本發(fā)明屬于生物菌制劑生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。涉及一種連續(xù)規(guī)模生產(chǎn)光合細(xì)菌的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

光合細(xì)菌（PSB）是地球上最早出現(xiàn)具有光能合成系統(tǒng)的原始生物，廣泛存分布于土壤、水域等自然環(huán)境中。PSB在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中能利用有機(jī)酸、氨、硫化氫、烷烴及低分子有機(jī)物作為碳源和供氫體進(jìn)行光合作用，同時(shí)降解和清除水體環(huán)境中的過(guò)量有機(jī)物和有害物質(zhì)，防止水體富營(yíng)養(yǎng)化，提高水體的溶氧量，從而凈化水質(zhì)，改善水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)環(huán)境。另外，PSB不僅蛋白質(zhì)豐富，而且氨基酸組成齊全，并含豐富的維生素、輔酶Q、抗病毒物質(zhì)和生長(zhǎng)促進(jìn)因子，在作為餌料添加劑防治魚(yú)病、促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng)、提高魚(yú)類孵化率等方面均表現(xiàn)出良好性能。因此，光合細(xì)菌受到眾多水產(chǎn)養(yǎng)殖戶的青睞，在日本、中國(guó)和東南亞各國(guó)的養(yǎng)蝦池和養(yǎng)魚(yú)池中均已普遍投放光合細(xì)菌以改善水質(zhì)。

目前，光合細(xì)菌的生產(chǎn)和應(yīng)用過(guò)程中還存在很多問(wèn)題：1）光合細(xì)菌生產(chǎn)周期長(zhǎng)，成本較高。光合細(xì)菌發(fā)酵過(guò)程需要一定的溫度，光照等條件，發(fā)酵周期一般為10-15d，發(fā)酵成本較高。2）市售光合細(xì)菌菌劑濃度低，使用效果不穩(wěn)定。市售光合細(xì)菌菌劑濃度一般在10億/毫升以下，且常伴有多種雜菌或藻類污染，不僅達(dá)不到所需的凈水效果，還存在致病的風(fēng)險(xiǎn)。3）光合細(xì)菌規(guī)模生產(chǎn)較難。培養(yǎng)基滅菌后培養(yǎng)，成本較高，難以保證產(chǎn)量；而開(kāi)放培養(yǎng)易污染，難以保證菌液質(zhì)量，限制了其規(guī)模生產(chǎn)。專利200810222313.6“一種培養(yǎng)光合細(xì)菌的方法”在水泥池中規(guī)模培養(yǎng)光合細(xì)菌，雖然可以大規(guī)模培養(yǎng)，但是水泥池造價(jià)成本高，受地理?xiàng)l件限制。專利201010590805.8“一種自然生態(tài)條件下的光合細(xì)菌發(fā)酵方法”采用白色塑料桶進(jìn)行自然光照培養(yǎng)，需要人工分裝，且不能連續(xù)大規(guī)模培養(yǎng)。

如何簡(jiǎn)化培養(yǎng)裝置和生產(chǎn)過(guò)程，在降低成本的條件下，提高菌液濃度，實(shí)現(xiàn)光合細(xì)菌規(guī)?；B續(xù)培養(yǎng)，成為生產(chǎn)上大面積推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種連續(xù)規(guī)模生產(chǎn)光合細(xì)菌的培養(yǎng)方法，在保證光合細(xì)菌菌液質(zhì)量的前提下，降低成本，實(shí)現(xiàn)光合細(xì)菌的規(guī)?；B續(xù)培養(yǎng)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種連續(xù)規(guī)模生產(chǎn)光合細(xì)菌的培養(yǎng)方法，其特征主要包括以下步驟：

A：選擇光照好無(wú)遮陰的平坦空曠地帶。

B：培養(yǎng)容器選擇大型筒狀塑料透明薄膜，雙層。橫放于地上，扎緊其中一個(gè)開(kāi)口并抬高，防止菌液在開(kāi)口處滲漏。

C：從另一開(kāi)口加入光合細(xì)菌菌種和培養(yǎng)基，加入相應(yīng)數(shù)量的干凈水，使塑料薄膜內(nèi)菌液厚度為30-40cm。封口密封，給光合細(xì)菌的生長(zhǎng)提供一個(gè)厭氧環(huán)境。其中所述的合細(xì)菌菌種指的是沼澤紅假單胞菌；菌種保藏號(hào)CGMCC1.8929，可從中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心購(gòu)得。

D：自然太陽(yáng)光下暴曬，待長(zhǎng)成棕紅色或深紅色即為成品菌液。

E：發(fā)酵完成未污染情況下，使用其中部分成品菌液后，剩余菌液作為菌種，繼續(xù)加入相應(yīng)的培養(yǎng)基和干凈水，可連續(xù)重復(fù)培養(yǎng)。

所述步驟A中的平坦空曠地帶必須光照好無(wú)遮陰，光照時(shí)間必須超過(guò)10小時(shí)/天。

所述步驟B中其特征在于選擇容器為可一次培養(yǎng)1噸甚至多噸的大型筒狀塑料透明薄膜，必須有一定厚度（15絲以上），最好為雙層，防止?jié)B漏，透光性強(qiáng)，容積大，攜帶使用比較方便，利于操作。如果有其他雜菌或藻類污染，不用消毒，可直接舍棄，減少成本。

所述步驟C中光合細(xì)菌菌種接種量為150kg，培養(yǎng)基成分為：乙酸鈉3kg，碳酸氫鈉6kg，氯化銨1kg，氯化鈉1kg，七水硫酸鎂0.2kg，磷酸氫二鉀0.5kg，磷酸二氫鉀0.2kg，氯化鈣0.05kg，酵母膏0.5kg。加入1噸干凈水。菌液厚度必須為30-40cm，如果太薄，菌液有被陽(yáng)光曬死的風(fēng)險(xiǎn)，如果太厚，則不利于光合細(xì)菌利用太陽(yáng)光。

所述步驟D中必須在日均溫度≥20℃條件下，自然太陽(yáng)光下暴曬3-5天，如中間有陰雨天需要延長(zhǎng)。

所述步驟E中使用剩余菌液必須在未污染情況下才可作為菌種，污染情況可通過(guò)肉眼觀察（是否有貼壁綠藻類），氣味判斷（是否有異味）以及顯微鏡檢測(cè)（是否有雜菌或其他藻類）等方法進(jìn)行判斷。連續(xù)培養(yǎng)時(shí)必須再次加入相應(yīng)的培養(yǎng)基和干凈水。

本發(fā)明重點(diǎn)考察了如何選擇一種成本較低，方便運(yùn)輸光合細(xì)菌培養(yǎng)容器和連續(xù)培養(yǎng)方法，最初選擇了白色噸桶作為培養(yǎng)容器，其透光性較差，運(yùn)輸極其不方便（需要雇傭大型貨車），菌液生長(zhǎng)不理想，菌數(shù)較低。

本研究利用的大型筒狀塑料透明薄膜主要解決了光合細(xì)菌的規(guī)模生產(chǎn)和連續(xù)生產(chǎn)問(wèn)題，同時(shí)解決的容器的方便運(yùn)輸問(wèn)題（一般家用轎車就可以運(yùn)輸），而對(duì)比文件1采用了是水泥池作為容器，在大規(guī)模培養(yǎng)的條件下增加了建造成本，對(duì)比文件2利用白色塑料桶，增加了運(yùn)輸成本，且無(wú)法大規(guī)模培養(yǎng)。而本發(fā)明中的大型筒狀塑料透明薄膜很好的解決了以上問(wèn)題。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)報(bào)道的光合細(xì)菌培養(yǎng)方法相比，其所具有的積極效果在于：

（1）本發(fā)明采用的容器為大型筒狀塑料透明薄膜，價(jià)格低廉，容積大，透光性強(qiáng)，陽(yáng)光照射面積大，攜帶使用比較方便，利于操作。如果有其他雜菌或藻類污染，不用消毒，可直接舍棄，減少成本浪費(fèi)。

（2）使用本方法可規(guī)?；a(chǎn)，不受生產(chǎn)設(shè)備限制，可以一次生產(chǎn)一噸或多噸光合細(xì)菌菌液，操作簡(jiǎn)單，除菌種和培養(yǎng)基外，無(wú)其他成本。

（3）使用本方法可連續(xù)培養(yǎng)，在無(wú)污染的情況下，使用剩余菌液作為菌種直接加入培養(yǎng)基和干凈水，實(shí)現(xiàn)一次接種，連續(xù)生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明：

圖1為大棚中水泥地利用本方法規(guī)模生產(chǎn)光合細(xì)菌；

圖2為水產(chǎn)養(yǎng)殖池邊利用本方法規(guī)模生產(chǎn)光合細(xì)菌。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，這里所述實(shí)施例的方案，不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域的專業(yè)人員按照本發(fā)明的精神可以對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)和變化，所述的這些改進(jìn)和變化都應(yīng)視為在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)由權(quán)利要求來(lái)限定。下面通過(guò)實(shí)例來(lái)進(jìn)一步闡明高一種連續(xù)規(guī)模生產(chǎn)光合細(xì)菌的培養(yǎng)方法。本發(fā)明所用到的大型筒狀透明塑料薄膜及光合細(xì)菌菌種（PSB）、其他試劑，除特別指出外均有市售。

實(shí)施例1

（1）選擇光照好無(wú)遮擋的農(nóng)戶水泥硬化地面。

（2）購(gòu)買大型筒狀透明塑料薄膜（厚度15絲），雙層，長(zhǎng)5-6米，寬2米左右。橫放于地上，扎緊其中一個(gè)開(kāi)口并用石頭或木頭抬高。

（3）從另一開(kāi)口加入光合細(xì)菌菌種150kg和培養(yǎng)基一組，加入1噸的地下深井水，使培養(yǎng)基和菌種混合均勻，塑料薄膜內(nèi)菌液厚度大約為30-40cm，封口密封，并用石頭或木頭抬高，防止?jié)B漏。

（4）平均氣溫在20℃以上（北方一般在5月-9月份），自然太陽(yáng)光下暴曬3-5天，光照強(qiáng)度在2000-7000Lux，待長(zhǎng)成棕紅色或深紅色。取樣檢測(cè)，菌數(shù)一般在50-60*10⁸cfu/ml，無(wú)其他藻類污染。

（5）連續(xù)培養(yǎng)。使用900kg菌液后，剩余菌液作為菌種，加入培養(yǎng)基一組和一噸的地下深井水。封口，自然太陽(yáng)光下暴曬3-5天，待長(zhǎng)成棕紅色或深紅色。取樣檢測(cè)，菌數(shù)一般在50-60*10⁸cfu/ml，無(wú)其他藻類污染。

實(shí)施例2

（1）選擇光照好無(wú)遮擋的農(nóng)戶養(yǎng)殖池旁，為土壤地面。挖一長(zhǎng)4-5米，寬1-1.5米，深0.3-0.4米的淺坑，平整完畢后在底部鋪上柔軟的篷布，塑料布等，防止扎漏。

（2）購(gòu)買大型筒狀透明塑料薄膜（厚度15絲），雙層，長(zhǎng)5-6米，寬2米左右。橫放于坑中，兩頭自然抬高，扎緊其中一頭開(kāi)口。

（3）從另一開(kāi)口加入光合細(xì)菌菌種150kg和培養(yǎng)基一組，加入1噸的地下深井水，使培養(yǎng)基和菌種混合均勻，塑料薄膜內(nèi)菌液厚度大約為30-40cm，密封開(kāi)口，防止?jié)B漏。

（4）平均氣溫在20℃以上（北方一般在5月-9月份），自然太陽(yáng)光下暴曬3-5天，光照強(qiáng)度在3000-7000Lux，待長(zhǎng)成棕紅色或深紅色。取樣檢測(cè)，菌數(shù)一般在50-60*10⁸cfu/ml，無(wú)其他藻類污染。

（5）連續(xù)培養(yǎng)。使用800kg菌液后，剩余菌液作為菌種，加入培養(yǎng)基一組和一噸的地下深井水。封口，自然太陽(yáng)光下暴曬3-5天，待長(zhǎng)成棕紅色或深紅色。取樣檢測(cè)，菌數(shù)一般在50-60*10⁸cfu/ml，無(wú)其他藻類污染。

實(shí)施例3

比較：

結(jié)論：本發(fā)明采用的容器大型筒狀塑料透明薄膜，價(jià)格低廉，容積大，透光性強(qiáng)，陽(yáng)光照射面積大，攜帶使用比較方便，利于操作。如果有其他雜菌或藻類污染，不用消毒，可直接舍棄，減少成本浪費(fèi)。使用本方法可連續(xù)培養(yǎng)，在無(wú)污染的情況下，使用剩余菌液作為菌種直接加入培養(yǎng)基和干凈水，實(shí)現(xiàn)一次接種，連續(xù)生產(chǎn)。