一類鉑(ii)配合物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一類以齊墩果酸、熊去氧膽酸等活性天然產(chǎn)物及其衍生物為配體的新 型鉑（II)配合物和制備方法，以及其在惡性腫瘤治療方面的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 以順鉑、奧沙利鉑等為代表的抗腫瘤鉑藥是目前臨床癌癥治療的一線藥物。在多 類腫瘤的化療方案中，抗腫瘤鉑藥通過其單獨(dú)給藥或與其他抗癌藥物配伍用藥過程中發(fā)揮 著不可或缺的作用。然而，現(xiàn)有鉑藥也存在著諸多缺陷，典型的有嚴(yán)重的毒副作用以及交叉 耐藥性。為了克服這些缺陷，研究人員設(shè)計(jì)、合成了多類非經(jīng)典鉑(II)配合物，如反鉑、多核 鉑、四價(jià)鉑等等。將具有生物活性的小分子作為配體與鉑（II)配位形成新型配合物也是行 之有效的研究策略，該類配合物有以下的特點(diǎn)：（1)活性小分子與鉑（II)的配位鍵較弱，在 體內(nèi)條件下易于斷裂釋放出活性小分子，從而獲得活性小分子與鉑（II)配合物的協(xié)同作 用，提升抗腫瘤活性；（2)由于活性小分子與鉑（II)配合物的作用靶點(diǎn)不同，可以通過多個(gè) 路徑阻斷腫瘤細(xì)胞的增值，因而能夠有效避免腫瘤的耐藥性。
[0003] 熊去氧膽酸、齊墩果酸均為五環(huán)三萜類天然產(chǎn)物，其具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤等 廣泛的生物活性，同時(shí)還有確切的保肝功能。研究發(fā)現(xiàn)，將一氧化氮(N0)供體如furoxan、有 機(jī)硝酸酯等連接至齊墩果酸上可顯著提升其抗癌特別是抗肝癌活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 技術(shù)問題:本發(fā)明的主要目的是提供一類鉑（II)配合物及其制備方法和用途，以 齊墩果酸、熊去氧膽酸以及齊墩果酸N0供體型衍生物為配體的新型鉑（II)配合物，在制備 惡性腫瘤治療藥物方面的應(yīng)用。
[0005] 技術(shù)方案:一類鉑（II)配合物，以齊墩果酸、熊去氧膽酸及其衍生物為配體，結(jié)構(gòu) 如下：

[0007] 所述的鉑（II)配合物的制備方法，四氯合鉑酸鉀在碘化鉀存在的條件下與氨或 (R，R)_環(huán)己二胺配位反應(yīng)后，在避光條件下通過硝酸銀除去碘離子，再與熊去氧膽酸或齊 墩果酸或齊墩果酸衍生物的鈉鹽反應(yīng)得到產(chǎn)物。
[0008] 所述的鉑（II)配合物在制備治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0009] 所述的鉑（II)配合物在制備治療肝癌、胃癌、肺癌、結(jié)腸癌藥物中的應(yīng)用。
[0010] 有益效果：該類新型鉑（II)配合物在體外對(duì)人體肝癌細(xì)胞HepG2、人體胃癌細(xì)胞 SGC7901、人體肺癌細(xì)胞A549以及人體結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116顯示出良好的體外抑制活性，且 配合物對(duì)人體正常肝細(xì)胞未表現(xiàn)出明顯毒性，表現(xiàn)出腫瘤選擇性細(xì)胞毒性。此外，配合物3 還具有溫和的體外一氧化氮釋放活性。上述生物活性測試結(jié)果表明本發(fā)明所披露的新型 鉑(II)配合物具有抗腫瘤潛在療效。
【附圖說明】
[0011] 圖1配合物3和4的N0釋放活性曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 本發(fā)明由下述實(shí)施例得到進(jìn)一步說明，但這些說明并不限制本發(fā)明的實(shí)施。
[0013] 本發(fā)明利用熊去氧膽酸及齊墩果酸的羧酸基團(tuán)，以齊墩果酸、熊去氧膽酸或齊墩 果酸N0供體衍生物為離去基團(tuán)，以單氨或(R，R)_環(huán)己二胺為載體基團(tuán)，設(shè)計(jì)了一系列新型 鉑(II)配合物，其結(jié)構(gòu)如式(1)所示：

[0015]本發(fā)明的新型鉑（II)配合物的制備方法為反應(yīng)式(I)所示：

[0017]四氯合鉑酸鉀在碘化鉀存在的條件下與氨或(R，R)_環(huán)己二胺配位得到中間體2或 2'，然后在避光條件下通過硝酸銀除去碘離子，再與熊去氧膽酸或齊墩果酸或齊墩果酸衍 生物的鈉鹽反應(yīng)得到式(1)所示的配合物。
[0018] 本發(fā)明的新型鉑（II)配合物的藥物用途是，該類新型鉑（II)配合物用于治療惡性 腫瘤，其在體外對(duì)人體肝癌細(xì)胞HepG2、人體胃癌細(xì)胞SGC7901、人體肺癌細(xì)胞A549以及人體 結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116顯示出良好的體外抑制活性。
[0019] 實(shí)施例1.齊墩果酸?二氨合鉑(化合物1)的制備

[0021 ] 二碘二氨合鉬(0.5g, lmmol)和硝酸銀(0.3g, 2mmol)溶于100ml水中，40°C下避光 攪拌反應(yīng)24h，過濾的澄清溶液。然后將配好的齊墩果酸鈉（1.0g，2mmol)的四氫呋喃/水混 合溶液加入到上述反應(yīng)液中，40 °C下避光攪拌反應(yīng)24h，過濾，濾液濃縮至約10ml，冷卻，有 白色固體析出，過濾，四氫呋喃重結(jié)晶，得白色產(chǎn)物，收率40 %。4 NMR(DMS〇-d6，500MHz): S 5.30-5.28(m,2H,2CH = C),4.20(br,6H,2NH3),3.24-3.18(m,2H,2C3-H),2.90-2.86(m,2H, 2Ci8-H),1.14(s,6H,2CH3),0.99(s,6H,2CH3),0.93(s,6H,2CH3),0.91(s,6H,2CH3),0.90(s, 6H,2CH3),0.78(s,6H,2CH3),0.72(s,6H,2CH3)cm _1；ESI-MS:1140.5[M+H] + .
[0022]實(shí)施例2.齊墩果酸?環(huán)己二胺合鉑(化合物2)的制備

[0024]由二碘環(huán)己二胺合鉑在硝酸銀存在條件下與齊墩果酸鈉鹽反應(yīng)制備得到，方法同 實(shí)施例 1，收率29 %。NMR(DMS〇-d6，500MHz): 55 ? 96 (br，2H，.2)，5 ? 30-5 ? 28 (m，2H，2OT = C),5.25(br,2H,NH2),3.23-3.19(m,2H,2C3-H),2.91-2.86(m,2H,2Ci8-H) ,1.14(s,6H, 2CH3),0.99(s,6H,2CH3),0.93(s,6H,2CH3),0.91(s,6H,2CH3),0.90(s,6H,2CH3),0.78(s, 6H,2CH3),0.72(s,6H,2CH3)cm_1；ESI-MS:1250.7[M+H] + .
[0025]實(shí)施例3.3-硝氧基乙?；R墩果酸?二氨合鉑(化合物3)的制備

[0027]由二碘二氨合鉑在硝酸銀存在條件下與3-硝氧基乙?；R墩果酸鈉鹽反應(yīng)制備 得到，方法同實(shí)施例 1，收率41 %。MMR(DMS〇-d6，500MHz): 55 ? 30-5 ? 28(m, 2H, 2OT = C)， 4.66(s,4H,2CH2〇N〇2),4.20(br,6H,2NH3),3.27-3.22(m,2H,2C3-H),2.93-2.88(m,2H,2Ci8-H),1.15(s,6H,2CH 3) ,0.99(s,6H,2CH3) ,0.95(s,6H,2CH3) ,0.92(s,6H,2CH3) ,0.90(s,6H, 2CH3),0.78(s,6H,2CH3),0.72(s,6H,2CH3)cm_1；ESI-MS:1346.6[M+H] + .
[0028]實(shí)施例4.3-硝氧基乙?；R墩果酸?環(huán)己二胺合鉑(化合物4)的制備

[0030]由二碘環(huán)己二胺合鉑在硝酸銀存在條件下與3-硝氧基乙?；R墩果酸鈉鹽反應(yīng) 制備得到，方法同實(shí)施例 1，收率37 %。4 NMR(DMS〇-d6，500MHz): 55 ? 96 (br，2H，N蟲），5.30-5.28(m,2H,2CH = C),5.25(br,2H,NH2) ,4.66(s,4H,2CH2〇N〇2) ,3.23-3.19(m,2H,2C3-H), 2.91-2.86(m,2H,2Ci8-H) ,1.14(s,6H,2CH3),0.99(s,6H,2CH3),0.93(s,6H,2CH3) ,0.91(s, 6H,2CH3) ,0.90(s,6H,2CH3),0.78(s,6H,2CH3),0.72(s,6H,2CH3)cm_1；ESI-MS:1456.7[M+H ] + . ~ ~ ~
[0031]實(shí)施例5.熊去氧膽酸?二氨合鉑(化合物5)的制備

[0033]制備方法同實(shí)施例 1，產(chǎn)率42%</H NMR(DMS0-d6,500MHz):S4.45(m，2H，2C3-廷）， 4.25(br,6H,2NH3),3.88(m,2H,2C7-H),1.13(s,6H,2CH3) ,0.93(s,6H,2CH3) ,0.69(s,6H, 2CH3)cm_1；ESI-MS:1012.3[M+H] + .
[0034]實(shí)施例6.熊去氧膽酸?環(huán)己二胺合鉑(化合物6)的制備

[0036] 制備方法同實(shí)施例 1，收率32% </H NMR(DMS0-d6,500MHz) :S5.96(br,2H,N廷2)， 5.25(br,2H,NH2),4.45(m,2H,2C3-H),3.88(m,2H,2Cy-H),1.13(s,6H,2CH 3) ,0.93(s,6H, 2CH3),0.69(s,6H,2CH3)cm_1；ESI-MS:1122.5[M+H] + .
[0037] 實(shí)施例7.典型化合物的體外細(xì)胞毒性。
[0038] 對(duì)配合物1-6進(jìn)行了體外抗腫瘤活性測定，被篩選的細(xì)胞株有：人體肝癌細(xì)胞 HepG2、人體正常肝細(xì)胞L02、人體胃癌細(xì)胞SGC7901、人體肺癌細(xì)胞A549和人體結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-116,選用奧沙利鉑為陽性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)采用CCK-8試劑盒法，具體操作如下:將選用的腫 瘤細(xì)胞株（100微升5000個(gè)細(xì)胞)接種于96孔板上，同時(shí)加入10yL受試化合物4%〇DMS0水溶液 (受試化合物濃度依次〇.1，〇.4,2，10,50yg/mL)進(jìn)行培養(yǎng)。然后每孔加入10yL CCK-8溶液， 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育〇. 5-4h。在450nm波長處測定吸光度，并計(jì)算受試化合物IC5Q值。測 試結(jié)果見表一。
[0039]表一、配合物1-6的體外細(xì)胞毒活性

[0042]從測試結(jié)果可見，本發(fā)明的配合物均顯示了較好的體外抗腫瘤活性，其中配合物3 對(duì)HepG2和A549兩個(gè)腫瘤細(xì)胞株的抑制活性都要優(yōu)于陽性對(duì)照奧沙利鉑，而對(duì)SGC7901和 HCT-116兩個(gè)腫瘤細(xì)胞株的抑制活性與奧沙利鉑相當(dāng)。并且所有配合物對(duì)人正常細(xì)胞L02均 為顯現(xiàn)出明顯毒性，而奧沙利鉑則表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，提示本發(fā)明的配合物對(duì)正常細(xì) 胞毒性較小，因而具有更好的安全性。
[0043] 實(shí)施例8.體外N0釋放實(shí)驗(yàn)
[0044]應(yīng)用Gri ess方法測試配合物3和4的N0體外釋放?；前?g，N-萘乙稀二胺鹽酸鹽 0.28,85%磷酸1〇1111，用蒸餾水溶解并定容至10〇1111，配制得到61^688試劑。
[0045] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：配制0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.2、0.4噸/1111的亞硝酸鹽系 列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取l〇ml與2.5ml Griess試劑充分混勾，室溫放置lOmin后，與540nm測定其吸 光度。并據(jù)此作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0046] 配合物3和4的N0釋放量的測定:將測試化合物用磷酸緩沖液溶解。緩沖液中分別 加有半胱氨酸（5mol/l)，將溶液置于37°C水浴，于不同是啊今年點(diǎn)取該溶液2ml與500iil Griess試劑混勻，室溫放置8min，并在540nm處測吸收值。結(jié)果見圖1。從測試結(jié)果可見，由于 配合物3和4帶有有機(jī)硝酸酯N0供體基團(tuán)，其在體外均顯示了溫和的N0釋放活性。在測試條 件下，其在12小時(shí)左右即達(dá)到釋放峰值，釋放量為理論值的7%左右，配合物3的釋放量略高 于4。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一類鉑（II)配合物，其特征在于，以齊墩果酸、熊去氧膽酸及其衍生物為配體，結(jié)構(gòu) 如下：〇2. 權(quán)利要求1所述的鉑（II)配合物的制備方法，其特征在于，四氯合鉑酸鉀在碘化鉀存 在的條件下與氨或(R，R)_環(huán)己二胺配位反應(yīng)后，在避光條件下通過硝酸銀除去碘離子，再 與熊去氧膽酸或齊墩果酸或齊墩果酸衍生物的鈉鹽反應(yīng)得到產(chǎn)物。3. 權(quán)利要求1所述的鉑(II)配合物在制備治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。4. 權(quán)利要求1所述的鉑(II)配合物在制備治療肝癌、胃癌、肺癌、結(jié)腸癌藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開的是一類鉑(II)配合物及其制備方法和用途，以齊墩果酸、熊去氧膽酸等活性天然產(chǎn)物及其衍生物為配體。是以四氯合鉑酸鉀在碘化鉀存在的條件下與氨或(R,R)?環(huán)己二胺配位反應(yīng)，再在避光條件下通過硝酸銀除去碘離子，再與熊去氧膽酸或齊墩果酸或齊墩果酸衍生物的鈉鹽反應(yīng)得到產(chǎn)物。上述鉑(II)配合物具有良好的體外抗腫瘤活性，可以應(yīng)用于制備惡性腫瘤的治療的藥物中。
【IPC分類】A61K31/555, C07F15/00, A61K31/282, A61P35/00
【公開號(hào)】CN105713047
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610179220
【發(fā)明人】房雷
【申請(qǐng)人】東南大學(xué)