、五元或六元雜芳基，優(yōu)選為鹵素、C1-C6烷氧基羰基、未取代或鹵代的C1-C6烷基。
在另一優(yōu)選例中，R1，R2，R3，R4，R5各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的五元或六元雜芳基；
R6、R7、R8、R12、R13、R14各自獨立地選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C6-C10芳基或五元或六元雜芳基，優(yōu)選為H、羥基、羧基、氨基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基，或C1-C6烷基-胺基；其中，所述的指基團(tuán)上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、硝基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；優(yōu)選為鹵素、C1-C6烷基。
在另一優(yōu)選例中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28各自獨立地選自下組：氫、C1-C6烷基；
或者，R16和R17或R18、R23和R20或R21與相連的碳原子或氮原子共同形成取代或未取代的五元或六元雜環(huán)，優(yōu)選地為五元雜環(huán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28中任一個分別為本發(fā)明實施例中所述具體化合物中所對應(yīng)的基團(tuán)。
在另一優(yōu)選例中，所述的衍生物是選自下組的化合物：
含金剛烷基的萘醌類衍生物的制備
本發(fā)明還提供了一種通式I所示的化合物的制備方法，該方法為下列方法：
將萘醌羧酸衍生物和相應(yīng)的金剛胺化合物，或?qū)⑤刘被苌锖拖鄳?yīng)的金剛烷羧基化合物，在縮合劑存在下縮合，再氧化得到目標(biāo)化合物。
在本發(fā)明的一種優(yōu)選情況下，所述的制備方法如下式所示：
所述縮合反應(yīng)和氧化反應(yīng)的具體反應(yīng)條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)選擇，例如，可以在例如N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺等的堿的存在下，在例如2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)等的縮合劑作用下進(jìn)行；氧化可以在硝 酸鈰銨的條件下進(jìn)行；其中，R1、R2、R3、R4、R5、L、A的定義同上。
含金剛烷基的萘醌類衍生物的用途
本發(fā)明還提供了如本發(fā)明的萘醌衍生物，即通式為(I)的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽及其前藥中的一種或多種在制備抗菌藥物、抗癌藥物中的應(yīng)用。
通過體外活性篩選，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物具有Sortase A酶抑制活性，且具有抗菌活性，因此本發(fā)明化合物可以用于制備治療和/或預(yù)防各種細(xì)菌感染的藥物。
通過體外活性篩選，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物具有抗腫瘤活性，因此本發(fā)明化合物可以用于制備治療和/或預(yù)防各種癌癥的藥物，如肺癌、結(jié)腸癌、口腔上皮癌、胃癌、白血病等各種癌癥。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含選自根據(jù)本發(fā)明的萘醌衍生物，即通式為I的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽及其前藥中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明的萘醌衍生物以治療有效量包含在所述藥物組合物中。此外，所述藥物組合物任選還可以包含藥學(xué)上可接受的輔料，例如賦形劑、粘合劑、著色劑、抗氧化劑、防腐劑、崩解劑、甜味劑、稀釋劑、溶劑等，但不限于這些。
所述藥物組合物可以用于治療和/或預(yù)防各種細(xì)菌感染，各種癌癥如肺癌、結(jié)腸癌、口腔上皮癌、胃癌、白血病等，但是不限于這些。
本發(fā)明還提供了一種治療細(xì)菌感染和癌癥的方法，其包括向需要該治療的患者給藥治療有效量的選自根據(jù)本發(fā)明的萘醌類衍生物，即通式為I的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽及其前藥中的一種或多種或者根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。所述癌癥例如為肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、白血病等，但是不限于這些。
藥物組合物和施用方法
由于本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的對Sortase A酶的抑制活性，以及對細(xì)菌的殺滅活性，因此本發(fā)明化合物及其各種晶型，藥學(xué)上可接受的無機或有機鹽，水合物或溶劑合物，以及含有本發(fā)明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解由與Sortase A酶活性或表達(dá)量相關(guān)的疾病，或與細(xì)菌感 染相關(guān)的疾病。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明化合物可用于治療以下疾?。悍伟?、結(jié)腸癌、口腔上皮癌、胃癌、白血病等等。
本發(fā)明的藥物組合物包含安全有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有1-2000mg本發(fā)明化合物/劑，更佳地，含有5-200mg本發(fā)明化合物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個膠囊或藥片。
“藥學(xué)上可以接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)、明膠、滑石、固體潤滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑(如吐溫)、潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、無熱原水等。
本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤內(nèi)、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。
用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。
固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。
用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿 或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。
除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、嬌味劑和香料。
除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。
用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。
用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要的推進(jìn)劑一起混合。
本發(fā)明化合物可以單獨給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。
使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發(fā)明化合物適用于需要治療的哺乳動物(如人)，其中施用時劑量為藥學(xué)上認(rèn)為的有效給藥劑量，對于60kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1～2000mg，優(yōu)選5～500mg。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。除非另有說明，本發(fā)明中采用的制備和測試方法以及設(shè)備等為本領(lǐng)域中常規(guī)的方法和設(shè)備。所用試劑均為分析純或化學(xué)純。
實施例1
將232mg的1，4-二甲氧基-2-萘酸溶于5ml干燥的二氯甲烷，加入151mg金剛烷胺和0.5ml N，N-二異丙基乙胺，冷至0～5℃，加入570mg縮合劑HATU和136mg HOAt，自然升至室溫反應(yīng)3h。TLC檢測原料點基本消失后，加入8ml飽和碳酸氫鈉溶液，分層，水層用5ml二氯甲烷提取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，將得到的產(chǎn)品直接溶在10ml乙腈中，將硝酸鈰銨986mg溶在6ml水中，然后將其慢慢滴到反應(yīng)液中，反應(yīng)10min，TLC檢測原料點基本消失后，加入20ml乙酸乙酯，分層，將有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，柱層析分離，得到262mg黃色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.57(s，1H)，8.11(m，2H)，7.86(3，1H)，7.80(m，2H)，2.15(s，6H)，1.74(s，4H)，1.59(m，5H).
實施例2
除了用2-金剛烷胺代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.25(s，1H)，8.26-8.04(m，2H)，7.93(s，1H)，7.86-7.75(m，2H)，4.28(m，1H)，2.07-1.87(m，10H)，1.82-1.69(m，4H).
實施例3
除了用金剛烷甲胺代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.84(s，1H)，8.16(m，2H)，7.95(s，1H)，7.88-7.80(m，2H)，3.22(d，J＝6.1Hz，2H)，2.05(s，3H)，1.74(m，8H)，1.62(s，4H).
實施例4
除了用(R)-1-(1-金剛烷基)乙胺鹽酸鹽代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.71(s，1H)，8.14-7.98(m，2H)，7.85(s，1H)，7.80-7.70(m，2H)，3.85(m，1H)，1.98(s，4H)，1.69(m，4H)，1.57(m，7H)，1.11(d，J＝6.8Hz，3H).
實施例5
除了用(R)-1-(3，5-二甲基金剛烷基)乙胺代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.58(s，1H)，8.07(m，2H)，7.82(s，1H)，7.77(m，2H)，2.17(m，1H)，1.95(s，2H)，1.75(m，4H)，1.42(m，2H)，1.30(m，2H)，1.18(m，2H)，0.86(s，6H).
實施例6
除了用3-羥基金剛烷胺代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，1H)，8.08(m，2H)，7.82(s，1H)，7.78(m，2H)，2.31(s，3H)，2.07(m，8H)，1.72(s，3H).
實施例7
除了用4-羥基金剛烷胺代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.19(s，1H)，8.22-8.03(m，2H)，7.92(s，1H)，7.85-7.76(m，2H)，4.23(s，1H)，2.25(s，3H)，1.91(m，4H)，1.82(m，4H)，1.68(m，2H)，1.59(s，1H).
中間體8-1和9-1的合成
將8-2(167mg，1mmol)溶于2ml THF中，冰浴下加入164mg的二碳酸二叔丁酯，然后慢慢滴加0.14ml的三乙胺，緩慢升至室溫，反應(yīng)過夜。將THF旋干，用10ml乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗，無水Na2SO4干燥，減壓蒸除溶劑，得白色粗品8-3(230mg，86％)。將中間體8-3(1eq)溶于3ml二氯乙烷中，加入DMAP(0.1eq)，攪拌下滴加丁酰氯，反應(yīng)2h后，旋干溶劑，加入水，用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用飽和食鹽水洗，干燥，減壓蒸除溶劑，柱層析得中間體8-4。將得到的中間體8-4直接溶在二氯甲烷中，攪拌下加入三氟乙酸，1h后將反應(yīng)液旋干得中間體8-1。
用同樣的方法得到中間體9-1，只是將丁酰氯化成丙烯酰氯。
實施例8
除了用中間體8-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，1H)，8.13-8.00(m，2H)，7.81(s，1H)，7.79-7.73(m，2H)，2.48(s，2H)，2.31(s，2H)，2.20-2.03(m，12H)，1.61(s，2H)，0.90(t，J＝7.4Hz，3H).
實施例9
除了用中間體9-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.69(s，1H)，8.08(m，2H)，7.82(s，1H)，7.78(m，2H)，6.29(d，J＝17.3Hz，1H)，6.00(dd，J＝17.3，10.3Hz，1H)，5.77-5.68(m，1H)，2.53(s，2H)，2.34(s，2H)，2.13(m，8H)，1.64(s，2H).
中間體10-1、11-1、12-1的合成
將8-2(1.67g，10mmol)溶于20ml THF中，冰浴下分批加入2g的碳酸鉀，然后再慢慢滴加氯甲酸芐酯1.7ml，升至室溫反應(yīng)2h。旋干THF，二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用飽和食鹽水洗，干燥，減壓蒸除溶劑，得粗品10-2(2g，62％)。將中間體10-2(1eq)，乙基異氰酸酯(1eq)溶在干燥的DCM中，在氮氣保護(hù)下加入TMSCl(0.05eq)，室溫下攪拌18h。將DCM旋干，柱層析得中間體10-3。將中間體5(1eq)溶在乙醇中，加入鈀碳(0.1eq)，在氫氣條件下反應(yīng)12h。將鈀碳抽濾掉，濾液旋干得中間體10-1。
用同樣的方法得到中間體11-1和12-1，只是將乙基異氰酸酯換成叔丁基異氰酸酯和芐基異氰酸酯。
實施例10
除了用中間體10-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.66(s，1H)，8.13-8.05(m，2H)，7.83(s，1H)，7.81-7.75(m，2H)，4.50(s，1H)，3.14(m，2H)，2.49(s，2H)，2.32(s，2H)，2.09(s，8H)，1.62(s，2H)，1.10(t，J＝7.2Hz，3H).
實施例11
除了用中間體11-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.63(s，1H)，8.11-8.02(m，2H)，7.80(s，1H)，7.78-7.73(m，2H)，4.50(s，1H)，2.47(s，2H)，2.29(s，2H)，2.08(m，8H)，1.60(s，2H)，1.26(s，9H).
實施例12
除了用中間體12-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，1H)，8.11-8.01(m，2H)，7.80(s，1H)，7.79-7.72(m，2H)，7.22(m，5H)，4.63(s，1H)，3.34(m，2H)，2.77(t，J＝6.8Hz，2H)，2.46(s，2H)，2.31(s，2H)，2.08(s，8H)，1.61(s，2H).
實施例13
將100mg 2-氨基萘醌溶于5ml干燥的二氯甲烷，加入104mg金剛烷甲酸和0.3ml N，N-二異丙基乙胺，冷至0～5℃，加入330mg縮合劑HATU和80mgHOAt，自然升至室溫反應(yīng)3h。TLC檢測原料點基本消失后，加入8ml飽和碳酸氫鈉溶液，分層，水層用5ml二氯甲烷提取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，柱層析得黃色產(chǎn)品13(155mg，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.11(m，2H)，7.87(s，1H)，7.75(m，2H)，2.13(s，3H)，1.97(m，6H)，1.76(m，7H)。
中間體14-1和15-1的合成
將N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸(94mg，0.46mmol)溶于5ml干燥的二氯甲烷，加入84mg 3，5-二甲基金剛烷胺和0.3mlN，N-二異丙基乙胺，冷至0～5℃，加入268mg縮合劑HATU和64mg HOAt，自然升至室溫反應(yīng)3h。TLC檢測原料點基本消失后，加入5ml飽和碳酸氫鈉溶液，分層，水層用5ml二氯甲烷提取，合并有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，柱層析得中間體14-2(133mg，80％)。將得到的中間體6直接溶在DCM中，滴加三氟乙酸溶液，反應(yīng)1h后，將溶劑旋干得中間體14-1。
用同樣的方法得到中間體15-1，只是將N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸換成N-叔丁氧羰基-L-脯氨酸。
實施例14
除了用中間體14-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.35(s，1H)，8.18-8.00(m，2H)，7.80(s，1H)，7.79-7.72(m，2H)，6.12(s，1H)，4.65-4.48(m，1H)，2.11(s，1H)，1.84(s，2H)，1.64(s，3H)，1.46(m，3H)，1.30(m，5H)，1.12(m，2H)，0.81(s，6H).
實施例15
除了用中間體15-1代替金剛烷胺以外，按照實施例1的方法制得目標(biāo)化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.11(dd，J＝8.6，4.3Hz，2H)，7.84-7.75(m，2H)，6.98(s，1H)，6.76(s，1H)，4.77-4.54(m，1H)，3.36(dd，J＝13.8，7.3Hz，2H)，2.33(s，1H)，2.14(d，J＝3.1Hz，1H)，2.10-1.96(m，2H)，1.90(s，2H)，1.80-1.66(m，4H)，1.47-1.36(m，2H)，1.29-1.05(m，5H)，0.85(s，6H).
實施例16
將萘醌(158mg，1mmol)和戊二酸0.3ml(3mmol)溶在3ml水和7ml乙腈中，將反應(yīng)液加熱到65℃，攪拌10min后慢慢滴加硝酸銀和過硫酸銨的乙腈-水溶液，反應(yīng)過夜。將乙腈旋干，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，柱層析分離得中間體4-(2-萘醌)-丁酸(120mg，50％)。將得到的酸與3，5-二甲基金剛烷胺反應(yīng)，按照實施例1的方法得到目標(biāo)化合物16。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.13-8.04(m，2H)，7.78-7.71(m，2H)，6.83(s，1H)，2.61(t，J＝7.2Hz，2H)，2.19(t，J＝7.2Hz，2H)，2.15-2.10(m，1H)，1.97-1.86(m，2H)，1.83-1.76(m，3H)，1.62(m，4H)，1.38(m，2H)，1.28(m，4H)，1.14(m，2H)，0.84(s，6H).
實施例17
除了用辛二酸代替戊二酸，得到中間體7-(2-萘醌)-庚酸外，按照實施例16的方法得到目標(biāo)化合物17。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.12-8.03(m，2H)，7.78-7.70(m，2H)，6.79(s，1H)，5.18(s，1H)，2.56(t，J＝7.7Hz，2H)，2.13(m，1H)，2.08(t，J＝7.5Hz，2H)，1.83(s，3H)，1.64(m，4H)，1.43-1.34(m，6H)，1.28(m，4H)，1.15m，3H)，0.84(s，6H).
中間體18-1的合成
將萘醌(2g，12.6mmol)溶于50ml THF中，加入鈀碳，在氫氣保護(hù)下反應(yīng)12h，將反應(yīng)液過濾，濾液在氮氣保護(hù)下慢慢加入鈉氫，在0℃下攪拌10min后，慢慢滴加硫酸二甲酯，繼續(xù)反應(yīng)4h。將THF旋干，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑得1，4-二甲氧基萘(1.31g)。將得到的1，4-二甲氧基萘(1eq)溶于5ml二氯甲烷中，冰浴下，慢慢滴加四氯化錫(1.2eq)，攪拌10min后，再滴加1，1-二氯甲醚(1.2eq)，在0℃下反應(yīng)3h。往反應(yīng)液中加入冰水，用DCM萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得1，4-二甲氧基-2-萘甲醛。將NaH加入到50ml燒瓶中，氮氣保護(hù)下，加入5ml甲苯，及三乙基2-膦酰基丙酯，然后將反應(yīng)加熱到110℃回流30min，將得到的1，4-二甲氧基-2-萘甲醛溶在2ml甲苯中，慢慢滴加到反應(yīng)液中，繼續(xù)回流12h。用2M HCl酸化，然后用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，柱層析得中間體18-2。將中間體18-2溶在乙醇中，加入氫氧化鉀，將反應(yīng)在回流下反應(yīng)1h。旋干溶劑，得中間體18-1。
實施例18
將得到的中間體18-1與3，5-二甲基金剛烷胺反應(yīng)，按照實施例1的方法得到目標(biāo)化合物18。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.13-8.01(m，2H)，7.78-7.68(m，2H)，7.08(s，1H)，6.89(s，1H)，5.67(s，1H)，2.07(s，3H)，1.89(s，2H)，1.75-1.65(m，4H)，1.32(m，5H)，1.16(m，2H)，0.85(s，6H).
實施例19本發(fā)明化合物的藥理學(xué)研究
(一)實施例化合物的Sortase A抑制活性測試
將金黃色葡萄球菌的表面蛋白SasX和IsdA的cDNA序列構(gòu)建到表達(dá)載體pET28b中，通過Ni-NTA柱以及Superdex Hiload 75柱兩步純化得到純度大于95％的蛋白。轉(zhuǎn)肽反應(yīng)緩沖液為50mM Tris-HCl，150mM NaCl，5mM CaCl2，pH為7.5。在50μl的反應(yīng)體系中加入終濃度為200μg/μl的轉(zhuǎn)肽酶Sa-SrtA或是轉(zhuǎn)肽酶Sp-SrtA，化合物，隨后加入終濃度為300μg/μl的表面蛋白SasX和IsdA以及終濃度為3mM的另一個酶反應(yīng)底物，孵育10min，用酶標(biāo)儀連續(xù)監(jiān)測酶反應(yīng)過程中熒光強度的變化得到酶反應(yīng)動力學(xué)曲線，取酶反應(yīng)動力學(xué)曲線的線性部分求出不同化合物所對應(yīng)的反應(yīng)初速率Vi。V0為不加化合物時所求得的反應(yīng)初速率。抑制率(％)＝(1-Vi/V0)×100％。每個化合物同時做三個重復(fù)取平均值計算抑制率。實驗結(jié)果見表一。
表一化合物在分子水平對Sortase A酶活性的抑制作用
(二)實施例化合物的抗菌活性測試
挑取S.aureus Newman、S.aureus RN4220、S.epidermidis 145、B.subtilis 168、P.aeruginosa PAO1、E.coli DH5α單克隆置于TSB或LB培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)過夜。次日用新鮮的TSB或LB培養(yǎng)基稀釋A600至0.01，37℃搖床中培養(yǎng)2h后稀釋A600至0.005。取180μl菌液接種到96孔板中，然后加入20μl用TSB或LB稀釋好的一系列濃度的SD化合物，使化合物的終濃度為6.25μM-200μM(化合物從200μM開始等倍稀釋)。將96孔板置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h，次日肉眼觀察每個孔中細(xì)菌的生長情況，以每個化合物不抑制細(xì)菌生長的最低濃度作為該化合物的MIC值。每個樣品做三個平行孔。
表二化合物殺菌活性
表三化合物對Sa.Newman的殺菌活性
從上述試驗結(jié)果可以看出，本發(fā)明所保護(hù)的萘醌類化合物具有優(yōu)異的抗菌活性，因此具有較好的應(yīng)用前景。
(三)實施例化合物的抗腫瘤活性測試
對本發(fā)明的上述實施例1-12的萘醌衍生物進(jìn)行了體外抗腫瘤活性測試。采用KB、KB/VCR及A549細(xì)胞，分別加入各化合物處理72h，用SRB法檢測化合物的增殖生長抑制作用及其程度。實驗中化合物采用最高終濃度100μM，向下4倍稀釋，6個濃度梯度(分別為100μM、25μM、6.25μM、1.563μM、0.391μM和0.098μM)，處理細(xì)胞72小時。重復(fù)兩次，實驗結(jié)果見表四。
表四、實施例化合物的體外抗腫瘤活性
從上述試驗結(jié)果可以看出，本發(fā)明所保護(hù)的萘醌類化合物具有優(yōu)異的抗腫瘤活性。因此具有較好的應(yīng)用前景。
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