本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類氟取代的環(huán)丙胺類化合物、其制備方法、含此類化合物的藥物組合物及作為賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑，特別是制備用于治療癌癥、白血病等疾病的藥物的用途。

背景技術(shù)：

表觀遺傳學(xué)是研究基因的dna序列不發(fā)生變化的前提下，通過對核苷酸或染色體的可逆性修飾使基因表達(dá)可遺傳的變化的遺傳學(xué)分支學(xué)科。表觀遺傳學(xué)的調(diào)控機(jī)制主要包括dna甲基化、組蛋白修飾、非編碼rna作用等。大多數(shù)情況下，表觀遺傳信息通過改變胞嘧啶和組蛋白的化學(xué)修飾而儲存起來，這些化學(xué)結(jié)構(gòu)的改變調(diào)控染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)。正常的表觀遺傳過程對于胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化等生命活動有著重要作用。研究證明，很多疾病的發(fā)生與表觀遺傳修飾的異常相關(guān)，近年來表觀遺傳學(xué)成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)的研究熱點(diǎn)，表觀遺傳學(xué)的相關(guān)研究在人類許多疾病的防治過程中具有的重要意義。

lsd1(又稱為bhc110、p110b和npao)由shi課題組于2004年所確認(rèn)11，其結(jié)構(gòu)從酵母到人類均高度保守。在細(xì)胞中，lsd1的去甲基化能力具有基因、底物專和環(huán)境高度專一性，對不同基因位點(diǎn)的基因表達(dá)產(chǎn)生出不同(甚至相反)的功效。研究發(fā)現(xiàn)lsd1在促進(jìn)正常細(xì)胞分化中起到了重要的作用，但lsd1也被發(fā)現(xiàn)會被異常的招募對致白血病的基因受損的下游異?；蚰繕?biāo)產(chǎn)生不當(dāng)?shù)囊种谱饔?如mll-af9)。在這種情況下，lsd1會維持初始損傷賦予白血病干細(xì)胞(lsc)的活性，lsd1下游的細(xì)胞效應(yīng)也顯著區(qū)別于正常的細(xì)胞狀態(tài)。在正常的造血過程中，在最原始造血干細(xì)胞(hsc)水平上并未發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)的變化，這與由完全相反的lsd1消耗誘導(dǎo)的血球減少的觀察結(jié)果相一致²³。因此，lsd1若能對正常造血細(xì)胞產(chǎn)生可控可逆的毒性，可作為潛在治療白血病的藥物作用靶點(diǎn)。

開發(fā)結(jié)構(gòu)新穎的小分子lsd1抑制劑，對于治療惡性腫瘤和白血病等疾病的研究具有重要的研究意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個目的在于提供一種通式i所示的氟取代的環(huán)丙胺類化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種上述通式i所示的氟取代的環(huán)丙胺類化合物的制備方法。

本發(fā)明的再一個目的在于提供一種藥物組合物，其包含治療有效量的選自上述通式i所示的氟取代的環(huán)丙胺類化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物中的一種或多種。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑，其包含選自上述通式i所示的氟取代的環(huán)丙胺類化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物中的一種或多種。

本發(fā)明的又一個目的在于提供上述通式i所示的氟取代的環(huán)丙胺類化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物在制備用于治療與賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑相關(guān)的惡性腫瘤疾病，例如癌癥、白血病等疾病的藥物中的用途。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種治療與賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑相關(guān)的惡性腫瘤疾病，例如癌癥、白血病等疾病藥物的方法，其包括向需要該治療的患者給藥選自上述通式i所示的氟取代的環(huán)丙胺類化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物中的一種或多種。

基于上述目的，本發(fā)明提供了一種具有如下通式i所示結(jié)構(gòu)的氟取代的環(huán)丙胺類化合物，及其外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽或它們混合物：

其中：

a選自：取代或未取代的苯環(huán)或者取代或未取代的含有1～4個選自氧、硫和氮中的雜原子的c5-c12的芳香雜環(huán)，其中所述的取代的苯環(huán)或取代的芳香雜環(huán)，每個環(huán)上包括1～3個取代基；

其中，所述取代的苯環(huán)或取代的芳香雜環(huán)上的取代基為氫、氫的同位素、鹵素、未取代或由1-3個鹵素取代的c1-c12直鏈或支鏈的烷基、未取代或由1-3個鹵素或苯基取代的c1-c12直鏈或支鏈的烷氧基、未取代或由1-3個鹵素取代的c2-c12直鏈或支鏈的不飽和烴基、未取代或由1-3個鹵素取代的c3-c6環(huán)烷基、由c1-c6烷氧基取代的c1-c6直鏈或支鏈的烷基、由c3-c6環(huán)烷基取代的c1-c6直鏈或支鏈的烷基、羥基、氰基、硝基、c1-c6直鏈或支鏈的羥烷基或巰基；

或者，所述取代的苯環(huán)或取代的芳香雜環(huán)上任意兩個取代基可以與其相鄰的碳原子或雜原子一起連接成含有1至3個選自n、o和s中的雜原子的5-7元雜環(huán)，所述5-7元雜環(huán)非必須地被選自如下基團(tuán)的取代基所取代：氫、氫的同位素、鹵素、未取代或由1-3個鹵素取代的c1-c6直鏈或支鏈的烷基、未取代或由1-3個鹵素取代的c1-c6直鏈或支鏈的烷氧基、或羥基；

各r1獨(dú)立地選自：取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、氫、取代的或未取代的c1-c6烷基、-so2ra、-nc(o)ra、-ch2c(o)ora、-c(o)ora、-c(o)ra、-c(o)nrarb、-nrcrd、取代的或未取代的氨基、脲、酰胺、磺酰胺、取代的或未取代的芳烷基和取代的或未取代的雜芳烷基；

各ra獨(dú)立地為氫、苯基、苯基甲基、3,5-二甲基異噁唑-4-基、1,2-二甲基-1h-咪唑-4-基、c3-c7環(huán)烷基、c1-c6烷基、c1-c4烷氧基、c1-c3烷基氨基或-nhph；

rb為氫或c1-c3烷基，或當(dāng)連接至相同原子時,

ra和rb一起形成5-或6-元雜環(huán)烷基環(huán)；

rc、rd各自獨(dú)立地選自氫、c1～c3直鏈或支鏈烷基、c3～c5環(huán)烷基、c1～c3烷氧基、4～6元雜環(huán)基、c1～c3烷基酰基、c5～c7芳基酰基、芐基、c5～c7芳基；所述c1～c3直鏈或支鏈烷基非必須地被一個或多個選自甲磺基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷氧基羰基中的基團(tuán)所取代；所述雜環(huán)基含有1個選自氧、硫和氮中的雜原子；

r2為氫或cooh；

r3為c1-c4烷基、?；?、-c(o)cf3或氫；

w為-(ch2)1-4或-ch(re)(ch2)0-3，其中re為cn或c1-c4烷基；

y為n或c；

x為n或c；

z為o或(ch2)q，其中q為0-2，當(dāng)q為0時，z表示鍵；

n為0-3；

條件是當(dāng)z為o時，y為n且x為c；

而且，條件是當(dāng)x為c時，至少一個連接至x的r1基團(tuán)不為氫。

在另一優(yōu)選例中，當(dāng)x為n時，僅有一個r1與x相連。

在另一優(yōu)選例中，w為c。

在另一優(yōu)選例中，z為(ch2)q，其中q為1。

在另一優(yōu)選例中，x為c，且至少一個連接至x的r1為-nrcrd，rc、和rd各自獨(dú)立地選自氫、c1～c3直鏈或支鏈烷基、c3～c5環(huán)烷基、c1～c3烷氧基、4～6元雜環(huán)基、c1～c3烷基?；?、c5～c7芳基?；?、芐基、c5～c7芳基；所述c1～c3直鏈或支鏈烷基非必須地被一個或多個選自甲磺基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷氧基羰基中的基團(tuán)所取代；所述雜環(huán)基含有1個選自氧、硫和氮中的雜原子。

在另一優(yōu)選例中，x為n，且至少一個連接至x的r1選自取代的或未取代的；芳基、雜芳基、芳烷基、和雜芳烷基。

在另一優(yōu)選例中，x為n，且至少一個連接于至的r1選自取代的或未取代的；芳基c1～c4烷基、和雜芳基c1～c4烷基。

在本發(fā)明中，所述鹵素為f、cl、br或i。

在本發(fā)明中，除非特別指出，所用術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c1-c6烷基”是指具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等；優(yōu)選乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c1-c6烷氧基”是指具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基和丁氧基等。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c2-c6烯基”是指具有2至6個碳原子的含有一個雙鍵的直鏈或支鏈烯基，非限制性地包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、異丁烯基、戊烯基和己烯基等。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c2-c6炔基”是指具有2至6個碳原子的含有一個三鍵的直鏈或支鏈炔基，非限制性地包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、異丁炔基、戊炔基和己炔基等。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c3-c10環(huán)烷基”是指在環(huán)上具有3至10個碳原子的環(huán)狀烷基，非限制性地包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基和環(huán)癸基等。術(shù)語“c3-c8環(huán)烷基”、“c3-c7環(huán)烷基”、和“c3-c6環(huán)烷基”具有類似的含義。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c3-c10環(huán)烯基”是指在環(huán)上具有3至10個碳原子的環(huán)狀烯基，非限制性地包括環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基、環(huán)辛烯基和環(huán)癸基烯等。術(shù)語“c3-c7環(huán)烯基”具有類似的含義。

在本發(fā)明中，術(shù)語“c6-c12芳基”是指在環(huán)上不含雜原子的具有6至12個碳原子的芳香族環(huán)基，如苯基、萘基等。術(shù)語“c6-c10芳基”具有類似的含義。

在本發(fā)明中，術(shù)語“3-12元雜環(huán)基”是指在環(huán)上含有1～3個選自氧、硫和氮中的雜原子的飽和或不飽和的3-12元環(huán)基，例如二氧雜環(huán)戊基等。術(shù)語“3-7元雜環(huán)基”具有類似的含義。

在本發(fā)明中，術(shù)語“取代”指特定的基團(tuán)上的一個或多個氫原子被特定的取代基所取代。特定的取代基為在前文中相應(yīng)描述的取代基，或各實(shí)施例中所出現(xiàn)的取代基。除非特別說明，某個取代的基團(tuán)可以在該基團(tuán)的任何可取代的位點(diǎn)上具有一個選自特定組的取代基，所述的取代基在各個位置上可以是相同或不同的。環(huán)狀取代基，例如雜環(huán)烷基，可以與另一個環(huán)相連，例如環(huán)烷基，從而形成螺二環(huán)系，例如，兩個環(huán)具有一個共用碳原子。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明所預(yù)期的取代基的組合是那些穩(wěn)定的或化學(xué)上可實(shí)現(xiàn)的組合。所述取代基例如(但并不限于)：c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至12-元雜環(huán)基，芳基、雜芳基、鹵素、羥基、羧基(-cooh)、c1-8醛基、c2-10?；?、c2-10酯基、氨基、烷氧基等。

在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的通式(i)的化合物優(yōu)選為如下具體化合物：

本發(fā)明的化合物具有不對稱中心、手性軸和手性平面，并且可以以外消旋體、r-異構(gòu)體或s-異構(gòu)體的形式存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠采用常規(guī)技術(shù)手段由外消旋體拆分獲得r-異構(gòu)體和/或s-異構(gòu)體。

本發(fā)明提供了通式i化合物的可藥用的鹽，具體地為通式i化合物與無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)形成常規(guī)的可藥用鹽。例如，常規(guī)的可藥用鹽可通過通式i化合物與無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)制得，所述無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、胺基磺酸和磷酸等，以及所述有機(jī)酸包括檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、萘磺酸、乙磺酸、萘二磺酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、富馬酸、琥珀酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、硬酯酸、撲酸、羥基馬來酸、苯乙酸、苯甲酸、水楊酸、谷氨酸、抗壞血酸、對胺基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸和羥乙磺酸等；或者通式i化合物與無機(jī)堿形成的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽或銨鹽；或者通式i化合物與有機(jī)堿形成的甲胺鹽、乙胺鹽或乙醇胺鹽。

本發(fā)明另一方面提供了一種通式i表示的化合物的制備方法，該制備方法按照如下方案1、方案2或方案3進(jìn)行。

式(i)化合物可以通過以下方案1所示的方法制備

以下方案中使用的結(jié)構(gòu)式和r基團(tuán)標(biāo)號僅在本部分使用。式(ii)和(iii)化合物可市場上獲得或可使用本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)合成。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，當(dāng)hcl用于制備的最后步驟時，下面例示的化合物可以以鹽酸鹽的形式存在。

式(ii)和(iii)化合物可以在常規(guī)的還原胺化條件下反應(yīng)，得到式(i)化合物。加成反應(yīng)通常在極性溶劑(例如甲醇)和酸(例如乙酸)的存在下進(jìn)行。所述酸通常以相對于式(i)100mol％的量存在。還原劑通常為硼氫化物(例如氰基硼氫化鈉)。

方案1

式(i)化合物可以方便地通過方案2所示的方法制備，起始于合成的環(huán)丙基胺(iv)和合適地保護(hù)的醛(v)。胺(iv)與醛(v)通過還原胺化得到式(vi)中間體。然后可將胺基保護(hù)。然后脫去x或y基團(tuán)的保護(hù)基得到式(vii)化合物，以便于合適的r1取代基進(jìn)行官能團(tuán)化，得到式(viii)化合物。然后，胺可以脫保護(hù)基并用r3基團(tuán)官能團(tuán)化。

方案2

式(ii)和(iv)化合物可以如方案3所示合成。起始于肉桂酸(ix)，在縮合劑(例如hatu)和堿(例如dipea)的存在下,與二甲羥胺縮合得到酰胺(x)。然后在標(biāo)準(zhǔn)條件(例如三甲基碘化亞砜及氫化鈉)的存在下進(jìn)行環(huán)丙基化，反應(yīng)得到式(xi)化合物。然后該酰胺水解得到式(xii)酸。然后將其在標(biāo)準(zhǔn)的curtius重排條件下反應(yīng)，得到所需式(iv)化合物。式(iv)化合物可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下轉(zhuǎn)化為式(ii)化合物。

方案3

本發(fā)明的另一方面提供了一種藥物組合物，其含有治療有效量的選自上述通式(ⅰ)的化合物、其可藥用的鹽、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或外消旋體中的一種或多種，以及任選地，一種或多種可藥用的載體、賦形劑、佐劑、輔料和/或稀釋劑。所述輔料例如為氣味劑、香味劑、甜味劑等。

本發(fā)明所提供的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為1-99％的活性成份，其優(yōu)選的比例是，通式i化合物作為活性成分占總重量的65wt％～99wt％，其余部分為藥學(xué)可接受的載體、稀釋液或溶液或鹽溶液。

本發(fā)明所提供的化合物和藥物組合物可以是多種形式，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、溶液狀、懸浮液和氣霧劑等，并可以存在于適宜的固體或液體的載體或稀釋液中和適宜的用于注射或滴注的消毒器具中。

本發(fā)明的藥物組合物的各種劑型可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)制備方法制備。其制劑配方的單位計量中包含0.05-200mg通式i化合物，優(yōu)選地，制劑配方的單位計量中包含0.1mg-100mg通式i化合物。

本發(fā)明的化合物和藥物組合物可對哺乳動物臨床使用，包括人和動物，可以通過口、鼻、皮膚、肺或者胃腸道等的給藥途徑。最優(yōu)選為口服。最優(yōu)選日劑量為0.01-200mg/kg體重，一次性服用，或0.01-100mg/kg體重分次服用。不管用何種服用方法，個人的最佳劑量應(yīng)依據(jù)具體的治療而定。通常情況下是從小劑量開始，逐漸增加劑量一直到找到最適合的劑量。

本發(fā)明的又一方面提供了一種賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑，其包含選自上述通式i所示的化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物中的一種或多種，以及任選地一種或多種可藥用的載體、賦形劑、佐劑、輔料和/或稀釋劑。

本發(fā)明的化合物和組合物用于治療和預(yù)防與賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑相關(guān)的惡性腫瘤疾病，所述疾病包括，但不限于，癌癥、白血病等疾病。

因此，本發(fā)明的又一方面提供了上述通式i所示的化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物在制備用于治療與賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑相關(guān)的惡性腫瘤疾病，例如癌癥、白血病等疾病的藥物中的用途。

本發(fā)明的又一個方面提供了一種治療與治療與賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)抑制劑相關(guān)的惡性腫瘤疾病，例如癌癥、白血病等疾病的方法，其包括向需要該治療的患者給藥選自上述通式i所示的化合物、其可藥用的鹽、外消旋體、r-異構(gòu)體、s-異構(gòu)體或它們的混合物中的一種或多種。

具體實(shí)施方式

在以下的實(shí)施例中將進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例14-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a1)

向100ml茄形瓶中加入20ml無水甲醇，稱取反式-2-苯基環(huán)丙胺167mg及4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯300mg加入到甲醇溶液中，再向體系中加入72μl乙酸，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流10分鐘，然后冷卻至室溫，再向溶液中加入142mg氰基硼氫化鈉，室溫攪拌5小時，用薄層層析(tlc)監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束旋干甲醇，加入50ml水，二氯甲烷50ml萃取3次，有機(jī)層旋干，二氯甲烷：甲醇＝50：1柱層析得到目標(biāo)產(chǎn)物a1(310mg，產(chǎn)率72％)。¹hnmr(600mhz,meod)δ7.41–7.34(m,4h),7.36–7.30(m,3h),7.27–7.24(m,1h),7.22–7.19(m,2h),5.15(s,2h),4.14–4.08(m,2h),3.54(d,j＝20.1hz,2h),3.27–3.14(m,2h),3.07(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.60(ddd,j＝10.3,6.6,3.6hz,1h),2.02–1.95(m,2h),1.87–1.72(m,2h),1.60(ddd,j＝10.4,6.8,4.4hz,1h),1.41(dt,j＝7.8,6.7hz,1h)；lrms(esi):383.21[m+h]⁺。

實(shí)施例2n-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a2)

2.14-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-氟-4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得到4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(產(chǎn)率75％)。

2.2終產(chǎn)物a2的合成

將3.5g4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯溶于30ml2m鹽酸1，4-二氧六環(huán)中，常溫攪拌10小時，反應(yīng)完畢，旋干溶劑得白色固體。將固體溶于少量甲醇，加入大量乙酸乙酯，超聲析出白色固體，抽濾后取濾餅干燥，得到目標(biāo)產(chǎn)物a2的二鹽酸鹽4.4g(產(chǎn)率97％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.30(t,j＝7.4hz,2h),7.22(t,j＝7.3hz,1h),7.14(d,j＝7.5hz,2h),3.55(d,j＝20.3hz,2h),3.38(dd,j＝13.4,4.7hz,2h),3.21(td,j＝13.2,3.1hz,2h),2.97(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.52(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.25–2.10(m,2h),1.96(dtd,j＝37.8,14.7,4.9hz,2h),1.50(ddd,j＝10.9,7.1,4.4hz,1h),1.36(q,j＝7.2hz,1h)；lrms(esi):249.17[m+h]⁺。

實(shí)施例34-((4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酸甲酯(a3)

將4-氟-4-甲酰基哌啶-1-甲酸芐酯替換為4-((4-氟-4-甲?；哙?1-基)甲基)苯甲酸甲酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a3(產(chǎn)率63％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.95(d,j＝8.3hz,2h),7.48(d,j＝8.2hz,2h),7.27–7.18(m,2h),7.18–7.12(m,1h),7.08–7.04(m,2h),4.31(s,2h),3.79(s,3h),3.48(d,j＝20.2hz,2h),3.39(d,j＝12.5hz,2h),3.23(t,j＝12.2hz,2h),2.90(dt,j＝7.9,4.0hz,1h),2.44(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.21–2.07(m,2h),2.04–1.81(m,2h),1.43(ddd,j＝10.9,7.2,4.4hz,1h),1.29(q,j＝7.3hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例4(1s,4s)-4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己胺(a4)

將4-氟-4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯替換為((1s,4s)-4-氟-4-甲?；h(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例2，得產(chǎn)物a4(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.33–7.27(m,2h),7.25–7.16(m,3h),3.51(d,j＝19.8hz,2h),3.28–3.18(m,1h),3.05(dt,j＝7.9,4.1hz,1h),2.61(ddd,j＝10.3,6.6,3.6hz,1h),2.21–2.10(m,2h),2.08–1.97(m,2h),1.87–1.66(m,4h),1.60(ddd,j＝10.5,6.8,4.4hz,1h),1.38(dt,j＝7.9,6.7hz,1h)；lrms(esi):263.18[m+h]⁺。

實(shí)施例54-((4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酸(a5)

5.14-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成

將實(shí)施例2.1所得產(chǎn)物4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯210mg溶于15ml氯仿，加入1.2ml三乙胺后，向溶液中緩緩滴加0.44ml三氟乙酸酐，室溫攪拌30分鐘后加入1m碳酸鈉溶液6ml淬滅反應(yīng)，分離得有機(jī)層，水層用5ml二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)層后旋干溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得黃色油狀物1.09g，為4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(產(chǎn)率85％)。

5.22,2,2-三氟-n-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺鹽酸鹽的合成

將4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯1.09g溶于15ml2m鹽酸1，4-二氧六環(huán)中，常溫攪拌4小時，反應(yīng)完畢，旋干溶劑后得到黃色固體為2,2,2-三氟-n-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺鹽酸鹽(產(chǎn)率99％)。

5.34-((4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶-1-基甲基)苯甲酸叔丁酯的合成

將2,2,2-三氟-n-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺鹽酸鹽1.1g溶于20ml乙腈中，向體系中依次加入784mg4-溴甲基苯甲酸叔丁酯及1.2g碳酸鉀后加熱回流2小時，用薄層層析(tlc)監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后將乙腈旋干，再加入30ml水，二氯甲烷20ml萃取3次，有機(jī)層旋干，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得到4-((4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶1-基甲基)苯甲酸叔丁酯720mg(產(chǎn)率47％)。

5.4終產(chǎn)物a5的合成

將4-((4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶1-基甲基)苯甲酸叔丁酯720mg溶于20ml乙醇，加入1m氫氧化鈉溶液10ml，加熱回流2小時后停止加熱，冷卻至室溫，旋干溶劑，加入30ml水，二氯甲烷20ml萃取3次，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥后旋干，將得到的淡黃色油狀體溶于1m鹽酸溶液中，90℃加熱1小時后停止反應(yīng)，將反應(yīng)液置于冰浴中攪拌1小時后析出固體，抽濾，將濾餅干燥得到白色固體為目標(biāo)產(chǎn)物a5的二鹽酸鹽540mg(產(chǎn)率88％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.00–7.93(m,2h),7.44(dt,j＝7.4,1.2hz,2h),7.26–7.11(m,5h),3.54(d,j＝1.5hz,2h),3.11(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.62–2.49(m,3h),2.05–1.85(m,3h),1.45(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),0.95(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):383.21[m+h]⁺。

實(shí)施例6n-((1-芐基-4-氟哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a6)

6.1n-((1-芐基-4-氟哌啶-4-基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺的合成

將4-溴甲基苯甲酸叔丁酯替換為溴甲基苯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例5.3，得到產(chǎn)物n-((1-芐基-4-氟哌啶-4-基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺210mg(產(chǎn)率70％)。

6.2終產(chǎn)物a6的合成

將210mgn-((1-芐基-4-氟哌啶-4-基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺溶于10ml乙醇，加入1m氫氧化鈉溶液5ml，加熱回流2小時后停止加熱，冷卻至室溫，旋干溶劑，加入30ml水，二氯甲烷20ml萃取3次，有機(jī)層旋干，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到目標(biāo)產(chǎn)物a6149mg(產(chǎn)率91％)。¹hnmr(500mhz,d2o)δ7.50–7.41(m,5h),7.35–7.28(m,2h),7.27–7.22(m,1h),7.18–7.12(m,2h),4.32(s,2h),3.54(d,j＝20.3hz,2h),3.47(d,j＝8.3hz,2h),3.28(t,j＝12.7hz,2h),2.97(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.52(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.22(dd,j＝15.3,8.4hz,2h),2.11–1.86(m,2h),1.50(ddd,j＝10.9,7.2,4.4hz,1h),1.37(q,j＝7.2hz,1h)；lrms(esi):339.22[m+h]⁺。

實(shí)施例73-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)-丙酸甲酯(a7)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為3-(4-氟-4-甲?；哙?1-基)-丙酸甲酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a7(產(chǎn)率57％)。¹hnmr(500mhz,d2o)δ7.32(t,j＝7.5hz,2h),7.25(t,j＝7.4hz,1h),7.16(d,j＝7.5hz,2h),3.68(s,3h),3.61–3.54(m,4h),3.46(t,j＝7.0hz,2h),3.32–3.23(m,2h),3.00(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.93–2.85(m,2h),2.55(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.30–2.20(m,2h),2.16–1.94(m,2h),1.52(ddd,j＝11.1,7.2,4.4hz,1h),1.38(q,j＝7.3hz,1h)；lrms(esi):335.21[m+h]⁺。

實(shí)施例81-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)-3-苯基-1-丙酮(a8)

8.12,2,2-三氟-n-((4-氟-1-(3-苯基丙?；?哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺的合成

取實(shí)施例5.2產(chǎn)物2,2,2-三氟-n-((4-氟哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺鹽酸鹽200mg溶于10ml干燥二氯甲烷中，加入0.22ml三乙胺，冰浴下逐滴加入已溶于二氯甲烷的3-苯基丙酰氯106mg，滴加完畢后室溫攪拌2h，反應(yīng)結(jié)束加入15ml水和15ml二氯甲烷萃取，收集有機(jī)層旋干后得無色油狀體為2,2,2-三氟-n-((4-氟-1-(3-苯基丙?；?哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺粗品。

8.2終產(chǎn)物a8的合成

將n-((1-芐基-4-氟哌啶-4-基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺替換為2,2,2-三氟-n-((4-氟-1-(3-苯基丙?；?哌啶-4-基)甲基)-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6.2，得產(chǎn)物a8(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.28–7.12(m,5h),7.14–7.04(m,5h),4.14(d,j＝13.5hz,1h),3.61(d,j＝14.1hz,1h),3.21(d,j＝20.3hz,2h),3.06(t,j＝13.2hz,1h),2.90–2.62(m,5h),2.57–2.47(m,1h),2.46–2.37(m,1h),1.78(t,j＝12.4hz,1h),1.62(t,j＝12.5hz,1h),1.48–1.21(m,3h),0.81(dt,j＝39.9,13.9hz,1h)；lrms(esi):381.23[m+h]⁺。

實(shí)施例94-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸苯酯(a9)

將4-氟-4-甲酰基哌啶-1-甲酸芐酯替換為4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸苯酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a9(產(chǎn)率79％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.30(t,j＝7.4hz,2h),7.24(t,j＝7.2hz,2h),7.16(t,j＝7.1hz,2h),7.08(d,j＝7.4hz,2h),6.98(d,j＝7.6hz,2h),4.11(d,j＝13.8hz,1h),3.87(d,j＝13.6hz,1h),3.41(d,j＝20.4hz,2h),3.23(t,j＝12.7hz,1h),3.10(t,j＝12.9hz,1h),2.94–2.85(m,1h),2.49–2.40(m,1h),1.94–1.83(m,2h),1.83–1.58(m,2h),1.43(ddd,j＝10.8,7.1,4.0hz,1h),1.35–1.22(m,1h).；lrms(esi):369.19[m+h]⁺。

實(shí)施例103-環(huán)己基-1-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)-1-丙酮(a10)

將3-苯基丙酰氯替換為3-環(huán)己基丙酰氯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a10(產(chǎn)率54％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.34–7.27(m,2h),7.25–7.16(m,3h),4.48–4.41(m,1h),3.95–3.88(m,1h),3.53(d,j＝20.1hz,2h),3.40(ddd,j＝14.2,12.4,2.9hz,1h),3.05(dt,j＝7.9,4.1hz,1h),2.96(td,j＝12.8,3.0hz,1h),2.58(ddd,j＝10.3,6.5,3.5hz,1h),2.42(td,j＝7.5,3.6hz,2h),2.11–1.93(m,2h),1.93–1.54(m,8h),1.53–1.34(m,3h),1.33–1.09(m,4h),1.01–0.82(m,2h)；lrms(esi):387.27[m+h]⁺。

實(shí)施例114-氟-n-甲基-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己烷-1-胺(a11)

11.1n-((4-氨基-1-氟環(huán)己基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺鹽酸鹽的合成

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為(4-氟-4-甲酰基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，5.1及5.2，得產(chǎn)物n-((4-氨基-1-氟環(huán)己基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺鹽酸鹽(產(chǎn)率39％)。

11.2終產(chǎn)物a11的合成

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為甲醛溶液(含8％-14％甲醇)，將反式-2-苯基環(huán)丙基-1-胺替換為n-((4-氨基-1-氟環(huán)己基)甲基)-2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1及6.2，得產(chǎn)物a11(產(chǎn)率64％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.24–7.17(m,2h),7.16–7.10(m,1h),7.07–7.02(m,2h),3.34(d,j＝20.4hz,2h),3.06–2.9d2o5(m,1h),2.85(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.54(s,3h),2.41(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.01–1.89(m,4h),1.64–1.43(m,4h),1.39(ddd,j＝10.5,7.2,4.4hz,1h),1.30–1.19(m,1h)；lrms(esi):277.20[m+h]⁺。

實(shí)施例12n-((4-氟-1-(3-苯基丙基)哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a12)

將溴甲基苯替換為溴丙基苯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a12(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.45–7.39(m,4h),7.38–7.31(m,4h),7.28–7.23(m,2h),3.71–3.58(m,4h),3.33–3.16(m,4h),3.09(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.77(t,j＝7.4hz,2h),2.64(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.38–2.26(m,2h),2.22–2.01(m,4h),1.62(ddd,j＝10.5,7.2,4.4hz,1h),1.48(q,j＝7.2hz,1h)；lrms(esi):367.25[m+h]⁺。

實(shí)施例13n-((1-([1,1'-聯(lián)苯]-4-甲基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a13)

將溴甲基苯替換為4-溴甲基-1,1'-聯(lián)苯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a13(產(chǎn)率80％)。¹hnmr(400mhz,meod)δ7.78(d,j＝8.1hz,2h),7.74–7.64(m,4h),7.49(t,j＝7.6hz,2h),7.44–7.38(m,1h),7.33(t,j＝7.4hz,2h),7.29–7.14(m,3h),4.48(s,2h),3.72–3.54(m,4h),3.38(d,j＝13.2hz,2h),3.09(t,j＝4.6hz,1h),2.64(t,j＝9.6hz,1h),2.40–2.13(m,4h),1.67–1.59(m,1h),1.42(q,j＝7.0hz,1h)；lrms(esi):415.27[m+h]⁺。

實(shí)施例14n-((1-(3-環(huán)己基丙基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a14)

將溴甲基苯替換為溴丙基環(huán)己烷，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a14(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.45–7.39(m,2h),7.38–7.32(m,1h),7.28–7.23(m,2h),3.73–3.58(m,4h),3.29(td,j＝13.2,2.9hz,2h),3.22–3.15(m,2h),3.10(dt,j＝8.0,4.0hz,1h),2.64(ddd,j＝10.5,6.9,3.7hz,1h),2.41–2.30(m,2h),2.25–2.02(m,2h),1.86–1.55(m,8h),1.49(q,j＝7.3hz,1h),1.35–1.04(m,6h),0.99–0.82(m,2h)；lrms(esi):373.29[m+h]⁺。

實(shí)施例15n-((4-氟-1-甲基哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a15)

將(4-氟-4-甲酰環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯替換為4-氟-4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例11，得產(chǎn)物a15(產(chǎn)率34％)。¹hnmr(400mhz,d2o)δ7.30–7.24(m,2h),7.22–7.17(m,1h),7.11(dd,j＝7.1,1.8hz,2h),3.52(d,j＝20.3hz,2h),3.43(dd,j＝12.7,4.5hz,2h),3.20(td,j＝13.2,3.1hz,2h),2.94(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.81(s,3h),2.49(ddd,j＝10.4,6.7,3.6hz,1h),2.19(dd,j＝15.1,8.6hz,2h),2.03(td,j＝15.1,14.7,4.9hz,1h),1.93(td,j＝14.5,4.8hz,1h),1.47(ddd,j＝10.5,7.2,4.4hz,1h),1.33(q,j＝7.2hz,1h)；lrms(esi):263.18[m+h]⁺。

實(shí)施例16n-((4-氟-1-(4-(甲磺?；?芐基)哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a16)

將溴甲基苯替換為1-溴甲基-4-甲磺?；?，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a16(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,meod)δ8.10–8.06(m,2h),7.92–7.87(m,2h),7.33–7.28(m,2h),7.25–7.16(m,3h),4.53(s,2h),3.65(d,j＝20.1hz,2h),3.53(d,j＝12.5hz,2h),3.42–3.30(m,2h),3.16(s,3h),3.10–3.05(m,1h),2.66–2.56(m,1h),2.37–2.16(m,4h),1.61(dt,j＝11.0,6.2hz,1h),1.40(q,j＝7.1hz,1h)；lrms(esi):417.19[m+h]⁺。

實(shí)施例17n-((4-氟-1-(萘基-2-甲基)哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a17)

將溴甲基苯替換為2-溴甲基萘，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a17(產(chǎn)率60％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.95–7.77(m,3h),7.69(d,j＝1.5hz,1h),7.61–7.47(m,3h),7.26–7.11(m,5h),3.66(s,2h),3.00(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.46(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),1.93(ddt,j＝25.1,14.2,7.2hz,3h),1.53(ddt,j＝25.1,13.1,7.0hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):389.23[m+h]⁺。

實(shí)施例18n-((1-氟環(huán)己基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a18)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為1-氟環(huán)己烷-1-甲醛，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a18(產(chǎn)率82％)。¹hnmr(400mhz,meod)δ7.36–7.30(m,2h),7.28–7.24(m,1h),7.22(tt,j＝5.9,1.2hz,2h),3.47(d,j＝20.0hz,2h),3.06(dt,j＝8.0,4.1hz,1h),2.59(ddd,j＝10.3,6.6,3.6hz,1h),1.99–1.88(m,2h),1.74–1.62(m,6h),1.59(ddd,j＝10.3,6.8,4.4hz,2h),1.40(dt,j＝7.9,6.7hz,2h)；lrms(esi):248.17[m+h]⁺。

實(shí)施例19(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己基)氨基甲酸芐酯(a19)

將4-氟-4-甲酰基哌啶-1-甲酸芐酯替換為(4-氟-4-甲?；h(huán)己基)氨基甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a19(產(chǎn)率64％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.02(s,2h),4.11(p,j＝7.0hz,1h),2.73–2.64(m,2h),1.94–1.72(m,5h),1.65–1.50(m,2h),1.54–1.43(m,2h),0.99(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.67(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例20n-((4-氟-1-苯基哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a20)

將溴甲基苯替換為溴苯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a20(產(chǎn)率41％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.30–7.11(m,7h),7.07–6.99(m,2h),6.80(tt,j＝7.4,2.0hz,1h),4.00(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.33(dt,j＝12.4,7.0hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.06–1.84(m,3h),1.50(ddt,j＝25.2,13.2,7.1hz,2h),0.97(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):325.20[m+h]⁺。

實(shí)施例21環(huán)己基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a21)

將3-苯基丙酰氯替換為環(huán)己基甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a21(產(chǎn)率63％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),4.02(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.91–3.85(m,2h),3.27(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.04–1.85(m,3h),1.77–1.65(m,2h),1.70–1.56(m,4h),1.60–1.42(m,2h),1.34–1.12(m,6h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):389.25[m+h]⁺。

實(shí)施例22吡啶-4-基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a22)

將3-苯基丙酰氯替換為吡啶-4-基甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a22(產(chǎn)率53％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.58(d,j＝5.1hz,2h),7.70(d,j＝5.1hz,2h),7.26–7.11(m,5h),5.80(s,2h),4.17(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.10(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.04–1.83(m,3h),1.63(ddt,j＝25.2,13.2,7.1hz,2h),0.92(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):384.20[m+h]⁺。

實(shí)施例234-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸苯乙酯(a23)

將3-苯基丙酰氯替換為氯甲酸苯乙酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a23(產(chǎn)率60％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.27–7.11(m,10h),4.41(t,j＝7.5hz,2h),4.05(dt,j＝12.4,7.0hz,2h),3.30(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.86(t,j＝7.5hz,2h),2.78–2.64(m,2h),2.05–1.86(m,3h),1.65(ddt,j＝25.2,13.2,7.1hz,2h),0.96(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例244-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸乙酯(a24)

將3-苯基丙酰氯替換為氯甲酸乙酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a24(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),4.10–3.98(m,4h),3.25(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.00–1.82(m,3h),1.64(ddt,j＝25.2,13.2,7.1hz,2h),1.17(t,j＝8.0hz,3h),0.94(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):321.19[m+h]⁺。

實(shí)施例25(1h-吲哚-5-基)甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a25)

將3-苯基丙酰氯替換為(1h-吲哚-5-基)甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a25(產(chǎn)率36％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.53(s,1h),8.06(t,j＝1.5hz,1h),7.61(d,j＝7.5hz,1h),7.50–7.40(m,2h),7.26–7.11(m,5h),6.65(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),5.02(s,2h),4.04(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.30(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.05–1.86(m,3h),1.64(ddt,j＝25.2,13.2,7.1hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):422.22[m+h]⁺。

實(shí)施例261-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)吡啶-1-基)-1-乙酮(a26)

將3-苯基丙酰氯替換為乙酰氯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a26(產(chǎn)率76％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),3.96(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.93(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.71–2.61(m,2h),2.60(s,1h),2.10(s,3h),2.00–1.82(m,3h),1.63(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.99(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.66(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):291.18[m+h]⁺。

實(shí)施例27噻吩-2基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a27)

將3-苯基丙酰氯替換為噻吩-2基甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a27(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.30(dd,j＝6.4,2.5hz,1h),7.26–7.11(m,5h),7.05–6.96(m,2h),5.61(s,2h),4.19(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.11(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.08–1.82(m,3h),1.73–1.55(m,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):389.16[m+h]⁺。

實(shí)施例28呋喃-2基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a28)

將3-苯基丙酰氯替換為呋喃-2基甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a28(產(chǎn)率76％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.45(dd,j＝7.0,1.9hz,1h),7.26–7.11(m,5h),6.44–6.32(m,2h),5.09(s,2h),4.06(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.31(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),1.99(dt,j＝10.9,6.0hz,1h),1.98–1.86(m,2h),1.65(ddt,j＝25.3,13.3,7.1hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):373.18[m+h]⁺。

實(shí)施例294-氟芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a29)

將3-苯基丙酰氯替換為4-氟芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a29(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.35(dd,j＝7.2,5.7hz,2h),7.26–7.11(m,7h),5.21–5.15(m,2h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.25(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.00–1.82(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),0.94(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):401.20[m+h]⁺。

實(shí)施例304-氯芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a30)

將3-苯基丙酰氯替換為4-氯芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a30(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39(d,j＝7.5hz,2h),7.34–7.26(m,2h),7.26–7.11(m,5h),5.18(s,1h),4.04(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.25(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.00–1.82(m,3h),1.64(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.94(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):417.17[m+h]⁺。

實(shí)施例314-溴芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a31)

將3-苯基丙酰氯替換為4-溴芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a31(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.58(d,j＝7.6hz,2h),7.29–7.22(m,2h),7.27–7.11(m,5h),5.18(s,1h),4.02(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.28(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.04–1.86(m,3h),1.63(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.95(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):461.12[m+h]⁺。

實(shí)施例324-甲氧基芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a32)

將3-苯基丙酰氯替換為4-甲氧基芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a32(產(chǎn)率76％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),7.03–6.96(m,2h),6.94–6.87(m,2h),5.18(s,1h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.79(s,3h),3.28(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.04–1.85(m,3h),1.72–1.54(m,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):413.22[m+h]⁺。

實(shí)施例334-三氟甲基芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a33)

將3-苯基丙酰氯替換為4-三氟甲基芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a33(產(chǎn)率68％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.69(d,j＝7.2hz,2h),7.58–7.52(m,2h),7.26–7.11(m,5h),5.18(s,1h),4.03(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),3.27(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.74–2.64(m,2h),2.60(s,1h),1.94(ddt,j＝25.0,14.1,7.1hz,3h),1.73–1.54(m,2h),0.96(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):451.19[m+h]⁺。

實(shí)施例343,5-二甲氧基芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a34)

將3-苯基丙酰氯替換為3,5-二甲氧基芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a34(產(chǎn)率77％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),6.59(dt,j＝2.2,1.0hz,2h),6.33(t,j＝2.0hz,1h),5.02(d,j＝1.2hz,2h),4.16(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.66(s,6h),3.09(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.05–1.81(m,3h),1.61(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),0.94(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):443.23[m+h]⁺。

實(shí)施例354-((4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-羰氧基)甲基)苯甲酸(a35)

35.14-(叔丁氧羰基)芐基4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯的合成

將3-苯基丙酰氯替換為4-((氯甲酰氧基)甲基)苯甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8.1，得4-(叔丁氧羰基)芐基4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(產(chǎn)率77％)。

35.2終產(chǎn)物a35的合成

將4-((4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶1-基甲基)苯甲酸叔丁酯替換為4-(叔丁氧羰基)芐基4-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例5.4，得產(chǎn)物a35的鹽酸鹽(產(chǎn)率85％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.91(s,1h),7.93–7.86(m,2h),7.46–7.39(m,2h),7.26–7.11(m,5h),5.18(s,1h),4.03(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.29(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.05–1.86(m,3h),1.63(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):427.20[m+h]⁺。

實(shí)施例36(e)-1-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)-3-苯基-2-烯-1-丙酮(a36)

將3-苯基丙酰氯替換為肉桂酰氯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a36(產(chǎn)率88％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.66–7.54(m,3h),7.43–7.34(m,3h),7.31(tt,j＝6.9,1.0hz,2h),7.25–7.16(m,4h),4.56(d,j＝12.8hz,1h),4.27(d,j＝13.3hz,1h),3.61–3.45(m,3h),3.17–3.09(m,1h),3.06(dt,j＝7.9,4.0hz,1h),2.58(ddd,j＝10.3,6.6,3.6hz,1h),2.07(q,j＝12.6,11.4hz,2h),1.85(tt,j＝25.7,13.1hz,2h),1.58(ddd,j＝10.6,6.8,4.4hz,1h),1.40(dt,j＝7.9,6.7hz,1h)；lrms(esi):379.21[m+h]⁺。

實(shí)施例37n-芐基-4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-硫代酰胺(a37)

將3-苯基丙酰氯替換為芐基異硫氰酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a37(產(chǎn)率58％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.36–7.13(m,10h),7.13(s,1h),4.75(s,2h),3.97(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.82(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.47(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),1.89(q,j＝7.0hz,1h),1.77(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),1.47(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.97(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):398.20[m+h]⁺。

實(shí)施例38n-芐基-4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酰胺(a38)

將3-苯基丙酰氯替換為芐基異氰酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a38(產(chǎn)率52％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.30(s,3h),7.34–7.23(m,2h),7.27–7.11(m,5h),4.27(s,2h),4.11(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.09(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.72–2.57(m,3h),2.04–1.85(m,3h),1.59(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,2h),0.94(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.68(td,j＝7.0,4.9hz,1h)；lrms(esi):382.22[m+h]⁺。

實(shí)施例39n-((1-((芐氧基)甲基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a39)

將溴甲基苯替換為芐基氯甲基醚，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a39(產(chǎn)率64％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.37–7.25(m,5h),7.29–7.11(m,5h),4.68(s,1h),4.44(s,2h),3.06(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.63–2.51(m,3h),1.96–1.78(m,3h),1.47(ddt,j＝25.3,13.3,7.1hz,2h),0.94(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):369.23[m+h]⁺。

實(shí)施例404-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己烷-1-甲酸芐酯(a40)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-氟-4-甲?；h(huán)己烷-1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a40(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.38–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.11(s,2h),2.74–2.64(m,2h),2.27(p,j＝6.9hz,1h),2.18–2.05(m,2h),1.98–1.74(m,6h),1.61–1.42(m,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.68(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):382.21[m+h]⁺。

實(shí)施例41環(huán)戊基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a41)

將3-苯基丙酰氯替換為環(huán)戊基甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a41(產(chǎn)率69％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),4.04(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.88(s,2h),3.28(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.72(s,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.96(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),1.86(s,1h),1.71–1.42(m,7h),1.07(tdd,j＝7.8,4.8,1.5hz,2h),0.94(s,1h),0.69(s,1h)；lrms(esi):375.24[m+h]⁺。

實(shí)施例42環(huán)丁基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a42)

將3-苯基丙酰氯替換為環(huán)丁基甲基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a42(產(chǎn)率71％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),4.13(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.88(d,j＝7.0hz,2h),3.11(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),2.90(q,j＝6.9hz,1h),2.62–2.47(m,2h),2.14–1.96(m,4h),1.90–1.77(m,2h),1.80–1.68(m,2h),1.71–1.58(m,4h),0.93(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):361.22[m+h]⁺。

實(shí)施例43哌啶-4-基甲基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a43)

將3-苯基丙酰氯替換為4-((氯甲酰氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8.1及5.4，得產(chǎn)物a43的二鹽酸鹽(產(chǎn)率61％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.88(s,2h),3.27(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.04(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.75–2.57(m,5h),2.44(s,1h),2.04–1.86(m,2h),1.91(s,1h),1.66(s,1h),1.64(ddt,j＝25.3,13.7,7.1hz,2h),1.45(dt,j＝13.1,7.1hz,2h),1.18(dt,j＝13.3,7.2hz,2h),0.95(s,1h),0.71(s,1h)；lrms(esi):390.25[m+h]⁺。

實(shí)施例443-氯芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a44)

將3-苯基丙酰氯替換為3-氯芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a44(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.51–7.45(m,1h),7.39–7.26(m,3h),7.26–7.11(m,5h),5.02(s,2h),4.04(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.26(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.01–1.83(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),0.93(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):417.17[m+h]⁺。

實(shí)施例452-氯芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a45)

將3-苯基丙酰氯替換為2-氯芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a45(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.45–7.31(m,2h),7.26–7.05(m,7h),5.09(d,j＝0.9hz,2h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.26(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.00–1.82(m,3h),1.73–1.55(m,2h),0.94(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):417.17[m+h]⁺。

實(shí)施例46(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)(苯基)甲酮(a46)

將3-苯基丙酰氯替換為苯甲酰氯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a46(產(chǎn)率66％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.59(tt,j＝7.2,2.2hz,1h),7.50–7.36(m,4h),7.26–7.11(m,5h),3.75(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.13(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),1.98–1.86(m,2h),1.90–1.80(m,1h),1.63(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),0.96(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):353.20[m+h]⁺。

實(shí)施例474-叔丁基芐基4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(a47)

將3-苯基丙酰氯替換為4-叔丁基芐基氯甲酸酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a47(產(chǎn)率69％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39(t,j＝6.3hz,4h),7.26–7.11(m,5h),5.18(d,j＝1.2hz,2h),4.04(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.25(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.00–1.82(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),1.31(s,9h),0.94(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):439.27[m+h]⁺。

實(shí)施例484-氟-2-甲基-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a48)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-氟-2-甲基-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a48(產(chǎn)率68％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.50(d,j＝12.3hz,1h),5.31(d,j＝12.4hz,1h),4.16(dt,j＝12.4,7.1hz,1h),3.79(h,j＝6.8hz,1h),3.21(dt,j＝12.4,7.1hz,1h),3.04(dd,j＝25.2,12.4hz,1h),2.90–2.66(m,2h),2.12–1.60(m,4h),1.46(ddd,j＝25.3,13.1,7.0hz,1h),1.25(d,j＝6.8hz,3h),0.94(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.69(td,j＝7.0,4.9hz,1h).lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例494-氟-2,6-二甲基-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a49)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-氟-2,6-二甲基-4-甲酰基哌啶-1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a49(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.35(d,j＝12.4hz,1h),3.88(q,j＝6.9hz,2h),2.74–2.64(m,2h),2.60(s,1h),1.94–1.78(m,3h),1.51(ddd,j＝25.3,13.2,7.0hz,2h),1.25(d,j＝6.8hz,6h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):411.24[m+h]⁺。

實(shí)施例504-氟-4-(((反式-2-(萘-2-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a50)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(萘-2-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a50(產(chǎn)率60％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.94–7.81(m,3h),7.57–7.39(m,4h),7.39–7.26(m,5h),5.22(s,2h),4.04(dt,j＝12.4,7.2hz,2h),3.30(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.76(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.05–1.87(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),0.99(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.75(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):433.22[m+h]⁺。

實(shí)施例514-氟-4-(((反式-2-(苯并噻吩-5-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a51)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(苯并噻吩-5-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a51(產(chǎn)率55％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.96(d,j＝7.5hz,1h),7.68(s,1h),7.55–7.44(m,2h),7.32(dtd,j＝8.9,7.4,2.3hz,6h),5.22(s,2h),4.03(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.30(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),2.77(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.05–1.87(m,3h),1.73–1.55(m,2h),0.99(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.77(td,j＝7.0,4.9hz,1h)；lrms(esi):439.18[m+h]⁺。

實(shí)施例524-氟-4-(((反式-2-(吡啶-4-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a52)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(吡啶-4-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a52(產(chǎn)率65％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.50(d,j＝5.1hz,2h),7.39–7.26(m,5h),7.22(d,j＝5.2hz,2h),5.22(s,2h),4.02(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),3.34–3.13(m,3h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.94(ddt,j＝25.3,13.9,7.1hz,2h),1.79–1.54(m,3h),0.86(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.61(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):384.20[m+h]⁺。

實(shí)施例534-氟-4-(((反式-2-(1h-吲哚-5-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a53)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(1h-吲哚-5-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a53(產(chǎn)率57％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.53(s,1h),7.82(s,1h),7.56(d,j＝7.5hz,1h),7.43(d,j＝7.5hz,1h),7.39–7.24(m,6h),6.64(dd,j＝7.4,1.4hz,1h),5.22(s,2h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.29(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.76(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.05–1.87(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),0.99(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.76(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):422.22[m+h]⁺。

實(shí)施例544-氟-4-(((反式-2-(1-甲基-1h-吲哚-5-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a54)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(1-甲基-1h-吲哚-5-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a54(產(chǎn)率67％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.66(t,j＝1.5hz,1h),7.52(d,j＝7.5hz,1h),7.39–7.26(m,5h),7.17(d,j＝7.5hz,1h),7.02(dd,j＝7.5,1.5hz,1h),6.53(dd,j＝7.5,1.6hz,1h),5.22(s,2h),4.12(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.79(s,3h),3.12(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75(q,j＝6.9hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.02–1.84(m,3h),1.65(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),0.96(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.72(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):436.23[m+h]⁺。

實(shí)施例554-氟-4-(((反式-2-(吲哚啉-5-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a55)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(吲哚啉-5-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a55(產(chǎn)率55％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),6.95(d,j＝2.0hz,1h),6.69(dd,j＝7.4,2.0hz,1h),6.47(d,j＝7.5hz,1h),5.83(s,1h),5.22(s,2h),4.02(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),3.65–3.43(m,2h),3.28(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.88(ddd,j＝18.5,10.3,8.0hz,1h),2.77–2.57(m,4h),2.04–1.82(m,3h),1.63(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):424.23[m+h]⁺。

實(shí)施例564-氟-4-(((反式-2-(1-(苯磺?；?吲哚啉-5-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a56)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(1-(苯磺酰基)吲哚啉-5-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a56(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.68–7.51(m,5h),7.39–7.26(m,5h),7.17(d,j＝2.0hz,1h),6.75(dd,j＝7.5,1.9hz,1h),6.63(d,j＝7.5hz,1h),5.22(s,2h),4.43–4.22(m,2h),4.19–4.09(m,1h),3.99(dt,j＝12.5,7.1hz,1h),3.32(dt,j＝12.5,7.1hz,1h),3.08(dt,j＝12.5,7.1hz,1h),2.97(q,j＝6.9hz,1h),2.92–2.83(m,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.09–1.72(m,4h),1.63(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,1h),0.90(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):564.23[m+h]⁺。

實(shí)施例574-氟-4-(((反式-2-(1h-吲哚-3-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a57)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(1h-吲哚-3-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a57(產(chǎn)率61％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.75(s,1h),7.58(dd,j＝7.4,1.5hz,1h),7.39–7.26(m,3h),7.32(s,3h),7.17(s,1h),7.02(dtd,j＝32.8,7.4,1.5hz,2h),5.22(s,2h),3.89–3.71(m,3h),2.89(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.88(ddt,j＝25.1,12.3,7.1hz,2h),1.72–1.46(m,3h),0.71(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.46(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):422.22[m+h]⁺。

實(shí)施例584-氟-4-(((反式-2-(咪唑并[1,2-α]吡啶-3-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a58)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(咪唑并[1,2-α]吡啶-3-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a58(產(chǎn)率51％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.47(dd,j＝7.4,1.5hz,1h),7.89(s,1h),7.47(dd,j＝7.5,1.6hz,1h),7.39–7.26(m,5h),7.21(td,j＝7.5,1.5hz,1h),6.85(td,j＝7.4,1.4hz,1h),5.22(s,2h),3.83(dt,j＝12.4,7.2hz,2h),3.76(q,j＝7.0hz,1h),2.89(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.88(ddt,j＝25.1,12.3,7.1hz,2h),1.72–1.46(m,3h),0.82(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.57(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):422.21[m+h]⁺。

實(shí)施例594-氟-4-(((反式-2-(2,3-二氫苯并呋喃-5-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a59)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(2,3-二氫苯并呋喃-5-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a59(產(chǎn)率65％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.05(d,j＝2.0hz,1h),6.96(dd,j＝7.5,2.1hz,1h),6.78(d,j＝7.5hz,1h),5.22(s,2h),4.47–4.37(m,2h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.29(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.99(ddd,j＝18.6,6.2,2.5hz,1h),2.77–2.57(m,4h),2.04–1.84(m,3h),1.63(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):425.22[m+h]⁺。

實(shí)施例604-氟-4-(((反式-2-(色滿-6-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a60)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(色滿-6-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a60(產(chǎn)率66％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.04–6.98(m,1h),6.96–6.89(m,1h),6.77(d,j＝7.4hz,1h),5.22(s,2h),4.08–3.91(m,3h),3.94–3.84(m,1h),3.28(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.77–2.64(m,3h),2.60(s,1h),2.50–2.36(m,1h),2.04–1.74(m,5h),1.73–1.54(m,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,4.9hz,1h)；lrms(esi):439.23[m+h]⁺。

實(shí)施例614-氟-4-(((反式-2-(2-氧代-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a61)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(2-氧代-1,2,3,4-四氫喹啉-6-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a61(產(chǎn)率69％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.01(s,1h),7.39–7.26(m,5h),7.20(d,j＝2.1hz,1h),7.11(dd,j＝7.5,1.9hz,1h),6.98(d,j＝7.5hz,1h),5.22(s,2h),4.14(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.31–3.07(m,4h),2.89–2.70(m,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.48(ddd,j＝15.2,4.4,1.7hz,1h),2.11(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),1.89(q,j＝7.0hz,1h),1.67(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.96(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.72(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):452.23[m+h]⁺。

實(shí)施例624-氟-4-(((反式-2-(噻吩-3-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a62)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(噻吩-3-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a62(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.22(d,j＝7.5hz,1h),6.95–6.86(m,2h),5.22(s,2h),3.83(dt,j＝12.4,7.2hz,2h),3.76(q,j＝7.0hz,1h),2.89(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.88(ddt,j＝25.1,12.3,7.1hz,2h),1.63(ddt,j＝25.3,12.5,7.1hz,2h),1.51(q,j＝7.0hz,1h),0.69(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.44(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):389.16[m+h]⁺。

實(shí)施例634-氟-4-(((反式-2-(呋喃-3-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a63)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(呋喃-3-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a63(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,6h),7.11(d,j＝1.5hz,1h),6.13(dd,j＝7.5,1.5hz,1h),5.22(s,2h),3.83(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),3.76(q,j＝7.0hz,1h),2.89(dt,j＝12.4,7.2hz,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.88(ddt,j＝25.1,12.3,7.1hz,2h),1.63(ddt,j＝25.3,12.5,7.1hz,2h),1.51(q,j＝7.0hz,1h),0.78(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.53(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):373.18[m+h]⁺。

實(shí)施例644-氟-4-(((反式-2-(噻唑-2-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a64)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(噻唑-2-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a64(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.69(d,j＝7.5hz,1h),7.58(d,j＝7.5hz,1h),7.39–7.26(m,5h),5.22(s,2h),3.83(dt,j＝12.4,7.2hz,2h),3.76(q,j＝7.0hz,1h),2.89(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.88(ddt,j＝25.1,12.3,7.1hz,2h),1.63(ddt,j＝25.3,12.5,7.1hz,2h),1.51(q,j＝7.0hz,1h),0.78(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.53(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):390.16[m+h]⁺。

實(shí)施例654-氟-4-(((反式-2-(4-氟苯基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a65)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(4-氟苯基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a65(產(chǎn)率78％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.16(ddd,j＝7.0,5.8,1.1hz,2h),7.12–7.03(m,2h),5.22(s,2h),4.04(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.25(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75–2.64(m,2h),2.00–1.82(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.2hz,2h),0.95(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):401.20[m+h]⁺。

實(shí)施例664-氟-4-(((反式-2-(4-氰基苯基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a66)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(4-氰基苯基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a66(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.73–7.66(m,2h),7.33(tdd,j＝8.7,4.2,2.8hz,7h),5.22(s,2h),4.09(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.23(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),2.73–2.64(m,2h),2.01–1.83(m,3h),1.67(ddt,j＝25.3,13.2,7.2hz,2h),0.95(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):408.20[m+h]⁺。

實(shí)施例674-氟-4-(((反式-2-(4-甲氧基苯基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a67)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(4-甲氧基苯基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a67(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.10–7.03(m,2h),6.95–6.88(m,2h),5.22(s,2h),4.03(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.79(s,3h),3.28(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.04–1.82(m,3h),1.63(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):413.22[m+h]⁺。

實(shí)施例684-氟-4-(((反式-2-(2-乙?；交?環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a68)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(2-乙?；交?環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a68(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.66(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),7.46(td,j＝7.5,2.1hz,1h),7.39–7.26(m,5h),7.27–7.12(m,2h),5.22(s,2h),4.04(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.24(dt,j＝12.5,7.0hz,2h),2.73–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.50(s,3h),2.08–1.82(m,3h),1.72–1.54(m,2h),0.85(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.53(td,j＝7.0,5.0hz,1h).lrms(esi):425.22[m+h]⁺。

實(shí)施例694-氟-4-(((反式-2-([1,1'-聯(lián)苯]-4-基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a69)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-([1,1'-聯(lián)苯]-4-基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a69(產(chǎn)率68％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.70(dd,j＝7.6,2.0hz,2h),7.54–7.37(m,5h),7.37–7.26(m,7h),5.22(s,2h),4.04(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.29(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.75(q,j＝6.9hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),2.04–1.85(m,3h),1.73–1.55(m,2h),0.96(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.72(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):459.24[m+h]⁺。

實(shí)施例704-氟-4-(((反式-2-(4-甲基苯基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a70)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(4-甲基苯基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a70(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.12–7.04(m,2h),7.06–6.98(m,2h),5.22(s,2h),4.03(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.29(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.21(s,3h),2.04–1.84(m,3h),1.63(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例714-氟-4-(((反式-2-(4-硝基苯基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a71)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(4-硝基苯基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a71(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.22–8.13(m,2h),7.39–7.26(m,7h),5.22(s,2h),3.95(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.19(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),2.81(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.96–1.72(m,3h),1.56(ddt,j＝25.3,13.7,7.1hz,2h),0.95(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):428.19[m+h]⁺。

實(shí)施例724-(反式-2-(((1-((芐氧基)羰基)-4-氟哌啶-4-基)甲基)氨基)環(huán)丙基)苯甲酸(a72)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為4-(反式-2-氨基環(huán)丙基)苯甲酸，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a72(產(chǎn)率60％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.91(s,1h),7.87–7.81(m,2h),7.39–7.26(m,5h),7.22(dd,j＝7.4,1.1hz,2h),5.22(s,2h),4.03(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.29(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.04–1.86(m,3h),1.64(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,2h),0.97(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.72(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):427.20[m+h]⁺。

實(shí)施例734-氟-4-(((反式-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a73)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為反式-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a73(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.22(m,6h),7.01–6.88(m,2h),5.22(s,2h),4.03(dt,j＝12.4,7.0hz,2h),3.29(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),2.77–2.64(m,2h),2.03–1.85(m,3h),1.64(ddt,j＝25.3,13.7,7.1hz,2h),0.98(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.72(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):419.19[m+h]⁺。

實(shí)施例744-氟-4-((2,2,2-三氟-n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a74)

將4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替換為實(shí)施例1所得產(chǎn)物a1，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例5.1，得產(chǎn)物a74(產(chǎn)率80％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.22(s,2h),3.99(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.31(s,1h),3.25(s,1h),3.16(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.85(q,j＝7.0hz,1h),2.10–1.86(m,3h),1.67–1.48(m,2h),1.04(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.76(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):479.19[m+h]⁺。

實(shí)施例754-氟-4-((甲基(反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a75)

將反式-2-苯基環(huán)丙胺替換為n-甲基-反式-2-苯基環(huán)丙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a75(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.22(s,2h),4.02(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.24(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),2.67(q,j＝7.0hz,1h),2.40(d,j＝6.3hz,4h),1.99–1.80(m,3h),1.62(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),0.94(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.70(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例764-氟-4-(1-((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)乙基)哌啶-1-甲酸芐酯(a76)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-乙酰基-4-氟哌啶-1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a76(產(chǎn)率48％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.22(s,2h),4.02(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.30(dt,j＝12.5,7.1hz,2h),3.02(dq,j＝25.1,6.8hz,1h),2.80(q,j＝7.0hz,1h),2.11(s,1h),2.07–1.86(m,3h),1.65(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),1.10(d,j＝6.7hz,3h),0.96(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.71(td,j＝7.0,5.1hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例774-氟-4-((n-(反式-2-苯基環(huán)丙基)乙酰氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a77)

將4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替換為實(shí)施例1所得產(chǎn)物a1，三氟乙酸酐替換為乙酸酐，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例5.1，得產(chǎn)物a77(產(chǎn)率84％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.22(s,2h),4.09(dt,j＝12.6,7.2hz,2h),3.42–3.29(m,3h),3.25(s,1h),2.78(q,j＝7.0hz,1h),2.08(s,3h),1.96–1.70(m,3h),1.55(ddt,j＝25.1,13.2,7.1hz,2h),0.99(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.69(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):425.22[m+h]⁺。

實(shí)施例783-氟-3-(((反式2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯(a78)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為3-氟-3-甲?；s環(huán)丁烷-1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a78(產(chǎn)率68％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.22(s,2h),4.16(d,j＝11.3hz,1h),4.09(d,j＝11.1hz,1h),3.85(d,j＝11.1hz,1h),3.79(d,j＝11.2hz,1h),2.90(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.91(q,j＝6.9hz,1h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.72(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):355.17[m+h]⁺。

實(shí)施例792-氟-2-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)嗎啉-4-甲酸芐酯(a79)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為2-氟-2-甲酰基嗎啉-4-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a79(產(chǎn)率60％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.41(d,j＝1.2hz,2h),4.10(dd,j＝25.2,12.6hz,1h),3.86–3.72(m,1h),3.74–3.61(m,2h),3.51–3.36(m,2h),3.15(dd,j＝25.2,12.4hz,1h),2.88(dd,j＝25.1,12.5hz,1h),2.78(q,j＝7.0hz,1h),1.88(q,j＝7.0hz,1h),1.55(s,1h),0.95(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.69(td,j＝7.0,4.9hz,1h)；lrms(esi):385.18[m+h]⁺。

實(shí)施例804-氟-4-(2-((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)乙基)哌啶-1-甲酸芐酯(a80)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-氟-4-(2-氧乙基)哌啶-1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a80(產(chǎn)率78％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.39–7.26(m,5h),7.26–7.11(m,5h),5.22(s,2h),4.11(dt,j＝12.4,7.0hz,2h),3.11(tt,j＝12.0,7.4hz,3h),2.97(dt,j＝12.3,7.8hz,1h),2.71(q,j＝7.0hz,1h),1.96–1.77(m,3h),1.72–1.41(m,4h),0.89(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.64(td,j＝7.0,4.9hz,1h)；lrms(esi):397.22[m+h]⁺。

實(shí)施例813-氟-3-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸芐酯(a81)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為3-氟-3-甲酰基哌啶-1-甲酸芐酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物a81(產(chǎn)率77％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.32(dq,j＝6.0,3.2hz,5h),7.26–7.11(m,5h),6.44(d,j＝12.3hz,1h),4.63(d,j＝12.5hz,1h),4.11(dd,j＝25.1,12.5hz,1h),3.76(d,j＝12.5hz,1h),3.38–3.18(m,2h),3.02(dd,j＝25.2,12.4hz,1h),2.75(dd,j＝25.3,12.5hz,1h),2.74(s,1h),1.98–1.80(m,3h),1.70(d,j＝13.2hz,1h),1.57(dd,j＝25.1,13.2hz,1h),0.94(s,1h),0.70(s,1h)；lrms(esi):383.21[m+h]⁺。

實(shí)施例82n-((4-氟-1-(苯磺?；?哌啶-4-基)甲基)-反式-2-苯基環(huán)丙胺(a82)

將3-苯基丙酰氯替換為苯磺酰氯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得產(chǎn)物a82(產(chǎn)率74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.92–7.84(m,2h),7.63(hept,j＝2.5hz,3h),7.26–7.11(m,5h),3.79(dt,j＝12.4,7.1hz,2h),3.35(dt,j＝12.4,7.2hz,2h),2.72–2.64(m,2h),1.75(ddt,j＝25.1,13.1,7.0hz,2h),1.67–1.49(m,3h),0.89(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.63(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):389.16[m+h]⁺。

實(shí)施例832-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)己基)氨基)甲基)哌啶-1-基)乙醇(a83)

將溴甲基苯替換為2-溴乙醇，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例6，得產(chǎn)物a83(產(chǎn)率55％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),4.25(t,j＝5.0hz,1h),3.53(td,j＝7.2,5.0hz,2h),3.08(dt,j＝12.5,7.2hz,2h),2.74–2.64(m,2h),2.60(s,1h),2.49(dt,j＝12.2,7.2hz,4h),2.00–1.89(m,1h),1.94–1.82(m,2h),1.42(ddt,j＝25.1,13.2,7.0hz,2h),0.95(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.68(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):293.20[m+h]⁺。

實(shí)施例84n-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己基)乙酰胺(a84)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為n-(4-氟-4-甲酰基環(huán)己基)乙酰胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得到產(chǎn)物a84(產(chǎn)率65％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),5.49(s,1h),3.44(p,j＝7.0hz,1h),2.72–2.61(m,2h),2.60(s,1h),2.33–2.18(m,2h),1.99(s,3h),1.95–1.75(m,3h),1.77–1.66(m,2h),1.67(dd,j＝5.8,4.3hz,1h),1.61(dt,j＝12.3,6.8hz,1h),0.99(td,j＝7.0,5.0hz,1h),0.66(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):305.21[m+h]⁺。

實(shí)施例85n-芐基-4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己胺(a85)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為4-(芐氨基)-1-氟環(huán)己烷-1-甲醛，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得到產(chǎn)物a85(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.37–7.11(m,10h),4.09(s,2h),2.72–2.57(m,3h),2.09–1.98(m,2h),1.98–1.83(m,5h),1.67–1.49(m,4h),0.99(td,j＝7.0,4.9hz,1h),0.66(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):353.23[m+h]⁺。

實(shí)施例86n-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己基)苯胺(a86)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為1-氟-4-(苯胺基)環(huán)己烷-1-甲醛，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，得到產(chǎn)物a86(產(chǎn)率64％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.12(m,5h),7.17–7.03(m,2h),6.74–6.60(m,3h),6.26(s,1h),3.06(p,j＝7.0hz,1h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),1.97–1.71(m,5h),1.53(ddt,j＝25.3,11.6,6.4hz,2h),1.42(dq,j＝12.7,6.9hz,2h),0.95(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.68(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):339.22[m+h]⁺。

實(shí)施例87n-(4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己基)苯磺酰胺(a87)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸芐酯替換為n-(4-氟-4-甲?；h(huán)己基)苯磺酰胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1，產(chǎn)物a87(產(chǎn)率68％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.86–7.77(m,2h),7.68–7.55(m,4h),7.26–7.11(m,5h),3.05(p,j＝7.0hz,1h),2.75(q,j＝7.0hz,1h),2.66(s,1h),2.60(s,1h),1.93–1.74(m,5h),1.68–1.57(m,1h),1.62–1.44(m,3h),0.94(td,j＝7.0,5.1hz,1h),0.67(td,j＝6.9,5.0hz,1h)；lrms(esi):403.18[m+h]⁺。

實(shí)施例88(1r,4r)-4-氟-4-(((反式-2-苯基環(huán)丙基)氨基)甲基)環(huán)己胺(a88)

將4-氟-4-甲?；哙?1-甲酸叔丁酯替換為((1r，4r)-4-氟-4-甲酰基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例2，得產(chǎn)物a88(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26–7.11(m,5h),2.83(p,j＝7.0hz,1h),2.76–2.64(m,2h),2.60(s,1h),1.91–1.69(m,5h),1.62–1.44(m,2h),1.47–1.32(m,2h),1.30(s,2h),0.90(td,j＝6.9,5.0hz,1h),0.67(td,j＝7.0,5.0hz,1h)；lrms(esi):263.18[m+h]⁺。

藥理活性試驗實(shí)施例

實(shí)施例一、分子水平活性測試：

1.lsd1體外活性實(shí)驗

篩選方法：賴氨酸特異性脫甲基酶1(lsd1)活性篩選

儀器：酶標(biāo)儀envision^tm(perkinelmer,usa)。

材料：人源重組lsd1，本實(shí)驗室利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化獲得的融合gst的lsd1蛋白片斷(aa158-end)；

lsd1活性檢測試劑盒l(wèi)anceultralsd1histoneh3-lysine4demethylaseassay，購自perkinelmer公司；

h3多肽底物artk(me1)qtarkstggkaprkqla-gg-k(biotin)-nh2由吉爾生化公司合成。

原理：lsd1能夠特異性去除h3多肽底物上k4位賴氨酸上的甲基化修飾，使其變成無甲基化修飾的底物。本方法采用組蛋白h3甲基化多肽(1-24)作為底物，在底物的c段引入生物素標(biāo)記。當(dāng)lsd1在fad的參與下，啟動反應(yīng)，能夠去除底物h3k4上的甲基化修飾。在eu標(biāo)記的h3k4本底抗體就能夠與底物通過抗原抗體反應(yīng)而結(jié)合在一起，同時鏈霉親和素標(biāo)記的受體通過鏈霉親和素與生物素的特異性相互作用而結(jié)合在一起。從而使得eu標(biāo)記的供體能夠與鏈霉親和素標(biāo)記的受體相互作用。在熒光共振能量轉(zhuǎn)移中，當(dāng)由于生物分子相互作用導(dǎo)致兩個熒光基團(tuán)接近時，在激發(fā)時被穴狀化合物捕獲的部分能量將被釋放，發(fā)射波長為620nm；另一部分能量轉(zhuǎn)移到受體(acceptor)上，發(fā)射波長665nm。665nm的發(fā)射光僅由供體(donor)引起的fret產(chǎn)生。所以，當(dāng)生物分子相互作用時，有兩個激發(fā)光620nm和665nm；當(dāng)不存在相互作用時，只有620nm一個激發(fā)光。通過檢測665nm和620nm兩個發(fā)射波長的熒光信號比值能反應(yīng)lsd1去甲基化活性。同時設(shè)置空白對照來判定酶活性的強(qiáng)弱。實(shí)驗采用ory-1001、gsk-2879552作為陽性抑制劑。

樣品處理：樣品用dmso溶解，低溫保存，dmso在最終體系中的濃度控制在不影響檢測活性的范圍之內(nèi)。

初篩選擇單濃度條件下，例如20μm，對樣品的活性進(jìn)行測試。對于在一定條件下表現(xiàn)出活性的樣品，例如抑制率％inhibition大于50，測試活性劑量依賴關(guān)系，即ic50值，通過樣品活性對樣品濃度進(jìn)行非線性擬和得到，計算所用軟件為graphpadprism5，擬合所使用的模型為sigmoidaldose-response(varibleslope)，對于大多數(shù)抑制劑篩選模型，將擬合曲線底部和頂部設(shè)定為0和100。

實(shí)驗結(jié)果：

2.maoa和maob體外活性實(shí)驗

篩選方法：單胺氧化酶maoa和maob活性篩選

儀器：酶標(biāo)儀envision^tm(perkinelmer,usa)。

材料：人源重組maoa，購自promega公司；人源重組maob，購自sigma公司；

maoa和maob活性檢測試劑盒mao-glo購自promega公司。

原理：本方法采用特異性的一種特性螢光素衍生物作為底物，maoa或maob能夠催化底物變?yōu)槲灩馑丶柞ィ洚a(chǎn)物螢光素甲酯在螢光素酶的作用下能夠差生螢光，從而能夠通過螢光信號的強(qiáng)弱來反應(yīng)maoa或maob的活性。同時設(shè)置空白對照來判定酶活性的強(qiáng)弱。實(shí)驗采用tranylcypromine作為陽性抑制劑。

樣品處理：樣品用dmso溶解，低溫保存，dmso在最終體系中的濃度控制在不影響檢測活性的范圍之內(nèi)。

初篩選擇單濃度條件下，例如100μm，對樣品的活性進(jìn)行測試。對于在一定條件下表現(xiàn)出活性的樣品，例如抑制率％inhibition大于50，測試活性劑量依賴關(guān)系，即ic50值，通過樣品活性對樣品濃度進(jìn)行非線性擬和得到，計算所用軟件為graphpadprism5，擬合所使用的模型為sigmoidaldose-response(varibleslope)，對于大多數(shù)抑制劑篩選模型，將擬合曲線底部和頂部設(shè)定為0和100。

實(shí)驗結(jié)果：

實(shí)施例2、細(xì)胞水平活性測試：

1.cd86基因表達(dá)激活測試：

實(shí)驗原理：實(shí)時熒光定量pcr(quantitativereal-timepcr)是一種在dna擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定dna序列進(jìn)行定量分析的方法。由于在pcr擴(kuò)增的指數(shù)時期，模板的ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。

材料：白血病細(xì)胞株mv4-11：小兒急性淋巴髓細(xì)胞白血病，免疫雙表型，af4-mll融合性t(4,11)，是lsd1抑制劑激活cd86表達(dá)的敏感細(xì)胞株(analyticalbiochemistry442(2013)104–106)。

實(shí)驗方法：

1.精確計數(shù)mv4-11細(xì)胞350w/ml，12孔板中，每孔900μl。

2.將待測化合物或陽性化合物3μl加入147μl培養(yǎng)基中，混勻，取100μl加入鋪有細(xì)胞的12孔板，混勻，恒溫箱中37℃，5％co2孵育24h。

3.收樣至1.5mlep管，2000rpm，離心3min，去上清，加入500mltrizol裂解，靜置3min。

4.加入100μl三氯甲烷，劇烈搖晃ep管15s，靜置3min，12000rpm，15min。

5.吸取上清至一個新的ep管中，加入200μl異丙醇，置于-20℃冰箱15min，12000rpm，10min。

6.去上清，加入500μl4°75％乙醇，混勻，7500rpm，10min。

7.去上清，將ep管置于通風(fēng)櫥中風(fēng)干，加入20-30μl滅過rna酶的去離子水，混勻，檢測rna濃度。

8.將所有樣品統(tǒng)一調(diào)成750ng/8μl，加入rt-kit酶與底物，42°反轉(zhuǎn)錄15min，85°滅活酶2min。

9.向ep管中加入100μl去離子水，混勻。

10.按照7.6μl樣品+0.65μl正向引物+0.65μl反向引物+11.1μlsybr的比例配置qpcr樣品至八連管中，1500rpm，離心1min，開始qpcr。

11.整理數(shù)據(jù)，采用什么2^(-δδct)方法進(jìn)行激活倍數(shù)的計算(blood,8august2013volume122,number6)。

實(shí)驗結(jié)果：

2.mts方法測試化合物對細(xì)胞生長抑制活性

實(shí)驗原理：mts法檢測受試化合物對白血病細(xì)胞mv(4:11)的生長抑制作用，其原理是活細(xì)胞內(nèi)的線粒體中琥珀酸脫氫酶能使外源性的噻唑藍(lán)還原為難溶的藍(lán)色結(jié)晶formazan。

材料：白血病細(xì)胞株mv4-11：小兒急性淋巴髓細(xì)胞白血病，免疫雙表型，af4-mll融合性t(4,11)，是lsd1抑制劑細(xì)胞生長抑制敏感細(xì)胞株(cancercell.2012,17；21(4):473-487)。

實(shí)驗方法：

1.取處于對數(shù)生長期的mv4-11細(xì)胞，精確計數(shù)16000cells/ml，將稀釋好的細(xì)胞液加入96孔板，每孔90μl。

2.取新鮮的培養(yǎng)基，依次加入鋪有細(xì)胞液的96孔板，每孔90μl。

3.在化合物板中，取濃度為10mm的待測化合物與陽性化合物ory-1001和gsk2879552，用dmso依次做3倍濃度梯度稀釋，各8個點(diǎn)。

4.分別取稀釋好的化合物2μl，分別加入盛有98μl的空白培養(yǎng)基96孔板中，dmso組以2μldmso加入98μl的空白培養(yǎng)基，混勻待用。

5.將用培養(yǎng)基混勻的化合物分別加入鋪有細(xì)胞的96孔板中，三副孔，每孔20μl，混勻?？瞻捉M加入imdm培養(yǎng)基200μl，dmso組以用培養(yǎng)基稀釋好的dmso加入180μl含細(xì)胞培養(yǎng)基。

6.恒溫箱中37℃，5％co2孵育10天；

7.10天后，加入mts，孵育2.5h后讀值。

實(shí)驗結(jié)果：

實(shí)施例3、動物水平慢性藥效評價：

lsd1抑制劑對人急性髓系白血病mv4-11裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用配制方法：準(zhǔn)確稱取藥物，加入生理鹽水，配成0.3mg/ml，給藥容積10ml/kg

動物：balb/c裸小鼠，雌性，體重17-20g，購自北京維通利華實(shí)驗動物技術(shù)有限公司，每組動物數(shù)：5只。iacuc號：2015-06-lj-17

細(xì)胞株：mv4-11細(xì)胞株由我室保存。用該細(xì)胞株接種裸小鼠右側(cè)腋窩皮下，細(xì)胞接種量為5×10⁶/只，形成移植瘤后即可開始實(shí)驗。

試驗設(shè)計：

實(shí)驗方法：

雌性裸小鼠，體重20±3g，接種mv(4，11)細(xì)胞株接種裸小鼠右側(cè)腋窩皮下，細(xì)胞接種量為5×10⁶/只，待成瘤后，用游標(biāo)卡尺測量移植瘤直徑，腫瘤長至100-300mm³，將動物按體重和腫瘤體積分為模型對照組和給藥組，每組5只，模型對照組則給等量空白溶劑。分組后每天口服灌胃給藥，持續(xù)21天。

瘤重抑制率％＝(wc-wt)/wc×100％

注：wc：對照組瘤重，wt：治療組瘤重。

數(shù)據(jù)處理：數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計方法采用t-test雙尾分析進(jìn)行顯著性分析。

實(shí)驗結(jié)果：

實(shí)施例4：大鼠藥代動力學(xué)實(shí)驗

實(shí)驗方法：

gsk2879552取血漿樣品15μl于離心管中，加入60μl甲醇:乙腈(1:1,v/v)，渦流1min，離心(11000rpm)5min，取上清液20μl加水80μl，渦流混勻后進(jìn)樣分析。gsk2879552的線性范圍為0.3～12500ng/ml。

a1取血漿樣品15μl于離心管中，加入60μl甲醇:乙腈(1:1,v/v)，渦流1min，離心(11000rpm)5min，取上清液20μl加水80μl，渦流混勻后進(jìn)樣分析。a1的線性范圍為3.0～25000ng/ml。

a2取血漿樣品15μl于離心管中，加入60μl甲醇:乙腈(1:1,v/v)，渦流1min，離心(11000rpm)5min，取上清液20μl加水40μl，渦流混勻后進(jìn)樣分析。a2的線性范圍為0.3～5000ng/ml。

a4取血漿樣品15μl于離心管中，加入60μl甲醇:乙腈(1:1,v/v)，渦流1min，離心(11000rpm)5min，取上清液20μl加水40μl，渦流混勻后進(jìn)樣分析。a4的線性范圍為1.0～5000ng/ml。

實(shí)驗結(jié)果：

gsk2879552、a1、a2和a4的藥代動力學(xué)參數(shù)總表

在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。