本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域；具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及新型的蝶啶酮衍生物，其合成方法及其作為flt3抑制劑在制備腫瘤、免疫性疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase)是一類催化atp上γ-磷酸轉(zhuǎn)移到蛋白特定氨基酸殘基上的蛋白，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中占有非常重要的地位，并且調(diào)節(jié)著細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、死亡等一系列生理過(guò)程。已有資料表明，超過(guò)50％的原癌基因及其產(chǎn)物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞生命周期的紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。此外，酪氨酸激酶的異常表達(dá)還與腫瘤的轉(zhuǎn)移、化療抗性等密切相關(guān)。

fms樣酪氨酸激酶3(fms-liketyrosinekinase3，flt3)屬于iii型受體酪氨酸激酶家族，flt3在造血細(xì)胞的增殖、分化及凋亡過(guò)程中起著重要作用(oncogene,1993,8,815-822)。flt3與flt3配體結(jié)合之后，激活多個(gè)下游信號(hào)通路，包括stat5、ras/mapk及pi3k/akt通路。在大約三分之一的急性髓細(xì)胞白血病(acutemyeloidleukemia，aml)患者中存在flt3突變(blood,2002,100,1532-1542)，包括近膜結(jié)構(gòu)域14和(或)15號(hào)外顯子的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)序列(flt3-itd)突變、酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的激活環(huán)中氨基酸的缺失或插入(flt3-tkd)突變。此外，在急性白血病病例中存在flt3高表達(dá)現(xiàn)象(blood,2004,103,1901)，flt3的過(guò)表達(dá)、flt3-itd突變及flt3-tkd突變均會(huì)導(dǎo)致aml患者預(yù)后不良。因此，flt3成為aml治療的重要靶標(biāo)。到目前為止，尚無(wú)flt3抑制劑被批準(zhǔn)用于臨床使用，眾多處于臨床試驗(yàn)階段的flt3抑制劑的臨床效果仍不夠理想。

因此，提高小分子激酶抑制劑臨床有效率正成為當(dāng)前抗腫瘤靶向藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，最有前景的策略即為，開(kāi)發(fā)同時(shí)靶向多個(gè)與疾病(腫瘤)發(fā)生相關(guān)的激酶的多靶點(diǎn)抑制劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種能夠抑制flt3的化合物，所述化合物或含有所述化合物的藥物組合物能夠用于制備治療flt3介導(dǎo)的疾病或抑制flt3的藥物。

在第一方面，本發(fā)明涉及一種具有通式i所示結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

式中，

x選自：n、ch；

y選自：o、s和se；

a選自各種取代的苯環(huán)、含氮五元環(huán)、含氮六元環(huán)，例如

r¹獨(dú)立選自：氫、鹵素、c1-c8烷基、c3-c6環(huán)烷基、含氟c1-c8烷基、任選取代的苯基；

r²選自：氫、任選取代的c1-c6烷基、鹵素、任選取代的c1-c6烷氧基、氨基、-nrarb、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的n-烷基哌嗪-1-基、任選取代的嗎啉-4-基、任選取代的哌啶-1-基、任選取代的吡咯-1-基、任選取代的吡咯烷-1-基、任選取代的芳基或任選取代的芳基甲基、任選取代的哌啶基氧基、任選取代的n,n',n'-三烷基乙二胺基；

ra和rb各自獨(dú)立選自：氫、c1-c6烷基和鏈烯基；和

n為0、1、2、3或4；

r³各自獨(dú)立選自：氫、鹵素、羥基、氨基、-nrcrd、c1-c2?；被⑷芜x取代的c1-c6烷基、c1-c3磺?；被?、cn、氨基甲酰基、羧基、c1-c6烷氧甲?；⑷芜x取代的苯基、任選取代的哌嗪基、任選取代的嗎啉-4-基、任選取代的吡咯-1-基、任選取代的吡咯烷-1-基；

rc和rd各自獨(dú)立選自：氫、c1-c6烷基和鏈烯基；和

m為0、1、2、3或4；

其中，當(dāng)n和m均為1時(shí)，且r²為c1-c6烷氧基時(shí)，r³不為氨基。

在具體的實(shí)施方式中，所述化合物具有通式ii所示結(jié)構(gòu)：

式中，

a選自各種取代的苯環(huán)；

r¹為氫；

r²選自：氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的c1-c6烷氧基、鹵素、氨基、-nrarb、任選取代的哌嗪基、任選取代的n-烷基哌嗪-1-基、任選取代的哌啶基氧基；

ra和rb各自獨(dú)立選自：氫、c1-c6烷基和鏈烯基；和

n為1、2、或3；

r³各自獨(dú)立選自：氫、鹵素、c1-c2?；被⒘u基、氨基、-nrcrd、甲磺酰氨基、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的哌嗪基；

rc和rd各自獨(dú)立選自：氫、c1-c3烷基和鏈烯基；和

m為1、2、或3。

在具體的實(shí)施方式中，所述化合物具有通式iii所示結(jié)構(gòu)：

式中，

r⁴選自：氫、鹵素、任選取代的c1-c6烷氧基、任選取代的c1-c6烷基；

r⁵選自：任選取代的n-烷基哌嗪-1-基、任選取代的哌啶基氧基；

r⁶選自：氨基、任選取代的哌嗪基、-nrerf；

re和rf各自獨(dú)立選自：氫、c1-c3烷基和鏈烯基。

在具體的實(shí)施方式中，r⁴選自任選取代的c1-c6烷基，優(yōu)選c1-c3烷基；r⁵ 選自任選取代的n-烷基哌嗪-1-基；r⁶選自氨基、或-nrerf；re和rf各自獨(dú)立選自氫、和c1-c3烷基。

在第二方面，本發(fā)明提供選自下組的具體化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

在第三方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，所述藥物組合物含有本發(fā)明第一或第二方面所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

在第四方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一或第二方面所述的化合物在制備治療flt3介導(dǎo)的疾病，或抑制flt3的藥物中的用途。

在具體的實(shí)施方式中，所述flt3介導(dǎo)的疾病為血液病，如骨髓增殖性疾病，癌癥，免疫性疾病，以及皮膚病，如銀屑病和特應(yīng)性皮炎。

在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，所述癌癥選自急性骨髓性白血病(aml)、混合系白血病(mll)、t-細(xì)胞急性白血病(t-all)、b細(xì)胞急性白血病(b-all)、慢性骨髓單細(xì)胞性白血病(cmml)、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性中性粒細(xì)胞白血病。

在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，所述免疫性疾病選自關(guān)節(jié)炎、狼瘡、炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病、青少年關(guān)節(jié)炎、 糖尿病、重癥肌無(wú)力癥、橋本甲狀腺炎、奧德甲狀腺炎、格雷夫斯病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎綜合征、多發(fā)性硬化癥、傳染性神經(jīng)元炎、急性傳播性腦脊髓炎、阿狄森病、再生障礙性貧血、自身免疫性肝炎、視神經(jīng)炎、銀血病、移植物抗宿主病、移植、輸血過(guò)敏反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、i型超敏反應(yīng)、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附圖說(shuō)明

圖1a顯示了用westernblot分析法測(cè)定到化合物f-8可以使flt3自磷酸化并抑制下游信號(hào)通路的磷酸化作用；圖1b顯示了通過(guò)48小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)，在不同濃度下化合物20誘導(dǎo)的mv4-11細(xì)胞凋亡；圖1c顯示了在48小時(shí)培養(yǎng)后，用特定濃度的化合物20來(lái)抑制g1期的細(xì)胞生長(zhǎng)；

圖2顯示了mv4-11移植瘤模型中的腫瘤體積變化；

圖3顯示了mv4-11移植瘤模型中的腫瘤重量變化。

具體實(shí)施方式

發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，出乎意料地發(fā)現(xiàn)一批結(jié)構(gòu)全新的蝶啶酮衍生物，這些衍生物對(duì)flt3的抑制活性ic50值達(dá)到nm級(jí)別；對(duì)相關(guān)細(xì)胞的抑制活性ic50值達(dá)到μm級(jí)別。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。

本發(fā)明人合成了一系列具有flt3抑制活性的未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的蝶啶酮衍生物，并對(duì)這些化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。對(duì)此系列化合物進(jìn)行了分子水平和細(xì)胞水平的活性測(cè)試，得到一批具有抑制flt3活性的化合物。其中多個(gè)化合物，例如f-8和f-16對(duì)flt3的抑制活性ic50值低于10nm，遠(yuǎn)優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照mln518。

術(shù)語(yǔ)定義

對(duì)于本文中涉及到的一些術(shù)語(yǔ)作如下說(shuō)明：

本文中，“烷基”指碳鏈長(zhǎng)度為1-10個(gè)碳原子的飽和的支鏈或直鏈烷基，優(yōu)選的烷基包括長(zhǎng)2-8個(gè)碳原子、1-6個(gè)、1-4個(gè)碳原子、3-8個(gè)碳原子、1-3個(gè)碳 原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、庚基等。本發(fā)明的烷基可以被1個(gè)或多個(gè)取代基取代，例如被鹵素或鹵代烷基取代。例如，烷基可以是被1-4個(gè)氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。

本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。優(yōu)選的烷氧基是長(zhǎng)1-6個(gè)碳原子的烷氧基，更優(yōu)選為長(zhǎng)1-4個(gè)碳原子的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基等。

本文中，“鏈烯基”通常表示具有至少一個(gè)雙鍵的單價(jià)烴基，通常含有2-8個(gè)碳原子，優(yōu)選含有2-6個(gè)碳原子，可以是直鏈或支鏈。鏈烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、己烯基等等。

本文中，“鹵素原子”或“鹵素”指氟、氯、溴和碘。

“芳基”是指含有6到14個(gè)碳原子的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)芳族基團(tuán)，包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、茀基、四氫化萘基、二氫化茚基等。芳基可任選地被1-5個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))選自以下的取代基取代：鹵素、c1-4醛基、c1-6烷基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、鹵素取代的烷基(例如三氟甲基)、鹵素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、c1-4烷氧基、乙氧甲?；?、n(ch3)和c1-4?；取㈦s環(huán)基或雜芳基等。

本文中，“芳烷基”指被芳基取代的烷基，例如被苯基取代的c1-c6烷基。芳烷基的例子包括但不限于芳基甲基、芳基乙基等，例如芐基、苯乙基等。

例如，芳基可以被1-3個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、-oh、c1-4烷氧基、c1-4烷基、-no2、-nh2、-n(ch3)2、羧基和乙氧甲?；取?/p>

本文所用的“5元或6元雜環(huán)”包括但不限于含有1-3個(gè)選自o、s和n的雜原子的雜環(huán)基團(tuán)，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基、嗎啉基等。

本文所用“雜芳基”是指含有5-14個(gè)環(huán)原子，并且有6個(gè)、10個(gè)或14個(gè)電子在環(huán)體系上共用。而且所含環(huán)原子是碳原子和從氧、氮、硫中任選的1-3個(gè)雜原子?？捎糜诒景l(fā)明的雜芳基包括哌嗪基、嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、包括但不限制于2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。

雜芳基或5元或6元雜環(huán)可任選地被1-5個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))選自以下的取代基取代：鹵素、c1-4醛基、c1-6直鏈或支鏈烷基、氰基、硝基、氨基、 羥基、羥甲基、鹵素取代的烷基(例如三氟甲基)、鹵素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、c1-4烷氧基、乙氧甲?；(ch3)和c1-4?；?/p>

本文中，“酰氧基”指結(jié)構(gòu)式為“-o-c(o)-r”的基團(tuán)，其中，r可選自烷基、鏈烯基和炔基。所述r可任選地被取代。

本文中，“酰氨基”指結(jié)構(gòu)式為“-r’-nh-c(o)-r”的基團(tuán)，其中，r’可選自鍵或烷基，r可選自烷基、鏈烯基、炔基、被nrarb取代的烷基、被nrarb取代的鏈烯基和nrarb取代的炔基、被鹵素取代的烷基、被氰基取代的鏈烯基、其中，ra和rb可選自烷基和鏈烯基。

本文中，“任選取代的”指其所修飾的取代基可任選地被1-5個(gè)(例如，1、2、3、4或5個(gè))選自以下的取代基取代：鹵素、c1-4醛基、c1-6直鏈或支鏈烷基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、鹵素取代的烷基(例如三氟甲基)、鹵素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、c1-4烷氧基、乙氧甲酰基、n(ch3)和c1-4?；?。

本發(fā)明的化合物

本發(fā)明的化合物是具有通式i所示結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

式中，

x選自n、ch；

y選自o、s和se；

a選自各種取代的苯環(huán)、含氮五元環(huán)、含氮六元環(huán)，例如

r¹獨(dú)立選自氫、鹵素、c1-c8烷基、c3-c6環(huán)烷基、含氟c1-c8烷基、任選取代的苯基；

r²選自氫、任選取代的c1-c6烷基、鹵素、任選取代的c1-c6烷氧基、氨基、-nrarb、羧基、任選取代的烷氧甲?；?、任選取代的n-烷基哌嗪-1-基、任選取 代的嗎啉-4-基、任選取代的哌啶-1-基(優(yōu)選哌嗪取代的哌啶-1-基)、任選取代的吡咯-1-基、任選取代的吡咯烷-1-基、任選取代的芳基或任選取代的芳基甲基、任選取代的哌啶基氧基、任選取代的n,n',n'-三烷基乙二胺基；

ra和rb各自獨(dú)立選自氫、c1-c6烷基和鏈烯基；和

n為0、1、2、3或4；

r³各自獨(dú)立選自氫、鹵素、羥基、氨基、-nrcrd、c1-c2?；被⑷芜x取代的c1-c6烷基、c1-c3磺?；被n、氨基甲?；?、羧基、c1-c6烷氧甲?；?、任選取代的苯基、任選取代的哌嗪基、任選取代的嗎啉-4-基、任選取代的吡咯-1-基、任選取代的吡咯烷-1-基；

rc和rd各自獨(dú)立選自：氫、c1-c6烷基和鏈烯基；和

m為0、1、2、3或4；

其中，當(dāng)n和m均為1時(shí)，且r²為c1-c6烷氧基時(shí)，r³不為氨基。

在具體的實(shí)施方式中，所述化合物具有通式ii所示結(jié)構(gòu)：

式中，

a選自各種取代的苯環(huán)；

r¹為氫；

r²選自氫、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的c1-c6烷氧基、鹵素、氨基、-nrarb、任選取代的哌嗪基、任選取代的n-烷基哌嗪-1-基、任選取代的哌啶基氧基；

ra和rb各自獨(dú)立選自氫、c1-c6烷基和鏈烯基；和

n為1、2、或3；

r³各自獨(dú)立選自氫、鹵素、c1-c2?；被?、羥基、氨基、-nrcrd、c1-c3磺?；被?優(yōu)選甲磺酰氨基)、任選取代的c1-c6烷基、任選取代的哌嗪基、任選取代的n-烷基哌嗪-1-基；

rc和rd各自獨(dú)立選自氫、c1-c3烷基和鏈烯基；和

m為1、2、或3。

在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述化合物具有通式iii所示結(jié)構(gòu)：

式中，

r⁴選自氫、鹵素、任選取代的c1-c6烷氧基、任選取代的c1-c6烷基；

r⁵選自任選取代的n-烷基哌嗪-1-基、任選取代的哌啶基氧基；

r⁶選自氨基、任選取代的哌嗪基、-nrerf；

re和rf各自獨(dú)立選自氫、c1-c3烷基和鏈烯基。

在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中：

r⁴選自任選取代的c1-c6烷基，優(yōu)選c1-c3烷基；

r⁵選自任選取代的n-烷基哌嗪-1-基；

r⁶選自氨基、或-nrerf；

re和rf各自獨(dú)立選自氫、和c1-c3烷基。

本發(fā)明人合成得到了一系列結(jié)構(gòu)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的蝶啶酮類化合物；具體地說(shuō)，本發(fā)明人合成得到了選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明人合成得到選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明人合成得到選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

在本發(fā)明的化合物的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供一種藥物組合物，該組合物含有治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括但不限于無(wú)機(jī)和有機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽和草酸鹽；以及與堿例如鈉羥基、三(羥基甲基)胺基甲烷(tris,胺丁三醇)和n-甲基葡糖胺形成的無(wú)機(jī)和有機(jī)堿鹽。

雖然每個(gè)人的需求各不相同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定本發(fā)明藥物組合物中每種活性成分的最佳劑量。一般情況下，本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，對(duì)哺乳動(dòng)物每天口服給藥，藥量按照約0.0025到50毫克/公斤體重。但最好是每公斤口服給藥約0.01到10毫克。例如，單位口服劑量可以包括約0.01到50毫克，最好是約0.1到10毫克的本發(fā)明化合物。單位劑量可給予一次或多次，每天為一片或多片，每片含有約0.1到50毫克，合宜地約0.25到10毫克的本發(fā)明化合物或其溶劑化物。

本發(fā)明的藥物組合物可被配制成適合各種給藥途徑的制劑形式，包括但不限于被配制成用于腸外，皮下，靜脈，肌肉，腹腔內(nèi)，透皮，口腔，鞘內(nèi)，顱內(nèi)，鼻腔或外用途徑給藥的形式，用于治療腫瘤和其他疾病。給藥量是有效地改善或消除一個(gè)或多個(gè)病癥的藥量。對(duì)于特定疾病的治療，有效量是足以改善或以某些方式減輕與疾病有關(guān)的癥狀的藥量。這樣的藥量可作為單一劑量施用，或者可依據(jù)有效的治療方案給藥。給藥量也許可治愈疾病，但是給藥通常是為了改善疾病的癥狀。一般需要反復(fù)給藥來(lái)實(shí)現(xiàn)所需的癥狀改善。藥的劑量將根據(jù)病人的年齡，健康與體重，并行治療的種類，治療的頻率，以及所需治療效益來(lái)決定。

本發(fā)明的藥物制劑可以給予任何哺乳動(dòng)物，只要他們能獲得本發(fā)明化合物的治療效果。在這些哺乳動(dòng)物中最為重要的是人。

本發(fā)明的化合物或其藥物組合物可用于治療各種由fms樣酪氨酸激酶3(flt3)介導(dǎo)的疾病。在本文中，所述flt3介導(dǎo)的疾病為血液病，如骨髓增殖性疾病，癌癥，免疫性疾病，以及皮膚病，如銀屑病和特應(yīng)性皮炎。

在具體的實(shí)施方式中，所述癌癥選自急性骨髓性白血病(aml)、混合系白血病(mll)、t-細(xì)胞急性白血病(t-all)、b細(xì)胞急性白血病(b-all)、慢性骨髓單細(xì)胞性白血病(cmml)、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性中性粒細(xì)胞白血病。

在其它實(shí)施方式中，所述免疫性疾病選自關(guān)節(jié)炎、狼瘡、炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病、青少年關(guān)節(jié)炎、糖尿病、重癥肌無(wú)力癥、橋本甲狀腺炎、奧德甲狀腺炎、格雷夫斯病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 綜合征、多發(fā)性硬化癥、傳染性神經(jīng)元炎、急性傳播性腦脊髓炎、阿狄森病、再生障礙性貧血、自身免疫性肝炎、視神經(jīng)炎、銀血病、移植物抗宿主病、移植、輸血過(guò)敏反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、i型超敏反應(yīng)、過(guò)敏性結(jié)膜炎、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎。

本發(fā)明的藥物制劑可用已知的方式制造。例如，由傳統(tǒng)的混合，制粒，制錠，溶解，或冷凍干燥過(guò)程制造。制造口服制劑時(shí)，可結(jié)合固體輔料和活性化合物，選擇性研磨混合物。如果需要或必要時(shí)加入適量助劑后，加工顆?；旌衔?，獲得片劑或錠劑芯。

合適的輔料特別是填料，例如糖類如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇；纖維素制劑或鈣磷酸鹽，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；以及粘結(jié)劑，例如淀粉糊，包括玉米淀粉，小麥淀粉，大米淀粉，馬鈴薯淀粉，明膠，黃芪膠，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加崩解劑，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂，或褐藻酸或其鹽，如海藻酸鈉.輔助劑特別是流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤(rùn)滑劑，例如，硅石，滑石，硬脂酸鹽類，如鎂硬脂酸鈣，硬脂酸或聚乙二醇。如果需要，可以給錠劑核芯提供可以抵抗胃液的合適包衣。為此，可以應(yīng)用濃縮糖類溶液。這個(gè)溶液可以含有阿拉伯樹(shù)膠，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了制備耐胃液的包衣，可使用適當(dāng)?shù)睦w維素溶液，例如醋酸纖維素鄰苯二甲酸或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸?？上蛩幤蝈V劑核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于識(shí)別或?yàn)榱吮碚骰钚猿煞謩┝康慕M合。

基于上述化合物和藥物組合物，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療flt3介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括給予需要的對(duì)象以本發(fā)明的化合物或藥物組合物。

給藥方法包括但不限于本領(lǐng)域周知的各種給藥方法，可根據(jù)患者的實(shí)際情況加以確定。這些方法包括但不限于腸外，皮下，靜脈，肌肉，腹腔內(nèi)，透皮，口腔，鞘內(nèi)，顱內(nèi)，鼻腔或外用途徑給藥。

本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物在制備治療flt3介導(dǎo)的疾病，或抑制flt3的藥物中的用途。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明提供的化合物是一種結(jié)構(gòu)全新的蝶啶酮衍生物；

2.本發(fā)明提供的化合物對(duì)flt3具有優(yōu)異的抑制活性；

3.本發(fā)明提供的化合物為開(kāi)發(fā)能抑制flt3的靶向藥物奠定了基礎(chǔ)，具備極大的產(chǎn)業(yè)化和商品化前景以及市場(chǎng)價(jià)值，經(jīng)濟(jì)效益顯著。

以下結(jié)合具體實(shí)施案例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步描述，但以下實(shí)施案例不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制，所有依據(jù)本發(fā)明的原理和技術(shù)手段采用的各種施用方法，均屬于本發(fā)明范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。

抑制劑合成部分

在以下的實(shí)施例中將進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。

蝶啶酮母核衍生物的合成路線

上述制備流程中，r¹-r⁴的定義如上文所述。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際制備需要，采用本領(lǐng)域常規(guī)獲得的各種起始化合物為原料，制備本發(fā)明的化合物。

實(shí)施例1

1)8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-7(8h)-蝶啶酮(f-1)的合成

①(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成

稱取對(duì)苯二胺(890mg，8.23mmol)置于100ml圓底燒瓶中，加入40ml二氯甲烷，冰浴下攪拌，另取二碳酸二叔丁酯(449mg，2.06mmol)溶于二氯甲烷當(dāng)中，滴加到上述反應(yīng)液當(dāng)中，然后繼續(xù)在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1，v/v)分離，得到(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯398mg，產(chǎn)率93％。

¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.14(d,j＝8.0hz,2h),6.65(d,j＝8.4hz,2h),6.26(s,1h),1.52(s,9h).熔點(diǎn)112-113℃，文獻(xiàn)值^[97]112-114℃。

②(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(b-1)的合成

稱取2,4-二氯-5-硝基嘧啶(190mg，0.98mmol)，加入6ml1,4-二氧六環(huán)，置于25ml圓底燒瓶中，室溫下攪拌，取(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.96mmol)、n,n-二異丙基乙胺(137mg，1.06mmol)溶于4ml1,4-二氧六環(huán)，緩慢滴加到上述反應(yīng)液中，滴加完后繼續(xù)在室溫下攪拌1小時(shí)左右，tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全轉(zhuǎn)化。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，v/v)分離，得到(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯橙色固體301mg，產(chǎn)率82％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.38(s,1h),9.47(s,1h),9.12(s,1h),7.49(d,j＝8.4hz,2h),7.39(d,j＝8.4hz,2h),1.49(s,9h).lc-ms計(jì)算值c15h17cln5o4[m+h]⁺366.09,實(shí)驗(yàn)值366.00。

③(4-(2-(4-甲氧基-2-甲基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(c-1)的合成

稱取(4-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.41mmol)、4-甲氧基-2-甲基苯胺(51mg，0.37mmol)、n,n-二異丙基乙胺(145mg，1.12mmol)置于25ml圓底燒瓶中，加入10ml1,4-二氧六環(huán)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝5:1，v/v)純化，得到(4-(2-(4-甲氧基-2-甲基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯黃色固體148mg，產(chǎn)率85％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.22(s,1h),9.86(s,1h),9.33(s,1h),9.06(s,1h),7.60(s,1h),7.36(d,j＝8.4hz,2h),7.27-7.23(m,2h),6.85(s,1h),6.79(d,j＝7.6hz,1h),3.82(s,3h),2.15(s,3h),1.48(s,9h).esi計(jì)算值c23h27n6o5[m+h]⁺467.20,實(shí)驗(yàn)值467.20。

④(4-(2-(4-甲氧基-2-甲基苯基氨基)-7-氧代-8(7h)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成(e-1)的合成

稱取(4-(2-(4-甲氧基-2-甲基苯基氨基)-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.21mmol)置于250ml圓底燒瓶中，加入100ml甲醇、100ml二氯甲烷和20mg鈀碳(10％pd)，通入氫氣，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，將濾液旋干，得粗產(chǎn)品88mg，產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下一步反應(yīng)。

將上一步反應(yīng)得到的產(chǎn)品置于50ml圓底燒瓶中，加入0.6ml冰醋酸、10ml無(wú)水乙醇，然后加入乙醛酸乙酯(50％甲苯溶液)(0.044ml,0.22mmol)，加熱至回流攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，有固體析出，抽濾，濾餅用乙醇洗滌，烘干。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝50:1，v/v)分離純化，得到(4-(2-(4-甲氧基-2-甲基苯基氨基)-7-氧代-8(7h)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯黃色固體61mg，產(chǎn)率64％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.55(s,1h),9.17(s,1h),8.76(s,1h),7.98(s,1h),7.56(d,j＝8.8hz,2h),7.22(d,j＝7.6hz,2h),7.16(s,1h),6.69(s,1h),6.54(s,1h),3.70(s,3h),2.11(s,3h),1.51(s,9h).esi計(jì)算值c25h27n6o4[m+h]⁺475.20,實(shí)驗(yàn)值475.20。

⑤8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-7(8h)-蝶啶酮(f-1)的合成

稱取(4-(2-(4-甲氧基-2-甲基苯基氨基)-7-氧代-8(7h)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.11mmol)置于25ml圓底燒瓶中,加入6ml二氯甲烷，0℃下攪拌，加入1.5ml三氟乙酸。繼續(xù)在0℃下攪拌1小時(shí)，后室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和至溶液偏堿性，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用去離子水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，將溶劑旋干。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)分離純化，得到8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-7(8h)-蝶啶酮黃色固體32mg，產(chǎn)率82％,mp149.1-149.3℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.13(s,1h),8.72(s,1h),7.95(s,1h),7.21(s,1h),6.94(d,j＝8.0hz,2h),6.72(s,1h),6.65(d,j＝8.4hz,2h),6.60(s,1h),5.33(br,2h),3.72(s,3h),2.13(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c20h19n6o2[m+h]⁺375.1569,實(shí)驗(yàn)值375.1573。hplcpurity:96.0％，retentiontime＝11.68min.

2)8-(4-氨基苯基)-2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-7(8h)-蝶啶酮(f-2)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率75％，mp>300℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.13(s,1h),8.84(s,1h),8.03(s,1h),7.60(s,1h),7.38(s,1h),6.98(d,j＝8.4hz,2h),6.87(s,1h),6.72(d,j＝8.4hz,2h),5.39(br,2h),3.79(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c19h16cln6o2[m+h]⁺395.1023,實(shí)驗(yàn)值395.1027。hplcpurity:97.0％，retentiontime＝11.55min.

3)8-(4-氨基苯基)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7(8h)-蝶啶酮(f-3)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率73％，mp>300℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.14(s,1h),8.85(s,1h),8.03(s,1h),7.42(s,1h),7.19(s,1h),6.98(d,j＝8.4hz,2h),6.89(s,1h),6.72(d,j＝8.4hz,2h),5.38(br,2h),3.77(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c19h16fn6o2[m+h]⁺379.1319,實(shí)驗(yàn)值379.1323。hplcpurity:96.3％，retentiontime＝11.68min.

4)n-(4-(2-(4-甲氧基苯基氨基)-7-氧代-8(7h)-蝶啶基)苯基)乙酰胺(e-4)的合成

合成方法參照e-1，得黃色固體，產(chǎn)率62％，mp>300℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.23(s,1h),10.10(s,1h),8.85(s,1h),8.04(s,1h),7.78(d,j＝7.2hz,2h),7.34(d,j＝7.6hz,4h),6.61(s,2h),3.67(s,3h),2.13(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c21h19n6o3[m+h]⁺403.1519,實(shí)驗(yàn)值403.1500。hplcpurity:97.5％，retentiontime＝10.54min.

5)n-(4-(2-((4-甲基苯基)氨基)-7-氧代-8(7h)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(g-5)的合成

稱取8-(4-氨基苯基)-2-(4-甲氧基苯基)-7(8h)-蝶啶酮(100mg,0.277mmol)，三乙胺(0.232ml，1.662mmol)置于25ml圓底燒瓶中，加入15ml無(wú)水二氯甲烷，冰浴下攪拌。稱取甲基磺酰氯(0.172ml，2.216mmol)溶于2ml的二氯甲烷中，將其緩慢滴加到上述反應(yīng)液當(dāng)中，滴加完后冰浴下繼續(xù)攪拌1小時(shí)，室 溫?cái)嚢柽^(guò)夜。tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化。旋干溶劑，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和至溶液偏堿性，用二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥。粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇＝100:50:1，v/v)純化，得到n-(4-(2-((4-甲基苯基)氨基)-7-氧代-8(7h)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺黃色固體54mg，產(chǎn)率47％，mp>300℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.11(br,1h),8.84(s,1h),8.03(s,1h),7.40(s,4h),7.31(br,2h),6.66(br,2h),3.69(s,3h),3.12(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c20h19n6o4s[m+h]⁺439.1189,實(shí)驗(yàn)值439.1187。hplcpurity:95.4％，retentiontime＝11.70min.

6)8-(4-氨基苯基)-2-((3-氯-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8h)蝶啶酮(f-6)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率62％，mp>300℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.13(br,1h),8.85(s,1h),8.03(s,1h),7.60(s,1h),7.37(d,j＝7.6hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,2h),6.89(d,j＝7.6hz,1h),6.71(d,j＝8.4hz,2h),5.38(s,2h),2.89(br,4h),2.47(br,4h),2.34(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c23h24cln8o[m+h]⁺463.1762,實(shí)驗(yàn)值463.1710。hplcpurity:98.7％，retentiontime＝9.64min.

7)8-(4-氨基苯基)-2-((3-氟-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8h)蝶啶酮(f-7)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率64％，mp238.2-238.7℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.13(br,1h),8.84(s,1h),8.02(s,1h),7.32(d,j＝12.4hz,1h),7.19(d,j＝7.2hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,2h),6.77 (br,1h),6.72(d,j＝8.4hz,2h),5.39(s,2h),2.92-2.90(m,4h),2.45(br,4h),2.22(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c23h24fn8o[m+h]⁺447.2057,實(shí)驗(yàn)值447.2057。hplcpurity:96.9％,retentiontime＝9.12min.

8)8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8h)蝶啶酮(f-8)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率74％，mp255.6-256.3℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.94(br,1h),8.80(s,1h),7.99(s,1h),7.36(br,1h),7.18(d,j＝6.4hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,2h),6.79(d,j＝8.4hz,1h),6.71(d,j＝8.4hz,2h),5.37(s,2h),2.76-2.74(m,4h),2.47(br,4h),2.24(s,3h),2.06(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c24h27n8o[m+h]⁺443.2308，實(shí)驗(yàn)值443.2301。hplcpurity:99.2％,retentiontime＝9.44min.

9)8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8h)蝶啶酮(f-9)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得橙黃色固體，產(chǎn)率63％，mp147.4-147.9℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.94(br,1h),8.81(s,1h),7.99(s,1h),7.09(s,2h),6.97(d,j＝8.4hz,2h),6.70(d,j＝8.4hz,2h),6.60(br,1h),5.41(s,2h),3.56(s,3h),2.87(br,4h),2.43(br,4h),2.21(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c24h27n8o2[m+h]⁺459.2257,實(shí)驗(yàn)值459.2256。hplcpurity:98.0％,retentiontime＝8.75min.

10)8-(4-氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(1-甲基-4-氧代哌啶基)苯基)氨基)-7(8h)蝶啶酮(f-10)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率52％，mp228.9-229.4℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.97(br,1h),8.81(s,1h),7.99(s,1h),7.36(d,j＝2.0hz,1h),7.16(br,1h),6.97(d,j＝8.8hz,2h),6.70(d,j＝8.4hz,3h),5.39(s,2h),4.37(s,1h),2.92(s,2h),2.75(s,2h),2.01(s,6h),1.81-1.71(m,2h),1.34-1.19(m,1h).hrms(esi)計(jì)算值c25h28n7o2[m+h]⁺458.2304,實(shí)驗(yàn)值458.2289。hplcpurity:99.3％,retentiontime＝10.29min.

11)n-(4-(2-(4-(4-甲基-1-哌嗪基)氨基)-7-氧代-8(7h)-蝶啶酮)苯基)乙酰胺(e-11)的合成

合成方法參照e-1，得橙紅色固體，產(chǎn)率58％，mp288.0-288.7℃。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.44(s,1h),10.05(s,1h),8.82(s,1h),8.02(s,1h),7.80(d,j＝8.0hz,2h),7.32(d,j＝8.4hz,2h),7.25(br,2h),6.64(br,2h),3.24(br,4h),3.05(br,4h),2.64(s,3h),2.15(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c25h27n8o2[m+h]⁺471.2257,實(shí)驗(yàn)值471.2213。hplcpurity:97.3％,retentiontime＝8.17min.

12)n-(4-(2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7h)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(g-12)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得橙紅色固體，產(chǎn)率86％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.98(s,1h),8.78(s,1h),7.98(s,1h),7.32(d,j＝6.4hz,2h),6.97(d,j＝8.8hz,2h),6.74(d,j＝8.0hz,2h),6.67(br,2h),3.04-3.02(m,4h),2.45-2.43(m,4h),2.22(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c23h25n8o[m+h]⁺429.2151,實(shí)驗(yàn)值429.2153。

①n-(4-(2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7h)蝶啶基)苯基)甲基磺酰胺(g-12)的合成

合成方法參照g-5，得黃色固體，產(chǎn)率50％，mp>300℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.02(s,1h),8.82(s,1h),8.02(s,1h),7.42-7.37(m,4h),7.26(br,2h),6.66(br,2h),3.13(s,3h),3.07(br,4h),2.54(br,4h),2.29(s,3h)。hrms(esi)計(jì)算值c24h27n8o3s[m+h]⁺507.1927,實(shí)驗(yàn)值507.1926。hplcpurity:99.0％,retentiontime＝8.53min.

13)8-(4-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)芐基)氨基)-7(8h)蝶啶酮(f-13)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率65％，mp216.2-216.8℃。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.99(s,1h),8.82(s,1h),8.01(s,1h),7.55(d,j＝8.0hz,2h),7.32(d,j＝8.4hz,2h),7.20(s,2h),6.59(s,2h),3.86(s,2h),3.00-2.99(m,4h),2.44-2.41(m,4h),2.21(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c24h27n8o[m+h]⁺443.2308,實(shí)驗(yàn)值443.2304。hplcpurity:97.4％,retentiontime＝6.92min.

14)2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-8-(4-(1-哌嗪基)苯基)-7(8h)蝶啶酮 (f-14)的合成

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，產(chǎn)率72％，mp276.6-277.2℃。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.01(s,1h),8.81(s,1h),8.00(s,1h),7.26(d,j＝6.8hz,2h),7.20(d,j＝8.8hz,2h),7.12(d,j＝8.8hz,2h),6.58(s,2h),3.19-3.17(m,4h),3.02-3.00(m,4h),2.90-2.88(m,4h),2.45-2.43(m,4h),2.22(s,3h).hrms(esi)計(jì)算值c27h32n9o[m+h]⁺498.2730,實(shí)驗(yàn)值498.2728。hplcpurity:98.6％,retentiontime＝7.86min.

15)8-(3-氨基苯基)-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)蝶啶-7(8h)-酮.(f-15)

合成方法參照f(shuō)-1，得黃色固體，收率70％,mp262.5-262.9℃.

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.01(s,1h),8.81(s,1h),7.99(s,1h),7.35(d,j＝7.2hz,2h),7.22(t,j＝8.0hz,1h),6.75(d,j＝7.2hz,1h),6.66(br,2h),6.52(br,1h),6.48(d,j＝8.0hz,1h),5.35(s,2h),3.02(br,4h),2.46-2.44(m,4h),2.23(s,3h).hplcpurity:99.5％,retentiontime＝8.57min.hrms(esi)(m/z):[m+h]⁺calcdforc23h25n8o,429.2151；found,429.2151.

16)8-(4-n,n-二甲氨基苯基)-2-((3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)蝶啶-7(8h)-酮.(f-16)

將原料1置于250ml圓底燒瓶中，加入dcm和meoh溶解，稱取100mg鈀碳(10％pd)，通入氫氣，室溫下反應(yīng)約10h后，抽濾，濾液減壓蒸去溶劑，產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下一步。稱取原料2(0.3g,0.69mmol)于50ml圓底燒瓶，加入適量乙醇溶解，攪拌下加入乙醛酸乙酯(50％甲苯溶液)0.21ml(1.04mmol)與0.6ml冰醋酸，升溫至回流，tlc跟蹤反應(yīng)至原料2轉(zhuǎn)化完全，將反應(yīng)液冷卻至室溫后抽濾，濾餅硅膠柱層析(dcm:meoh＝80:1)，得黃色粉末狀固體120mg。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ10.02(br,1h),8.83(s,1h),8.01(s,1h),7.28(s,1h),7.15(d,j＝8.8hz,3h),6.87(d,j＝8.8hz,2h),6.69-6.67(m,1h),3.01(s,6h),2.71(m,4h),2.44(m,4h),2.22(s,3h),1.96(s,3h).ms(esi)(m/z):[m+h]⁺calcdforc26h30n8o，470.25；found,470.21.

實(shí)施例2

化合物1的合成步驟如下所述，而化合物2-31的合成參照化合物1的合成進(jìn)行：

(s)-3-((2-氯-5-硝基嘧啶)4-氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成

稱取2,4-二氯-5-硝基嘧啶(3.23g，16.28mmol)置于250ml低溫反應(yīng)瓶中，加入80ml二氯甲烷溶解，-70℃下攪拌冷卻，另取(s)-1-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷(3.03g，16.28mmol)、n,n-二異丙基乙胺(2.52g，19.53mmol)溶于20ml二氯甲烷，并滴加到上述反應(yīng)液中，滴加完成后，繼續(xù)在-70℃下攪拌0.5小時(shí)，tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝12:1，v/v)分離，得到s1黃色油狀液體5.54g，產(chǎn)率99％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.07(s,1h),8.41(d,j＝6.4hz,1h),4.87-4.84(m,1h),3.81(dd,j＝11.6hz,6.4hz,1h),3.54(t,j＝6.4hz,1h),3.36(br,1h),2.40-2.31(m,1h),2.06-1.98(m,1h),1.48(s,9h).

1-甲基-4-(2-甲基-4-硝基苯基)哌嗪的合成

稱取3-甲基-4-氟-1-硝基苯(2.67g,17.21mmol)以及n-甲基哌嗪(1.72g,17.21mmol)于50ml圓底燒瓶中，加入dmso溶解，加入k2co34.76g,90℃加熱攪拌9h,tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化,抽濾除去k2co3，乙酸乙酯洗滌后，取濾液加入少量乙酸乙酯稀釋，飽和氯化鈉萃取，有機(jī)層干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝60:1，v/v)分離，得到s2褐色固體3.92g，產(chǎn)率96.8％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ7.88(d,j＝4.8hz,1h),6.60(dd,j＝9.6hz,2.4hz,1h),6.53(s,1h),3.91(s,3h),3.44(br,4h),2.42(br,4h),2.22(s,3h).

3-甲基-4-(4-甲基哌嗪基)苯胺的合成

稱取s2(1.96g,8.33mmol)于250ml圓底燒瓶中，加入乙酸乙酯/甲醇(1:1)溶解，加入100mg10％pd/c,通入氫氣，室溫?cái)嚢?h,tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化,反應(yīng)液抽濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得到s3黃色固體1.68g，產(chǎn)率98.2％。產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。

(s)-3-((2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-5-硝基-4-嘧啶基)氨基)吡咯烷基-1-叔丁基甲酸酯的合成

稱取s1(2.84g,8.26mmol),s2(1.70g,8.26mmol),dipea(2.13g,16.52mmol)于250ml圓底燒瓶中，加入thf溶解，氬氣保護(hù)下攪拌過(guò)夜。tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化,，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，加水稀釋后用乙酸乙酯萃取(100ml×2)，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液(50ml×2)、飽和氯化鈉溶液洗滌后，加入無(wú)水硫酸鈉干燥。粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝40:1，v/v)分離，得到s4黃色固體3.45g，產(chǎn)率81.5％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.35(s,1h),8.95(s,1h),8.57(s,1h),7.69(s,1h),7.44(d,j＝7.6hz,1h),6.98(d,j＝8.8hz,1h),4.65-4.62(m,1h),4.12(s,0.4h),3.72(dd,j＝10.8hz,6.8hz),3.57-3.27(m,4.31h),3.18(s,1h),2.80(br,4h),2.45(br,4h),2.22(s,3h),2.21(s,3h),1.42(s,9h)。

(s)-3-((5-氨基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基苯基)氨基)4-嘧啶基)氨基)吡咯烷基)-1-甲酸叔丁酯

稱取s4(3.45g,6.73mmol)于250ml圓底燒瓶中，加入無(wú)水乙醇溶解，加入100mgpd/c(10％),通入氫氣，室溫下攪拌過(guò)夜8h.反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，將濾液旋干，產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下一步反應(yīng)。

(s)-3-(6-異丙基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7h)-蝶啶基)吡咯烷基-1-甲酸叔丁酯

取上一步產(chǎn)物s5(1.61g,3.33mmol)于25ml圓底燒瓶中，加入10ml無(wú)水乙醇，0.6ml冰醋酸，加入二甲基丙酮酸乙酯(721mg,5.00mmol),氬氣保護(hù)下加熱回流，攪拌過(guò)夜。tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，加水稀釋 后用二氯甲烷萃取(100ml×2)，有機(jī)相經(jīng)飽和碳酸氫鈉溶液(50ml×2)、飽和氯化鈉溶液洗滌后，加入無(wú)水硫酸鈉干燥。粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇/氨水＝50:1:1，v/v/v)分離，得到s6黃色固體1.34g，產(chǎn)率71.4％。lc-ms

(s)-6-異丙基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-8-(3-吡咯烷基)-7(8h)蝶啶酮的合成

稱取s6(1.20g,2.13mmol)于25ml圓底燒瓶中，加入二氯甲烷溶解，在冰浴中冷卻后滴加4ml三氟乙酸，室溫反應(yīng)3h,tlc跟蹤至原料完全轉(zhuǎn)化,，反應(yīng)液倒入燒杯，二氯甲烷稀釋，邊攪拌邊滴加氫氧化鈉溶液至溶液分層，上層ph約為9，加二氯甲烷稀釋，飽和氯化鈉溶液萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥。粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝20:1，v/v)分離，得到s7黃色固體0.89g，產(chǎn)率90.2％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ9.85(s,1h),8.74(s,1h),7.51(s,1h),7.43(d,j＝8.4hz,1h),7.02(d,j＝8.4hz,1h),5.85-5.77(m,1h),3.42-3.36(m,1h),2.96-2.91(m,1h),2.82(br,4hz),2.78-2.73(m,1h),2.47(br,4h),2.24(s,3h),2.23(s,3h),2.17-2.09(m,1h),1.99-1.91(m,1h),1.19(d,j＝6.8hz,6h)。

實(shí)施例3

生物活性測(cè)試部分

激酶測(cè)試方法

通過(guò)mobilityshiftassay方法測(cè)試而成，激酶緩沖液(50mmhepes,ph7.5,0.01％brij-35,10mmmgcl2,2mmdtt)，終止緩沖液(100mmhepes,ph7.5,0.015％brij-35,0.2％coatingreagent#3,50mmedta)。用100％的dmso將化合物稀釋到所需要的濃度，并將配好的化合物轉(zhuǎn)移到96孔板中，稀釋的濃度從20μl至60μl不等并以一定的濃度梯度配成10個(gè)濃度。以100μl的100％dmso濃度作為空白對(duì)照。后將96孔板的藥物的5μl轉(zhuǎn)移到384孔板中重復(fù)試驗(yàn)。激酶在28℃下以特定的方式進(jìn)行培養(yǎng)。最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ic50值。

細(xì)胞測(cè)試方法

細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞株由美國(guó)菌種保藏中心獲得。細(xì)胞在rpmi-1640或者mem培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其在5％的co2中含10％的胎牛血清，在37℃下進(jìn)行。mv4-11細(xì)胞在imdm培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

細(xì)胞活性測(cè)定方法：懸浮細(xì)胞的活性測(cè)試主要是mtt測(cè)試方法測(cè)定，而貼壁細(xì)胞的測(cè)試主要是srb測(cè)試方法。懸浮細(xì)胞在每孔3-8×10³細(xì)胞的96孔板上進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)孔中加入100μl的培養(yǎng)基，然后加入10μl的化合物(一式三份)，在37℃下培養(yǎng)72h。細(xì)胞培養(yǎng)完以后，在每一孔板中加入20μl的5mg/mlmtt試劑再繼續(xù)培養(yǎng)4h，加入50μl三種混合溶劑(5％異丙醇-10％sds-12mmol/lhcl)來(lái)溶解氧化產(chǎn)物。od值用多功能檢測(cè)儀synergy2在570nm處測(cè)定。貼壁細(xì)胞在每孔2-7×10³細(xì)胞的96孔板上進(jìn)行培養(yǎng)24h，同樣在培養(yǎng)基中加入相同當(dāng)量的化合物。72h培養(yǎng)以后，移除培養(yǎng)液，菌種用tca固定1h。干燥的孔板染上磺酰羅丹明b，然后加入150μl10mmtris-hcl。最后，溶解細(xì)胞的光吸收用synergy2微分光光度計(jì)在560nm處檢測(cè)。所有的實(shí)驗(yàn)都進(jìn)行三次平行反應(yīng)。

免疫沉淀反應(yīng)和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)：用不同濃度的化合物去培養(yǎng)細(xì)胞2h，然后用ripa溶解緩沖液將細(xì)胞進(jìn)一步地溶解，隨后在4℃下離心分離，取上清液進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。蛋白質(zhì)用sds-page進(jìn)行分離，然后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜中用于抗體的檢測(cè)。主要抗體作用于flt3,akt,p-akt,stat5,p-stat5和p44/42mapk，抗gapdh用推薦的濃度進(jìn)行培養(yǎng)?？梢暬男盘?hào)在用了hrp共聚抗體后用tanon5200多捕獲系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)提高的ecl基質(zhì)。細(xì)胞溶解產(chǎn)物用flt3抗體和蛋白a凝膠進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)，煮熟的樣品用6％凝膠進(jìn)行電泳電極化，然后用4g10抗體進(jìn)行標(biāo)記，用此方法來(lái)檢測(cè)flt3磷酸化水平。

流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞用膜聯(lián)蛋白v和碘化丙啶來(lái)染色，用于檢測(cè)化合物的細(xì)胞凋亡活性。mv4-11細(xì)胞在6個(gè)孔板中用密度為1×10⁵細(xì)胞/ml進(jìn)行培養(yǎng)，然后加入不同濃度的化合物培養(yǎng)48h。將細(xì)胞分割并用冷的pbs緩沖溶液洗滌兩次。樣品在結(jié)合緩沖液中重新懸浮，在光照的保護(hù)下用膜聯(lián)蛋白v和碘化丙啶培養(yǎng)。細(xì)胞周期試驗(yàn)根據(jù)pi/rnase染色溶劑產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行操作。分裂細(xì)胞在70％的乙醇中固定1h。然后所有的細(xì)胞都在非光照室溫的條件下用碘化丙啶染色30min。細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期都用facs流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

化合物的測(cè)試結(jié)果(測(cè)試以ac220、mln518作為陽(yáng)性對(duì)照藥)如下表所示，細(xì)胞測(cè)試結(jié)果如附圖所示。

表1.化合物的激酶測(cè)試和細(xì)胞測(cè)試結(jié)果

mv4-11移植瘤模型測(cè)試

發(fā)明人進(jìn)一步在mv4-11移植瘤模型中測(cè)試了本發(fā)明化合物對(duì)腫瘤的抑制活性。

結(jié)果如圖2-3所示，本發(fā)明化合物對(duì)腫瘤體積以及重量的影響與陽(yáng)性對(duì)照ac220相似，從而進(jìn)一步證實(shí)本發(fā)明化合物在抑制腫瘤方面的潛能。

討論：

發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，設(shè)計(jì)并合成得到了一系列未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的蝶啶酮衍生物，對(duì)得到的化合物進(jìn)行了分子水平和細(xì)胞水平的活性測(cè)試，得到一批能夠抑制flt3的化合物。這些化合物對(duì)flt3的抑制活性ic50值達(dá)到nm級(jí)別；對(duì)相關(guān)細(xì)胞的抑制活性ic50值達(dá)到μm級(jí)別。其中多個(gè)化合物，例如f-8和f-16對(duì)flt3的抑制活性ic50值低于10nm，遠(yuǎn)優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照mln518。而進(jìn)一步的腫瘤模型測(cè)試顯示本發(fā)明的化合物在體內(nèi)同樣具備優(yōu)異的抑制腫瘤活性。因此，本發(fā)明非化合物有可能成為抑制flt3的靶向藥物，或者作為經(jīng)進(jìn)一步修飾得到活性更佳和/或毒性更低的化合物的基礎(chǔ)。

在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。