本發(fā)明涉及一種牛羊食道-咽部分泌物處理液，還涉及該處理液的制備方法和用途，本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
口蹄疫是口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要感染豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物，對(duì)經(jīng)濟(jì)危害嚴(yán)重的動(dòng)物傳染病。我國(guó)地域遼闊，地形多樣，與許多國(guó)家接壤，病原易感動(dòng)物多而復(fù)雜，但病原持續(xù)性感染的研究相對(duì)滯后，食道探杯采集牛羊食道及咽部的上皮細(xì)胞及黏液是目前檢測(cè)口蹄疫病毒感染的最好方法，牛羊o/p液采集作為口蹄疫監(jiān)測(cè)的必檢項(xiàng)目。
從牛羊活體上檢查口蹄疫病毒就是運(yùn)用食道探杯從牛羊的口腔和咽喉部收集食道-咽部分泌物(o/p液)，該分泌物中含有大量粘液和上皮細(xì)胞組織，大量的粘液會(huì)包裹上皮細(xì)胞，從而影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種食道-咽部分泌物處理液，使用本發(fā)明的處理液處理收集得到的牛羊食道-咽部分泌物，能夠使得上皮細(xì)胞充分暴露，同時(shí)也不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損壞，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：
本發(fā)明的一種牛羊食道-咽部分泌物處理液，其由氯化鈉、tris緩沖液、分散劑、表面活性劑以及粘液分解劑組成。
在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述氯化鈉的含量為5-19g/l，tris緩沖液的濃度為0.02-0.1m，ph6.8-7.6，分散劑的含量為0.1-5g/l，表面活性劑的含量為0.3-1％(v/v)，粘液分解劑的含量為3-5g/l。
在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的分散劑為聚乙二醇，所述表面活性劑為tritonx-100，所述粘液分解劑為甲基半胱氨酸。
進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了所述的處理液在牛羊食道-咽部分泌物預(yù)處理中的用途。
一種牛羊食道-咽部分泌物的預(yù)處理方法，其包括向采集的牛羊食道-咽部分泌物中加入其體積2-5倍量的本發(fā)明所述的處理液，混勻，靜置15-30min，然后離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步檢測(cè)。
本發(fā)明的一種牛羊食道-咽部分泌物處理液常溫下可放置貯存，不易變質(zhì)、無(wú)毒，專(zhuān)一、高效、對(duì)牛羊o/p液中的粘液分解迅速，對(duì)細(xì)胞則比較溫和，不會(huì)因?yàn)檎骋航到膺^(guò)程而損害細(xì)胞。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1
1、牛羊食道-咽部分泌物處理液的制備
(1)0.05mtris緩沖液(ph7.4)的配制
50ml0.1mol/l的tris溶液與42.0ml0.1mol/l鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml，即得。
(2)稱(chēng)取氯化鈉1.2g，聚乙二醇0.25g，tritonx-1000.5ml以及甲基半胱氨酸0.4g，將上述組分充分溶解于配制好的100ml的0.05mtris緩沖液(ph7.4)中，即得。
2、牛羊食道-咽部分泌物處理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)預(yù)處理中的用途
采樣時(shí)動(dòng)物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動(dòng)作送入食道上部10-15cm處，輕輕來(lái)回抽動(dòng)2-3次，然后將探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul處理液的滅菌2mlep管中，混勻，靜置15-30min，然后離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步檢測(cè)。同時(shí)取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中，作為平行對(duì)照。室溫下存放24h，進(jìn)行染菌觀察，結(jié)果表明，沒(méi)有加處理液的o/p液對(duì)照有菌長(zhǎng)出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液無(wú)菌長(zhǎng)出，而且持續(xù)觀察5-7天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無(wú)菌 長(zhǎng)出。兩組樣本分別離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果表明，對(duì)照組無(wú)或僅有少量細(xì)胞檢出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液檢測(cè)出大量的細(xì)胞及碎片。
實(shí)施例2
1、牛羊食道-咽部分泌物處理液的制備
(1)0.05mtris緩沖液(ph7.4)的配制
50ml0.1mol/l的tris溶液與42.0ml0.1mol/l鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml，即得。
(2)稱(chēng)取氯化鈉1.2g，聚乙二醇0.25g，tritonx-1000.5ml以及甲基半胱氨酸0.4g，將上述組分充分溶解于配制好的100ml的0.05mtris緩沖液(ph7.4)中，高壓滅菌后，即得。
2、牛羊食道-咽部分泌物處理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)預(yù)處理中的用途
采樣時(shí)動(dòng)物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動(dòng)作送入食道上部10-15cm處，輕輕來(lái)回抽動(dòng)2-3次，然后將探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul處理液的滅菌2mlep管中，混勻，靜置15-30min，然后離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步檢測(cè)。同時(shí)取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中，作為平行對(duì)照。室溫下存放24h，進(jìn)行染菌觀察，結(jié)果表明，沒(méi)有加處理液的o/p液對(duì)照有菌長(zhǎng)出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液無(wú)菌長(zhǎng)出，而且持續(xù)觀察5-7天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無(wú)菌長(zhǎng)出。兩組樣本分別離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果表明，對(duì)照組無(wú)或僅有少量細(xì)胞檢出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液檢測(cè)出大量的細(xì)胞及碎片。
實(shí)施例3
1、牛羊食道-咽部分泌物處理液的制備
(1)0.1mtris緩沖液(ph7.5)的配制
80ml水中溶解1.211gtris堿，加入濃hcl調(diào)節(jié)ph值至7.5，加水定容至100ml，即得。
(2)稱(chēng)取氯化鈉1.0g，聚乙二醇0.4g，tritonx-1000.3ml以及甲基半胱氨酸0.5g，將上述組分充分溶解于配制好的0.1mtris緩沖液(ph7.5)中，即得。
2、牛羊食道-咽部分泌物處理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)預(yù)處理中的用途
采樣時(shí)動(dòng)物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動(dòng)作送入食道上部10-15cm處，輕輕來(lái)回抽動(dòng)2-3次，然后將探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul處理液的滅菌2mlep管中，混勻，靜置15-30min，然后離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步檢測(cè)。同時(shí)取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中，作為平行對(duì)照。室溫下存放24h，進(jìn)行染菌觀察，結(jié)果表明，沒(méi)有加處理液的o/p液對(duì)照有菌長(zhǎng)出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液無(wú)菌長(zhǎng)出，而且持續(xù)觀察5-7天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無(wú)菌長(zhǎng)出。兩組樣本分別離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果表明，對(duì)照組無(wú)或僅有少量細(xì)胞檢出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液檢測(cè)出大量的細(xì)胞及碎片。
實(shí)施例4
1、牛羊食道-咽部分泌物處理液的制備
(1)0.05mtris緩沖液(ph7.4)的配制
50ml0.1mol/l的tris溶液與42.0ml0.1mol/l鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml，即得。
(2)稱(chēng)取氯化鈉0.5g，聚乙二醇0.1g，tritonx-1001ml以及甲基半胱氨酸0.3g，將上述組分充分溶解于配制好的0.05mtris緩沖液(ph7.4)中，即得。
2、牛羊食道-咽部分泌物處理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)預(yù)處理中的用途
采樣時(shí)動(dòng)物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動(dòng)作送入食道上部10-15cm處，輕輕來(lái)回抽動(dòng)2-3次，然后將探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul處理液的滅菌2mlep管中，混勻，靜置15-30min，然后離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步檢測(cè)。同時(shí)取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中，作為平行對(duì)照。室溫下存放24h，進(jìn)行染菌觀察，結(jié)果表明，沒(méi)有加處理液的o/p液對(duì)照有菌長(zhǎng)出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液無(wú)菌長(zhǎng)出，而且持續(xù)觀察5-7天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無(wú)菌長(zhǎng)出。兩組樣本分別離心15min，所得沉淀用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果表明，對(duì)照組無(wú)或僅有少量細(xì)胞檢出，而加入本發(fā)明處理液的o/p液檢測(cè)出大量的細(xì)胞及碎片。
以上實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明對(duì)于處理牛羊o/p液效果好，同時(shí)本發(fā)明牛羊o/p液處理液具有無(wú)毒，穩(wěn)定性好，貯存方便安全等優(yōu)點(diǎn)。