本發(fā)明屬于醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及具有抗腫瘤活性的7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物及其制備方法，以及含有它們的抗腫瘤藥物組合物。具體地說，涉及含有4-肟基-1-哌啶基片段的5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺類化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：多靶點酪氨酸激酶抑制劑是近年來抗腫瘤領(lǐng)域的研究熱點，目前已有數(shù)個優(yōu)秀品種獲準(zhǔn)上市，多個候選物處于臨床或臨床前研究階段(JShenyangPharmUniv.2011,28,1005；ChinJOrgChem.2011,31,1595)。作為第一個被美國FDA批準(zhǔn)上市的多靶點酪氨酸激酶抑制劑，舒尼替尼(Sunitinib)對多種實體瘤顯示明確的抑瘤活性(ChinJNewDrugsClinRem.2007,26,474)，其臨床適應(yīng)癥為對標(biāo)準(zhǔn)療法沒有響應(yīng)或不能耐受之胃腸道基質(zhì)腫瘤和轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌。本品對其他實體瘤的研究目前處于II和/或III期臨床試驗階段。遺憾的是，舒尼替尼已有耐藥性的報道。近年來，本領(lǐng)域科學(xué)家對舒尼替尼進(jìn)行了較全面的結(jié)構(gòu)修飾，并篩選得到若干值得進(jìn)一步評價的有苗頭的化合物或候選物(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3814；Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3819；J.Med.Chem.2010,53,8140；Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21,3062；Med.Chem.Res.2013,22,1723)。然而，所有這些修飾均是在保留舒尼替尼母核結(jié)構(gòu)(吲哚啉-2-酮)的基礎(chǔ)上，對其1-位、3-位和/或5-位上的取代基進(jìn)行改造和優(yōu)化，而未見對舒尼替尼母核結(jié)構(gòu)本身進(jìn)行修飾的報道。2015年，劉明亮等學(xué)者公開了含有仲胺基或環(huán)胺基片段的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物的合成與抗腫瘤活性(CN201510229131.1)。未涉及含有4-肟基-1-哌啶基片段的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物。為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的缺陷，本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛的研究，設(shè)計合成了一系列含有4-肟基-1-哌啶基片段的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物，并測定和比較了它們的抗腫瘤活性。最終發(fā)現(xiàn)，不同于以往文獻(xiàn)報道的含有4-肟基-1-哌啶基片段的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺類化合物具有意想不到的強(qiáng)抗腫瘤活性，與同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼相比，具有更加優(yōu)越的抗腫瘤活性。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一類由通式(I)表示的5-溴-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物及其藥用鹽，其中：n代表2～4；R代表氫、甲基、乙基、芐基或取代芐基。本發(fā)明的式(I)化合物的在藥學(xué)上可接受的非毒性的藥用鹽，包括與無機(jī)酸，如鹽酸、硫酸形成的鹽，與有機(jī)酸，如乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富馬酸、扁桃酸、抗壞血酸或蘋果酸形成的鹽，以及氨基酸，如丙氨酸、天冬氨酸、賴氨酸形成的鹽或與磺酸，如甲磺酸、對甲苯磺酸形成的鹽。本發(fā)明具體包括以下化合物，以及它們的藥用鹽：(Z)-N-[2-(4-羥肟基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[2-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[2-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[2-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-{3-[4-(4-甲基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-{3-[4-(4-氟芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-{3-[4-(4-硝基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-{3-[4-(4-甲氧基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。優(yōu)選的，本發(fā)明的化合物，如下：(Z)-N-[2-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-{3-[4-(4-氟芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-{3-[4-(4-甲氧基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。本發(fā)明的另一個目的在于提供式(I)化合物及其藥用鹽的制備方法。如反應(yīng)路線1所示。反應(yīng)路線1：在反應(yīng)路線1中，n和R如前述的定義。在質(zhì)子溶劑中加入堿，使式(II)化合物與式(III)化合物通過縮合反應(yīng)來制備式(I)化合物。用于本反應(yīng)的質(zhì)子溶劑選自水、醇或醇-水混合溶劑；所述的堿選自三乙胺、吡咯烷、哌啶、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀。在本發(fā)明中用作起始物的式(II)化合物為已知化合物,國內(nèi)均有商品供應(yīng)。(III)化合物也為已知化合物,并參考現(xiàn)有出版物中已知的方法可容易地制得，例如劉明亮等，CN201510229131.1；LvK等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21：3062；Med.Chem.Res.2013,22：1723以及WangMH等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25:2782。本發(fā)明的另一個目的在于提供式(I)所示化合物及其藥用鹽的藥物用途。本發(fā)明式(I)所示化合物及其藥用鹽在制備治療實體瘤和非實體瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述實體瘤包括肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌、頭頸癌、食道癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腎癌、前列腺癌、骨癌和腦癌；所述非實體瘤指白血病。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含有式(I)所示化合物及其藥用鹽的藥物組合物。本發(fā)明所述的藥物組合物，還含有藥物上可接受的載體。本發(fā)明所述的藥物組合物，以式(I)所示化合物及其藥用鹽作為抗腫瘤藥物的活性成分。藥物組合物含有的式(I)所示化合物及其藥用鹽在組合物中的重量比為0.1～99.9％，藥物可接受的載體在組合物中的重量比為0.1～99.9％。藥物組合物以適合藥用的制劑形式存在。藥用的制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、混懸劑、注射劑、粉針劑、栓劑、霜劑、滴劑或貼劑。其中，所述片劑為糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑或緩釋片劑；所述膠囊劑為硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑；所述粉針劑為凍干粉針劑。本發(fā)明的藥物組合物，作為制劑形式，每劑中含有的發(fā)明化合物的有效量為0.1～1000mg，所述每劑指的是，每一制劑單位，如片劑的每片，膠囊的每粒，也可指每次服用劑量，如每次服用100mg。本發(fā)明的藥物組合物在制備成粉劑、片劑、可分散粉劑、膠囊、扁囊劑、栓劑和軟膏形式的固體或半固體藥物制劑時，可使用固體載體?？墒褂玫墓腆w載體優(yōu)選為選自稀釋劑、調(diào)味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、膨脹劑等中的一種或多種物質(zhì)，或可為包封物質(zhì)。在粉狀制劑中，在載體中含有5～70％的微?；钚猿煞?。適宜的固體載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低沸點蠟、可可脂等。由于它們易于給藥，片劑，粉劑、扁囊劑和膠囊等代表最有利的口服固體制劑。本發(fā)明的液體制劑包括溶液、懸液和乳液。例如，非胃腸道給藥的注射制劑可為水或水-丙二醇溶液形式，調(diào)節(jié)其等滲度，pH等使適于活體的生理條件。液體制劑還可制成在聚乙二醇、水溶液中的溶液形式?？赏ㄟ^將活性成分溶解在水中，再加入適量的著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑，來制備口服水溶液。可將微?；幕钚猿煞址稚⒃谡承晕镔|(zhì)如天然和合成膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它已知懸浮劑中制備適于口服的水懸液。為了易于給藥及劑量均一，將上述藥物制劑配制成劑量單位形式是特別有利的。制劑的劑量單位形式指適于作為單一劑量的物理分離單位，每個單位含有產(chǎn)生所期望的治療效果的計算好的預(yù)定量的活性成分。這種劑量單位形式可為包裝形式，如片劑、膠囊或裝在小管或小瓶中的粉劑，或裝在管或瓶中的軟膏、凝膠或霜劑。雖然劑量單位形式中所含活性成分的量可以變化，但一般根據(jù)所選擇活性成分的效力，調(diào)節(jié)在1～800mg范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可按常規(guī)方法確定適于某種情況的優(yōu)選劑量。一般，開始治療的量低于活性成分的最佳劑量，然后逐漸增加給藥劑量，直到達(dá)到最佳治療效果。為治療需要，總的日劑量可一次給藥或分?jǐn)?shù)次給藥。本發(fā)明式(I)所示5-溴-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物，與現(xiàn)有的同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼相比，具有更加優(yōu)越的抗腫瘤活性。而且，本發(fā)明的藥物安全性更高，有效的降低藥物的毒副作用。同時，本發(fā)明的制備方法工藝簡單，用時短，大大降低藥品的成本，適合大規(guī)模生產(chǎn)。具體實施方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實施例1(Z)-N-[2-(4-羥肟基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸(167mg,1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(230mg,1.2mmol)、1-羥基苯并三唑(162mg，1.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)攪拌反應(yīng)20min后，加入N,N-二異丙基乙胺(365ml，2.2mmol)，1-(2-氨乙基)-4-羥肟基哌啶(314mg，2mmol)，室溫反應(yīng)12h以上。加10ml蒸餾水稀釋，10ml飽和食鹽水，10ml飽和碳酸鈉,用氫氧化鈉溶液調(diào)pH＝10-11，用含10％甲醇的二氯甲烷萃取15mLx3次，水洗1次，飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液減壓濃縮得紅色油狀液體(收率55％)。將上述油狀液體和5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮(100mg,0.46mmol)溶于無水乙醇(8mL)，加入6滴哌啶于室溫攪拌反應(yīng)2h。過濾,濾餅用乙醇洗滌，后經(jīng)硅膠柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1，加少量三乙胺)分離純化，得橘黃色固體(收率：52％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),12.13(s,1H),11.62(s,1H),8.46(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.58(t,J＝5.5Hz,1H),3.33-3.39(m,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.47-2.52(m,6H),2.46(s,3H),2.44(s,3H),2.23(t,J＝5.8Hz,2H).MS-ESI(m/z):501.3(M+H)+,503.3(M+H)+.實施例2(Z)-N-[2-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(2-氨乙基)-4-甲氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：51％)，mp:262-264℃。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.46(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.58(t,J＝5.5Hz,1H),3.71(s,3H),3.33-3.39(m,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.47-2.52(m,6H),2.46(s,3H),2.44(s,3H),2.23(t,J＝5.8Hz,2H).MS-ESI(m/z):515.2(M+H)+,517.3(M+H)+.(Z)-N-[2-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺鹽酸鹽攪拌下,向上述橘黃色固體(100mg，0.194mmol)的甲醇混懸液中，通入干燥鹽酸氣30min，后回流攪拌30min。降至室溫，抽濾，干燥，得類白色固體(收率40％)。C23H27BrN6O3·HClCHNBrCl計算值50.065.1115.2314.486.42實測值50.045.1215.2114.506.41類似地也可以制備下述的鹽，例如：(Z)-N-[2-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽。實施例3(Z)-N-[2-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(2-氨乙基)-4-乙氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：53％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.43(s,1H),11.60(s,1H),8.46(d,J＝2.1,Hz,1H),8.11(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.58(t,J＝5.5Hz,1H),3.97(q,J＝14.0Hz,2H),3.33-3.39(m,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.47-2.52(m,6H),2.46(s,3H),2.44(s,3H),2.22(t,J＝5.8Hz,2H),1.16(t,J＝7.0Hz,3H).MS-ESI(m/z):529.3(M+H)+,531.3(M+H)+.實施例4(Z)-N-[2-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(2-氨乙基)-4-芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：49％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.43(s,1H),11.61(s,1H),8.46(d,J＝2.1,Hz,1H),8.11(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.58(t,J＝5.5Hz,1H),7.27-7.36(m,5H),4.99(s,2H),3.33-3.39(m,2H),2.56(t,J＝5.8Hz,2H),2.47-2.52(m,6H),2.46(s,3H),2.45(s,3H),2.23(t,J＝5.8Hz,2H).MS-ESI(m/z):591.3(M+H)+,593.3(M+H)+.實施例5(Z)-N-[3-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-甲氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：50％)，mp:233-235℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.71(s,3H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.45-2.49(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.38(t,J＝5.9Hz,2H),2.22(t,J＝7.0Hz,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):529.3(M+H)+,531.3(M+H)+.實施例6(Z)-N-[3-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-乙氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：52％)，mp:237-239℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.97(q,J＝14.0Hz,2H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.45-2.48(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.37-2.40(m,2H),2.22(t,J＝5.0Hz,2H),1.65-1.71(m,2H),1.16(t,J＝7.0Hz,3H).MS-ESI(m/z):543.3(M+H)+,545.3(M+H)+.實施例7(Z)-N-[3-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：55％)，mp:226-228℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),7.27-7.36(m,5H),4.99(s,2H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.51-2.53(m,2H),2.47-2.48(m,4H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.37-2.40(m,2H),2.22(t,J＝5.8Hz,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):605.3(M+H)+,607.3(M+H)+.實施例8(Z)-N-[4-(4-甲氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)-4-甲氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：53％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.45(s,1H),11.63(s,1H),8.46(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.71(s,3H),3.06(m,4H),2.45-2.49(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.38(t,J＝5.9Hz,2H),1.73-1.79(m,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):543.3(M+H)+,545.3(M+H)+.實施例9(Z)-N-[4-(4-乙氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)-4-乙氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.11(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.96(q,J＝14.0Hz,2H),3.06(m,4H),2.44-2.48(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.38(t,J＝5.9Hz,2H),1.73-1.79(m,2H),1.65-1.71(m,2H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H).MS-ESI(m/z):557.3(M+H)+,559.3(M+H)+.實施例10(Z)-N-[4-(4-芐氧亞氨基哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)-4-芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：54％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.43(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),7.26-7.35(m,5H),4.98(s,2H),3.06(m,4H),2.43-2.48(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.38(t,J＝5.9Hz,2H),1.73-1.79(m,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):619.3.3(M+H)+,621.3(M+H)+.實施例11(Z)-N-{3-[4-(4-甲基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-甲基芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：50％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),6.92-6.98(m,4H),4.99(s,2H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.51-2.53(m,2H),2.47-2.48(m,4H),2.45(s,3H),2.43(s,3H),2.42(s,3H),2.37-2.40(m,2H),2.23(t,J＝5.8Hz,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):619.3(M+H)+,621.3(M+H)+.實施例12(Z)-N-{3-[4-(4-氟芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-氟芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：49％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.43(s,1H),11.60(s,1H),8.46(d,J＝2.1,Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),7.13-7.19(m,4H),4.98(s,2H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.51-2.53(m,2H),2.47-2.48(m,4H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.37-2.40(m,2H),2.22(t,J＝5.8Hz,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):623.3(M+H)+,625.3(M+H)+.實施例13(Z)-N-{3-[4-(4-硝基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-硝基芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：53％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1,Hz,1H),8.17-8.25(m,2H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.74-7.82(m,2H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),5.01(s,2H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.51-2.53(m,2H),2.47-2.48(m,4H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.36-2.40(m,2H),2.22(t,J＝5.8Hz,2H),1.66-1.72(m,2H).MS-ESI(m/z):650.3(M+H)+,652.3(M+H)+.實施例14(Z)-N-{3-[4-(4-甲氧基芐氧亞氨基)哌啶-1-基]丙基}-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-甲氧基芐氧亞氨基哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：51％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.45(s,1H),11.63(s,1H),8.48(d,J＝2.1,Hz,1H),8.11(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),7.27-7.36(m,4H),5.00(s,2H),4.02(s,3H),3.25(q,J＝12.7Hz,2H),2.51-2.53(m,2H),2.47-2.48(m,4H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.36-2.41(m,2H),2.23(t,J＝5.8Hz,2H),1.65-1.71(m,2H).MS-ESI(m/z):635.3(M+H)+,637.3(M+H)+.試驗例1對實體瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性(IC50：μM)本實驗例在于研究本發(fā)明化合物對實體瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性，試驗方法采用SRB(磺酰羅丹明)法。根據(jù)腫瘤細(xì)胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的貼壁實體瘤細(xì)胞以170μL/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24h后加藥(30μL/孔)，每個濃度設(shè)3復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)48h。培養(yǎng)后，取出培養(yǎng)板，每孔加入50％(m/v)的三氯乙酸(TCA)50uL4℃放置lh，固定細(xì)胞。棄固定液，用蒸餾水洗滌5次，在空氣中干燥后，每孔加SRB溶液100uL，室溫下放置10-30min，進(jìn)行染色。去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣中自然干燥后，加入150μL/孔的Tris溶液，在平板振蕩器上振蕩10min。用酶聯(lián)免疫檢測儀測定570nm處的OD值，用空白對照調(diào)零。按以下公式計算腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：抑制率＝[(OD570對照孔－OD570給藥孔)/OD570對照孔]×100％。根據(jù)各濃度抑制率，采用Logit法計算半數(shù)抑制濃度IC50。以上每個實驗重復(fù)2～3次，求出2～3次實驗的平均IC50值作為最終指標(biāo)。表1列出了本申請的式(Ⅰ)化合物中的若干代表化合物對三種實體瘤細(xì)胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗腫瘤活性，并與同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼以及CN201510229131.1中描述的結(jié)構(gòu)近似的代表化合物進(jìn)行比較。表1實施例3、5、6、7、9、12、14化合物對實體瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性(IC50：μM)*化合物A為CN201510229131.1中描述的實施例8化合物，即(Z)-N-[2-(吡咯烷-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。由表1可見，本申請的式(Ⅰ)化合物中的實施例3、5、6、7、9、12、14化合物對三種實體瘤細(xì)胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗腫瘤活性(IC50：2.357–11.023μM)均優(yōu)于CN201510229131.1中描述的結(jié)構(gòu)近似化合物A(IC50：13.443–14.922μM)以及舒尼替尼(IC50：31.594–49.036μM)。其中，活性最強(qiáng)的式(Ⅰ)化合物中的實施例6化合物對三種實體瘤細(xì)胞的活性是CN201510229131.1中描述的結(jié)構(gòu)近似化合物A的5.0–5.7倍，而是舒尼替尼的11.3–18.5倍。盡管上述實驗中，本發(fā)明只選取部分實施例進(jìn)行實驗測試，但是實際上，本發(fā)明的其他藥物也能取得和上述藥物相同或者相近的治療效果。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3