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背景技術(shù)：
：叔丁啡(式1)是蒂巴因的半合成阿片衍生物。它是混合激動(dòng)劑-拮抗劑阿片受體調(diào)節(jié)劑，用于以較高劑量治療阿片類成癮，以較低劑量控制非阿片類藥物耐受的個(gè)體的中度急性疼痛，并且以甚至更小劑量控制中度慢性疼痛。叔丁啡在胃腸道被吸收，全身性作用。納洛酮(式2)是純粹的阿片類拮抗劑。納洛酮是用來逆轉(zhuǎn)阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑郁、呼吸系統(tǒng)和低血壓的藥物。納洛酮可與口服的阿片類藥物相結(jié)合，以減少它們?yōu)E用的風(fēng)險(xiǎn)。納洛酮在胃腸道中被吸收，并且可以全身性作用，從而導(dǎo)致阿片戒斷癥狀。納曲酮(式3)是在治療酒精依賴和阿片依賴中主要使用的阿片類拮抗劑。通常以鹽酸鹽形式(即鹽酸納曲酮)銷售。納曲酮也在胃腸道中被吸收且全身性起作用。像納洛酮一樣，納曲酮可能誘發(fā)阿片類戒斷癥狀。去甲文拉法辛(式4)也稱為O-去甲文拉法辛，是5-羥色胺-去甲腎上腺素再攝取抑制劑類的抗抑郁藥。它已被考慮用于治療慢性特發(fā)性便秘和胃輕癱，但由于它全身性作用且其中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的影響可包括性功能障礙，因此在未患抑郁癥的人上出于那些目的進(jìn)行使用是禁忌。對(duì)乙酰氨基酚(式5)，化學(xué)名稱為N-乙?；?對(duì)氨基苯酚，是在美國(guó)最廣泛使用的藥物之一。它是不需處方可以開具的鎮(zhèn)痛劑和退熱劑，通常以商品名泰諾出售。對(duì)乙酰氨基酚分類為溫和的鎮(zhèn)痛劑。它常用于頭痛和其他輕微疼痛的緩解，是在眾多感冒和流感醫(yī)治中的主要成分。與阿片類鎮(zhèn)痛藥組合，對(duì)乙酰氨基酚也可以用于治療更嚴(yán)重的疼痛，如手術(shù)后疼痛和為晚期癌癥患者提供姑息治療。對(duì)乙酰氨基酚的醌代謝物是肝毒性的。盡管通常認(rèn)為對(duì)乙酰氨基酚的使用劑量是無害的，但急性和慢性過量可能是致命的。沙丁胺醇(式6)是用于在如哮喘和慢性阻塞性肺病的病癥中緩解支氣管痙攣的短效β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。它放松呼吸道的肌肉并增加空氣流動(dòng)到肺部。沙丁胺醇還用于防止運(yùn)動(dòng)誘發(fā)的支氣管痙攣。它通常是通過吸入給予，從而避開肝臟內(nèi)的高首過代謝。其高度變化的生物利用度已被歸因于它的酚羥基。這些藥物的共同特點(diǎn)是單一酚羥基。這類基團(tuán)賦予光不穩(wěn)定性并在胃腸道中經(jīng)受快速的系統(tǒng)前或首過代謝，從而多樣性化形成硫酸酯或葡糖苷酯。叔丁啡和去甲文拉法辛還經(jīng)受酶促降解(CYP3A4和CYP2A6)。為了避開隨之而來的生物利用度降低，如叔丁啡和納洛酮的藥物最常見是通過注射或舌下給藥。腹瀉型腸易激綜合征(IBS-D)IBS-D是非常普遍的胃腸疾病，除了腹瀉，它常伴有內(nèi)臟痛覺過敏(來自結(jié)腸刺激的增強(qiáng)的疼痛)、不適、腹脹和放氣。伊盧多啉森林實(shí)驗(yàn)室公司(ForestLaboratories,Inc.))是一種μ阿片受體激動(dòng)劑和δ阿片受體拮抗劑，在三期測(cè)試中已符合大便性狀改進(jìn)和減少腹痛的主要測(cè)試指標(biāo)，盡管對(duì)減少導(dǎo)致痛覺過敏的結(jié)腸超敏反應(yīng)沒有可展示的效果。此外，幾例嚴(yán)重的胰腺炎(一種潛在的威脅生命的疾病)，已在二期試驗(yàn)中報(bào)道過。甚至將已知膽道疾病史的患者排除出臨床研究登記名單后，仍然有胰腺炎病例的報(bào)導(dǎo)。通常，μ激動(dòng)劑對(duì)奧狄氏括約肌(一種調(diào)節(jié)膽汁和胰液從膽管流入十二指腸的肌肉閥)具有收縮作用。對(duì)于具有μ-受體激動(dòng)劑活性且處方為長(zhǎng)期使用的藥物，不導(dǎo)致對(duì)奧狄氏括約肌的收縮是非常重要的。因此，長(zhǎng)期需要一種IBS-D的長(zhǎng)期治療手段，它可降低腸道蠕動(dòng)從而降低腹瀉的發(fā)生率的，是鎮(zhèn)痛型的，與胰腺炎不相關(guān)，并且不僅僅是治療癥狀，能夠解決與IBS-D相關(guān)的潛在的超敏反應(yīng)和導(dǎo)致的痛覺過敏。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過它們酚羥基的O-烷基化，對(duì)藥物試劑確定基團(tuán)的二聚化，使得活性劑的殘基通過乙烯接頭橋接，并相對(duì)活性單體而言獲得明顯優(yōu)勢(shì)，同時(shí)保留它們的受體藥理學(xué)。阿片類藥物和其他藥劑的特點(diǎn)是單個(gè)酚羥基，由乙烯接頭通過這類基團(tuán)共價(jià)連接兩個(gè)這類藥劑，可獲得同型二聚體，它基本上比它們的母體分子更耐受系統(tǒng)前代謝。乙烯連接是高度穩(wěn)定的，并在特定的情況下還產(chǎn)生其他明顯的優(yōu)點(diǎn)。在阿片樣物質(zhì)叔丁啡、納洛酮和納曲酮的情況下，相應(yīng)二聚體是抗篡改的(例如，通過廚房化學(xué)將其轉(zhuǎn)化為濫用藥物)；且基本上不在胃腸道吸收，允許它們?cè)谕庵鼙焕?，而不進(jìn)入會(huì)伴有后續(xù)不利影響(如成癮或阿片戒斷)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。去甲文拉法辛的二聚化，防止活性劑穿過血腦屏障，盡管該二聚體對(duì)治療抑郁癥不再有效(需要中樞神經(jīng)系統(tǒng)的滲透)，但其功能性配體保持有效并在腸道中局部作用，這樣避免所有中樞介導(dǎo)的不良事件，包括性功能障礙。因此，二聚化使得藥劑安全用于治療胃輕癱和慢性特發(fā)性便秘。去甲文拉法辛二聚體有望作為外周5-羥色胺去甲腎上腺素再攝取抑制劑。與去甲文拉法辛不同，二聚體預(yù)期僅在胃腸道外周起作用。5-羥色胺本身對(duì)胃腸道具有推進(jìn)效果，因此，二聚物可以用于治療腸疾病，如胃輕癱、慢性特發(fā)性便秘和假性腸道梗阻(腸梗阻)。根據(jù)本發(fā)明，二聚的對(duì)乙酰氨基酚的效果，是為了防止形成母體化合物的醌代謝物，該代謝物在急性和慢性使用中具有肝毒性。此外，阻斷單體的酚羥基，二聚化降低活性劑的離子性，潛在地增強(qiáng)了透過血-腦屏障輸送以及由此鎮(zhèn)痛效果。沙丁胺醇二聚化增強(qiáng)了對(duì)胃腸道和肝臟代謝的耐受性，從而在口服用于治療支氣管痙攣時(shí)增加了藥物的生物利用度，其中支氣管痙攣發(fā)生于各種不同的肺部疾病，包括哮喘和慢性阻塞性肺疾病。在至少嗎啡喃化合物的情況下，直到目前，當(dāng)在研究例如前藥活性中對(duì)活性藥劑進(jìn)行衍生化時(shí)，常規(guī)想法似乎一直是：酚羥基是要避免的，以免受體結(jié)合受到不利影響。令人驚奇的是，盡管涉及對(duì)相應(yīng)單體的酚羥基的衍生化，但據(jù)信本發(fā)明的化合物保留了它們的特有活性。附圖說明圖1為叔丁啡二聚體鹽酸鹽的合成路線圖。圖2為納洛酮二聚體鹽酸鹽的合成路線圖。圖3為納曲酮二聚體鹽酸鹽的合成路線圖。圖4為去甲文拉法辛二聚體鹽酸鹽的合成路線圖。圖5為對(duì)乙酰氨基酚二聚體的合成路線圖。圖6為沙丁胺醇二聚體的合成路線圖。在圖6中，DHP為二氫吡喃，t-BuNH2為叔丁胺，TBSCI為叔丁基二甲基氯硅烷；LAH為氫化鋁鋰；(Boc)2O為二叔丁基二碳酸酯；AcOH為乙酸。圖7為柱狀圖，示出在輔助因子存在和不存在下，暴露于CYP酶時(shí)，叔丁啡二聚體的穩(wěn)定性。圖8為柱狀圖，示出叔丁啡二聚體對(duì)水性條件，以及酸性和堿性條件的穩(wěn)定性，各個(gè)分別在室溫和在140°F下經(jīng)過一段指定時(shí)間。圖9為叔丁啡二聚體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)–μ受體結(jié)果圖。圖10為叔丁啡二聚體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)–κ受體結(jié)果圖。圖11為叔丁啡二聚體μ激動(dòng)劑功能試驗(yàn)結(jié)果圖。圖12為叔丁啡二聚體μ拮抗劑功能試驗(yàn)結(jié)果圖。圖13為叔丁啡二聚體的口服和靜脈生物利用度結(jié)果圖。圖14為根據(jù)實(shí)施例7評(píng)價(jià)的應(yīng)激誘導(dǎo)的雄性CD-1小鼠的糞便量圖。圖15示出叔丁啡二聚體以劑量依賴性方式降低糞便量。圖16示出根據(jù)實(shí)施例7，在炎癥后模型中叔丁啡二聚體對(duì)胃腸蠕動(dòng)的作用。圖17為柱狀圖，示出當(dāng)在輔助因子存在或不存在時(shí)，暴露于CYP酶時(shí)，納洛酮二聚體鹽的穩(wěn)定性。圖18為柱狀圖，示出納洛酮二聚體對(duì)水性條件以及酸性和堿性的穩(wěn)定性，各個(gè)分別在室溫和在140°F下經(jīng)過一段指定時(shí)間。圖19顯示了納洛酮二聚體和納洛酮的人μ阿片受體結(jié)合試驗(yàn)的結(jié)果。圖20為柱狀圖，示出納洛酮二聚體鹽在小鼠中緩解洛哌丁胺誘發(fā)的便秘的效果。具體實(shí)施方式二聚體的藥物組合物–概述在一些實(shí)施方式中，本文提供包含二聚體的藥物組合物。藥物組合物還可以包括藥學(xué)上可接受的載體。說明性的藥學(xué)上可接受的載體和制劑描述如下。應(yīng)理解，在本文討論的任一或全部的治療方法和組合物中，二聚體的藥學(xué)上可接受的鹽可以用于替代二聚體或作為二聚體的補(bǔ)充。因此，在具體實(shí)施方式中，二聚體的藥學(xué)上可接受的鹽(即任何二聚體的任何藥學(xué)上可接受的鹽)可用于本發(fā)明的方法。這些鹽可以，例如，在最終分離和純化化合物期間原位制備，或各自通過將其自由堿形式的純化化合物與合適的有機(jī)或無機(jī)酸反應(yīng)并分離由此形成的鹽來制備。在一些實(shí)施方式中，采用乙酸、海藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、撲酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、對(duì)氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸、或?qū)妆交撬?，來制備二聚體藥學(xué)上可接受的鹽。對(duì)于能夠用于本文描述方法中的藥學(xué)上可接受的鹽的進(jìn)一步描述，參見，如S.M.Berge等人,“藥用鹽(PharmaceuticalSalts),”1977,J.Pharm.Sci.66:1-19，該文獻(xiàn)通過引用全部并入本文。本發(fā)明的二聚體，可以是以非溶劑化的，或與藥學(xué)上可接受的溶劑例如水、乙醇等以溶劑化(物)的形式存在。出于本發(fā)明的目的，一般而言，溶劑化形式被認(rèn)為等同于非溶劑化形式。在一具體的實(shí)施方式中，二聚體的溶劑化形式是水合物。通常，鹽形成可改善所得治療劑的保質(zhì)期。適當(dāng)?shù)柠}的合成可提供結(jié)晶的、不易發(fā)生氧化且易于處理的產(chǎn)品?？梢灾苽涓鞣N鹽，得到穩(wěn)定的結(jié)晶化合物。幾個(gè)例子是鹽酸鹽、硫酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、丙二酸鹽、富馬酸鹽、和抗壞血酸鹽。在一些具體實(shí)施方式中，這樣的藥物組合物可被配制成口服片劑或膠囊、延長(zhǎng)釋放的口服片劑或膠囊(硬明膠膠囊，軟明膠膠囊)、舌下片劑或薄膜、或延長(zhǎng)釋放的舌下片劑或膜。在下面更詳細(xì)描述這些說明性的藥學(xué)上可接受的載體和制劑。藥物組合物、劑量和給藥途徑本文提供的二聚體可以以常規(guī)制劑的形式口服給藥于對(duì)象，如膠囊、微膠囊、片劑、顆粒、粉末、錠劑、丸劑、栓劑、口服懸浮液、糖漿、口服凝膠劑、噴霧劑、溶液和乳液?？梢酝ㄟ^通常使用的方法制備合適的制劑，采用常規(guī)的有機(jī)或無機(jī)添加劑，如賦形劑(例如，蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石粉、磷酸鈣或碳酸鈣)，粘合劑(例如，纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)，崩解劑(如淀粉、羧甲基纖維素、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、碳酸氫鈉、磷酸鈣或檸檬酸鈣)，潤(rùn)滑劑(例如，硬脂酸鎂、輕質(zhì)無水硅酸、滑石粉或月桂基硫酸鈉)，矯味劑(例如，檸檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橘粉)，防腐劑(例如，苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯)，穩(wěn)定劑(如檸檬酸、檸檬酸鈉或乙酸)，懸浮劑(例如，甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸鋁)，分散劑(如羥丙基甲基纖維素)，稀釋劑(例如，水)，和底蠟(如可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。實(shí)施例提供以下實(shí)施例用于說明，但不限于要求保護(hù)的發(fā)明。實(shí)施例1叔丁啡二聚體鹽酸鹽如圖1所示合成叔丁啡二聚體。中間體2的合成：將叔丁啡鹽酸鹽(5.0g,10.68毫摩爾,1當(dāng)量)和碳酸鉀(42.73毫摩爾,4當(dāng)量)加入三口圓底燒瓶，隨后加入無水DMSO(50ml,10體積)。將混合物加熱至60攝氏度并緩慢加入1,2-二溴乙烷(3.7mL,42.72毫摩爾,4當(dāng)量)。在60攝氏度攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)，然后冷卻至室溫，用水稀釋并用二氯甲烷萃取。采用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(無水Na2SO4)，過濾并減壓濃縮，從而獲得粘性液體。通過硅膠色譜采用0-5％MeOH/DCM純化粗產(chǎn)物,從而獲得4.2g(69％)中間體2，為米白色泡沫狀固體。中間體3的合成：將叔丁啡鹽酸鹽(1.74g,3.72毫摩爾)和碳酸鉀(2.0g,14.87毫摩爾,4當(dāng)量)加入三口圓底燒瓶，隨后加入無水DMSO(10mL)。將混合物加熱至60攝氏度并經(jīng)2小時(shí)滴加溶于7mL無水DMSO的中間體2(3g,5.22毫摩爾,1.4當(dāng)量)。在60攝氏度攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)，然后冷卻至室溫，用水稀釋并用二氯甲烷萃取。采用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(無水Na2SO4)，過濾并減壓濃縮,從而獲得粘性液體。通過硅膠色譜采用0-5％MeOH/DCM純化粗產(chǎn)物,從而獲得二聚體3，為泡沫狀固體(2.8g,77％)。二聚體鹽酸鹽的合成:在氮?dú)?，于室溫，?.5g(5.7毫摩爾)雙共軛物3溶于50mL乙酸乙酯。室溫滴加3.43mL(6.9毫摩爾,1.2當(dāng)量)乙醚中的2NHCl。在室溫下再攪拌反應(yīng)混合物一小時(shí)，過濾獲得固體。進(jìn)一步用100mL乙酸乙酯洗滌固體并真空干燥，從而獲得白色固體(5.8g,98％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.75(br,2H),6.88(d,J＝9.2Hz,2H),6.67(d,J＝9.2Hz,2H),4.66(s,2H),4.23-4.42(m,4H),3.84-3.92(m,2H),3.40(s,6H),3.21-3.35(m,5H),2.98-3.20(m,7H),2.64-2.85(m,4H),2.12-2.26(m,4H),1.72-1.94(m,4H),1.38-1.52(m,4H),1.26(s,6H),0.99(s,20H),0.48-0.76(m,10H),0.32-0.42(m,4H)；MS:m/z962(M+1)+。實(shí)施例2體外試驗(yàn)：叔丁啡二聚體的代謝穩(wěn)定性采用帝肯(Tecan)液體處理系統(tǒng)或等效系統(tǒng)，于37±1℃在有或無輔助因子，NADPH-生成系統(tǒng)，在包含磷酸鉀緩沖液(50mM,pH7.4)、MgCl2(3mM)和EDTA(1mM,pH7.4)的0.2-mL孵育混合物(終體積)中，在96孔板指示的終濃度下進(jìn)行二聚體(例如，1μM)和人肝微粒體(例如，1毫克蛋白質(zhì)/毫升)的孵育。NADPH-生成系統(tǒng)由NADP(1mM,pH7.4)、葡萄糖-6-磷酸(5mM,pH7.4)和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(1單位/mL)組成。叔丁啡二聚體溶于甲醇水溶液(甲醇0.5％v/v或更低)。通常通過加入輔助因子開始反應(yīng)，并通過等體積的終止試劑(例如，乙腈，0.2mL，含內(nèi)標(biāo))，在四個(gè)指定的時(shí)間點(diǎn)(例如，至多120分鐘)停止反應(yīng)。零點(diǎn)時(shí)間孵育作為100％的值，以確定底物百分比損失。除了零點(diǎn)時(shí)間樣本(一式四份進(jìn)行孵育)外，一式三份進(jìn)行孵育。零-輔因子(無NADPH)孵育，是在零時(shí)間和最長(zhǎng)的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行。樣本經(jīng)離心(例如，920xg，10min，10℃)并通過LC-MS/MS分析上清部分。采用微粒體和標(biāo)記的底物(例如，右美沙芬，以監(jiān)測(cè)底物損失)作為陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行額外的孵育從而確定測(cè)試系統(tǒng)是否能夠代謝。上述樣品通過LC-MS/MS方法進(jìn)行分析。在各孵育溶液中對(duì)樣品進(jìn)行分析。通過在實(shí)驗(yàn)時(shí)間過程比較峰比率(通常被報(bào)告為“％親本剩余”)確定結(jié)果。采用LIMS(包括伽利略(Galileo),賽默飛世爾科技公司(ThermoFisherScientificInc.)和報(bào)告工具,水晶報(bào)表(CrystalReports),SAP),電子制表軟件計(jì)算機(jī)程序微軟Excel(MicrosoftCorp.)或等價(jià)物，計(jì)算數(shù)據(jù)。采用LIMS，“分析員儀器控制和數(shù)據(jù)處理軟件”(ABSCIEX)或等價(jià)物，基于分析物/內(nèi)標(biāo)物(IS)的峰面積比，評(píng)價(jià)未改變母體化合物的量(以確定各孵育中底物殘留的大概百分?jǐn)?shù))。結(jié)果：結(jié)果示于圖7，表明在測(cè)試期間在微粒體酶存在下，叔丁啡二聚體是相對(duì)穩(wěn)定的。微粒體酶通常負(fù)責(zé)藥物如叔丁啡的代謝。在微粒體存在下，以及有或無輔助因子存在下，二聚體是穩(wěn)定的。在2小時(shí)終止反應(yīng)，因?yàn)樵?7℃孵育溫度超過2小時(shí)后，酶通常不穩(wěn)定。實(shí)施例3叔丁啡二聚體的應(yīng)激穩(wěn)定性試驗(yàn)本研究幫助理解潛在濫用者使用家用化學(xué)品如小蘇打、酸或在水中簡(jiǎn)單加熱從而裂解二聚體的難易程度。于室溫，在未處理的自來水和在酸(1NHCl)或堿(5％碳酸氫鈉水溶液)存在下，評(píng)估叔丁啡二聚體的穩(wěn)定性。在那些條件下，二聚體相對(duì)穩(wěn)定，且在這些條件下沒有降解為叔丁啡。參見圖8。結(jié)果：如圖8所示，在室溫或在升高的溫度，在極端pH，甚至長(zhǎng)達(dá)30分鐘，叔丁啡二聚體保持穩(wěn)定，沒有降解釋放叔丁啡。這些研究也助于理解二聚體在IBS-D患者和健康對(duì)象兩者胃腸道(沿其長(zhǎng)度呈現(xiàn)梯度pH)中的穩(wěn)定性。pH值范圍為：從因胃壁細(xì)胞鹽酸排泄導(dǎo)致的pH1至結(jié)腸內(nèi)pH8。胃腸道的近端部分是酸性最大的，而遠(yuǎn)端是酸性最小的。實(shí)施例4受叔丁啡二聚體的受體結(jié)合活性本實(shí)施例闡明本發(fā)明提供的叔丁啡二聚體與以下受體的結(jié)合：μ-阿片受體、κ-阿片受體和δ-阿片受體。人μ阿片受體結(jié)合試驗(yàn)采用玻璃組織研磨機(jī)、特氟龍研棒和固定攪拌器(飛世爾科技)在測(cè)試緩沖液(50mMTris,pH7.5，含5mMMgCl2)中，將表達(dá)人μ阿片受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞的膜(珀金埃爾默#RBHOMM400UA)進(jìn)行勻漿。在測(cè)試板(96孔圓底聚丙烯板)內(nèi)，將膜濃度調(diào)節(jié)至300μg/mL。待測(cè)試的化合物溶于DMSO(Pierce)，10mM，然后在測(cè)試緩沖液中稀釋至3.6nM。在第二個(gè)96孔圓底聚丙烯板(被稱為預(yù)混物板)內(nèi)，將60μL的6X化合物與60μL3.6nM3H-納洛酮混合。從預(yù)混板轉(zhuǎn)移50μL至含有膜的測(cè)試板，一式兩份。測(cè)試板在室溫下孵育2小時(shí)。采用0.3％聚乙烯亞胺預(yù)處理GF/C96孔過濾板(珀金埃爾默#6005174)30分鐘。使用帕卡德過濾(PackardFiltermate)收集器，通過過濾板過濾測(cè)試板中的內(nèi)容物，在4℃采用0.9％鹽水洗滌3次。干燥過濾板，底面密封，將30μLMicroscint20(Packard#6013621)加入各孔。采用Topcount-NXT微板閃爍記數(shù)器(Packard)檢測(cè)2.9到35KeV的發(fā)射能量。將結(jié)果與最大結(jié)合(沒有抑制的孔)進(jìn)行比較。在50μM未標(biāo)記納洛酮的存在下，測(cè)定非特異性結(jié)合。叔丁啡二聚體的生物學(xué)活性示于圖9。結(jié)果：圖9的圖示出二聚體對(duì)阿片μ受體具有顯著的親合力。在10-8M(～10ng)，叔丁啡二聚體的阿片μ受體親合力與叔丁啡的類似。人κ阿片受體結(jié)合試驗(yàn)采用玻璃組織研磨機(jī)、特氟龍研棒和固定攪拌器(飛世爾科技)在測(cè)試緩沖液(50mMTris,pH7.5，含5mMMgCl2)中，將表達(dá)人κ阿片受體的克隆的HEK-293細(xì)胞的膜(英國(guó)安瑪西亞生物科學(xué)有限公司.6110558200U)進(jìn)行勻漿。在測(cè)試板(96孔圓底聚丙烯板)內(nèi)，將膜濃度調(diào)節(jié)至300μg/mL。待測(cè)試的化合物溶于DMSO(Pierce)，10mM，然后在測(cè)試緩沖液中稀釋至3.6nM。在第二個(gè)96孔圓底聚丙烯板(被稱為預(yù)混物板)內(nèi)，將60μL的6X化合物與60μL3.6nM3H-二丙諾啡混合。從預(yù)混板轉(zhuǎn)移50μL至含有膜的測(cè)試板，一式兩份。測(cè)試板在室溫下孵育18小時(shí)。采用0.3％聚乙烯亞胺預(yù)處理GF/C96孔過濾板(珀金埃爾默#6005174)30分鐘。使用帕卡德過濾(PackardFiltermate)收集器通過過濾板過濾測(cè)試板中的內(nèi)容物，在4℃采用0.9％鹽水洗滌3次。干燥過濾板，底面密封，將30μLMicroscint20(Packard#6013621)加入各孔。采用Topcount-NXT微板閃爍記數(shù)器(Packard)檢測(cè)2.9到35KeV的發(fā)射能量。將結(jié)果與最大結(jié)合(沒有抑制的孔)進(jìn)行比較。在50μM未標(biāo)記納洛酮的存在下測(cè)定非特異性結(jié)合。叔丁啡二聚體的生物學(xué)活性示于圖10。結(jié)果：圖10描述叔丁啡二聚體的阿片κ受體激動(dòng)劑圖。叔丁啡單體或叔丁啡二聚體都沒有損失κ受體親合力。定性地，同叔丁啡一樣，叔丁啡二聚體結(jié)合至阿片κ受體是隨濃度增加的。據(jù)估計(jì)在約1μg時(shí)，二聚體的阿片κ受體親合力與叔丁啡類似。人δ阿片受體結(jié)合試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)檢測(cè)化合物干預(yù)氚代納曲吲哚與人δ亞型2阿片受體結(jié)合的能力。采用玻璃組織研磨機(jī)、特氟龍研棒和固定攪拌器(飛世爾科技)，在測(cè)試緩沖液(50mMTris,pH7.5，含5mMMgCl2)中，將表達(dá)人δ亞型2阿片受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞的膜(珀金埃爾默#RBHODM400UA)進(jìn)行勻漿。在測(cè)試板(96孔圓底聚丙烯板)內(nèi)，將膜濃度調(diào)節(jié)至100μg/mL。待測(cè)試的化合物溶于DMSO，10mM，然后在測(cè)試緩沖液中稀釋至6x所需終濃度。配體(3H-納曲吲哚)(珀金埃爾默#NET-1065)也在測(cè)試緩沖液中稀釋至6nM。將等份的3H-納曲吲哚(50μL)轉(zhuǎn)移至含有膜的測(cè)試板，一式兩份。測(cè)試板在室溫下孵育30分鐘。采用0.3％聚乙烯亞胺預(yù)處理GF/C96孔過濾板(珀金埃爾默#6005174)30分鐘。使用帕卡德過濾(PackardFiltermate)收集器，通過過濾板過濾測(cè)試板中的內(nèi)容物，在4℃采用0.9％鹽水洗滌3次。干燥過濾板，底面密封，將30μLMictoS＝scint20(Packard#6013621)加入各孔。采用Topcount-NXT微板閃爍記數(shù)器(Packard)檢測(cè)2.9到35KeV的發(fā)射能量。將結(jié)果與最大結(jié)合(沒有抑制的孔)進(jìn)行比較。在1μM未標(biāo)記納曲吲哚的存在下測(cè)定非特異性結(jié)合。叔丁啡二聚體的生物學(xué)活性為7.6nM(IC50)和2.87(Ki)。相對(duì)于μ和κ阿片受體，二聚體具有弱δ受體親合力。實(shí)施例5-受體刺激活性μ阿片受體激動(dòng)劑和拮抗劑功能試驗(yàn)：表達(dá)人μ受體中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO-hMOR)細(xì)胞膜的[35S]GTPγS結(jié)合試驗(yàn)本實(shí)施例說明本發(fā)明提供的叔丁啡二聚體刺激μ-阿片受體-介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。簡(jiǎn)而言之，從受體生物公司(BaltimoreMd)購(gòu)買CHO-hMOR細(xì)胞膜。將約10mg/ml膜蛋白懸浮于10mMTRIS-HCl(pH7.2,2mMEDTA,10％蔗糖)，懸浮液保持在冰上。1毫升膜加入15mL冷結(jié)合分析緩沖液，其包含50mMHEPES,pH7.6,5mMMgCl2,100mMNaCl,1mMDTT和1mMEDTA。膜懸浮液采用勻漿器進(jìn)行均質(zhì)，并在3000rpm離心10分鐘。然后在18000rpm離心上清20分鐘。采用勻漿器將沉淀重懸于10毫升分析緩沖液。于25℃，在分析緩沖液中，膜與小麥胚芽凝集素包被的SPA珠(阿莫仙Amersham)一起預(yù)孵育45分鐘。然后在分析緩沖液中，將偶聯(lián)有膜(10μg/ml)的SPA珠(5mg/ml)和0.5nM[35S]GTPγS進(jìn)行孵育。基線結(jié)合是在沒有加入測(cè)試化合物的情況下發(fā)生的結(jié)合，這個(gè)未調(diào)節(jié)的結(jié)合被認(rèn)為是100％，激動(dòng)劑刺激結(jié)合升高至明顯高于該值的水平。一系列濃度范圍的受體激動(dòng)劑SNC80被用來刺激[35S]GTPγS結(jié)合。在不存在激動(dòng)劑下，測(cè)試基線和非特異性結(jié)合兩者，非特異性結(jié)合檢測(cè)包括10μM未標(biāo)記的GTPγS。通過采用D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-Thr-NH2(CTOP)作為標(biāo)準(zhǔn)品，評(píng)價(jià)其抑制激動(dòng)劑刺激的GTPγS結(jié)合的潛力，從而測(cè)試叔丁啡二聚體作為拮抗劑的功能。采用帕卡德計(jì)數(shù)器量化放射性。計(jì)算以下參數(shù)：％刺激＝[(測(cè)試化合物cpm-非特異性cpm)/(基線cpm–非特異性cpm)]×100％抑制＝(％由1μMSNC80刺激-％在測(cè)試化合物存在下由1μMSNC80刺激)×100/(％由1μMSNC80刺激-100)。采用GraphPadPrism計(jì)算EC50。測(cè)試化合物的圖示于圖11和12。結(jié)果：圖11示出的數(shù)據(jù)表明，叔丁啡二聚體是有效的μ激動(dòng)劑。結(jié)果也表明，在10-6M(～1μg)時(shí)，二聚體的阿片μ受體活性與叔丁啡類似。圖12的數(shù)據(jù)表明，叔丁啡二聚體不能作為μ-拮抗劑。實(shí)施例6體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究在這些動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)研究使用的動(dòng)物為CD-1小鼠(約35克，n＝3，每個(gè)時(shí)間點(diǎn))。測(cè)試的藥物是叔丁啡和叔丁啡二聚體。劑量10毫克/千克靜脈內(nèi)和口服給予。在時(shí)間0時(shí)，30分鐘和1、2、6和24小時(shí)收集血液。獲得血漿后，如下通過LC/MS/MS分析藥物血液樣本。采用摻入任一試驗(yàn)藥物(10-25000nM)的小鼠血漿，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用包含作為內(nèi)標(biāo)的氯沙坦或叔丁啡-d4的300μL乙腈萃取血漿樣本(50μL)。于4℃在16000xg離心提取物5分鐘。將上清轉(zhuǎn)移至新管并在45℃在氮?dú)庀赂稍?小時(shí)。采用100μL的30％乙腈重構(gòu)樣本，渦旋并離心。將上清(90μL)轉(zhuǎn)移至LC小瓶，將10μL注入LC/MS。結(jié)果：圖13描述了10mg口服和靜脈內(nèi)給藥后二聚體的血漿濃度曲線。曲線圖表明，口服和靜脈內(nèi)給藥后如濃度曲線下面積比所測(cè)定的，二聚體的絕對(duì)生物利用度為1％或更小，而單體為約30％。實(shí)施例7體內(nèi)試驗(yàn)：應(yīng)激誘導(dǎo)的糞便量研究中采用的動(dòng)物是雄性CD-1小鼠，平均體重約30至35克，每劑量組平均5只小鼠。小鼠通常裝在群籠中，其中在聚碳酸酯籠中每籠3只，隨意飲食和飲水。在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，運(yùn)送小鼠到操作室，在試驗(yàn)化合物灌胃后，它們被單獨(dú)放在配備有金屬絲網(wǎng)的20厘米寬×20厘米深×15厘米高的籠子里。在測(cè)試過程中，動(dòng)物隨意飲食和飲水。以金屬絲網(wǎng)為底的高籠，產(chǎn)生誘導(dǎo)小鼠應(yīng)激的新環(huán)境。以小時(shí)為單位檢測(cè)排泄顆粒的數(shù)量。結(jié)果示于圖14。結(jié)果：圖14顯示，二聚體口服給藥相對(duì)于空白劑(載體)顯著地降低小鼠糞便量。研究的劑量為每千克小鼠25毫克和50毫克。即使從分析中去除表明極端敏感性零糞便量的動(dòng)物，結(jié)果也不發(fā)生變化。圖15顯示小鼠糞便量隨劑量發(fā)生降低，這標(biāo)志真正的藥理作用。體內(nèi)試驗(yàn)：對(duì)炎癥后改變的GI通過時(shí)間的影響設(shè)計(jì)本試驗(yàn)以檢測(cè)測(cè)試物質(zhì)對(duì)胃腸過敏伴隨炎癥的影響。通過注射新打開的芥末油(95％純異硫氰酸烯丙酯，0.5％在乙醇中)，誘導(dǎo)雄性CD-1小鼠炎癥后改變的GI運(yùn)送。給藥后，檢測(cè)炎癥后改變的GI段應(yīng)激效果3-4周。在該點(diǎn)，GI段處于高度敏感的狀態(tài)，即，對(duì)刺激具有顯著更大的響應(yīng)(痛覺過敏)?？诜o藥(灌胃)并通過將動(dòng)物放入配有金屬絲網(wǎng)底的籠(20厘米寬×20厘米深×15厘米高)內(nèi)，使動(dòng)物經(jīng)受環(huán)境應(yīng)激后，檢測(cè)測(cè)試物質(zhì)的效果。在測(cè)試過程中，動(dòng)物隨意飲食和飲水。以金屬絲網(wǎng)為底的高籠，產(chǎn)生誘導(dǎo)小鼠應(yīng)激的新環(huán)境。每小時(shí)到每?jī)尚r(shí)檢測(cè)排泄顆粒的數(shù)量。見圖16。結(jié)果：如圖16所示，在25毫克/千克情況下，根據(jù)糞便量測(cè)定，叔丁啡二聚體顯著地降低了該模型胃腸蠕動(dòng)。該圖還示出，沒有用芥子油處理的小鼠糞便顆粒量是短暫的，持續(xù)時(shí)間不超過1小時(shí)。芥子油處理動(dòng)物的顆粒排泄的增加，持續(xù)了甚至2小時(shí)。甚至在2小時(shí)，二聚體繼續(xù)抑制胃腸蠕動(dòng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著結(jié)果。實(shí)施例8納洛酮和納曲酮二聚體鹽酸鹽如圖2所示，合成納洛酮二聚體鹽酸鹽。中間體的合成3：將納洛酮(5.0g,15.27毫摩爾,1當(dāng)量)和碳酸鉀(6.32g,45.8毫摩爾,3當(dāng)量)加入500-mL三口圓底燒瓶，隨后加入無水DMF(50ml,10體積)。將混合物加熱至60攝氏度并通過注射器加入1,2-二溴乙烷(6.57mL,76.35毫摩爾,5當(dāng)量)至反應(yīng)混合物。在110攝氏度攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。TLC分析顯示大部分中間體3。反應(yīng)完成后，用水(150mL,30體積)稀釋混合物，用乙酸乙酯(100mL,20體積)萃取。用乙酸乙酯(100毫升)萃取水層。用鹽水(100毫升)洗滌合并的有機(jī)部分，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。通過硅膠色譜采用0-5％MeOH/DCM純化粗產(chǎn)物，從而獲得中間體3，為粘性油(1.25g)。中間體的合成4：將中間體3(1.25g,2.87毫摩爾)和碳酸鉀(1.59g,11.52毫摩爾,4當(dāng)量)加入含化合物1(0.57g，在15mLDMF中)的三口圓底燒瓶。將混合物在60℃加熱，并通過TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。將混合物冷卻至室溫，用水稀釋，并用乙酸乙酯萃取(50毫升×2)。將合并的有機(jī)相部分經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，從而獲得黃色漿狀物。通過硅膠色譜用0-4％MeOH/DCM純化粗產(chǎn)物，從而獲得納洛酮二聚體4，為淺白色固體(0.55g)。納洛酮二聚體鹽酸鹽5的合成:在氮?dú)庀?，于室溫，?.5g(0.8毫摩爾)雙共軛物4溶于10mL乙酸乙酯。室溫滴加0.8ml(3.2毫摩爾,4.0當(dāng)量)二氧六環(huán)中的4MHCl。在室溫下再攪拌反應(yīng)混合物一小時(shí)，過濾獲得固體。進(jìn)一步用20mLMTBE洗滌固體并真空干燥，從而獲得白色固體(0.5g)。在235Nm，HPLC分析表明純度98.2％(AUC)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):1.41-1.63(m,4H,CH2),1.98(d,2H,CH2),2.14(d,2H,CH2),2.63(dt,2H,CH2),2.88-3.19(m,6H,CH2),3.26-3.44(m,6H,CH2),3.62(d,2H,CH),3.72-3.84(m,2H,CH2),3.85-3.98(m,2H,CH),4.41(dd,4H,CH2),5.09(s,2H,OH),5.58(dd,4H,CH2),5.82-6.02(m,2H,CH),6.78(d,2H,Ar),6.90(d,2H,Ar),9.42(s,2H,NHCl).用摩爾當(dāng)量的納曲酮代替納洛酮，類似地合成納曲酮二聚體鹽酸鹽，如圖3所示。實(shí)施例9納洛酮二聚體的代謝穩(wěn)定性采用與實(shí)施例3所述的叔丁啡二聚體實(shí)驗(yàn)類似的方案，考察納洛酮二聚體的代謝穩(wěn)定性。約1μM二聚體與人肝微粒體(1mg蛋白/ml)孵育至多1小時(shí)。通過LC/MS/MS測(cè)試孵育介質(zhì)，以分析納洛酮隨時(shí)間的形成情況。如圖17所示，隨時(shí)間進(jìn)展，沒有形成納洛酮的證據(jù)。實(shí)施例10納洛酮二聚體的應(yīng)激穩(wěn)定性于室溫，在未處理的自來水和在酸(1NHCl)或堿(5％碳酸氫鈉水溶液)存在下，評(píng)估納洛酮二聚體穩(wěn)定性。方案與實(shí)施例3描述的叔丁啡二聚體的應(yīng)激穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)類似。在那些條件下，二聚體是相對(duì)穩(wěn)定的，并且在這些條件下沒有可檢出的降解形成納洛酮，如圖18所示。實(shí)施例11納洛酮二聚體鹽酸鹽的μ受體結(jié)合試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)從而檢測(cè)通過納洛酮(10-10,10-9,19-8,10-7,10-6及10-5mol/L)和納洛酮二聚體(10-10,10-9,10-8,10-7,10-6及10-5mol/L)，對(duì)示蹤物DAMGO([酪氨酰-3,5-3H(N)]-[D-Ala2,N-Me-Phe,Gly5-ol]-腦啡肽乙酸酯)對(duì)大鼠阿片μ受體的抑制作用。在25℃下，溫育試驗(yàn)材料60分鐘。采用先前結(jié)合到[3H]N-DAMGO人μ阿片受體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。DAMGO是對(duì)人μ阿片受體具有高親和性的肽。隨著納洛酮或納洛酮二聚體的濃度增加，它逐漸取代與受體結(jié)合的DAMGO，從而導(dǎo)致曲線的斜率下降，如圖19所示。納洛酮、納洛酮二聚體和其他類似拮抗劑的結(jié)合親合力在表1中提供。表1實(shí)施例12納洛酮二聚體鹽酸鹽的便秘試驗(yàn)納洛酮二聚體逆轉(zhuǎn)阿片μ激動(dòng)劑洛哌丁胺的便秘效果，如圖20所示。在該研究中，一組小鼠進(jìn)行溫和的應(yīng)激，這通常導(dǎo)致腹瀉和腸胃蠕動(dòng)，其中通過每小時(shí)排泄糞粒的數(shù)量測(cè)定。采用洛哌丁胺處理的組排泄糞粒的數(shù)量明顯少于對(duì)照(載體)動(dòng)物每小時(shí)排泄的糞粒。該結(jié)果證實(shí)了洛哌丁胺的便秘影響。在通過納洛酮二聚體逆轉(zhuǎn)洛哌丁胺效果的組中，經(jīng)3小時(shí)或更久，每小時(shí)排出糞粒的數(shù)量多于洛哌丁胺處理的動(dòng)物排出的糞粒，并與對(duì)照動(dòng)物的排泄顆粒相當(dāng)。結(jié)果表明，納洛酮二聚體有效逆轉(zhuǎn)了人μ阿片激動(dòng)劑洛哌丁胺的便秘影響。納洛酮二聚體提供了優(yōu)于納洛酮、納曲酮、聚乙二醇化納洛酮和甲基納曲酮的顯著益處，因?yàn)轭A(yù)期對(duì)胃腸道受體起作用而不會(huì)被吸收，從而可通常治療阿片腸紊亂和特別治療阿片誘導(dǎo)的便秘。納洛酮二聚體還可以找到其他的治療用途，如治療腹脹，降低胃蠕動(dòng)，腹部絞痛和GERD(胃食管反流病)。實(shí)施例13去甲文拉法辛二聚體鹽酸鹽如圖4所示合成化合物。化合物2的合成.在60℃，在無水碳酸鉀(3當(dāng)量)存在下，DMF中的化合物1(1當(dāng)量)與1,2-二溴乙烷(2當(dāng)量)反應(yīng)15小時(shí)。TLC分析表明原料化合物完全消耗。采用MTBE稀釋混合物并用水洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，獲得純產(chǎn)物2。產(chǎn)率：61％。化合物3的合成.在5℃，將化合物2(1當(dāng)量)加至甲醇(5當(dāng)量)中的甲醇鈉，并在0-5℃攪拌2小時(shí)。加入環(huán)己酮(2.5當(dāng)量)并在0-5℃攪拌混合物4小時(shí)。采用飽和氯化銨溶液淬滅反應(yīng)混合物，并濃縮。得到的殘留物溶于乙酸乙酯和水。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，獲得純產(chǎn)物3。產(chǎn)率：74％?；衔?的合成.將雷尼鎳(30wt％)加入化合物3(1當(dāng)量)在乙酸(6體積)中的混合物。用氫氣(30psi)吹掃混合物，然后在55℃在140-150psi下攪拌3小時(shí)，然后冷卻至室溫。通過硅藻土墊過濾混合物，濃縮濾液。將殘余物溶于水中，并用MTBE洗滌，以除去任何未反應(yīng)的物質(zhì)。產(chǎn)物用碳酸氫鹽溶液中和后，用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過濾和濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，獲得純產(chǎn)物4。產(chǎn)率：85％?；衔?的合成.將37-40％甲醛(12當(dāng)量)和甲酸(6當(dāng)量)加入攪拌的4(1當(dāng)量)的水溶液，將反應(yīng)混合物在100℃下加熱22小時(shí)，然后冷卻至室溫。用MTBE洗滌混合物然后用20％的NaOH溶液堿化至pH8-9。將有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，獲得純產(chǎn)物5。將產(chǎn)物溶于乙酸乙酯中，并加入2N鹽酸的乙酸乙酯溶液。攪拌漿液30分鐘，過濾并干燥，得到產(chǎn)物5。產(chǎn)率：79％。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):0.96-1.58(m,20H,CH2),2.62(s,12H,CH3),2.94(dd,2H,CH),3.45(dd,2H,CH),3.63(dd,2H,CH),4.22(s,2H,OH),4.36(t,4H,CH2),6.76(d,4H,Ar),7.06(d,4H,Ar)。實(shí)施例14對(duì)乙酰氨基酚二聚體如圖5所示合成化合物。中間體3的合成：在三口圓底燒瓶?jī)?nèi)，將對(duì)乙酰氨基酚(1當(dāng)量)和碳酸鉀(4當(dāng)量)溶于無水DMF(10體積)中。將混合物加熱至60攝氏度并加入1,2-二溴乙烷(4當(dāng)量)。在60℃攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)，TLC分析表明對(duì)乙酰氨基酚被消耗。采用MTBE稀釋混合物，冷卻至10℃并用水洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，獲得純產(chǎn)物3。產(chǎn)率：65％。化合物4的合成:將化合物3(1當(dāng)量)、對(duì)乙酰氨基酚(1.2當(dāng)量)和碳酸鉀(3當(dāng)量)溶于無水DMF(10體積)中，并在60℃加熱混合物并攪拌14小時(shí)。TLC分析顯示中間體3被消耗。采用MTBE稀釋混合物并在15-20℃用水洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，獲得純產(chǎn)物4。產(chǎn)率：78％。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):2.14(s,6H,CH3),4.38(t,4H,CH2),6.80(d,4H,Ar),7.44(d,4H,Ar),9.15(s,2H,NH)。實(shí)施例15沙丁胺醇二聚體如圖6所示合成化合物?；衔?的合成.在室溫下，在DCM中10摩爾％PPTS存在下，化合物1(1當(dāng)量)與1.2當(dāng)量二氫吡喃反應(yīng)。通過TLC分析監(jiān)測(cè)反應(yīng)。用碳酸氫鹽溶液洗滌反應(yīng)混合物，有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。粗產(chǎn)物2不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。產(chǎn)率：95％?；衔?的合成.在室溫下，采用1.2當(dāng)量氯化鋁處理DCM中的化合物2(1當(dāng)量)，隨后滴加氯乙酰氯(1.5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，TLC分析表明原料完全消耗。用碳酸氫鹽溶液淬滅反應(yīng)混合物。將有機(jī)相分離并用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物3，得到純產(chǎn)物3。產(chǎn)率：72％?；衔?的合成.在室溫下，化合物3(1當(dāng)量)與THF中的2當(dāng)量丁胺反應(yīng)。15小時(shí)后TLC分析表明原料完全消耗。濃縮反應(yīng)混合物，殘余物通過硅膠色譜純化，得到純產(chǎn)物4。產(chǎn)率：96％。化合物5的合成.化合物4(1當(dāng)量)溶解于THF并冷卻至0℃。逐滴加入THF中的氫化鋁鋰(LAH)(1當(dāng)量)，并在室溫下攪拌混合物3小時(shí)。TLC分析顯示原料被消耗。加入飽和硫酸鈉水溶液，直至形成白色沉淀物。過濾固體并在減壓下濃縮濾液，得到產(chǎn)物5。產(chǎn)率(78％)?；衔?的合成.在室溫下，DCM中的化合物5(1當(dāng)量)先采用1.2當(dāng)量Boc-酸酐處理，接著用飽和碳酸氫鈉溶液(2當(dāng)量)處理。將反應(yīng)混合物攪拌15小時(shí)，TLC分析顯示原料完全消耗。分離有機(jī)相并濃縮，得到產(chǎn)物6。產(chǎn)率(94％)?；衔?的合成.采用咪唑(1.5當(dāng)量)隨后用TBDMSCl(1.2當(dāng)量)處理DCM中的化合物6(1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，TLC分析顯示原料完全消耗。將水加至反應(yīng)混合物并分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物從而獲得純產(chǎn)物7。產(chǎn)率：85％。化合物8的合成.在60℃將7:3乙酸/水中的化合物7(1當(dāng)量)加熱10小時(shí)。TLC分析顯示原料完全消耗。濃縮混合物，溶于MTBE，并用碳酸氫鹽溶液洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物從而獲得純產(chǎn)物8。產(chǎn)率：68％。化合物9的合成.在60℃，在無水碳酸鉀(3當(dāng)量)存在下，DMSO中的化合物8(1當(dāng)量)與1,2-二溴乙烷(5當(dāng)量)反應(yīng)15小時(shí)。TLC分析顯示原料完全消耗。采用MTBE稀釋混合物并用水洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物從而獲得純產(chǎn)物9。產(chǎn)率：62％?；衔?0的合成.在50℃，在無水碳酸鉀(2當(dāng)量)存在下，DMSO中的化合物9(1當(dāng)量)與化合物8(1.2當(dāng)量)反應(yīng)15小時(shí)。TLC分析顯示原料化合物9完全消耗。采用MTBE稀釋混合物并用水洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物從而獲得純產(chǎn)物10。產(chǎn)率：74％?；衔?1的合成.在室溫下，MTBE中的化合物10(1當(dāng)量)與乙酸乙酯中2NHCl(10當(dāng)量)反應(yīng)12小時(shí)。TLC分析顯示原料化合物完全消耗伴隨固體沉淀。過濾沉淀并用乙酸乙酯研磨，從而獲得產(chǎn)物11。產(chǎn)率：88％。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):1.04(s,18H,CH3),2.57(d,4H,CH2),4.42(t,2H,CH),4.45(t,4H,CH2),4.49(s,4H,CH2),4.63(s,6H,OH和NH),6.71(d,2H,Ar),7.01(d,2H,Ar),7.29(s,2H,Ar)。實(shí)施例16說明性的藥物組合物表2中的藥物組合物可以用于本發(fā)明二聚體的口服片劑。表2成分％w/w二聚體2乳糖83.6膠體二氧化硅0.67微晶纖維素10交聯(lián)羧甲基纖維素納3.4硬脂酸鎂0.33實(shí)施例17說明性劑量可施用于患者的本發(fā)明所提供的二聚體的劑量，是相當(dāng)廣泛可變的，并且可經(jīng)保健醫(yī)生確定。劑量可能根據(jù)受治者的年齡、體重和身體狀況以及給藥的類型適當(dāng)改變。在一實(shí)施方式中，一個(gè)劑量是每天給予。在任何給定的情況下，施用本發(fā)明提供二聚體的量將取決于多種因素，例如活性成分的溶解度、所使用的制劑和給藥途徑。所謂“治療有效劑量”是指在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著數(shù)目患者中產(chǎn)生可觀和有益效果的劑量。在一些實(shí)施方式中，患者是哺乳動(dòng)物。在更具體的實(shí)施方式中，患者是人。在某些具體的實(shí)施方式中，患者可以是馴養(yǎng)的哺乳動(dòng)物如狗，貓，或馬。例如，對(duì)于IBS-D患者，優(yōu)選的劑量是在用于口服的單位劑量中，約0.15mg/kgIBS-D患者體重至約7.2mg/kg患者體重，更優(yōu)選約0.7mg/kgIBS-D患者體重至約3.0mg/kg患者體重，還更優(yōu)選約1.5mg/kg患者體重?；蛘撸s10-約500mg，優(yōu)選約50-約200mg，更優(yōu)選約100mg，被給藥于IBS-D患者。在表3中，我們提供本發(fā)明二聚體對(duì)優(yōu)選適應(yīng)癥的推定劑量，并與用于其適應(yīng)癥的單體劑量相比較。二聚化在擴(kuò)展這些活性劑范圍的變革效果，在表中可明顯看出。表3單體適應(yīng)癥劑量二聚體適應(yīng)癥二聚體劑量叔丁啡阿片上癮2-32mg/SLIBS-D50-200mgPO納洛酮阿片濫用0.5-2mgIV/SC阿片誘導(dǎo)的便秘100-200mgPO納曲酮阿片濫用50mgPO阿片誘導(dǎo)的便秘100-200mgPO去甲文拉法辛抗抑郁劑50mgPO胃輕癱、便秘、腸梗阻50-200mgPO沙丁胺醇支氣管痙攣50mgIN支氣管痙攣5-10mgPO對(duì)乙酰氨基酚鎮(zhèn)痛500mgsPO肝臟安全鎮(zhèn)痛500-1000mgPO可以理解的是本文描述的實(shí)施例和實(shí)施方式僅用于說明目的，各種明顯修改或改變將被建議給本領(lǐng)域的技術(shù)人員并且被包括在本申請(qǐng)的精神和范圍以及所附的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。如果在先申請(qǐng)和本申請(qǐng)間存在沖突到一定程度，那么以本申請(qǐng)優(yōu)先來消除任何不一致之處。本文引用的所有出版物和專利通過引用以其整體為所有目的并入本文。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3