本發(fā)明涉及環(huán)境微生物領(lǐng)域，尤其是涉及一株具有溶藻活性的赤潮藻裂解細(xì)菌YWL1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

在海洋和淡水水體中，由于富營養(yǎng)化程度的加劇，藻類過量繁殖形成赤潮和水華，從而影響和改變水體的理化性質(zhì)，并且能直接或間接引起食藻動(dòng)物的大量死亡。傳統(tǒng)的治理方法如機(jī)械除藻，高頻電磁脈沖以及利用除草劑等方法，常受到成本和環(huán)境安全性問題等諸多因素的限制。相比之下，生物控藻技術(shù)成本低、安全性好，其中溶藻細(xì)菌因其較高的除藻性能，成為防治赤潮和水華的一個(gè)新方向。

所謂溶藻細(xì)菌（algae-lysing bacteria），是一類以直接或間接方式抑制藻類生長、或殺死藻類、溶解藻細(xì)胞的細(xì)菌的統(tǒng)稱。1924年，Ceitler報(bào)道一種黏細(xì)菌Polyangium parasitium寄生在剛毛藻（Cladophora）上，使其死亡。國內(nèi)外文獻(xiàn)中報(bào)道的溶藻細(xì)菌有：黏細(xì)菌、噬胞菌屬、弧菌、腐生螺旋體屬、假單胞菌、鞘氨醇單胞菌屬、交替單胞菌、交替假單胞菌等。溶藻細(xì)菌的作用方式一般分為兩種：①直接溶藻，即直接進(jìn)攻宿主，它需要細(xì)菌與溶藻細(xì)胞直接接觸，甚至侵入藻細(xì)胞內(nèi)；②間接溶藻，即間接進(jìn)攻宿主，主要包括細(xì)菌同藻競爭有限營養(yǎng)或細(xì)菌分泌胞外物質(zhì)溶藻。

作為水生生態(tài)系統(tǒng)中生物種群結(jié)構(gòu)和功能的一個(gè)重要組成部分，溶藻細(xì)菌對(duì)赤潮和水華的控制、維持藻類生物量的平衡具有非常重要的作用，它們對(duì)浮游植物的溶解作用也可能是調(diào)節(jié)水生生態(tài)系統(tǒng)中初級(jí)生產(chǎn)力的一個(gè)重要因素。赤潮和水華的突然消亡可能與溶藻細(xì)菌的感染有關(guān)。溶藻細(xì)菌作為赤潮和水華防治的生物，能夠作為一種高效溶藻微生物控制甚至殺死藻細(xì)胞，恢復(fù)生態(tài)平衡，具有巨大的開發(fā)價(jià)值。

溶藻菌對(duì)藻的抑制和溶藻作用具有宿主特異性，針對(duì)我國海域特有赤潮藻株分離溶藻菌具有重要的現(xiàn)實(shí)和科學(xué)意義。中肋骨條藻Skeletonema costatum是在全球近岸海域分布極廣的廣溫廣鹽性的浮游硅藻，是我國赤潮的優(yōu)勢(shì)種，在黃、東、南海均有該種赤潮記錄。中肋骨條藻SCXMBO2株和SKSPXS0711株分別是中國東海寧波海域和廈門海域赤潮優(yōu)勢(shì)藻。迄今，尚無有關(guān)此兩株藻的溶藻菌的分離及應(yīng)用的報(bào)道。產(chǎn)毒圓海鏈藻（Thalassiosira rotula）和塔瑪亞歷山大藻（Alexandrium tamarense）是廣泛存在于海洋中的產(chǎn)毒藻，亦是我國沿海重要的赤潮原因藻。獲得能夠同時(shí)裂解赤潮原因藻中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻的細(xì)菌，對(duì)于赤潮的生物防治非常重要。迄今，尚無能夠同時(shí)裂解這三種赤潮原因藻的細(xì)菌的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一株可安全、高效、快速、特異抑制海水中中肋骨條藻（SCXMBO2和SKSPXS0711）、產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻的赤潮藻裂解細(xì)菌YWL1及其應(yīng)用，該裂解細(xì)菌使中肋骨條藻SCXMBO2藻葉綠素a濃度減少率達(dá)76.14%、使產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻藻液的OD680減少65.38%和57.25%。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一株赤潮藻裂解細(xì)菌，該細(xì)菌為YWL1株，分類命名為海桿菌（Marinobacter sp.），于2015 年5 月25 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.10857。

該菌的生物學(xué)特征如下：該細(xì)菌為過氧化氫酶陽性，不可以利用蔗糖、麥芽糖、淀粉作為碳源，無運(yùn)動(dòng)性，菌體形態(tài)為棒狀，有鞭毛，無芽孢，菌落為淡黃色半透明，表面光滑濕潤，邊緣規(guī)則，無暈環(huán)，直徑約1 mm；該菌株在UV下處理30分鐘后死亡，其最高耐受溫度為40℃，最適生長條件為：pH=6.0-8.5，溫度20-40℃。

上述赤潮藻裂解細(xì)菌的應(yīng)用，其對(duì)產(chǎn)毒圓海鏈藻（Thalassiosira rotula）、塔瑪亞歷山大藻（Alexandrium tamarense）和東海赤潮優(yōu)勢(shì)藻中肋骨條藻SCXMBO2、SKSPXS0711具有強(qiáng)溶藻作用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明公開了一株赤潮藻裂解細(xì)菌及其應(yīng)用，將其用于控制在特定環(huán)境下由于中肋骨條藻、圓海鏈藻或塔瑪亞歷山大藻爆發(fā)性增值或高度聚集而引起的赤潮，此裂解細(xì)菌可用于抑制中肋骨條藻(SCXMBO2、SKSPXS0711)、產(chǎn)毒圓海鏈藻（Thalassiosira rotula）和塔瑪亞歷山大藻（Alexandrium tamarense）的生長，并殺死這些赤潮藻。具有成本低，經(jīng)濟(jì)效益高；對(duì)生態(tài)環(huán)境無破壞；培養(yǎng)大量赤潮藻裂解細(xì)菌YWL1株較為容易，操作簡單。權(quán)衡社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和環(huán)境效益等綜合因素，是一種新型的治理赤潮的技術(shù)，具有良好的發(fā)展前景。

綜上所述，本發(fā)明提供一株赤潮藻裂解菌YWL1及其應(yīng)用，該YWL1可高效、快速降解海水中中肋骨條藻，產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻，該菌10天能使中肋骨條藻藻葉綠素a濃度減少76.14%；使產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻藻液的OD680減少率達(dá)65.38%和57.25%。

附圖說明

圖1為Marinobacter sp. YWL1負(fù)染圖；

圖2為UV以及不同pH、溫度對(duì)Marinobacter sp. YWL1的影響；

圖3為Marinobacter sp. YWL1最適儲(chǔ)存溫度圖；

圖4為中肋骨條藻SCXMBO2培養(yǎng)液。右為被YWL1感染10 d后的藻液；左為未添加YWL1的同期藻液；

圖5為顯微鏡下Marinobacter sp. YWL1對(duì)中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻、塔瑪亞歷山大藻的溶藻作用。a：被YWL01感染的中肋骨條藻SKSPXS0711；b：未添加YWL1的中肋骨條藻SKSPXS0711；c：被YWL01感染的產(chǎn)毒圓海鏈藻；d：未添加YWL01的產(chǎn)毒圓海鏈藻；e：被YWL1感染的塔瑪亞歷山大藻；f：未添加YWL01的塔瑪亞歷山大藻；

圖6為Marinobacter sp. YWL1對(duì)中肋骨條藻SCXMBO2葉綠素a濃度的影響。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

一、實(shí)驗(yàn)方法

藻葉綠素a濃度測定方法

取5 mL 藻液，6000 g離心15 min后去上清，加入5 mL 體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇水溶液或者體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮水溶液，在4℃冰箱內(nèi)避光放置。24 h后7000 g 離心10 min，上清液用分光光度計(jì)檢測在663nm和645 nm時(shí)的吸光度，用體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇水溶液或者體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮水溶液調(diào)零。藻葉綠素a濃度利用以下公式計(jì)算得到：

a=(12.7D₆₆₃-2.59D₆₄₅)*V/A

a 代表藻葉綠素a濃度，V為加入的體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇水溶液或者體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮水溶液體積，A為藻細(xì)胞重量(g)。藻細(xì)胞裂解，藻葉綠素a濃度下降。

二、具體實(shí)施例

實(shí)施例1

Marinobacter sp. YWL1的分離與鑒定

現(xiàn)場采集寧波赤潮高發(fā)海域表層海水。配制固體海水LB培養(yǎng)基，取上述水樣劃線分離細(xì)菌，得到多株純菌。將分離到的純菌分別接種于液體海水LB培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃。固體海水LB培養(yǎng)基的成分為：10 g/L胰化蛋白胨，5g/L酵母提取物，15g/L瓊脂，加人工海水至1L，調(diào)pH7.0，121℃高壓蒸汽滅菌30min。液體海水LB培養(yǎng)基配方則不加瓊脂。

擴(kuò)大培養(yǎng)的純菌經(jīng)5000 ×g離心20min得到細(xì)菌沉淀，用加30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基清洗細(xì)菌三次，最后用等體積的含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基重懸細(xì)菌。菌懸液分別與指數(shù)生長期的中肋骨條藻NMBguh004-2共培養(yǎng)7天（菌液：藻液的體積比為1:4），培養(yǎng)溫度為20℃，光照強(qiáng)度2500 LX，光暗比(L/D)12 h:12 h，得到新鮮菌液。將含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基與處于指數(shù)生長期的中肋骨條藻SCXMBO2株藻液按菌液：藻液的體積比1:4混合后作為對(duì)照組。分別用肉眼、光學(xué)顯微鏡、藻葉綠素a濃度變化和電鏡觀察藻生長情況，判斷所分離的細(xì)菌是否具有裂解中肋骨條藻的能力，最后得到一株中肋骨條藻高效裂解菌YWL1，該菌16S rDNA與海桿菌HP15的16S rRNA基因序列的相似性最高，為97.63%，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。 將其命名為海桿菌（Marinobacter sp.）YWL1，于2015 年5 月25 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.10857，保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，郵編100101。

其中f/2培養(yǎng)基的成分為：硝酸鈉75 mg/L，磷酸二氫鈉 5mg/L，六水合三氯化鐵3.15 mg/L，EDTA - Na₂ 4.36 mg/L，五水硫酸銅10 mg/L，七水硫酸鋅22 mg/L，六水氯化鈷10 mg/L，四水氯化錳18 mg/L，二水鉬酸鈉6.3 mg/L，維生素B₁₂ 1 mg/L，維生素H 1 mg/L，維生素B₁ 200 mg /L，加人工海水至1L。

實(shí)施例2

用電子顯微鏡觀察Marinobacter sp. YWL1的形態(tài)

取實(shí)施例1所分離純化的YWL1菌液滴于銅網(wǎng)格上，以2wt%乙酸鈾酰溶液（W/V）進(jìn)行負(fù)染，再置于電子顯微鏡（日立H-7650）下觀察中肋骨條藻裂解細(xì)菌的形態(tài)。結(jié)果如圖1所示，YWL1為棒狀（58 nm × 229 nm），有鞭毛，無芽孢。

實(shí)施例3

紫外線以及不同pH、溫度對(duì)Marinobacter sp. YWL1的影響

（1）紫外線UV對(duì)Marinobacter sp. YWL1穩(wěn)定性的影響

取實(shí)施例1分離純化得到的YWL1新鮮菌液，經(jīng)5000 ×g離心20min得到細(xì)菌沉淀，用含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基清洗細(xì)菌三次，最后用含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基重懸細(xì)菌。取上述菌懸液在UV（300 LX）下處理30分鐘。用實(shí)施例1中所述的對(duì)照組作為對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組中分別取100μL菌液涂布于固體海水LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同實(shí)施例1。24小時(shí)后，分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。

結(jié)果表明，如圖2所示，YWL1菌液在強(qiáng)UV下照射30分鐘，菌落數(shù)減少率為100%。說明細(xì)菌在強(qiáng)UV下照射30分鐘后，可使細(xì)菌死亡，然而，自然界紫外線正常情況下不會(huì)到達(dá)此強(qiáng)度。

（2）Marinobacter sp. YWL1的耐受溫度及最適儲(chǔ)存溫度的探究

取實(shí)施例1分離純化得到的含中肋骨條藻裂解細(xì)菌YWL1的新鮮菌液，經(jīng)5000 ×g離心20min得到細(xì)菌沉淀，用含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基清洗細(xì)菌三次，最后用含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基重懸細(xì)菌。取上述菌懸液分別在40℃、45℃水浴鍋中處理30分鐘，在-80℃、-40℃、-20℃、4℃、20℃、37℃冰箱內(nèi)放置7天。用實(shí)施例1中所述的對(duì)照組作為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均無需黑暗處理。在實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組中分別取100μL菌液涂布于固體海水LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同實(shí)施例1。24小時(shí)后，分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。

結(jié)果表明，如圖2所示，菌懸液分別至于40℃、45℃水浴鍋中處理30分鐘后，菌落數(shù)減少率分別為6.67%、98.89%。說明該細(xì)菌在40℃環(huán)境下其活性均較穩(wěn)定，在45℃下無法正常生存。如圖3所示菌液分別在-80℃、-40℃、-20℃、4℃、20℃、37℃冰箱內(nèi)放置7天后，菌落數(shù)減少率分別為97.44%、100%、100%、12.30%、14.87%、95.38%。說明該細(xì)菌的最適儲(chǔ)存溫度為4℃、20℃。

（3）不同pH對(duì)Marinobacter sp. YWL1穩(wěn)定性的影響

取實(shí)施例1分離純化得到的含中肋骨條藻裂解細(xì)菌YWL1的新鮮菌液，經(jīng)5000 ×g離心20min得到細(xì)菌沉淀，用含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基清洗細(xì)菌三次，最后用含30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基重懸細(xì)菌。測菌液原始pH值并記錄，隨后用NaOH和HCl將菌液相應(yīng)調(diào)制pH 4.5、pH 5、pH 6、pH 8.5、pH 10、pH 10.5并分別處理30分鐘作為實(shí)驗(yàn)組，30分鐘后將實(shí)驗(yàn)組菌液pH調(diào)回原始pH。用實(shí)施例1中所述的對(duì)照組作為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均無需黑暗處理。在實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組中分別取100μL菌液涂布于固體海水LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同實(shí)施例1。24小時(shí)后，分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。

結(jié)果表明，如圖2所示，菌懸液在pH 4.5、pH 5、pH 6、pH 8.5、pH 10、pH 10.5處理30 min后菌落減少率分別為98.89%、93.33%、11.67%、13.33%、95.56%、98.89%。說明該細(xì)菌無法在強(qiáng)酸強(qiáng)堿環(huán)境下生存，在pH 6、pH 8.5環(huán)境下其活性均較穩(wěn)定。

實(shí)施例4

Marinobacter sp. YWL1溶藻范圍測試

選用19株海洋藻種（表1）進(jìn)行溶藻細(xì)菌YWL1的溶藻范圍分析。取處于指數(shù)生長期的藻種按4:1的體積比分別與溶藻細(xì)菌YWL01共培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上述實(shí)施例1，設(shè)置三個(gè)平行組。對(duì)照組為不含細(xì)菌YWL01 的藻液。共培養(yǎng)第0、4、10 d均搖勻取樣，測藻液的OD₆₈₀值。同時(shí)，每天用照相機(jī)記錄實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組藻液顏色變化情況以及光學(xué)顯微鏡下觀察藻細(xì)胞形態(tài)。14 d后，與對(duì)照組比較，若無明顯變化，則基本判定細(xì)菌YWL01無法感染該藻。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次進(jìn)行。

結(jié)果，YWL1可以感染中肋骨條藻SCXMBO2、SKSPXS0711、產(chǎn)毒圓海鏈藻（Thalassiosira rotula）和塔瑪亞歷山大藻（Alexandrium tamarense）（表1）。感染后，與對(duì)照組相比，藻細(xì)胞裂解明顯，無完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，光合色素變少。感染期間，對(duì)照組藻液OD₆₈₀值一直處于上升狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)組藻液OD₆₈₀值雖然感染初期高于對(duì)照組（這是由于加入了菌懸液，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)組藻OD₆₈₀初始值比對(duì)照組高），但是感染后期藻液OD₆₈₀值逐漸下降，最終均低于對(duì)照組。

如圖4所示，中肋骨條藻SCXMBO2培養(yǎng)液。右為被YWL1感染10 d后的藻液；左為未添加YWL1的同期藻液，被感染的藻液顏色明顯淡于同期對(duì)照藻液；如圖5所示，顯微鏡下Marinobacter sp. YWL1對(duì)中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻、塔瑪亞歷山大藻的溶藻作用。a：被YWL01感染的中肋骨條藻SKSPXS0711；b：未添加YWL1的中肋骨條藻SKSPXS0711；c：被YWL01感染的產(chǎn)毒圓海鏈藻；d：未添加YWL01的產(chǎn)毒圓海鏈藻；e：被YWL1感染的塔瑪亞歷山大藻；f：未添加YWL01的塔瑪亞歷山大藻。圖4b、d、f分別顯示未感染YWL01的中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻具有完整的、輪廓清晰的細(xì)胞形態(tài)；而圖4a、c、e分別顯示感染YWL01的中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻的細(xì)胞裂解、破碎。

而其他15株赤潮藻無論從藻細(xì)胞形態(tài)還是從藻液OD₆₈₀值來看，均無溶藻現(xiàn)象。

表1藻種與溶藻結(jié)果

Tab. 3.1 Susceptibility of algealgal blooming

注：“+”為有溶藻現(xiàn)象， “-”為無溶藻現(xiàn)象。

實(shí)施例5

Marinobacter sp. YWL1的生化鑒定

（1）過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)

取1 ml新鮮培養(yǎng)的YWL1細(xì)菌菌液（實(shí)施例1提供），使用CAT可見光試劑盒（南京建成生物工程研究所）按說明提取過氧化氫酶。若提取到過氧化氫酶，則說明該菌可以利用過氧化氫，無則反之。結(jié)果表明，如表2說明所示該細(xì)菌存在過氧化氫酶，利用過氧化氫。

（2）淀粉酶實(shí)驗(yàn)

取1 ml新鮮培養(yǎng)的YWL1細(xì)菌菌液（實(shí)施例1提供），使用二糖酶（淀粉酶）試劑盒（南京建成生物工程研究所）按說明提取淀粉酶。若提取到淀粉酶，則說明該菌可以利用淀粉，無則反之。結(jié)果表明，如表2所示，說明該細(xì)菌不存在淀粉酶，不可以利用淀粉。

（3）麥芽糖酶實(shí)驗(yàn)

取1 ml新鮮培養(yǎng)的YWL1細(xì)菌菌液（實(shí)施例1提供），使用二糖酶(麥芽糖酶)試劑盒（南京建成生物工程研究所）按說明提取麥芽糖酶。若提取到麥芽糖酶，則說明該菌可以利用麥芽糖，無則反之。結(jié)果表明，如表2所示，說明該細(xì)菌不存在麥芽糖酶，不可以利用麥芽糖。

（4）蔗糖酶實(shí)驗(yàn)

取1 ml新鮮培養(yǎng)的YWL1細(xì)菌菌液（實(shí)施例1提供），使用二糖酶(蔗糖酶)試劑盒（南京建成生物工程研究所）按說明提取蔗糖酶。若提取到蔗糖酶，則說明該菌可以利用蔗糖，無則反之。結(jié)果表明，如表2所示，說明該細(xì)菌不存在蔗糖酶，不可以利用蔗糖。

（5）革蘭氏染色測定實(shí)驗(yàn)

染液: 結(jié)晶紫染色液、脫色液、95%乙醇、沙黃復(fù)染液、稀石碳酸復(fù)紅液（均由本實(shí)驗(yàn)室提供）。

染色方法：在涂片上滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)將YWL1細(xì)菌涂于水滴中，并輕輕攪勻，酒精燈烘干；再將涂片固定于酒精燈火焰上方，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液，作用1min后，水洗；接著滴加95wt%酒精水溶液脫色，約30s，或?qū)⒕凭螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用酒精滴滿整個(gè)涂片，脫色10s，水洗；滴加復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗，待干，鏡檢。若所染菌呈紅色則為革蘭氏陰性菌，若所染菌呈紫色則為革蘭氏陽性菌。結(jié)果表明，表2所示，說明該細(xì)菌為革蘭氏陰性菌。

表2 Marinobacter sp. YWL1的生化特性

注：“+”: 陽性; “-“: 陰性。

實(shí)施例6

Marinobacter sp. YWL1對(duì)中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻藻華的抑制應(yīng)用

取實(shí)施例1所分離純化的Marinobacter sp. YWL1菌液按1：4的比例分別添加到中肋骨條藻、產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻藻華液中，對(duì)照組添加含有30 mg/L硅酸鹽的f/2培養(yǎng)基。在第0、4、10 d分別取5 mL 藻液提取葉綠素a，檢測實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的葉綠素a濃度或OD680值的變化。

對(duì)于中肋骨條藻，結(jié)果如圖4所示，與對(duì)照組相比，裂解液的藻葉綠素a濃度在第10天具有顯著性影響 (P < 0.05)。對(duì)照組藻葉綠素a濃度從0.096 mg/L 穩(wěn)定上升至 0.285 mg/L。而實(shí)驗(yàn)組，前四天緩慢上升至0.186 mg/L，隨后到第10天下降至0.068 mg/L，與對(duì)照組相比下降了76.14%，對(duì)中肋骨條藻具有很好的裂解作用。

通過相同實(shí)驗(yàn)方法得到Marinobacter sp. YWL1使產(chǎn)毒圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻藻液的OD680減少65.38%和57.25%，控藻效果明顯。

綜上所述，上述赤潮藻裂解菌海桿菌YWL1株可用于特異性地抑制東海赤潮優(yōu)勢(shì)藻中肋骨條藻和產(chǎn)毒赤潮藻圓海鏈藻、塔瑪亞歷山大藻的生長并殺死這些藻。其對(duì)中肋骨條藻（SCXMBO2和SKSPXS0711）具有強(qiáng)裂解作用，使藻液由褐色變成白色；對(duì)產(chǎn)毒赤潮藻圓海鏈藻和塔瑪亞歷山大藻均具有強(qiáng)烈裂解作用，使藻液顏色變淡至無色。

上述說明并非對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明也并不限于上述舉例。本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)，作出的變化、改型、添加或替換，也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。

序 列 表

<110> 寧波大學(xué)

<120> 一株赤潮藻裂解細(xì)菌YWL1及其應(yīng)用

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1266

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 中肋骨條藻高效裂解菌YWL1基因

<400> 1

GGGCTGGCGG CAGCTTACAC ATGCAGTCGA GCGGTAACAG GGGGTGCTTG CACCCCGCTG

ACGAGCGGCG GACGGGTGAG TAATGCATAG GAAACTGCCC AGTAGTGGGG GATAGCCCGG

GGAAACCCGG ATTAATACCG CGTACGCCCT TCGGGGGAAA GCAGGGGATC TTCGGACCTT

GCGCTATTGG ATGTGCCTAT GTCGGATTAG CTAGTTGGTG GGGTAAAGGC CTACCAAGGC

GACGATCCGT AGCTGGTCTG AGAGGATGAT CAGCCACATC GGGACTGAGA CACGGCCCGA

ACTCCTACGG GAGGCAGCAG TGGGGAATAT TGGACAATGG GGGCAACCCT GATCCAGCCA

TGCCGCGTGT GTGAAGAAGG CTTTCGGGTT GTAAAGCACT TTCAGTGAGG AGGAAAACTC

TGCGACTAAT ACTCGTAGGG CTTGACGTTA CTCACAGAAG AAGCACCGGC TAACTCCGTG

CCAGCAGCCG CGGTAATACG GAGGGTGCAA GCGTTAATCG GAATTACTGG GCGTAAAGCG

CGCGTAGGTG GTTTGATAAG CGAGATGTGA AAGCCCCGGG CTTAACCTGG GAACGGCATT

TCGAACTGTC AGGCTAGAGT ATGGTAGAGG GTAGTGGAAT TTCCTGTGTA GCGGTGAAAT

GCGTAGATAT AGGAAGGAAC ACCAGTGGCG AAGGCGGCTA CCTGGACCAA TACTGACACT

GAGGTGCGAA AGCGTGGGGA GTAAACAGGA TTAGATACCC TGGTAGTCCA CGCCGTAAAC

GATGTCTACT AGCCGTTGGG ACTCTTGAAG TCTTAGTGGC GCAGCTAACG CACTAAGTAG

ACCGCCTGGG GAGTACGGCC GCAAGGTTAA AACTCAAATG AATTGACGGG GGCCCGCACA

AGCGGTGGAG CATGTGGTTT AATTCGACGC AACGCGAAGA ACCTTACCTG GCCTTGACAT

GCAGAGAACT TTCCAGAGAT GGATTGGTGC CTTCGGGAAC TCTGACACAG GTGCTGCATG

GCGTCGTCAG CTCGTGTCGT GAGATGTTGG GTAAGTCCCG TACGAGCGCA ACCCCTATCC

CTAGTGCTAG CAGTTCGGCT GAGAACTCTA GGGAGACTGC CGTGACAACC GGAGAAGGTG

GGGGGATGAA CGTCAGGTCA TCATGACTTA CGGCCAGGCT ACCCACTGGC TCAATGGTGG

CCAAGCGTCA ACCCGAGGGG ACACTCATAC ACTGTATCCG ATGCACTGCA ACTGACTGCG

TGGACT 1266