本發(fā)明屬于分子生物學領域，具體涉及一種高特異性的人17號染色體著絲粒探針試劑盒及其制備方法和應用。

背景技術：
人類第17號染色體由大約8100萬個堿基對構成，含1500多個基因，有許多與疾病相關的基因，如乳腺癌基因、神經纖維瘤基因、遺傳性神經紊亂基因等。乳腺癌臨床檢測中，HER2基因擴增檢測可指導用藥及預后判斷，熒光原位雜交中常用HER2探針與人17號染色體著絲粒探針熒光數的比值來判斷待檢測組織HER2基因擴增狀態(tài)。研究表明，13～46％的浸潤乳腺癌患者癌細胞的17號染色體為非整倍體[Torrisir,RotmensZN,BagnardIV,etal.HER2statusinearlybreastcancer:relevanceofcellstainingpatterns,geneamplificationandpolysomy17[J].EurJCancer,2007,43(16):2339-2344]。一方面，這種情況可能影響HER2基因狀況的判斷，另一方面，這種遺傳學改變可能與乳腺癌的不良預后有關[May,Lespagnardl,Durbecqv,etal.Polysomy17inHER2/neustatuselaborationinbreastcancer:effectondailypractice[J].ClinCancerRes,2005,11(12):4393-4399]。在膀胱癌的研究中，17號染色體數目異?？赡芘c膀胱癌的復發(fā)相關[WattersAD,BallantyneSA,GoingJJ,etal.Aneu-somyofchromosomes7and17predictstherecurrenceoftransitionalcellcarcinomaoftheurinarybladder[J].BJUInt,2000,85(1):42-47.]。因此，17號染色體計數對一些疾病的治療及預后判斷有重要意義。目前常用的人17號染色體著絲粒探針的制備一般采用已提供序列的特異性重復單元序列標記，但實際雜交效果較差，存在特異性較低、雜信號多、雜交背景差等缺點，這不利于臨床的正確診斷及治療。因此研發(fā)一種特異性高的人17號染色體著絲粒探針非常必要。

技術實現要素：
本發(fā)明針對現有技術的不足，目的在于提供一種高特異性的人17號染色體著絲粒探針試劑盒及其制備方法和應用。為實現上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案為：一種高特異性的人17號染色體著絲粒探針試劑盒，包括：熒光材料標記的CEP17著絲粒探針和雜交緩沖液，所述CEP17著絲粒探針的序列號如SEQIDNO.1所示。上述方案中，所述熒光材料為異硫氰酸熒光素(FITC)。上述方案中，所述雜交緩沖液為10％硫酸葡聚糖、0.01M的PBS緩沖液(PH＝7.4)與去離子甲酰胺按照體積比為1:6:3的比例混合的混合液。上述方案中，所述熒光材料標記的標記效率為1％～5％。上述高特異性的人17號染色體著絲粒探針試劑盒的制備方法，包括如下步驟：(1)制備高特異性的人17號染色體著絲粒探針：a.查找并篩選人17號染色體著絲粒的高特異性區(qū)域，人工合成該區(qū)域序列，獲得pUc-CEP17質粒；b.根據步驟a所得pUc-CEP17質粒的序列設計引物；c.以步驟a所得pUc-CEP17質粒為模板，加入已用熒光材料標記的dUTP，利用步驟b設計的引物進行PCR擴增，得到熒光材料標記的PCR產物，所述PCR產物經純化后即為CEP17著絲粒探針；(2)將步驟(1)所得CEP17著絲粒探針用雜交緩沖液稀釋至終濃度為2ng/μL，然后、分裝、貼標簽、組裝后即得到高特異性的人17號染色體著絲粒探針試劑盒。上述方案中，步驟(1)中所述高特異性區(qū)域的序列號如SEQIDNO.1所示。上述方案中，步驟(1)中所述引物為F：GGAATCTGCAAGTGGATATG；R:CAGAACTACTCTATGAAAAGC。上述方案中，步驟(1)中所述PCR擴增的反應體系為：5μL、10Xbuffer，2μL引物(F/R，濃度均為10μM)，1μL、1ng/μLpUc-CEP17質粒，1μL、10mMdATP，1μL、10mMdCTP，1μL、10mMdGTP，0.75μL、10mMdTTP，2.5μL、1mMFluorescein-12-dUTP，0.5μL、TaqDNApolymerase，35.25μL去離子水。上述方案中，步驟(1)中所述PCR擴增的程序為：94℃5min；55℃5min；72℃1min、94℃1min、55℃1min，30cycles；72℃5min，4℃保存。上述高特異性的人17號染色體著絲粒探針試劑盒在制備用于檢測人17號染色體著絲粒產品中的應用。本發(fā)明的有益效果如下：(1)本發(fā)明所述試劑盒中，CEP17著絲粒探針的大小為156bp，較一般探針小，更容易進入細胞與靶區(qū)域雜交；(2)細胞滴片原位雜交時，一般無前處理過程，細胞通透性不好，一般探針較難雜交，本發(fā)明所述CEP17著絲粒探針較一般探針小，且大小均一，非常容易雜交，因此，本發(fā)明所述CEP17著絲粒探針試劑盒也適用于細胞熒光原位雜交；(3)本發(fā)明所述CEP17著絲粒探針序列是17號染色體著絲粒序列中的高特異性序列，提高了探針的特異性，進而增加了探針雜交檢測結果判讀的準確性。附圖說明圖1為PCR產物(CEP17著絲粒探針)電泳結果圖，其中a為Mark，b為PCR產物。圖2為CEP17著絲粒探針與正常人外周血淋巴細...