本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療急性腎損傷的噁唑并嘧啶類化合物、其制備方法、含有其的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：急性腎損傷(AKI)是一組臨床綜合征，是指突發(fā)(1-7d內(nèi))和持續(xù)(>24h)的腎功能突然下降，定義為血清肌酐(SCr)至少上升0.5mg/dl，表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、水電解質(zhì)和酸堿平衡以及全身各系統(tǒng)癥狀，可伴有少尿(<400ml/24h或17ml/h)或無尿(<100ml/24h)。AKI的最常見的病因是敗血癥、大外科、血容量過低和藥物。形成AKI的危險(xiǎn)因素包括：老年(>75歲)、慢性腎病、動(dòng)脈粥樣硬化周圍血管疾病、心力衰竭、肝臟疾病、糖尿病和腎中毒的藥物。然而，無論病原如何，目前尚無得到廣泛認(rèn)可的預(yù)防或治療AKI的方法。鞘氨醇-1磷酸鹽(S1P)是與五個(gè)GPCR(G蛋白偶合受體)結(jié)合的脂質(zhì)介質(zhì)，稱為S1P1-5(Brinkman等，PharmacologyTherapeutics，2007，Vol.115，pp84-105)。S1P1被普遍表達(dá)，包括在內(nèi)皮、免疫和腎臟上皮細(xì)胞中表達(dá)。S1P1調(diào)節(jié)許多生理功能，包括：保持內(nèi)皮屏障的完整性(細(xì)胞骨架重排)、細(xì)胞生長(zhǎng)、存活、分化、血管生成和免疫細(xì)胞輸送。S1P1在腎臟髓質(zhì)中高度表達(dá)，其是血流和供氧受到特別為尿濃度而設(shè)計(jì)的血管解剖學(xué)限制的腎臟區(qū)域。由于該區(qū)域中的細(xì)胞具有高耗氧性，所以，髓質(zhì)尤其易受缺氧傷害的影響。腎皮質(zhì)管損傷是髓質(zhì)損傷和近端管狀細(xì)胞的直接損傷的結(jié)果。腎臟缺血再灌注損傷之后，S1P1上調(diào)(Awad等，AmericanJournalofPhysiology-renalPhysiology，2006，Vol.290，F(xiàn)1516-F1524)，并且預(yù)計(jì)它的活化能夠保持腎臟功能，這是由于三個(gè)主要機(jī)理∶保持內(nèi)皮屏障功能；限制近端管狀上皮細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡；降低炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。已有文獻(xiàn)報(bào)道S1P-S1P1途徑在調(diào)節(jié)內(nèi)皮屏障完整性中的作用(Wang等，Microvascularresearch，2009，Vol.77，pp39-45)，在AKI模型中降低炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的作用(Lien等，KidneyInternational，2006，Vol.69，pp1601-1608)，在急性腎損傷中保持內(nèi)皮功能方面的作用(HamA.，KidneyInternational，2013，Sept)，在對(duì)腎臟功能具有保護(hù)作用(Garcia-Criado等，Transplantation，1998，Vol.66，pp982-990；Ysebaert等，KidneyInternational，2004，Vol.66，pp491-496)。通過S1P1活化S1P決定著淋巴細(xì)胞從淋巴結(jié)流出到血液中。這種S1P1活化引起受體內(nèi)化作用，而后受體再循環(huán)回到細(xì)胞表面，進(jìn)行重新活化。然而，人們認(rèn)為，S1P1功能性拮抗劑或拮抗劑通過抑制內(nèi)化的S1P1受體回到細(xì)胞表面或抑制S1P1活化而導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少，由此導(dǎo)致細(xì)胞表面S1P1的顯著和持續(xù)減少。因此，最近的藥劑顯示出在臨床前和臨床上觀察到血液淋巴細(xì)胞的大量和持續(xù)減少。然而，淋巴細(xì)胞減少是機(jī)會(huì)感染的誘因，尤其對(duì)于很敏感、虛弱的患者，例如，處于AKI的高風(fēng)險(xiǎn)的患者。因此，還需要選擇性的S1P1激動(dòng)劑，這種激動(dòng)劑應(yīng)該能夠引起有限的淋巴細(xì)胞減少，或在最佳情況下，淋巴細(xì)胞不減少，并且在治療急性腎損傷方面具有治療應(yīng)用性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的，在于提供一種選擇性S1P1激動(dòng)劑，其不會(huì)引起淋巴細(xì)胞減少，或者僅會(huì)引起有限的淋巴細(xì)胞減少，并且在治療急性腎損傷方面具有治療應(yīng)用性。本發(fā)明涉及式I的噁唑并嘧啶類化合物：其中：A選自：a)具有1、2、3或4個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、N及S(O)r的雜原子的5或6元單環(huán)雜芳基，b)具有1、2或3個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、N及S(O)r的雜原子的5或6元單環(huán)的飽和的雜環(huán)烷基，及c)具有1、2或3個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、N及S(O)r的雜原子的9或10元雙環(huán)雜芳基，所述5或6元單環(huán)雜芳基、5或6元單環(huán)的飽和的雜環(huán)烷基、9或10元雙環(huán)雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的選自鹵素、羥基、(C1-C4)-烷基-、(C1-C4)-烷基氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)r-、氨基、硝基、氰基、羧基、(C1-C4)-烷基氧基羰基、氨基羰基和氨基磺酰基的取代基取代；每個(gè)X各自獨(dú)立地選自N和CR2，條件是至少有一個(gè)X為N；R1、R2各自獨(dú)立地選自鹵素、羥基、(C1-C4)-烷基-、(C1-C4)-烷基氧基、(C1-C4)-烷基-S(O)r-、氨基、硝基、氰基、羧基、(C1-C4)-烷基氧基羰基、氨基羰基和氨基磺?；?；r為0、1或2。在另一個(gè)實(shí)施方案中，鹵素選自氟、氟、溴及碘。在另一個(gè)實(shí)施方案中，5或6元單環(huán)雜芳基選自以下：呋喃基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、三唑基、吡啶基及嘧啶基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，5或6元單環(huán)的飽和的雜環(huán)烷基選自以下：四氫呋喃基、四氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基及硫代嗎啉基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，9或10元雙環(huán)雜芳基選自以下：吲哚基、異吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、異苯并呋喃基、異苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、喹唑啉基及喹喔啉基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述式I化合物包括具有以下結(jié)構(gòu)的式II化合物：在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物為：如果式I化合物含有一個(gè)或多個(gè)酸性和/或堿性基團(tuán)，本發(fā)明還包括它們相應(yīng)的藥學(xué)上可接受的鹽。因此，含有酸性基團(tuán)如羧基的式I化合物可在所述基團(tuán)上以如堿金屬鹽、堿土金屬鹽或銨鹽形式存在，更具體實(shí)例包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、季銨鹽等。含有堿性基團(tuán)如氨基或含氮雜環(huán)的式I化合物可在所述基團(tuán)上按與無機(jī)酸和有機(jī)酸形成的加成鹽形式存在。合適的酸的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、丙二酸、富馬酸、馬來酸、枸櫞酸和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它酸。本發(fā)明還包括式I化合物的所有溶劑化物(如水合物或與醇的加合物)、式I化合物的前藥和衍生物(如由羧基形成的酯或酰胺)，所述前藥和衍生物在體外可能不一定顯示出藥理學(xué)活性，但在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成藥理學(xué)活性化合物。本發(fā)明另一個(gè)目的為提供一種制備式I化合物的方法，通過所述方法可得到所述化合物，所述方法概述如下：其中A、X、R1、R2如上文所述。本發(fā)明的再一個(gè)目的，在于提供一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥或衍生物，以及藥學(xué)上可接受的輔料。可將式I化合物單獨(dú)作為藥物或以藥物組合物形式給藥至動(dòng)物，特別是給藥至哺乳動(dòng)物(包括人類)。給藥可通過以下方式進(jìn)行：口服(如以片劑、膜衣片劑、糖衣片劑、顆粒劑、硬明膠膠囊和軟明膠膠囊、溶液劑、滴劑、糖漿劑、乳劑或混懸劑形式)、經(jīng)直腸(如以栓劑形式)或腸胃外(如以用于皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射或輸注的溶液劑形式，具體地，水性溶液劑形式)。藥物組合物中存在的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥或衍生物的量通常為每單位劑量約0.2至約600mg，如約0.5至約400mg，例如約1至約100mg。所述藥物組合物通常包含約0.5至約90重量％的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥或衍生物。作為可含在藥物組合物和藥物中的藥學(xué)上可接受的輔料的實(shí)例，可提及稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、崩解劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、緩沖物質(zhì)、著色劑、矯味劑和香料，其實(shí)例為水、氯化鈉生理溶液、植物油、蠟、醇、三醋精、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠、纖維素、碳水化合物類、滑石、羊毛脂、凡士林或它們的混合物等。本發(fā)明的再一個(gè)目的，在于提供式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥或衍生物在制備預(yù)防或治療急性腎損傷的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的式I的噁唑并嘧啶類化合物具有S1P1激動(dòng)活性，其在以急性腎損傷保護(hù)性劑量給予時(shí)，不會(huì)引起淋巴細(xì)胞減少，且在較高劑量給予時(shí)，僅引起有限的淋巴細(xì)胞減少，并且在治療急性腎損傷方面具有治療應(yīng)用性。具體實(shí)施方式在下文中更詳細(xì)地描述了本發(fā)明以有助于對(duì)本發(fā)明的理解。應(yīng)當(dāng)理解的是，在說明書和權(quán)利要求書中使用的術(shù)語或詞語不應(yīng)當(dāng)理解為具有在字典中限定的含義，而應(yīng)理解為在以下原則的基礎(chǔ)上具有與其在本發(fā)明上下文中的含義一致的含義：術(shù)語的概念可以適當(dāng)?shù)赜砂l(fā)明人為了對(duì)本發(fā)明的最佳說明而限定。實(shí)施例1：7-(1H-吲哚-7-羰基)噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基嘧啶-2-羧酸酯(化合物1)在裝有氮?dú)獗Ｗo(hù)裝置、溫度計(jì)、回流冷凝管的三頸瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入5-胍基嘧啶-2-羧酸2.7g(0.015mol)和甲苯(100ml)，攪拌使其溶解，然后加入羰基二咪唑2.6g(0.016mol)，加熱至80℃，反應(yīng)2小時(shí)后，再滴加噁唑[5,4-d]嘧啶-2-醇2.2g(0.016mol)的甲苯(50ml)溶液，然后加熱至回流，反應(yīng)4小時(shí)，將反應(yīng)液冷卻降溫后減壓下蒸除溶劑，殘余物用水洗滌后用乙醇重結(jié)晶，得到白色固體噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基嘧啶-2-羧酸酯3.9g，產(chǎn)率87％，ESI-MS：301.07[M+H]+。將三氯化鋁(5.6g，44.0mmol)、甲苯(100ml)加入安裝有冷凝器、溫度計(jì)和氮?dú)獗Ｗo(hù)裝置的三頸瓶中，攪拌，然后加入噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基嘧啶-2-羧酸酯(3.0g，0.01mol)和1H-吲哚-7-酰氯(1.8g，0.011mol)，加熱至回流，反應(yīng)10小時(shí)。停止反應(yīng)后將反應(yīng)液傾倒入冰-濃鹽酸中，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水、水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓下蒸除溶劑進(jìn)行濃縮，然后用硅膠柱色譜分離，以甲醇-氯仿體系為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫(5-95至95-5)，得到淺黃色固體7-(1H-吲哚-7-羰基)噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基嘧啶-2-羧酸酯3.5g，產(chǎn)率78％。ESI-MS：444.11[M+H]+。元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，C(54.18/54.11)，H(2.96/2.90)，N(28.43/28.54)，O(14.43/14.56)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.21(s，1H)，9.50(s，1H)，8.97(s，2H)，8.84(s，1H)，8.47(d，1H)，8.01(d，1H)，7.81(s，1H)，7.37(m，1H)，7.23(d，1H)，6.62(s，2H)，6.32(s，1H)。實(shí)施例2：7-(哌啶-4-羰基)噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基吡啶-2-羧酸酯(化合物2)按照實(shí)施例1的方法，用5-胍基吡啶-2-羧酸代替5-胍基嘧啶-2-羧酸，用哌啶-4-酰氯代替1H-吲哚-7-酰氯，得到白色固體，總產(chǎn)率51％，ESI-MS：411.15[M+H]+。實(shí)施例3：5-氟-7-(1H-吡唑-5-羰基)噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基嘧啶-2-羧酸酯(化合物3)按照實(shí)施例1的方法，用5-氟-噁唑[5,4-d]嘧啶-2-醇代替噁唑[5,4-d]嘧啶-2-醇，用1H-吡唑-5-酰氯代替1H-吲哚-7-酰氯，得到亮白色固體，總產(chǎn)率45％，ESI-MS：413.08[M+H]+。實(shí)施例4：7-(噻唑-2-羰基)噁唑[5,4-d]嘧啶-2-基5-胍基-3-甲氧基吡啶-2-羧酸酯(化合物4)按照實(shí)施例1的方法，用5-胍基-3-甲氧基吡啶-2-羧酸代替5-胍基嘧啶-2-羧酸，用噻唑-2-酰氯代替1H-吲哚-7-酰氯，得到黃色固體，總產(chǎn)率55％，ESI-MS：441.07[M+H]+。生物活性測(cè)定實(shí)施例：1.S1P1受體的內(nèi)化效應(yīng)實(shí)驗(yàn)將表達(dá)經(jīng)GFP標(biāo)記的S1P1受體的CHO-K1細(xì)胞以4×103個(gè)細(xì)胞/孔平鋪于384孔聚-D-賴氨酸涂覆的組織培養(yǎng)板中的50μl分析培養(yǎng)基(F12，具有L-谷氨酰胺、10％經(jīng)木炭/葡聚糖處理的FBS、1×青霉素-鏈霉素、1MHEPES)中。將細(xì)胞板在37℃/5％CO2溫育過夜。將測(cè)試化合物以11點(diǎn)、3倍連續(xù)稀釋由化合物來源板引入細(xì)胞板中，然后將測(cè)定板在37℃/5％CO2溫育45分鐘。在室溫用6％甲醛固定細(xì)胞并用在PBS(不含Ca2+/Mg2+)中的15μg/ml赫希斯特染料染色15分鐘。用PBS(不含Ca2+/Mg2+)將細(xì)胞板洗滌4次，添加50μl/PBS，然后將板密封。通過CellomicsArrayScanVTI高內(nèi)涵成像器獲取影像。在陣列掃描上使用隔室分析生物應(yīng)用實(shí)施相對(duì)于內(nèi)部對(duì)照化合物確定EC50的數(shù)據(jù)分析。將EC50定義為激動(dòng)劑濃度對(duì)應(yīng)于針對(duì)每個(gè)所測(cè)試個(gè)別化合物獲得的Ymax(最大反應(yīng))的50％，并使用4個(gè)參數(shù)的邏輯方程擬合數(shù)據(jù)進(jìn)行定量。結(jié)果如下：表1：目標(biāo)化合物激動(dòng)S1P1的EC50值測(cè)試樣品EC50(nm)BAF-3120.39化合物10.12化合物20.18化合物30.21化合物40.422.淋巴細(xì)胞減少性活性測(cè)定使雄性SD大鼠(n＝10，300至350g)單一口服接受化合物1(1、3、10和30mg/kg)、BAF-312(1和10mg/kg)或?qū)φ蛰d體(0.6％甲基纖維素-0.5％吐溫80，在水中)，給藥體積在2mL/kg之內(nèi)。在給予化合物之后2、6和24小時(shí)，采集血液，進(jìn)行血液分析，測(cè)定全血淋巴細(xì)胞數(shù)。結(jié)果用平均值+/-s.e.m來表示。結(jié)果如下：表2：目標(biāo)化合物引發(fā)大鼠淋巴細(xì)胞數(shù)變化情況，其中所示數(shù)值為淋巴細(xì)胞數(shù)，單位為103/ml上述結(jié)果表明，與現(xiàn)有的S1P1激動(dòng)劑如BAF-312相比，本發(fā)明化合物顯示出基本相當(dāng)甚至更優(yōu)的S1P1結(jié)合活性。此外，BAF-312導(dǎo)致血液淋巴細(xì)胞大量和持續(xù)減少，這種狀況即使在劑量低到1mg/kg時(shí)也很明顯。與此相反，1和3mg/kg的化合物1沒有顯示出淋巴細(xì)胞降低狀況，即使是大鼠急性腎損傷模型中的高劑量(10和30mg/kg)，也只有有限的淋巴細(xì)胞減少，而這些劑量代表比充分急性腎損傷保護(hù)作用所需要?jiǎng)┝扛叩膭┝?。上述?shù)據(jù)證明，本發(fā)明化合物可用作在非淋巴細(xì)胞減少性劑量下產(chǎn)生急性腎損傷保護(hù)作用的S1P1激動(dòng)劑。以上描述了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，然其并非用以限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)在此公開的實(shí)施方案可進(jìn)行并不偏離本發(fā)明范疇和精神的改進(jìn)和變化。當(dāng)前第1頁1 2 3