本發(fā)明屬于藥物化學，特別是涉及一種化合物的新晶型及其制備方法與應用。

背景技術：

目前沒有針對HIV病毒感染的治愈方法。20世紀90年代中期，高效抗反轉錄病毒療法(highly active antiretroviral therapy,HAART)的出現(xiàn)被認為是艾滋病治療史上里程碑性的事件。HAART聯(lián)合使用數(shù)種能夠阻斷或抑制HIV病毒入胞、復制、轉錄、翻譯、裝配等過程的抗逆轉錄病毒藥物，從而充分抑制病毒的增殖，將感染者體內的病毒載量降低到實驗室檢測水平以下(≤50拷貝/ml)，使之免疫系統(tǒng)功能得到一定程度的恢復，最終顯著延緩疾病的進展，大大降低AIDS的發(fā)病率和病死率，同時減少了HIV的傳播。近幾年來，HIV逆轉錄酶抑制劑已經(jīng)成為重要的一類控制和治療HIV感染的藥物。迄今為止，美國FDA批準的抗HIV藥物共有20多種，主要分為六大類：核苷(酸)類逆轉錄酶抑制劑(nucleoside/nucleotide reverse transcriptase inhibitors，N(t)RTI)、非核苷類逆轉錄酶抑制劑(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors，NNRTI)、蛋白酶抑制劑(PI)、融合抑制劑、整合酶鏈轉移抑制劑(INSTI)和輔助受體抑制劑。初治AIDS患者的優(yōu)選抗病毒治療方案目前由2種N(t)RTI再聯(lián)合1種NNRTI或PI、或INSTI組成，DHHS發(fā)布的指南自2009年開始列出了4種此類治療方案：①替諾福韋+恩曲他濱+依非韋倫；②替諾福韋+恩曲他濱+達茹那韋/利托那韋；③替諾福韋+恩曲他濱+阿扎那韋/利托那韋；④替諾福韋+恩曲他濱+雷特格韋。

3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈，是一種新型非核苷類逆轉錄酶抑制劑，可用于HIV病毒感染預防和治療，其英文名為3-[[3-ethyl-1,2,3,6-tetrahydro-5-(1-methylethyl)-2,6-dioxo-4-pyrimidinyl]carbonyl]-5-methyl benzonitrile，其化學結構式如下式：

分子式：C₁₈H₁₉N₃O₃ 分子量：325.14

該化合物的CAS號為1097628-00-6，曾用代號包括：GS9441(吉利德科學公司)、KM023(Kaino Medicine)以及ACC007(江蘇艾迪藥業(yè)有限公司)。

美國專利US2009/0163712 A1報道了該化合物的合成工藝方法，部分反應操作再經(jīng)優(yōu)化，可用于工業(yè)化生產(chǎn)，生產(chǎn)成本較低，可滿足我國對抗HIV藥物的迫切需求。但是用于制備醫(yī)藥組合物的活性物質結晶，應該具有高純度和高穩(wěn)定性，即使在較苛刻的儲存條件下，也應該保持穩(wěn)定，還需確保該結晶形態(tài)在隨后的制劑制備和儲存中不會改變。至今為止，未見其相關晶型的研究結果報道。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有高純度和高穩(wěn)定性的3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈I晶型。

本發(fā)明的目的還在于提供上述3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈I晶型的制備方法與應用。

本發(fā)明所述的一種3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈I晶型，該晶型以2θ角度表示的X-射線粉末衍射圖譜如附圖1所示，在以下位置具有特征峰：6.6±0.1°,8.3±0.1°,10.7±0.1°,12.6±0.1°,13.3±0.1°,15.1±0.1°,16.6±0.1°,17.6±0.1°,19.0±0.1°,19.6±0.1°,20.1±0.1°,20.5±0.1°,21.7±0.1°,22.2±0.1°,23.5±0.1°,24.0±0.1°,24.7±0.1°,25.4±0.1°,26.9±0.1°,27.9±0.1°,28.7±0.1°,30.3±0.1°,38.2±0.1°。

如附圖2該晶型的X射線粉末衍射數(shù)據(jù)可見，本發(fā)明的3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈I晶型X-射線粉末衍射光譜，還顯示了多個特征吸收峰。

所述化合物I晶型的DSC圖譜如圖3所示，在227±1.5℃處有吸熱峰。

所述化合物I晶型的熔程為223～231℃。

上述化合物I晶型的制備方法，包括以下步驟：取3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品，加入有機溶劑，加熱至溶劑回流，并攪拌一定時間；降溫至0℃～35℃并保持溫度，攪拌養(yǎng)晶至析晶完全；然后分離并收集晶體，干燥即得I晶型。

所述溶解加熱溫度為溶劑回流溫度；攪拌時間為0.5～10h，優(yōu)先為1～2h。

所述有機溶劑選自異丙醇、乙醇、乙腈和乙酸乙酯中的一種或者多種。

優(yōu)選的，所述有機溶劑為乙醇或異丙醇。最優(yōu)選為乙醇。

所述3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品和有機溶劑的質量體積比為1:3～1:10。

優(yōu)選的，所述的3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品和有機溶劑的質量體積比為1:5～1:7。

上述質量體積比的單位是指，當質量單位為g，體積單位為mL，當質量單位為kg，體積單位為L。

溶解后降溫采用自然冷卻或通冷凝水冷卻，冷凝水溫度為-10℃～25℃。

養(yǎng)晶溫度為0～35℃，優(yōu)選為20～25℃；養(yǎng)晶時間為0.5～5h，優(yōu)選為1～2h。

養(yǎng)晶至析晶完全后采用真空抽濾或離心分離。

所述干燥采用鼓風或真空干燥，干燥溫度為40℃～80℃，優(yōu)選為60～65℃；干燥時間為30～60h，優(yōu)選為40～50h。

本發(fā)明所述的3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I，以及含有該結晶的藥物組合物，可用于各種HIV感染者的預防和治療。

有益效果：本發(fā)明提供了一種抗HIV新藥分子(3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈)的I晶型，所述晶型具有優(yōu)良的穩(wěn)定性、利于后處理及存儲；并且制備方法簡單，可用于制備抗HIV的藥物，對后續(xù)相關藥物的優(yōu)化和開發(fā)具有重要的價值。

附圖說明

圖1是3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的X射線粉末衍射代表性譜圖；

圖2是3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的X射線粉末衍射代表性譜圖數(shù)據(jù)；

圖3是3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的DSC代表性譜圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明作出詳細說明。

試劑來源：

3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品購自桑迪亞醫(yī)藥技術(上海)有限責任公司，粗品采用HPLC面積歸一化法檢測，純度不低于98％。

實施例1：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的制備

取3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品20g于反應瓶中，加入60mL異丙醇，加熱至回流，保溫攪拌10h；邊攪拌，邊通冷凝水降溫至0℃，繼續(xù)保溫攪拌0.5h，真空抽濾，濾餅于80℃真空干燥60h，得19g類白色固體，純度99.3％，收率95％。

對制備所得3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I進行了粉末X射線衍射分析，其X射線粉末衍射譜圖與代表性譜圖一致，如圖1所示；X射線粉末衍射數(shù)據(jù)與代表性譜圖數(shù)據(jù)一致，如圖2所示；DSC圖譜與代表性譜圖一致，如圖3所示。

實施例2：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的制備

取3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品200g于反應瓶中，加入1200ml乙醇，加熱至回流，保溫攪拌4～5h；邊攪拌，邊通冷凝水降溫至25℃，繼續(xù)保溫攪拌1.5h，真空抽濾，濾餅于60～65℃真空干燥48h，得144g類白色固體，純度99.57％，收率72％。

對制備所得3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I進行了粉末X射線衍射分析，其X射線粉末衍射譜圖與代表性譜圖一致，如圖1所示；X射線粉末衍射數(shù)據(jù)與代表性譜圖數(shù)據(jù)一致，如圖2所示；DSC圖譜與代表性譜圖一致，如圖3所示。

實施例3：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的制備

取3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品200g于反應瓶中，加入2000ml乙腈，加熱至回流，攪拌至溶清；邊攪拌，邊自然降溫至35℃，繼續(xù)保溫攪拌5h，離心分離，濾餅于40℃鼓風干燥30h，得128g類白色固體，純度99.30％，收率64％。

對制備所得3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I進行了粉末X射線衍射分析，其X射線粉末衍射譜圖與代表性譜圖一致，如圖1所示；X射線粉末衍射數(shù)據(jù)與代表性譜圖數(shù)據(jù)一致，如圖2所示；DSC圖譜與代表性譜圖一致，如圖3所示。

實施例4：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的制備

取3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈粗品200g于反應瓶中，加入1000mL乙醇中，加熱至回流，攪拌1.5h；邊攪拌，邊自然降溫至25℃，繼續(xù)保溫攪拌1.5h，離心分離，濾餅于60～65℃下，真空干燥60h，得156g類白色固體，純度99.56％，收率78％。

對制備所得3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I進行了粉末X射線衍射分析，其X射線粉末衍射譜圖與代表性譜圖一致，如圖1所示；X射線粉末衍射數(shù)據(jù)與代表性譜圖數(shù)據(jù)一致，如圖2所示；DSC圖譜與代表性譜圖一致，如圖3所示。

實施例5：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的熱穩(wěn)定性測定

取實施例1-3制備所得3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I，在50～60℃，70～80℃，90～100℃下，烘干48h，并對烘干后樣品純度進行檢驗，實驗結果如表1所示。

表1 3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈的熱穩(wěn)定性

結果表明，在50～100℃的烘干溫度下，本品的含量沒有顯著變化，質量穩(wěn)定。

實施例6：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I在加速條件的穩(wěn)定性測定

對實施例1、2、3制備所得的晶型I進行了加速條件下的儲存，對0天樣品熔程及熔點進行了毛細管法及DSC法檢測，加速6個月后的熔程進行了毛細管法檢測，如表2所示。

表2 3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I加速條件的穩(wěn)定性

結果表明，三批樣品在加速條件下放置6個月后，熔點和熔程沒有發(fā)生顯著變化，證明本品在此條件下，具有很好的穩(wěn)定性。

實施例7：3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的抗病毒活性測定

通過5天多循環(huán)試驗法檢測了實施例4所得的3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I在MT-2、MT-4細胞系中的抗病毒活性，如表3所示。

表3 3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的抗病毒活性

SD＝standard deviation(標準差)；EC₅₀＝half-maximal effective concentration(半數(shù)有效濃度)；CC₅₀＝half-maximal cytotoxic concentration(半數(shù)細胞毒濃度)

^a N(number of independent experiments)(獨立試驗數(shù))≥10.

^b N≥4.

^c N≥3.

根據(jù)檢測結果可見，其抗病毒效力，在MT-2細胞中測定的EC₅₀值為6.8nM，在MT-4細胞中，EC₅₀值為7.6nM，在同等試驗條件下，3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈晶型I的抗病毒活性略低于依非韋倫(Efavirenz)，但其細胞毒性較依非韋倫低。因此，本品具有優(yōu)良的抗病毒活性，且具有很好的安全性。