1.一種雷公藤原生質(zhì)體的分離方法,包括如下步驟:
1)用酶解液酶解雷公藤愈傷組織懸浮細(xì)胞,得到酶解后的雷公藤懸浮細(xì)胞;
2)收集所述酶解后的雷公藤懸浮細(xì)胞中的沉淀,即得到雷公藤原生質(zhì)體;
所述酶解液包括纖維素酶、果膠酶和離析酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:
所述纖維素酶、所述果膠酶和所述離析酶的質(zhì)量比為4:1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于:
所述酶解液還包括甘露醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于:
所述甘露醇在所述酶解液中的濃度為0.3-0.7mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:
所述酶解液由甘露醇、BSA、MES、CaCl2·2H2O、纖維素酶、果膠酶、離析酶和水組成;
所述甘露醇在所述酶解液中的濃度為0.6mol/L;
所述BSA在所述酶解液中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%;
所述MES在所述酶解液中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%;
所述CaCl2·2H2O在所述酶解液中的濃度為0.05mol/L;
所述纖維素酶在所述酶解液中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.0%;
所述果膠酶在所述酶解液中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%;
所述離析酶在所述酶解液中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于:
所述收集為離心,所述離心的條件為(17-104)×g離心5min,所述離心的條件具體為67×g離心5min;
和/或,所述酶解的時間為10h;
和/或,所述雷公藤愈傷組織懸浮細(xì)胞來源于雷公藤愈傷組織;
和/或,所述1)和所述2)之間還包括過濾的步驟。
7.由權(quán)利要求1-6中任一所述的方法制備得到的原生質(zhì)體。
8.權(quán)利要求7所述的原生質(zhì)體在外源基因表達中的應(yīng)用。
9.一種外源基因表達的方法,包括如下步驟:將外源基因轉(zhuǎn)化權(quán)利要求7所述的原生質(zhì)體中,實現(xiàn)外源基因的表達。
10.權(quán)利要求1-6中所述的酶解液;
和/或,權(quán)利要求1-6中所述的酶解液在原生質(zhì)體分離中的應(yīng)用。