本發(fā)明屬水產(chǎn)養(yǎng)殖病害生態(tài)防控
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種降低養(yǎng)殖水體氨氮水平的護(hù)料制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：有研究表明，由于養(yǎng)殖魚(yú)類僅吸收投喂飼料中約30％的氮素，約70％以氨氮、糞便的形式釋放到水體中。有機(jī)碳中的碳素大部分以CO2的形式從池塘水體中釋放出去，氮素僅在厭氧條件下少量以N2、N2O的形式釋放，最終氮素會(huì)以無(wú)機(jī)氮的形式(氨氮、亞硝酸鹽等)積累在水中，導(dǎo)致養(yǎng)殖水質(zhì)惡化，增加對(duì)養(yǎng)殖魚(yú)類的毒性，成為了魚(yú)類疾病頻繁發(fā)生的主要原因。水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)病與養(yǎng)殖水體水質(zhì)穩(wěn)定關(guān)系密切，而氨氮水平是水質(zhì)的重要指標(biāo)。通過(guò)富集培養(yǎng)，添加芽孢、好氧反硝化菌群，利用這些能利用氨氮的微生物菌群，分解、吸收養(yǎng)殖水體中因殘餌、糞便等積累的氮源，維護(hù)養(yǎng)殖水質(zhì)穩(wěn)定。本護(hù)料制備技術(shù)特征為富集培養(yǎng)和固體發(fā)酵；發(fā)酵物富含芽孢、好氧反硝化菌群。目前已有的相關(guān)技術(shù)大多采取以投入外來(lái)有益微生物方式來(lái)改善水體環(huán)境；或者是以投入微生物生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方法來(lái)改善養(yǎng)殖水體環(huán)境。但是這些技術(shù)加入外來(lái)微生物會(huì)給養(yǎng)殖水體原有微生態(tài)平衡帶來(lái)潛在危險(xiǎn)。本技術(shù)在區(qū)域養(yǎng)殖水體微型生物養(yǎng)護(hù)劑(護(hù)料)具有通過(guò)護(hù)料優(yōu)化區(qū)域養(yǎng)殖水體微生物、原生動(dòng)物、藻類等微型生物多樣性，以維護(hù)養(yǎng)殖環(huán)境動(dòng)態(tài)穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，針對(duì)氨氮高問(wèn)題，添加某些微生物菌群，較短周期內(nèi)降低氨氮水平。其技術(shù)是在護(hù)料維護(hù)養(yǎng)殖水體微型生物微生態(tài)未定的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)降低氨氮水平的功能。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明公開(kāi)了一種降低養(yǎng)殖水體氨氮水平的護(hù)料制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明申請(qǐng)的技術(shù)方案是：一種降氨氮的護(hù)料，所述護(hù)料由芽孢、反硝化菌群和微生物培養(yǎng)料組成。優(yōu)選的，護(hù)料中芽孢和反硝化菌群的混合菌液比例是1:1。優(yōu)選的，護(hù)料中微生物培養(yǎng)料的含量是干物質(zhì)約占50％，其余主要為水分。優(yōu)選的，護(hù)料中芽孢為池塘水通過(guò)富集培養(yǎng)后得到芽孢菌群的混合物。優(yōu)選的，護(hù)料中反硝化菌群的菌種是為池塘水通過(guò)富集培養(yǎng)后得到好氧反硝化菌群的混合物。優(yōu)選的，護(hù)料中微生物培養(yǎng)料由麩皮、米糠、豆粕添加池塘水和富集的芽孢菌群和好氧反硝化菌群的混合液經(jīng)固體發(fā)酵方法制備而成。優(yōu)選的，護(hù)料中微生物培養(yǎng)料由50％麩皮，40％米糠，10％豆粕組成。一種降低養(yǎng)殖水域中氨氮含量的方法，其步驟是：1)富集培養(yǎng)芽孢菌群和好氧反硝化菌群的混合液；2)由麩皮、米糠、豆粕(比例為5:4:1)組成的培養(yǎng)料，添加池塘水和富集的芽孢菌群和好氧反硝化菌群的混合液，料水比為1:0.6-1，經(jīng)固體發(fā)酵方法制備而成；3)制備降氨氮料，根據(jù)當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖池塘情況，在晴天上午使用，每畝使用劑量1～2kg，取5～10倍塘水混合攪拌均勻，全池潑灑，2～5天使用一次。本發(fā)明申請(qǐng)的有益效果是：本發(fā)明申請(qǐng)的護(hù)料可以降低池塘水中氨氮含量，具有維持養(yǎng)殖過(guò)程水質(zhì)穩(wěn)定的作用。附圖說(shuō)明圖1護(hù)料使用生產(chǎn)塘A氨氮變化情況。圖2護(hù)料使用生產(chǎn)塘B氨氮變化情況。具體實(shí)施方式以下所述，僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于此；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，任何熟悉
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員實(shí)施例1優(yōu)良養(yǎng)殖水體采集與富集培養(yǎng)方法1、材料1.1養(yǎng)殖水體采集：選擇高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)池塘，采集養(yǎng)殖水體取底泥表層和水。1.2培養(yǎng)基芽孢菌培養(yǎng)基(克/升)：蛋白胨5葡萄糖10酵母膏3硫酸鎂0.5磷酸氫二鉀0.5氯化鈉0-2gpH7.0-7.2，121℃，滅菌15分鐘。好氧反硝化菌培養(yǎng)基(克/升)：磷酸二氫鉀1.5，硫酸鎂0.01，磷酸氫二鈉7.9，微量元素溶液2毫升，檸檬酸鈉5.66，硝酸鈉0.8415，去離子水1000毫升，pH7.0-7.5，121℃，滅菌15分鐘。微量元素溶液：用50gEDTA-2Na，3.93g的ZnSO4.7H2O，7.28g的CaC12.2H2O，5.06g的MnC12.4H2O，5.0g的FeSO4.7H2O，1.1g的(NH4)6Mo7O2.4H2O，2,45g的CuSO4.5H2O，1.61g的CoC12.6H2O，定容至1000mL，pH7.02富集培養(yǎng)方法：2.1孢菌富集培養(yǎng)：取1毫升池塘水樣加入含9毫升富集培養(yǎng)基試管中，28℃，搖床培養(yǎng)24小時(shí)。分離培養(yǎng)：將富集樣品80℃水浴15-20分鐘，殺滅芽孢菌之外的其它菌類，取100ul樣品，在平板涂布，28℃，培養(yǎng)24小時(shí)。2.2好氧反硝化菌富集培養(yǎng)法：取10毫升池塘水接種到裝有100毫升滅菌的富集培養(yǎng)基中，28℃、120rpm培養(yǎng)2-3天，根據(jù)用量再擴(kuò)大培養(yǎng)。3結(jié)果通過(guò)幾輪次富集培養(yǎng)，等到純度很高的芽孢菌群、好氧反硝化菌群菌液，搖瓶培養(yǎng)，菌液的活菌數(shù)均在1×109CFU/mL以上。表1富集培養(yǎng)菌液活菌數(shù)富集培養(yǎng)菌液活菌數(shù)備注芽孢菌群3.0×109CFU/mL為富集培養(yǎng)后各類芽孢菌群混合液好氧反硝化菌群2.1×109CFU/mL為富集培養(yǎng)后各類好氧反硝化菌群混合液實(shí)施例2固體發(fā)酵制備降氨氮護(hù)料1材料1.1菌液：芽孢菌、好氧反硝化菌的富集培養(yǎng)物(1×109CFU/mL以上)。1.2固體培養(yǎng)料：麩皮、米糠、豆粕。1.3池塘水：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)池塘水。2方法2.1、培養(yǎng)料準(zhǔn)備按照原料(麩皮：米糠：豆粕＝5:4:1)稱取，容器裝入芽孢、好氧反硝化菌菌混合液(每10公斤干料加1-2L)，剩余加池塘水,料水比＝1:0.6—1.0，混勻、濕度適中、均勻。2.2、種子培養(yǎng)上述物料混勻后，堆放、插入溫度計(jì)，用薄膜覆蓋，自然發(fā)酵，觀察料溫變化，每天上午、下午，視料溫各翻堆1次(料溫不超過(guò)50℃)培養(yǎng)48小時(shí)，培養(yǎng)料顏色變深，有發(fā)酵物的香味后，部分繼續(xù)擴(kuò)種，剩余的作為生產(chǎn)種子2.3、護(hù)料制備擴(kuò)好的生產(chǎn)種子按照1:4接種上述培養(yǎng)料，混勻，堆放，用薄膜覆蓋，發(fā)酵，插入溫度計(jì)，觀察料溫變化，每天上午、下午，視料溫翻堆1-2次(料溫不超過(guò)50℃)，48小時(shí)，培養(yǎng)料顏色變深，有發(fā)酵物的香味，用薄膜袋分裝，密封，室溫放置幾天后，可使用。3結(jié)果培養(yǎng)物為棕黃色混合料，帶酸香味，經(jīng)活菌檢測(cè)，芽孢菌群、好氧反硝化菌群1×106CFU/克以上)。室溫，密封可放置2個(gè)月以上。表2護(hù)料添加富集菌液與否比較護(hù)料芽孢菌群好氧反硝化菌群樣品1(添加富集菌液)4.5×106CFU/克5.0×106CFU/克樣品2(添加富集菌液)2.5×106CFU/克3.0×106CFU/克樣品3(不添加富集菌液)<103CFU/克<103CFU/克樣品4(不添加富集菌液)<103CFU/克<103CFU/克實(shí)施例3降氨氮護(hù)料作用效果實(shí)驗(yàn)1.材料1.1實(shí)驗(yàn)魚(yú)羅非魚(yú)，體長(zhǎng)2cm。1.2飼料熱帶觀賞魚(yú)幼魚(yú)飼料。1.3含氨氮水為本實(shí)驗(yàn)室小水體已穩(wěn)定放養(yǎng)羅非魚(yú)的池水，其氨氮含量分別為1.5mg/L和2.5mg/L兩種，該水源經(jīng)實(shí)驗(yàn)室馴化穩(wěn)定，含有藻類、浮游動(dòng)物、細(xì)菌等微型生物。1.4富集菌液參照實(shí)施例1方法制備，菌液含芽孢桿菌、反硝化菌，各菌群濃度為>109cfu/ml。1.5添加富集菌護(hù)料(降氨氮護(hù)料)為實(shí)驗(yàn)室配制，護(hù)料制備按照實(shí)施例2，制備的添加富集菌護(hù)料，含芽孢桿菌、反硝化菌，各濃度為106cfu/g。1.6未添加富集菌護(hù)料制備同1.5，未添加富集菌，含非富集芽孢桿菌、反硝化菌，各濃度位103cfu/g。1.7水質(zhì)檢測(cè)試劑盒為本實(shí)驗(yàn)室自制的水質(zhì)檢測(cè)試劑盒(參照陳佳榮.水化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)[M],北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1996)2.方法2.1試驗(yàn)分組分為兩大組，組1起始氨氮含量為1.5mg/L，組2起始氨氮含量為2.5mg/L；各組分別有添加富集菌護(hù)料及未添加富集菌護(hù)料、純富集菌對(duì)照，共8個(gè)小組，其中添加富集菌護(hù)料為兩個(gè)平行組。2.2試驗(yàn)系統(tǒng)構(gòu)建對(duì)各小組，取1.3含氨氮水1L，放入羅非魚(yú)5尾；每日投喂飼料，投量以食完為準(zhǔn)，各小組等量；配制護(hù)料水，稱取護(hù)料,與曝氣水充分混合,配成1g/L的護(hù)料水，每日現(xiàn)用現(xiàn)配；各添加富集菌護(hù)料及未添加富集菌護(hù)料小組，使用終濃度為0.02g/L，各純富集菌小組使用終濃度為0.02ml/L，每日用一次。2.3氨氮檢測(cè)每日11:00采集各小組水樣，以比色法測(cè)定氨氮含量。3.結(jié)果與分析由表3顯示，兩大組水樣品的氨氮變化呈相同規(guī)律，其中添加富集菌護(hù)料試驗(yàn)1-1、1-2及2-1、2-2雖起始濃度不同，但在第4天，氨氮含量均降至0.1mg/L以下，且兩平行試驗(yàn)小組重復(fù)性好；兩大組中純富集菌對(duì)照1-4、2-4因菌量較高，相比添加富集菌護(hù)料試驗(yàn)組在頭2-3天降氨氮速度較快，而到第4天氨氮含量與添加富集菌護(hù)料試驗(yàn)小組同樣均降至0.1mg/L以下，表明純富集菌降氨氮速度快，而添加富集菌護(hù)料降氨氮效果明顯且過(guò)程較為平穩(wěn)；兩大組中未添加富集菌護(hù)料對(duì)照1-3、2-3氨氮含量在頭3天無(wú)明顯變化，到第4天，受起始氨氮濃度水平的影響，起始氨氮含量較高的2-3出現(xiàn)略降。表3各試驗(yàn)組水體氨氮含量(單位：mg/L)4.結(jié)論試驗(yàn)表明，添加富集菌護(hù)料對(duì)養(yǎng)殖水體中的氨氮具有良好的降低作用。經(jīng)連續(xù)4天的水體降氨氮模擬試驗(yàn)觀察，顯示了添加富集菌護(hù)料試驗(yàn)組較未添加富集菌對(duì)照組降氨氮效果顯著；并且添加富集菌護(hù)料具有“護(hù)料”能維持養(yǎng)殖水體微型生物結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的疊加作用，而較純富集菌在降氨氮的過(guò)程更顯平穩(wěn)的特征。實(shí)施例4降氨氮護(hù)料制備和使用利用河南省當(dāng)?shù)氐脑希凑諏?shí)施二制備降氨氮護(hù)料，根據(jù)當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖池塘情況，在晴天上午使用，每畝使用劑量1～2kg，取5～10倍塘水混合攪拌均勻，全池潑灑，2～5天使用一次，并根據(jù)水體肥/瘦、氣溫低/高等調(diào)節(jié)用量與間隔。使用護(hù)料后檢測(cè)養(yǎng)殖水體的水質(zhì)情況。實(shí)驗(yàn)例1選擇河南省洛陽(yáng)市白鶴鎮(zhèn)A池塘，水面7.3畝，水深1.5米，養(yǎng)殖30年的老池塘(往年養(yǎng)殖過(guò)程中，氨氮水平較高)；主養(yǎng)鯉魚(yú)，混養(yǎng)花鰱、白鰱。2015年5月開(kāi)始連續(xù)使用護(hù)料，如圖1所示，使用護(hù)料前(5月19日)檢測(cè)養(yǎng)殖水體的氨氮濃度為2.5mg/L。使用護(hù)料后，水體氨氮值較快速下降，在1周以后(5月26日)檢測(cè)養(yǎng)殖水體的氨氮濃度為0.3mg/L。到6月17日氨氮濃度繼續(xù)下降至0.02mg/L。在此之后，隨著護(hù)料的連續(xù)使用，水體氨氮指標(biāo)保持穩(wěn)定的低水平值。實(shí)驗(yàn)例2選擇河南省洛陽(yáng)市白鶴鎮(zhèn)B池塘，水面6.8畝，水深1.5米，養(yǎng)殖30年的老池塘；主養(yǎng)鯉魚(yú)，混養(yǎng)花鰱、白鰱。在5月30日至7月7日期間，使用護(hù)料后檢測(cè)養(yǎng)殖水體的氨氮濃度。如圖2所示，使用護(hù)料前(5月29日)檢測(cè)養(yǎng)殖水體的氨氮濃度為2.1mg/L。使用護(hù)料后，水體氨氮值較快速下降至1.4mg/L(6月1日)。6月3日養(yǎng)殖戶使用消毒、殺蟲(chóng)藥并停用護(hù)料，6月6日檢測(cè)養(yǎng)殖水體的氨氮濃度上升至2.8mg/L，繼續(xù)使用護(hù)料后，到7月1日氨氮濃度下降至0.6mg/L。在此之后，隨著護(hù)料的連續(xù)使用，水體氨氮指標(biāo)保持穩(wěn)定的低水平值。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3